专利名称：一种石蜡组织芯片制作方法
技术领域：
本发明涉及一种石蜡组织芯片制作方法，用于制备组织芯片，属于组织芯片技术领域。
背景技术：
组织芯片技术是基因芯片技术的发展和延伸，与细胞芯片、蛋白芯片、抗体芯片一样， 属于一种特殊生物芯片技术。组织芯片技术可以将数十个甚至上千个不同个体的临床组织 标本按预先设计的顺序排列在一张玻片进行分析研究，是一种高通量、多样本的分析工具。 组织芯片技术使科研人员能同时对几百甚至上千种组织样本同时进行分析，进行某一个或 多个特定的基因，或与其相关的表达产物的研究。该技术可以与DNA、 RNA、蛋白质、抗体 等技术相结合，与传统的病理学技术、组织化学及免疫组化技术相结合，在基因、基因转 录和相关表达产物生物学功能三个水平上进行研究。这对人类基因组学的研究与发展，尤 其对基因和蛋白质与疾病关系的研究，疾病相关基因的验证、新药物的开发与筛选、疾病 的分子诊断，治疗过程的追踪和预后等方面具有实际意义和广阔的市场前景。
目前，美国Clontech和Stratagene等少数生物技术公司已开展了人及动物的组织芯 片产品开发和销售，但数量少、价格高、品种单一，满足不了医学科研和医药工业研发的 需要。2001年4月，美国Lifespan生物科学公司建立了正�：图膊∽橹虮泶锸菘�。 美国Tissuelnformactics公司用动物组织芯片技术进行药物毒理筛选和寻找新药物作用 位点。此外，日本、英国等国正积极筹建国家临床组织病理数据库。
中国在组织芯片技术方面的研究进展迅速。2001年10月，中国国家科技部将组织芯 片技术列为"十五"国家科技攻关西部开发重大项目，并已在西安正式立项。该立项分成 7个子项目，包括组织芯片技术、组织芯片生物信息数据库、自动化组织芯片仪、自动分 析装置、组织芯片相关技术与试剂、组织芯片实际应用技术，为中国与世界相关技术同步 发展奠定了基础。
目前，组织芯片的制备主要依靠机械化芯片制备仪来完成。制备仪包括操作平台、特 殊的打孔采样装置和一个定位系统。打孔采样装置对供体组织蜡块进行采样，同时也可对 受体蜡块进行打孔，其孔径与采样直径相同，两者均可精确定位。制备仪的定位装置可使 穿刺针或受体蜡块线性移动，从而制备出孔径、孔距、孔深完全相同的组织微阵列蜡块。 通过切片辅助系统将其转移并固定到硅化和胶化玻片上即成为组织芯片。根据样本直径
3(0. 2 2. 0腿)不同，在一张45 mmX25 mm的玻片上可以排列40 2000个以上的组织 标本。一般按照样本数目的多少，将组织芯片分为低密度芯片(< 200点)、中密度芯片(200 600点)和高密度芯片(〉600点)。常用组织芯片含有组织标本的数目在50 800个之间。 根据研究目的不同，芯片种类可以分成肿瘤组织芯片、正常组织芯片、单一或复合、特定 病理类型等数10种组织芯片。
但目前依据上述方法制备组织芯片有以下不足第一，现有组织芯片制作成本很高。 除特殊的仪器设备外(数十万元)，制作1个组织芯片的费用在万元以上，每张切片单价 在50 100元；第二，仅能在已有的蜡块上取样，组织来源受到限制；第三，根据现有设
备和方法制备的芯片，切片量仅约50张，因为是在原有蜡块上点孔取样，组织厚度有限； 第四，高密度芯片虽然通量大，但由于每枚组织微�。岩蕴峁┳橹峁沟男畔ⅲ坏谖澹�
仅在大型研究单位，才有经费和条件进行组织芯片的相关研究，难以推广。
发明内容
本发明的目的是开发一种简易组织芯片制作方法，制备低密度和中密度芯片，兼顾样 本通量、组织结构和芯片产量等多方面的要求，使组织芯片技术的作用得到充分发挥。 为了达到上述目的，本发明的技术方案是提供一种石蜡组织芯片制作方法，其特征在
于，具体步骤为
第一步将所需要的组织编号后浸石蜡，或在已有的蜡块上标记所需要的组织后编号； 将组织切成所需大�。旁谔烫ㄉ希�60-65'C将其上的石蜡融化得到待包埋的组织； 第二步另取石蜡放入石蜡壶，用电炉加热至60-7(TC使石蜡融化；
第三步将方形的蜡模放在玻璃板上，将第一步得到的待包埋的组织在第二步中融化 的石蜡中浸没后排列在蜡模内部的一侧，在定位板或定位纸上记录相应位置的组织的编 号，在蜡模内部的另外一侧留下方形空位，融化的石蜡沿空位处倒入蜡模内，直至将组织
浸没，在18-25。C (或室温下)静置10-30min使石蜡聚合，撤除蜡模，沿平行于玻璃板方 向切片。
进一步地，所述第一步中切后的组织为方体状或圆柱体状。 所述的方体状的长为5ram 10ram、宽为lram 2mm、厚为lmm 2mm。 所述第三步中的蜡模由2个垂直弯折的铜条组成，长为70mra，宽为40mra，高为20mra， 厚为10 20mm。
所述第三步中留下的方形空位的长为20mm，宽为25mm。
本发明利用石蜡易溶解、易聚合的特性，使需要的组织按照一定的顺序排列，先用少量石蜡将组织疏松地黏附在一起，最后用石蜡将组织完全聚合，切片后便得到所需要的组 织芯片。
本发明具有廉价、方便、快速、产量高、取材多样的优点，能普及至每一个病理科及 相关研究单位。制作的组织芯片，组织形状不受限制，可为长条形，长方形，方形，圆柱 形，圆筒形或不规则形；组织大小可根据需要而定，在50醒X25国的面积上可排列20 300个组织，能满足研究需要。组织芯片的高度也可根据需要而定，在5mm 20咖高的组 织芯片上可切制500张 2000张切片，远高于现有组织芯片切制50张切片的产量，约为 10 40倍；成本远低于现有制作方法。
具体实施例方式
下面结合实施例来具体说明本发明。
实施例1
采用如下方法制作石蜡组织芯片
第一步病理取材时留取所需的组织，编号，切成2ramX2mmX10mm大�。嫱±� 科常规组织处理程序，至浸石蜡的步骤；放在烫台上，在6(TC将其上的石蜡融化得到待包 埋的组织；
第二步另取石蜡放入石蜡壶，用电炉加热至6(TC使石蜡融化； 第三步将2个垂直弯折的铜条放在厚玻璃板上，拼成长为70mm，宽为40mm，高为 20mm，厚为lOmra的方形蜡模放在玻璃板上，厚为(铜条的高度)，用镊子钳取需要包埋的 第一枚组织，在融化的石蜡中快速浸没一次，将平整面贴着玻璃，依靠石蜡的粘性将组织 立于玻璃上，第一块组织有两个侧面紧贴蜡模，底面紧贴玻璃，在定位板或定位纸上记录 该组织的原始编号；依次放入第二块组织，第二块组织底面紧贴玻璃，有一个侧面与第一 枚组织相连，有一个侧面与蜡模相连，两枚组织之间的距离相当与两层蜡模的距离，直至 第一排组织点位完成，长度50rnm。接着开始第二排、第三排等的点位，直至蜡模宽度达 25mm，蜡模内有20mmx25mm的空位，将石蜡壶内融化的石蜡沿空位处缓慢倒入蜡模内，直 至浸没完全；在25'C静置10min使石蜡聚合，撤除蜡模，包埋n个组织的蜡块即制备完成， 沿平行于玻璃板方向切片。
实施例2
采用如下方法制作石蜡组织芯片
第一步在蜡块上将所需要的组织编号，定位，将组织切成长为5mm、宽为lmm、厚 为lmm的方形块；放在烫台上，在65'C将其上的石蜡融化得到待包埋的组织；
5第二步另取石蜡放入石蜡壶，用电炉加热至7(TC使石蜡融化；
第三步将2个垂直弯折的铜条放在厚玻璃板上，拼成长为70mm，宽为40mm，高为 20mm，厚为20mm的方形蜡模放在玻璃板上，厚为(铜条的高度)，用镊子钳取需要包埋的 第一枚组织，在融化的石蜡中快速浸没一次，将平整面贴着玻璃，依靠石蜡的粘性将组织 立于玻璃上，第一块组织有两个侧面紧贴蜡模，底面紧贴玻璃，在定位板或定位纸上记录 该组织的原始编号；依次放入第二块组织，第二块组织底面紧贴玻璃，有一个侧面与第一 枚组织相连，有一个侧面与蜡模相连，两枚组织之间的距离相当与两层蜡模的距离，直至 第一排组织点位完成，长度50mrn。接着开始第二排、第三排等的点位，直至蜡模宽度达 25mm，蜡模内有20mmx25mm的空位，将石蜡壶内融化的石蜡沿空位处缓慢倒入蜡模内，直 至浸没完全；在25'C静置10min使石蜡聚合，撤除蜡模，包埋n个组织的蜡块即制备完成， 沿平行于玻璃板方向切片。
实施例3
采用如下方法制作石蜡组织芯片
第一步在蜡块上将所需要的组织编号，定位，将组织切成长10mm,半径为lmin大 小的圆柱体；放在烫台上，在65T:将其上的石蜡融化得到待包埋的组织； 第二步另取石蜡放入石蜡壶，用电炉加热至7(TC使石蜡融化； 第三步将2个垂直弯折的铜条放在厚玻璃板上，拼成长为70mm，宽为40mm，高为 20mm，厚为20mm的方形蜡模放在玻璃板上，厚为(铜条的高度)，用镊子钳取需要包埋的 第一枚组织，在融化的石蜡中快速浸没一次，将平整面贴着玻璃，依靠石蜡的粘性将组织 立于玻璃上，第一块组织两侧紧贴蜡模，底面紧贴玻璃，在定位板或定位纸上记录该组织 的原始编号；依次放入第二块组织，第二块组织底面紧贴玻璃， 一侧与第一枚组织相连， 另一侧与蜡模相连，两枚组织之间的距离相当与两层蜡模的距离，直至第一排组织点位完 成，长度50mm。接着开始第二排、第三排等的点位，直至蜡�？矶却�25咖，蜡模内有 20mmx25mm的空位，将石蜡壶内融化的石蜡沿空位处缓慢倒入蜡模内，直至浸没完全；在 18T:静置30min待石蜡聚合后，撤除蜡模，包埋n个组织的蜡块即制备完成，沿平行于玻 璃板方向切片。
权利要求
1、一种石蜡组织芯片制作方法，其特征在于，具体步骤为第一步将所需要的组织编号后浸石蜡，或在已有的蜡块上标记所需要的组织后编号；将组织切成所需大�。旁谔烫ㄉ希�60-65℃将其上的石蜡融化得到待包埋的组织；第二步另取石蜡放入石蜡壶，用电炉加热至60-70℃使石蜡融化；第三步将方形的蜡模放在玻璃板上，将第一步得到的待包埋的组织在第二步中融化的石蜡中浸没后排列在蜡模内部的一侧，在定位板或定位纸上记录相应位置的组织的编号，在蜡模内部的另外一侧留下方形空位，融化的石蜡沿空位处倒入蜡模内，直至将组织浸没，在18-25℃静置10-30min使石蜡聚合，撤除蜡模，沿平行于玻璃板方向切片。
2、 如权利要求1所述的一种石蜡组织芯片制作方法，其特征在于，所述第一步中切 后的组织为方体状或圆柱体状。
3、 如权利要求2所述的一种石蜡组织芯片制作方法，其特征在于，所述的方体状的 长为5mm 10腿、宽为lmm 2mm、 厚为l面 2mm。
4、 如权利要求1所述的一种石蜡组织芯片制作方法，其特征在于，所述第三步中的 蜡模由2个垂直弯折的铜条组成，长为70mm，宽为40mm，高为20mm，厚为10 20rnm。
5、 如权利要求2所述的一种石蜡组织芯片制作方法，其特征在于，所述第三步中留 下的方形空位的长为20mm，宽为25mm。
全文摘要
本发明提供了一种石蜡组织芯片制作方法，其特征在于，具体步骤为将所需要的组织编号后浸蜡，或在已有的蜡块上标记所需要的组织后编号；将组织切成所需大�。旁谔烫ㄉ希�60-65℃将其上的石蜡融化得到待包埋的组织；另取石蜡放入石蜡壶，用电炉加热使石蜡融化；将方形蜡模放在玻璃板上，将第一步得到的待包埋的组织在融化的石蜡中浸没后排列在蜡模内部的一侧，在定位板或定位纸上记录相应位置的组织的编号，在蜡模内部的另外一侧留下方形空位，融化的石蜡沿空位处倒入蜡模内，直至将组织浸没，使石蜡聚合，撤除蜡模，沿平行于玻璃板方向切片。本发明具有廉价、方便、快速、产量高、取材多样的优点，能普及至每一个病理科及相关研究单位。
文档编号G01N1/28GK101556224SQ200910051399
公开日2009年10月14日 申请日期2009年5月18日 优先权日2009年5月18日
发明者侯英勇, 宿杰·阿克苏, 曾海英, 谭云山 申请人:复旦大学附属中山医院
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