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µ°°×Ãû³Æµ°°×ÐòÁбàÂë»ùÒòÐòÁÐQmpHSEQ ID NO 1SEQ ID NO 8ComlSEQ ID NO 2SEQ ID NO 9YbgFSEQ ID NO 3SEQ ID NO 10MipSEQ ID NO 4SEQ ID NO 11DnaKSEQ ID NO 5SEQ ID NO 12GroELSEQ ID NO 6SEQ ID NO 13RplLSEQ ID NO 7SEQ ID NO 14¶þ¡¢µ°°×OmpHµÄÖÆ±¸OmpH»ùÒòÀ©ÔöÒÔ±´ÊϿ¿Ë˹ÌåÐÂÇÅÖê(Coxiella burnetii)µÄ»ùÒò×éDNAΪģ°å£¬ÓÃÒýÎï¶Ô½øÐÐPCRÀ©Ôö£¬µÃµ½PCRÀ©Ôö²úÎÓÃÏÞÖÆÐÔÄÚÇÐøBamHIºÍMlIøÇÐPCRÀ©Ôö²úÎ»ØÊÕÄ¿µÄ»ùÒòƬ¶Î£»ÓÃÏÞÖÆÐÔÄÚÇÐøBamHIºÍMlIøÇгö·¢ÔØÌåpET_32a(+)£¬»ØÊÕÔØÌå´óƬ¶Î£»½«Ä¿µÄ»ùÒòƬ¶ÎºÍÔØÌå´óƬ¶ÎÁ¬½Ó£¬µÃµ½ÖØ×éÔØÌ壻PCRÀ©ÔöµÄͨÓÃÌõ¼þ 94¡ãCÔ¤±äÐÔ 5min£¬95¡ãC 30sec¡¢55¡ãC 30sec¡¢72¡ãC 1. 5min£¬Ñ­»·£»35 ´Î£¬72¡ãCÑÓÉì 7min¡£ÖØ×é¾úµÄÖÆ±¸½«ÖØ×éÔØÌåתÈë³ö·¢¾ú´ó³¦¸Ë¾úBL21ÖУ¬µÃµ½ÖØ×é¾ú¡£ÑéÖ¤½«ÖØ×é¾ú½ÓÈ뺬Óа²Üп¹ÐÔ(Amp+)µÄ¹ÌÌåLBƽ°åÅàÑø»ùÖУ¬¿¹ÐÔɸÑ¡£¬ÌôÈ¡µ¥ÐÔ¿Ë¡£»½«µ¥¿Ë¡½ÓÈëLBÒºÌåÅàÑø»ùÖУ¬ÅàÑø£¬ÌáÈ¡ÖÊÁ££¬½øÐвâÐò£¬½á¹ûÔÚÔØÌåpET-3h (+)µÄBamHIºÍ SalIøÇÐλµã¼ä²åÈëµÄ»ùÒòÐòÁÐÈçSEQ ID NO 8Ëùʾ£¬±íÃ÷¹¹½¨µÄÔØÌåÕýÈ·¡£µ°°×±í´ï½«ÑôÐÔÖØ×é¾ú½ÓÈë°²Üп¹ÐÔ(Amp+)LBÒºÌåÅàÑø»ùÖУ¬37¡ãCÕðÒ¡¹ýÒ¹£¬´ÎÈÕ°´1 100½ÓÖÖÐÂÏʰ²Üп¹ÐÔ(Amp+)LBÒºÌåÅàÑø»ù£¬37¡ãCÕðÒ¡ÖÁOD6tltl = 0. 4£¬¼ÓÈëÓÕµ¼¼ÁIPTG£¬Å¨¶ÈΪ0. 4mM£¬ÓÚ37¡ãC¼ÌÐøÕðÒ¡4Сʱ£¬µÃµ½·¢½ÍÒº¡£µ°°×´¿»¯È¡ÓÕµ¼±í´ïµÄ·¢½ÍÒº100ml£¬8000rpm/minÀëÐÄ5min£¬¼¯¾ú£¬ÆúÉÏÇå¡£Óà 30mlÁѽ⻺³åÒºÖØÐü¾úÌ壬ÒÔ25%Õñ·ù³¬ÉùÆÆËé(³¬3s£¬Í£9s) 1Сʱ¡£È¡³ö³¬ÉùÁѽâÎ ÒÔ12000rpmÀëÐÄ20min£¬Æúµô³Áµí£¬ÊÕ¼¯ÉÏÇåÒº¡£ÏòÉÏÇåÒºÖмÓÈëIOml»ØÊÕ»º³åÒººó»ì„ò£¬ IhºóÒÔ12000rpmÀëÐÄ20min£¬Æúµô³Áµí£¬ÊÕ¼¯ÉÏÇåÒº¡£½«ÉÏÇåÒºÓë^ilNi-NTA»ìºÏ£¬ÊÒΠ200rpmÕñµ´»ì„ò4h£¬Ê¹Ä¿µÄµ°°×ÓëNi-NTAÍêÈ«½áºÏ¡£ÎüµôÉÏÇ壬ÒÀ´Î¼ÓÈ뺬6M OM(6M¡¢ 5M¡¢4M¡¢3M¡¢2M¡¢1M¡¢0M)ÄòËØµÄ¸´ÐÔ»º³åÒºÖ𼶸´ÐÔ£»Ã¿´Î¼ÓÈ븴ÐÔ»º³åÒººó»ì„ò£¬ÊÒξ²ÖÃ×÷ÓÃ4h¡£´ý¼ÓÈ뺬OMÄòËØµÄ¸´ÐÔ»º³åÒº×÷ÓÃ4hºó£¬µ¹Èë´¿»¯¿ÕÖùÖУ¬¼ÓÈëIOmlÏ´µÓ»º³åҺϴµÓ£¬²¢¿ØÖÆÁ÷ËÙΪ3ml/min¡£´ýÒºÌåÁ÷¾»£¬¼ÓÈëÏ´ÍÑ»º³åÒº£¬¹²Ï´ÍÑ4´Î£¬Ã¿´Î0. 5ml£¬½«Ã¿´ÎÊÕ¼¯µÄÏ´ÍÑÒººÏ²¢£¬¼´µÃµ½Ä¿µÄµ°°×ÈÜÒº¡£
ÿ1ÉýÁѽ⻺³åÒº°´ÕÕÈçÏ·½·¨ÖƱ¸½«50mmol NaH2PO4 ¡¤ H2O¡¢300mmol NaCl¡¢ IOmmolßäßòºÍË®»ìºÏ£¬ÓÃNaOHµ÷½ÚpHÖÁ8. 0£¬ÓÃË®¶¨ÈÝÖÁ1L£¬µÃµ½Áѽ⻺³åÒº¡£0. lmol/L Tris-Cl »º³åÒºÅäÖÆ½« 12. llgTris¡¢800mL ddH20 ºÌ¿Ú 49mL HCl »ìºÏ£¬µÎ¼ÓŨÑÎËáµ÷PHÖÁ8. 0£¬ÓÃddH20¶¨ÈÜÖÁIOOOmL,µÃµ½0. lmol/L Tris-Cl»º³åÒº¡£Ã¿1Éý»ØÊÕ»º³åÒº°´ÕÕÈçÏ·½·¨ÖƱ¸½«IOOmmol NaH2PO4 ¡¤ H20¡¢0. ILTris-Cl»º³åÒº(¼´IOmmol Tris)¡¢8molÄòËØºÍË®»ìºÏ£¬ÓÃNaOHµ÷½ÚpHÖÁ8. 0£¬ÓÃË®¶¨ÈÝÖÁ1L£¬µÃµ½»ØÊÕ»º³åÒº¡£¸´ÐÔ»º³åÒºÖÆ±¸Ã¿1Éýº¬6MÄòËØ¸´ÐÔ»º³åÒº°´ÕÕÈçÏ·½·¨ÖƱ¸½«500mmol NaCl,0. 2L Tris-Cl »º³åÒº¡¢6molÄòËØ¡¢0. 2L¸ÊÓͺÍË®»ìºÏ£¬µ÷½ÚpHÖÁ7. 4£¬ÓÃË®¶¨ÈÝÖÁ1Éý£¬µÃµ½º¬6MÄòËØ¸´ÐÔ»º³åÒº¡£Ã¿1ÉýÎÞÄòËØ¸´ÐÔ»º³åÒº°´ÕÕÈçÏ·½·¨ÖƱ¸½«500mmOl NaCl,0. 2L Tris-Cl»º³åÒº¡¢0. 2L¸ÊÓͺÍË®»ìºÏ£¬µ÷½ÚpHÖÁ7. 4£¬ÓÃË®¶¨ÈÝÖÁ1Éý£¬µÃµ½ÎÞÄòËØ¸´ÐÔ»º³åÒº¡£5M-1MÄòËØ¸´ÐÔ»º³åÒºÓÉ6MÄòËØ¸´ÐÔ»º³åÒººÍÎÞÄòËØ¸´ÐÔ»º³åÒº²»Í¬Ìå»ýÅä±ÈµÃµ½¡£Ã¿1 ÉýÏ´µÓ»º³åÒº×é³É½« 50mmol NaH2PO4 'H2O^OOmmol NaCl¡¢20mmol ßäßòºÍË®»ìºÏ£¬ÓÃNaOHµ÷½ÚpHÖÁ8. 0£¬ÓÃË®¶¨ÈÝÖÁ1L£¬µÃµ½Ï´µÓ»º³åÒº¡£Ã¿1 ÉýÏ´ÍÑ»º³åÒº×é³É½« 50mmol NaH2PO4 ¡¤ H20¡¢300mmol NaCl¡¢250mmol ßäßò¡¢ 0. 3L¸ÊÓͺÍË®»ìºÏ£¬ÓÃNaOHµ÷½ÚpHÖÁ8. 0£¬ÓÃË®¶¨ÈÝÖÁ1L£¬µÃµ½Ï´ÍÑ»º³åÒº¡£Ã¿1ÉýLBÒºÌåÅàÑø»ù×é³É½«IOgÒȵ°°×ëË¡¢5g½ÍĸÌáÈ¡Îï¡¢IOgÂÈ»¯ÄƺÍË®»ìºÏ£¬ÓÃË®¶¨ÈÝÖÁ1L£¬µÃµ½LBÒºÌåÅàÑø»ù¡£Èý¡¢ÆäËüµ°°×µÄÖÆ±¸ÖƱ¸·½·¨Óë²½Öè¶þÖлù±¾Ïàͬ£¬²»Í¬µÄÊÇÒýÎï¡¢³ö·¢ÔØÌå¡¢ÏÞÖÆÐÔÄÚÇÐø¡¢³ö·¢¾úÖê¡¢ÖØ×é¾ú¿¹ÐÔɸѡ·½Ê½²»Í¬£¬¾ßÌåÈç±í2Ëùʾ¡£µ±ËùÓóö·¢ÔØÌåΪpET_32a(+)ʱ£¬Óõijö·¢¾úÖêΪBL21£¬¶ÔÓ¦µÄ¿¹ÐÔɸѡ²ÉÓð²Üп¹ÐÔ(Amp+)£»µ±ËùÓóö·¢ÔØÌåΪpQE30ʱ£¬Óõijö·¢¾úÖêΪM15£¬¶ÔÓ¦µÄ¿¹ÐÔɸѡ²ÉÓð²ÜÐ (Amp+)ºÍ¿¨ÄÇ(Kan+)Ë«¿¹ÐÔ¡£±í2¡¢ÒýÎï¡¢ÔØÌ塢ø
ȨÀûÒªÇó
1.Ò»ÖÖÓÃÓÚÕï¶ÏQÈȲ¡µÄµ°°××éºÏÎÓÉÈçÏÂ(1)-(7)ÖÐËùÊöµ°°××é³É(1)ΪÈçÏÂl_a»ò¦©-bËùʾ¦©-a¡¢°±»ùËáÐòÁÐΪSEQ ID NO=IËùʾµÄµ°°×ÖÊ£»¦©-b¡¢½«SEQ ID NO :1ËùʾµÄ°±»ùËáÐòÁо­¹ýÒ»¸ö»ò¼¸¸ö°±»ùËá²Ð»ùµÄÈ¡´úºÍ/»òȱʧºÍ/»òÌí¼ÓÇÒ¾ßÓÐÏàͬ¹¦ÄܵÄÓɦ©-aÑÜÉúµÄµ°°×ÖÊ£»(2)ΪÈçÏÂ2-a»ò2-bËùʾ2_a¡¢°±»ùËáÐòÁÐΪSEQ ID NO 2ËùʾµÄµ°°×ÖÊ£»2-b¡¢½«SEQID NO :2ËùʾµÄ°±»ùËáÐòÁо­¹ýÒ»¸ö»ò¼¸¸ö°±»ùËá²Ð»ùµÄÈ¡´úºÍ/»òȱʧºÍ/»òÌí¼ÓÇÒ¾ßÓÐÏàͬ¹¦ÄܵÄÓÉ2-aÑÜÉúµÄµ°°×ÖÊ£»(3)ΪÈçÏÂ3-a»ò3-bËùʾ3_a¡¢°±»ùËáÐòÁÐΪSEQ ID NO 3ËùʾµÄµ°°×ÖÊ£»3-b¡¢½«SEQID NO :3ËùʾµÄ°±»ùËáÐòÁо­¹ýÒ»¸ö»ò¼¸¸ö°±»ùËá²Ð»ùµÄÈ¡´úºÍ/»òȱʧºÍ/»òÌí¼ÓÇÒ¾ßÓÐÏàͬ¹¦ÄܵÄÓÉ3-aÑÜÉúµÄµ°°×ÖÊ£»(4)ΪÈçÏÂ4-a»ò4-bËùʾ4_a¡¢°±»ùËáÐòÁÐΪSEQ ID NO 4ËùʾµÄµ°°×ÖÊ£»4-b¡¢½«SEQID NO :4ËùʾµÄ°±»ùËáÐòÁо­¹ýÒ»¸ö»ò¼¸¸ö°±»ùËá²Ð»ùµÄÈ¡´úºÍ/»òȱʧºÍ/»òÌí¼ÓÇÒ¾ßÓÐÏàͬ¹¦ÄܵÄÓÉ4-aÑÜÉúµÄµ°°×ÖÊ£»(5)ΪÈçÏÂ5-a»ò5-bËùʾ5_a¡¢°±»ùËáÐòÁÐΪSEQ ID NO 5ËùʾµÄµ°°×ÖÊ£»5-b¡¢½«SEQID NO :5ËùʾµÄ°±»ùËáÐòÁо­¹ýÒ»¸ö»ò¼¸¸ö°±»ùËá²Ð»ùµÄÈ¡´úºÍ/»òȱʧºÍ/»òÌí¼ÓÇÒ¾ßÓÐÏàͬ¹¦ÄܵÄÓÉ5-aÑÜÉúµÄµ°°×ÖÊ£»(6)ΪÈçÏÂ6-a»ò6-bËùʾ6_a¡¢°±»ùËáÐòÁÐΪSEQ ID NO 6ËùʾµÄµ°°×ÖÊ£»6-b¡¢½«SEQID NO :6ËùʾµÄ°±»ùËáÐòÁо­¹ýÒ»¸ö»ò¼¸¸ö°±»ùËá²Ð»ùµÄÈ¡´úºÍ/»òȱʧºÍ/»òÌí¼ÓÇÒ¾ßÓÐÏàͬ¹¦ÄܵÄÓÉ6-aÑÜÉúµÄµ°°×ÖÊ£»(7)ΪÈçÏÂ7-a»ò7-bËùʾ7_a¡¢°±»ùËáÐòÁÐΪSEQ ID NO 7ËùʾµÄµ°°×ÖÊ£»7-b¡¢½«SEQID NO :7ËùʾµÄ°±»ùËáÐòÁо­¹ýÒ»¸ö»ò¼¸¸ö°±»ùËá²Ð»ùµÄÈ¡´úºÍ/»òȱʧºÍ/»òÌí¼ÓÇÒ¾ßÓÐÏàͬ¹¦ÄܵÄÓÉ7-aÑÜÉúµÄµ°°×ÖÊ¡£
2.¸ù¾ÝȨÀûÒªÇó1ËùÊöµÄµ°°××éºÏÎÆäÌØÕ÷ÔÚÓÚËùÊöQÈȲ¡ÊÇÓɲ¡Ô­¾ú±´ÊϿ¿Ë˹Ìå(Coxiella burnetii)¸ÐȾ¶¯ÎïÒýÆðµÄ¡£
3.¸ù¾ÝȨÀûÒªÇó2ËùÊöµÄµ°°××éºÏÎÆäÌØÕ÷ÔÚÓÚËùÊö¶¯ÎïΪÈË»ò¼ÒÐó»òÊó£»ËùÊö¼ÒÐóΪţ¡¢Ñò»òÂí¡£
4.Ò»ÖÖÓÃÓÚÕï¶ÏQÈȲ¡µÄµ°°×оƬ£¬ÓÉ»ùµ×¡¢¼ì²âµã¡¢ÑôÐÔÖʿصãºÍÒõÐÔÖʿصã×é³É£¬ ¼ì²âµã¡¢ÑôÐÔÖʿصãºÍÒõÐÔÖʿصã¾ùµãÖÆÔÚËùÊö»ùµ×ÉÏ£»ËùÊö¼ì²âµã·ÖΪÆßÖÖ£¬Ã¿ÖÖ¼ì²âµãÓÉÈçÏÂ(1)-(7)Ëùʾµ°°×ÖеÄÒ»ÖÖµãÖÆ¶ø³É£»(1)ΪÈçϦ©-a»òl_bËùʾ¦©-a¡¢°±»ùËáÐòÁÐΪSEQ ID NO 1ËùʾµÄµ°°×ÖÊ£»¦©-b¡¢½«SEQ ID NO :1ËùʾµÄ°±»ùËáÐòÁо­¹ýÒ»¸ö»ò¼¸¸ö°±»ùËá²Ð»ùµÄÈ¡´úºÍ/»òȱʧºÍ/»òÌí¼ÓÇÒ¾ßÓÐÏàͬ¹¦ÄܵÄÓɦ©-aÑÜÉúµÄµ°°×ÖÊ£»(2)ΪÈçÏÂ2-a»ò2-bËùʾ2_a¡¢°±»ùËáÐòÁÐΪSEQ ID NO 2ËùʾµÄµ°°×ÖÊ£»2-b¡¢½«SEQID NO :2ËùʾµÄ°±»ùËáÐòÁо­¹ýÒ»¸ö»ò¼¸¸ö°±»ùËá²Ð»ùµÄÈ¡´úºÍ/»òȱʧºÍ/»òÌí¼ÓÇÒ¾ßÓÐÏàͬ¹¦ÄܵÄÓÉ2-aÑÜÉúµÄµ°°×ÖÊ£»(3)ΪÈçÏÂ3-a»ò3-bËùʾ3_a¡¢°±»ùËáÐòÁÐΪSEQ ID NO 3ËùʾµÄµ°°×ÖÊ£»3-b¡¢½«SEQID NO :3ËùʾµÄ°±»ùËáÐòÁо­¹ýÒ»¸ö»ò¼¸¸ö°±»ùËá²Ð»ùµÄÈ¡´úºÍ/»òȱʧºÍ/»òÌí¼ÓÇÒ¾ßÓÐÏàͬ¹¦ÄܵÄÓÉ3-aÑÜÉúµÄµ°°×ÖÊ£»(4)ΪÈçÏÂ4-a»ò4-bËùʾ4_a¡¢°±»ùËáÐòÁÐΪSEQ ID NO 4ËùʾµÄµ°°×ÖÊ£»4-b¡¢½«SEQID NO :4ËùʾµÄ°±»ùËáÐòÁо­¹ýÒ»¸ö»ò¼¸¸ö°±»ùËá²Ð»ùµÄÈ¡´úºÍ/»òȱʧºÍ/»òÌí¼ÓÇÒ¾ßÓÐÏàͬ¹¦ÄܵÄÓÉ4-aÑÜÉúµÄµ°°×ÖÊ£»(5)ΪÈçÏÂ5-a»ò5-bËùʾ5_a¡¢°±»ùËáÐòÁÐΪSEQ ID NO 5ËùʾµÄµ°°×ÖÊ£»5-b¡¢½«SEQID NO :5ËùʾµÄ°±»ùËáÐòÁо­¹ýÒ»¸ö»ò¼¸¸ö°±»ùËá²Ð»ùµÄÈ¡´úºÍ/»òȱʧºÍ/»òÌí¼ÓÇÒ¾ßÓÐÏàͬ¹¦ÄܵÄÓÉ5-aÑÜÉúµÄµ°°×ÖÊ£»(6)ΪÈçÏÂ6-a»ò6-bËùʾ6_a¡¢°±»ùËáÐòÁÐΪSEQ ID NO 6ËùʾµÄµ°°×ÖÊ£»6-b¡¢½«SEQID NO :6ËùʾµÄ°±»ùËáÐòÁо­¹ýÒ»¸ö»ò¼¸¸ö°±»ùËá²Ð»ùµÄÈ¡´úºÍ/»òȱʧºÍ/»òÌí¼ÓÇÒ¾ßÓÐÏàͬ¹¦ÄܵÄÓÉ6-aÑÜÉúµÄµ°°×ÖÊ£»(7)ΪÈçÏÂ7-a»ò7-bËùʾ7_a¡¢°±»ùËáÐòÁÐΪSEQ ID NO 7ËùʾµÄµ°°×ÖÊ£»7-b¡¢½«SEQID NO :7ËùʾµÄ°±»ùËáÐòÁо­¹ýÒ»¸ö»ò¼¸¸ö°±»ùËá²Ð»ùµÄÈ¡´úºÍ/»òȱʧºÍ/»òÌí¼ÓÇÒ¾ßÓÐÏàͬ¹¦ÄܵÄÓÉ7-aÑÜÉúµÄµ°°×ÖÊ¡£
5.¸ù¾ÝȨÀûÒªÇó4ËùÊöµÄµ°°×оƬ£¬ÆäÌØÕ÷ÔÚÓÚËùÊöÑôÐÔÖʿصãÓÉÈËÔ´IgG»ò³ýÈËÍâµÄÆäËü¶¯ÎïÀ´Ô´µÄIgGµãÖÆ¶ø³É¡£
6.¸ù¾ÝȨÀûÒªÇó4»ò5ËùÊöµÄµ°°×оƬ£¬ÆäÌØÕ÷ÔÚÓÚÿ¸öËùÊö¼ì²âµãÖе°°×µÄÁ¿Îª 4. 5 ¦Ì g £»Ã¿¸öËùÊöÑôÐÔÖʿصãÖÐIgGµÄÁ¿Îª4. 5 ¦Ì g £»ËùÊö³ýÈËÍâµÄÆäËü¶¯ÎïÀ´Ô´µÄIgGΪ¼ÒÐóÀ´Ô´µÄIgG»òÊóÀ´Ô´µÄIgG £»ËùÊö¼ÒÐóÀ´Ô´µÄIgGΪţÀ´Ô´µÄIgG¡¢ÑòÀ´Ô´µÄIgG»òÂíÀ´Ô´µÄIgG¡£
7.¸ù¾ÝȨÀûÒªÇó4-6ÖÐÈÎÒ»ËùÊöµÄµ°°×оƬ£¬ÆäÌØÕ÷ÔÚÓÚËùÊöQÈȲ¡ÊÇÓɲ¡Ô­¾ú±´ÊϿ¿Ë˹Ìå(Coxiella burnetii)¸ÐȾ¶¯ÎïÒýÆðµÄ¡£
8.¸ù¾ÝȨÀûÒªÇó7ËùÊöµÄµ°°×оƬ£¬ÆäÌØÕ÷ÔÚÓÚËùÊö¸ÐȾ¶¯ÎïΪ¸ÐȾÈË»ò¸ÐȾ¼ÒÐó»ò¸ÐȾÊó£»ËùÊö¸ÐȾ¼ÒÐóΪ¸ÐȾţ¡¢¸ÐȾÑò»ò¸ÐȾÂí¡£
9.Ò»ÖÖÓÃÓÚѪÇåѧÕï¶ÏQÈȵÄÊÔ¼ÁºÐ£¬ÎªÈçÏÂI»òIIËùʾI¡¢ÓÉȨÀûÒªÇó1»ò2»ò3ËùÊöµ°°××éºÏÎï¡¢·â±ÕÒº¡¢Æ¯Ï´ÒººÍÓ«¹âËØ±ê¼ÇµÄ¶þ¿¹×é³É£»II¡¢ÓÉȨÀûÒªÇó4-8ÖÐÈÎÒ»ËùÊöµ°°×оƬ¡¢·â±ÕÒº¡¢Æ¯Ï´ÒººÍÓ«¹âËØ±ê¼ÇµÄ¶þ¿¹×é³É£»ËùÊö·â±ÕÒº°´ÕÕÈçÏ·½·¨ÖƱ¸µÃµ½½«BSAÈÜÓÚpHֵΪ7. 4µÄPBS»º³åÒºÖУ¬BSAÓëPHֵΪ7. 4µÄPBS»º³åÒºµÄÅä±ÈΪIg 100ml£¬µÃµ½µÄÈÜÒº¼´ÎªËùÊö·â±ÕÒº£»ËùÊöÓ«¹âËØ±ê¼ÇµÄ¶þ¿¹ÎªCy5±ê¼ÇµÄÑò¿¹ÈËIgG»òCy5±ê¼ÇµÄÑò¿¹³ýÈËÒÔÍâÆäËü¶¯ÎïÀ´Ô´µÄIgG £»ËùÊöƯϴҺΪPBST»º³åÒº£»Ã¿1ÉýËùÊöPHֵΪ7.4µÄPBS»º³åÒº°´ÕÕÈçÏ·½·¨ÖƱ¸½«8gNaCl¡¢0.2g KC1¡¢ 3. 53gNa2HP04. 12H20¡¢0. 24g KH2PO4ºÍË®»ìºÏ£¬ÓÃË®¶¨ÈÝÖÁ1Éý£¬µÃµ½µÄÈÜÒºµÄpHֵΪ7. 4£¬ ¼´µÃµ½ËùÊöPBS»º³åÒº£»ËùÊöPBST»º³åÒº°´ÕÕÈçÏ·½·¨ÖƱ¸½«ËùÊöpHֵΪ7. 4µÄPBS»º³åÒºÓëTween-20»ìºÏ£¬PHֵΪ7. 4µÄPBS»º³åÒºÓëTween-20µÄÅä±ÈΪIL lml£¬µÃµ½ËùÊöPBST»º³åÒº¡£
10.ȨÀûÒªÇó1»ò2»ò3ËùÊöµ°°××éºÏÎïÔÚÖÆ±¸QÈȲ¡Õï¶ÏоƬÖеÄÓ¦Óã»È¨ÀûÒªÇó1 »ò2»ò3ËùÊöµ°°××éºÏÎïÔÚÖÆ±¸QÈȲ¡Õï¶ÏÊÔ¼ÁºÐÖеÄÓ¦Óá£
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Îĵµ±àºÅG01N33/68GK102169122SQ201110001420
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