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专利名称：一种昆明山海棠药材的质量检测方法
技术领域：
本发明涉及一种中药材的质量检测方法，特别是涉及昆明山海棠药材的指纹图谱质量检测方法。
背景技术：
色谱指纹图谱用于中药质量检测符合中药复杂的多组分特点，在某些化学结构尚不清楚的情况下，能够较为全面地控制中药材的稳定性。与传统鉴别相比较，指纹图谱能够更好的反映中药(植物药)的整体质量信息，借助现代分析仪器等先进手段进行分析，方便易行。美国FDA及WHO通过了 “对植物药允许以指纹图谱判断上市产品批间样品的一致性”的规定。近年来，日、韩、德等国的植物药研究也广泛应用指纹图谱进行质量检测。由此可见，指纹图谱已成为控制植物药的有效控制手段，广·泛得到应用。昆明山海棠为卫矛科雷公藤属多年生落叶藤本灌木[Tripterygiumhypoglaucum(Levl)Hutch],又名粉背雷公藤、火把花、紫金皮等，中医用于杀虫、舒筋活络、清热解毒、祛风除湿等。国内外研究相继发现昆明山海棠在众多自身免疫性疾病(如红斑狼疮等)、肿瘤、白血病、以及艾滋病等方面的重要价值。但目前，现有方法仅上海市药材标准和广东省中药材标准有收载昆明山海棠的质量检测方法。对昆明山海棠药材的质量检测手段仅限于简单的性状和显微鉴别，没有对主要有效成分的定性或定量的鉴别，质量检测方法及其缺乏。本发明建立了昆明山海棠药材的指纹图谱的鉴别方法，通过药材的指纹图谱与标准指纹图谱对比，以确保药材质量稳定、可控。

发明内容
本发明的目的在于公开昆明山海棠药材的指纹图谱质量检测方法。本发明目的是通过如下技术方案实现的本发明昆明山海棠药材的指纹图谱质量检测方法，该方法包括如下步骤A、供试品溶液制备称取昆明山海棠药材经粉碎过2号筛后的粉末O. 5 1. 5重量份，置锥形瓶中，加入甲醇60 100体积份，置30 50°C超声水浴中超声提取O. 5 1. 5小时，室温放置O. 5 1. 5小时，在4000转/分钟条件下离心5 15分钟，取出，倾取上清液置旋转蒸发仪中浓缩至近干，残渣用甲醇4体积份溶解，在冰箱I 5°C下放置O. 5 1. 5小时，取出，在10000转/分钟条件下离心5分钟，上清液用甲醇5体积份稀释，稀释液用孔径为O. 45 μ m的微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；B、对照品溶液制备取雷公藤甲素、雷公藤红素、雷公藤内酯甲三种对照品，分别用甲醇配成每体积份含O. 00005 O. 00015重量份雷公藤甲素、雷公藤红素或雷公藤内酯甲的溶液，作为对照品溶液；
C、色谱条件色谱仪Agilent 1200型高效液相色谱仪；色谱柱Symmetry C18 (250X4. 6mm,5 μ m);流动相乙腈-甲醇-O. 02%磷酸溶液梯度洗脱；柱温10 30°C;流速1. Oml/分钟；检测波长210nm ；D、测定法吸取供试品溶液与对照品溶液各O. 00001体积份，注入液相色谱仪，测定，即得；昆明山海棠药材标准指纹图谱共有42个特征峰，共有特征峰按照出峰顺序为第5号峰、24号峰、32号峰、36号峰、37号峰五个峰,其中36号峰为参照峰雷公藤红素色谱峰,各峰号相对保留时间为5号峰O. 140 O. 160,24号峰O. 560 O. 580,32号峰O. 820 O. 840,36号峰1、37号峰1. 030 1. 050。本发明昆明山海棠药材的指纹图谱质量检测方法，优选如下步骤A、供试品溶液制备称取昆明山海棠药材经粉碎过2号筛后的粉末I重量份，置锥形瓶中，加入甲醇80体积份，置40°C超声水浴中超声提取I小时，室`温放置I小时，在4000转/分钟条件下离心10分钟，取出，倾取上清液置旋转蒸发仪中浓缩至近干，残渣用甲醇4体积份溶解，在冰箱I 5°C下放置I小时，取出，在10000转/分钟条件下离心5分钟，上清液用甲醇5体积份稀释，稀释液用孔径为O. 45 μ m的微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；B、对照品溶液制备取雷公藤甲素、雷公藤红素、雷公藤内酯甲三种对照品，分别用甲醇配成每体积份含O. 0001重量份雷公藤甲素、雷公藤红素或雷公藤内酯甲的溶液，作为对照品溶液；C、色谱条件色谱仪Agilent 1200型高效液相色谱仪；色谱柱Symmetry C18 (250X4. 6mm,5 μ m);流动相乙腈-甲醇-O. 02%磷酸溶液梯度洗脱；柱温20°C;流速1. Oml/分钟；检测波长2IOnm ；D、测定法吸取供试品溶液与对照品溶液各O. 00001体积份，注入液相色谱仪，测定，即得；昆明山海棠药材标准指纹图谱共有42个特征峰，共有特征峰按照出峰顺序为第5号峰、24号峰、32号峰、36号峰、37号峰五个峰,其中36号峰为参照峰雷公藤红素色谱峰,各峰号相对保留时间为5号峰O. 156,24号峰O. 569,32号峰O. 829,36号峰1、37号峰1. 044。本发明昆明山海棠药材的指纹图谱质量检测方法，还可以优选如下步骤A、供试品溶液制备称取昆明山海棠药材经粉碎过2号筛后的粉末O. 8重量份，置锥形瓶中，加入甲醇90体积份，置45°C超声水浴中超声提取O. 8小时，室温放置O. 8小时，在4000转/分钟条件下离心12分钟，取出，倾取上清液置旋转蒸发仪中浓缩至近干，残渣用甲醇4体积份溶解，在冰箱I 5°C下放置O. 6小时，取出，在10000转/分钟条件下离心5分钟，上清液用甲醇5体积份稀释，稀释液用孔径为O. 45 μ m的微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；B、对照品溶液制备取雷公藤甲素、雷公藤红素、雷公藤内酯甲三种对照品，分别用甲醇配成每体积份含O. 00008重量份雷公藤甲素、雷公藤红素或雷公藤内酯甲的溶液，作为对照品溶液；
C、色谱条件色谱仪Agilent 1200型高效液相色谱仪；色谱柱Symmetry C18 (250X4. 6mm,5 μ m);流动相乙腈-甲醇-O. 02%磷酸溶液梯度洗脱；柱温15。。;流速1. Oml/分钟；检测波长2IOnm ； D、测定法吸取供试品溶液与对照品溶液各O. 00001体积份，注入液相色谱仪，测定，即得；昆明山海棠药材标准指纹图谱共有42个特征峰，共有特征峰按照出峰顺序为第5号峰、24号峰、32号峰、36号峰、37号峰五个峰,其中36号峰为参照峰雷公藤红素色谱峰,各峰号相对保留时间为5号峰O. 148,24号峰O. 560,32号峰O. 819,36号峰1、37号峰1. 035。本发明昆明山海棠药材的指纹图谱质量检测方法还可以优选如下步骤A、供试品溶液制备称取昆明山海棠药材经粉碎过2号筛后的粉末1. 2重量份，置锥形瓶中，加入甲醇70体积份，置35°C超声水浴中超声提取1. 3小时，室温放置1. 2小时，在4000转/分钟条件下离心6分钟，取出，倾取上清液置旋转蒸发仪中浓缩至近干，残渣用甲醇4体积份溶解，在冰箱I 5°C下放置1. 2小时，取出，在10000转/分钟条件下离心5分钟，上清液用甲醇5体积份稀释，稀释液用孔径为O. 45 μ m的微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；B、对照品溶液制备取雷公藤甲素、雷公藤红素、雷公藤内酯甲三种对照品，分别用甲醇配成每体积份含O. 00012重量份雷公藤甲素、雷公藤红素或雷公藤内酯甲的溶液，作为对照品溶液；C、色谱条件色谱仪Agilent 1200型高效液相色谱仪；色谱柱Symmetry C18 (250X4. 6mm,5 μ m);流动相乙腈-甲醇-O. 02%磷酸溶液梯度洗脱；柱温25°C;流速1. Oml/分钟；检测波长2IOnm ；D、测定法吸取供试品溶液与对照品溶液各O. 00001体积份，注入液相色谱仪，测定，即得。上述昆明山海棠药材的指纹图谱质量检测方法步骤C中的梯度洗脱流动相按下述比例设定:1、梯度I流动相A : B : C = 30 : 70 : 0，洗脱时间为30分钟；2、梯度2流动相A : B : C = 49 : 51 : 0，洗脱时间20分钟；3、梯度3流动相A B C = 61 29 10，洗脱时间为10分钟；4、梯度4流动相A B C = 65 20 15，洗脱时间为15分钟；5、梯度5流动相A B C = 92 8 0，洗脱至特征峰完全出现为止。上述梯度洗脱的流动相为连续变化的一个整体过程，其中A为乙腈，B为甲醇，C为O. 02% 磷酸溶液；A+B+C =100%。本发明昆明山海棠药材的质量检测方法，5号峰为雷公藤甲素、36号峰为雷公藤红素、37号峰为雷公藤内酯甲。雷公藤甲素、雷公藤红素和雷公藤内酯甲含量可通过供试品溶液的峰面积与对照品溶液的峰面积比值计算得到。上述发明重量份与体积份的关系为g/ml的关系。本发明方法特点雷公藤甲素、雷公藤红素和雷公藤内酯甲是昆明山海棠药材的主要有效成分，其含量的高低可直接反应药材质量的好坏；本发明的指纹图谱不仅可以测定上述三种成分的含量，还对其微观的成分组成进行分析，制定了指纹图谱共有模式，从定性和定量方面都达到了最先进的水平。


附图1 :甲醇溶剂提取效果图附图2 :乙酸乙酯提取效果图附图3:提取次数的比较图附图4 :检测波长的比较图附图5:稳定性比较图附图6 :重复性比较图附图7 :昆明山海棠药材的标准指纹图谱附图8 :昆明山海棠药材标准指纹图谱共有特征峰附图9 :昆明山海棠药材的标准指纹图谱与对照样品图谱叠加图下面实验和实施例用于进一步说明但不限于本发明。实验例一方法学实验1、提取溶剂的选择取昆明山海棠药材粉末lg，分别加入乙酸乙酯、甲醇各80ml，依照本发明实施例1所述的方法测定，结果显示乙酸乙酯提取液杂质比甲醇少，脂溶性成分除32号峰提取率高于甲醇外，其余如雷公藤红素、雷公藤内酯甲等成分相当，而水溶性成分则是甲醇提取较为充分，衡量利弊，最后选择甲醇为提取溶剂。见附图一和二。2、提取次数的比较取昆明山海棠药材粉末lg，分别用甲醇先后提取3次，每次80ml，依法测定，结果显示一次提取可以便可满足指纹图谱技术要求。见附图三。3、检测检测波长的选择根据文献报道，比较了 210nm、220nm、267nm、280nm四种检测波长，最后选取基本能显示整体信息的210nm为测定检测波长。见附图四(l_210nm ;2_220nm ;3_267nm ;4_280nm)。实验例二 稳定性试验取供试品溶液，分别在O、1. 5、3、4. 5、6、7. 5、24、48、72小时不同时间点进样，所得色谱图导入相似度计算软件，计算夹角余弦相似度，各时间点的相似度均在O. 99以上，图谱一致，表明稳定性良好，见附图五。实验例三重复性试验取昆明山海棠药材粉末，称取一式五份，依照本发明实施例1所述的方法测定，所得色谱图导入相似度计算软件，计算夹角余弦相似度，结果均在O. 99以上，5份样品图谱一致，表明重复性良好，见附图六。实验例四建立昆明山海棠根的HPLC指纹图谱共有模式将图谱导入指纹图谱分析软件，选取10批昆明山海棠样品，采用中位数筛选建立共有模式，共选了 42个特征峰，其中5号峰为雷公藤甲素triptolide，36号峰为雷公藤红素Tripterine, 37号峰为雷公藤内酯甲wilforlide,见附图七(图中从左到右的色谱峰分别是I到42号峰)、附图八、附图九(图中从左到右三个色谱峰分别是雷公藤甲素、雷公藤红素、雷公藤内酯甲)。下述实施例用于进一步说明但不限于本发明。实施例一A、供试品溶液制备称取昆明山海棠药材经粉碎过2号筛后的粉末lg，置锥形瓶中，加入甲醇80ml，置40°C超声水浴中超声提取I小时，室温放置I小时，在4000转/分钟条件下离心10分钟，取出，倾取上清液置旋转蒸发仪中浓缩至近干，残渣用甲醇4ml溶解，在冰箱I 5°C下放置I小时，取出，在10000转/分钟条件下离心5分钟，上清液用甲醇5ml稀释，用孔径为O. 45 μ m的微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；B、对照品溶液制备取雷公藤甲素、雷公藤红素、雷公藤内酯甲三种对照品，分别用甲醇配成每Iml含O. OOOlg雷公藤甲素、雷公藤红素或雷公藤内酯甲的溶液，作为对照品溶液；C、色谱条件色谱仪Agilent 1200型高效液相色谱仪；色谱柱Symmetry C18 (250 X 4. 6mm,5 μ m);流动相乙腈-甲醇-O. 02%磷酸溶液梯度洗脱；柱温20°C;流速1. Oml/分钟；检测波长2IOnm ；

D、测定法吸取供试品溶液与对照品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得；昆明山海棠药材标准指纹图谱共有42个特征峰，共有特征峰按照出峰顺序为第5号峰、24号峰、32号峰、36号峰、37号峰五个峰，其中36号峰为参照峰雷公藤红素色谱峰，各峰号相对保留时间为5号峰O. 156,24号峰O. 569,32号峰O. 829,36号峰1、37号峰1. 044。上述昆明山海棠药材的指纹图谱质量检测方法步骤C中的梯度洗脱流动相按下述比例设定1、梯度I流动相Α : B : C = 30 : 70 : 0，洗脱时间为30分钟；2、梯度2流动相Α B C = 49 51 0，洗脱时间20分钟；3、梯度3流动相A B C = 61 29 10，洗脱时间为10分钟；4、梯度4流动相A B C = 65 20 15，洗脱时间为15分钟；5、梯度5流动相A B C = 92 8 0，洗脱至特征峰完全出现为止。上述梯度洗脱的流动相为连续变化的一个整体过程，其中A为乙腈，B为甲醇，C为O. 02% 磷酸溶液；A+B+C =100%。实施例二 A、供试品溶液制备称取昆明山海棠药材经粉碎过2号筛后的粉末O. Sg,置锥形瓶中，加入甲醇90ml，置45°C超声水浴中超声提取O. 8小时，室温放置O. 8小时，在4000转/分钟条件下离心12分钟，取出，倾取上清液置旋转蒸发仪中浓缩至近干，残渣用甲醇4ml溶解，在冰箱I 5°C下放置O. 6小时，取出，在10000转/分钟条件下离心5分钟，上清液用甲醇5ml稀释，用孔径为O. 45 μ m的微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；
B、对照品溶液制备取雷公藤甲素、雷公藤红素、雷公藤内酯甲三种对照品，分别用甲醇配成每Iml含O. OOOOSg雷公藤甲素、雷公藤红素或雷公藤内酯甲的溶液，作为对照品溶液；C、色谱条件色谱仪Agilent 1200型高效液相色谱仪；色谱柱Symmetry C18 (250 X 4. 6mm,5 μ m);流动相乙腈-甲醇-O. 02%磷酸溶液梯度洗脱;柱温15°C;流速1. Oml/分钟；检测波长2IOnm ；D、测定法吸取供试品溶液与对照品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得；昆明山海棠药材标准指纹图谱共有42个特征峰，共有特征峰按照出峰顺序为第5号峰、24号峰、32号峰、36号峰、37号峰五个峰，其中36号峰为参照峰雷公藤红素色谱峰，各峰号相对保留时间为5号峰O. 148,24号峰O. 560,32号峰O. 819,36号峰1、37号峰1. 035。上述昆明山海棠药材的指纹图谱质量检测方法步骤C中的梯度洗脱流动相按下述比例设定1、梯度I流动相Α : B : C = 30 : 70 : 0，洗脱时间为30分钟；2、梯度2流动相Α B C = 49 51 0，洗脱时间20分钟；3、梯度3流动相A B C = 61 29 10，洗脱时间为10分钟；4、梯度4流动相 A B C = 65 20 15，洗脱时间为15分钟；5、梯度5流动相A B C = 92 8 0，洗脱至特征峰完全出现为止。上述梯度洗脱的流动相为连续变化的一个整体过程，其中A为乙腈，B为甲醇，C为O. 02% 磷酸溶液；A+B+C =100%。实施例三、A、供试品溶液制备称取昆明山海棠药材经粉碎过2号筛后的粉末1. 2g，置锥形瓶中，加入甲醇70ml，置35°C超声水浴中超声提取1. 3小时，室温放置1. 2小时，在4000转/分钟条件下离心6分钟，取出，倾取上清液置旋转蒸发仪中浓缩至近干，残渣用甲醇4ml溶解，在冰箱I 5°C下放置1. 2小时，取出，在10000转/分钟条件下离心5分钟，上清液用甲醇5ml稀释，用孔径为O. 45 μ m的微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液；B、对照品溶液制备取雷公藤甲素、雷公藤红素、雷公藤内酯甲三种对照品，分别用甲醇配成每Iml含O. 00012g雷公藤甲素、雷公藤红素或雷公藤内酯甲的溶液，作为对照品溶液；C、色谱条件色谱仪Agilent 1200型高效液相色谱仪；色谱柱Symmetry C18 (250 X 4. 6mm,5 μ m);流动相乙腈-甲醇-O. 02%磷酸溶液梯度洗脱；柱温25°C;流速1. Oml/分钟；检测波长2IOnm ；D、测定法吸取供试品溶液与对照品溶液各10 μ 1，注入液相色谱仪，测定，即得；昆明山海棠药材标准指纹图谱共有42个特征峰，共有特征峰按照出峰顺序为第5号峰、24号峰、32号峰、36号峰、37号峰五个峰，其中36号峰为参照峰雷公藤红素色谱峰，各峰号相对保留时间为5号峰O. 160,24号峰O. 578,32号峰O. 835,36号峰1、37号峰1. 048。上述昆明山海棠药材的指纹图谱质量检测方法步骤C中的梯度洗脱流动相按下述比例设定1、梯度I流动相A : B : C = 30 : 70 : 0，洗脱时间为30分钟；2、梯度2流动相A B C = 49 51 0，洗脱时间20分钟；3、梯度3流动相A B C = 61 29 10，洗脱时间为10分钟；4、梯度4流动相A B C = 65 20 15，洗脱时间为15分钟；5、梯度5流动相A B C = 92 8 0，洗脱至特征峰完全出现为止。 上述梯度洗脱的流动相为连续变化的一个整体过程，其中A为乙腈，B为甲醇，C为O. 02% 磷酸溶液；A+B+C =100%。
权利要求
1.一种昆明山海棠药材的质量检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤 A、供试品溶液制备 称取昆明山海棠药材经粉碎过2号筛后的粉末0. 5 1. 5重量份，置锥形瓶中，加入甲醇60 100体积份，置30 50°C超声水浴中超声提取0. 5 1. 5小时，室温放置0. 5 1.5小时，在4000转/分钟条件下离心5 15分钟，取出，倾取上清液置旋转蒸发仪中浓缩至近干，残渣用甲醇4体积份溶解，在冰箱I 5°C下放置0. 5 1. 5小时，取出，在10000转/分钟条件下离心5分钟，上清液用甲醇5体积份稀释，稀释液用孔径为0. 45 y m的微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液； B、对照品溶液制备 取雷公藤甲素、雷公藤红素、雷公藤内酯甲三种对照品，分别用甲醇配成每体积份含.0.00005 0. 00015重量份雷公藤甲素、雷公藤红素或雷公藤内酯甲的溶液，作为对照品溶液； C、色谱条件 色谱仪Agilent 1200型高效液相色谱仪；色谱柱Symmetry C18 (250 X 4. 6mm, 5 u m)；流动相乙腈-甲醇-0. 02%磷酸溶液梯度洗脱；柱温10 30°C ;流速1. Oml/分钟；检测波长2IOnm ； D、测定法 吸取供试品溶液与对照品溶液各0. 00001体积份，注入液相色谱仪，测定，即得；昆明山海棠药材标准指纹图谱共有42个特征峰，共有特征峰按照出峰顺序为第5号峰、24号峰、32号峰、36号峰、37号峰五个峰，各峰号相对保留时间为5号峰0. 140 0. 160,24号峰.0.560 0. 580,32号峰0. 820 0. 840,36号峰1、37号峰1. 030 1. 050 ;其中5号峰为雷公藤甲素、37号峰为雷公藤内酯甲，36号峰为参照峰雷公藤红素色谱峰。
2.如权利要求1所述的昆明山海棠药材的质量检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤 A、供试品溶液制备 称取昆明山海棠药材经粉碎过2号筛后的粉末I重量份，置锥形瓶中，加入甲醇80体积份，置40°C超声水浴中超声提取I小时，室温放置I小时，在4000转/分钟条件下离心10分钟，取出，倾取上清液置旋转蒸发仪中浓缩至近干，残渣用甲醇4体积份溶解，在冰箱I 5°C下放置I小时，取出，在10000转/分钟条件下离心5分钟，上清液用甲醇5体积份稀释，稀释液用孔径为0. 45 的微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液； B、对照品溶液制备 取雷公藤甲素、雷公藤红素、雷公藤内酯甲三种对照品，分别用甲醇配成每体积份含·0.0001重量份雷公藤甲素、雷公藤红素或雷公藤内酯甲的溶液，作为对照品溶液； C、色谱条件 色谱仪Agilent 1200型高效液相色谱仪；色谱柱Symmetry C18 (250 X 4. 6mm, 5 u m)；流动相乙腈-甲醇-0. 02%磷酸溶液梯度洗脱；柱温20°C ;流速1. Oml/分钟；检测波长·21 Onm ； D、测定法 吸取供试品溶液与对照品溶液各0. 00001体积份，注入液相色谱仪，测定，即得；昆明山海棠药材标准指纹图谱共有42个特征峰，共有特征峰按照出峰顺序为第5号峰、24号峰、32号峰、36号峰、37号峰五个峰，其中36号峰为参照峰雷公藤红素色谱峰，各峰号相对保留时间为5号峰0. 156,24号峰0. 569,32号峰0. 829,36号峰1、37号峰1. 044。
3.如权利要求1所述的昆明山海棠药材的质量检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤 A、供试品溶液制备 称取昆明山海棠药材经粉碎过2号筛后的粉末0. 8重量份，置锥形瓶中，加入甲醇90体积份，置45°C超声水浴中超声提取0. 8小时，室温放置0. 8小时，在4000转/分钟条件下离心12分钟，取出，倾取上清液置旋转蒸发仪中浓缩至近干，残渣用甲醇4体积份溶解，在冰箱I 5°C下放置0. 6小时，取出，在10000转/分钟条件下离心5分钟，上清液用甲醇5体积份稀释，稀释液用孔径为0. 45 y m的微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液； B、对照品溶液制备 取雷公藤甲素、雷公藤红素、雷公藤内酯甲三种对照品，分别用甲醇配成每体积份含.0.00008重量份雷公藤甲素、雷公藤红素或雷公藤内酯甲的溶液，作为对照品溶液； C、色谱条件 色谱仪Agilent 1200型高效液相色谱仪；色谱柱Symmetry C18 (250 X 4. 6mm, 5 u m)；流动相乙腈-甲醇-0. 02%磷酸溶液梯度洗脱；柱温15°C ;流速1. Oml/分钟；检测波长21 Onm ； D、测定法 吸取供试品溶液与对照品溶液各0. 00001体积份，注入液相色谱仪，测定，即得；昆明山海棠药材标准指纹图谱共有42个特征峰，共有特征峰按照出峰顺序为第5号峰、24号峰、32号峰、36号峰、37号峰五个峰，其中36号峰为参照峰雷公藤红素色谱峰，各峰号相对保留时间为5号峰0. 148,24号峰0. 560,32号峰0. 819,36号峰1、37号峰1. 035。
4.如权利要求1所述的昆明山海棠药材的质量检测方法，其特征在于该方法包括如下步骤 A、供试品溶液制备 称取昆明山海棠药材经粉碎过2号筛后的粉末1. 2重量份，置锥形瓶中，加入甲醇70体积份，置35°C超声水浴中超声提取1. 3小时，室温放置1. 2小时，在4000转/分钟条件下离心6分钟，取出，倾取上清液置旋转蒸发仪中浓缩至近干，残渣用甲醇4体积份溶解，在冰箱I 5°C下放置1. 2小时，取出，在10000转/分钟条件下离心5分钟，上清液用甲醇5体积份稀释，稀释液用孔径为0. 45 y m的微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液； B、对照品溶液制备 取雷公藤甲素、雷公藤红素、雷公藤内酯甲三种对照品，分别用甲醇配成每体积份含,0.00012重量份雷公藤甲素、雷公藤红素或雷公藤内酯甲的溶液，作为对照品溶液； C、色谱条件 色谱仪Agilent 1200型高效液相色谱仪；色谱柱Symmetry C18 (250 X 4. 6mm, 5 u m)；流动相乙腈-甲醇-0. 02%磷酸溶液梯度洗脱；柱温25°C ;流速1. Oml/分钟；检测波长21Onm ； D、测定法吸取供试品溶液与对照品溶液各0. 00001体积份，注入液相色谱仪，测定，即得；昆明山海棠药材标准指纹图谱共有42个特征峰，共有特征峰按照出峰顺序为第5号峰、24号峰、32号峰、36号峰、37号峰五个峰，其中36号峰为参照峰雷公藤红素色谱峰，各峰号相对保留时间为5号峰0. 160,24号峰0. 578,32号峰0. 835,36号峰1、37号峰1. 048。5、如权利要求1-4任一所述的昆明山海棠药材的质量检测方法，其特征在于昆明山海棠药材的指纹图谱质量测定方法步骤C中的梯度洗脱中流动相按下述比例设定 梯度I流动相A : B : C = 30 : 70 : 0，洗脱时间为30分钟； 梯度2流动相A : B : C = 49 : 51 : 0，洗脱时间20分钟； 梯度3流动相A : B : C = 61 : 29 : 10，洗脱时间为10分钟； 梯度4流动相A B C = 65 20 15，洗脱时间为15分钟； 梯度5流动相A B C = 92 8 0，洗脱至特征峰完全出现为止； 上述梯度洗脱的流动相为连续变化的一个整体过程，其中A为乙腈，B为甲醇，C为.0.02% 磷酸溶液；A+B+C =100%。
全文摘要
本发明目的在于公开一种昆明山海棠药材的指纹图谱质量检测方法。以乙腈-甲醇-0.02％磷酸溶液为流动相，梯度洗脱；注温20℃；本发明的指纹图谱不仅可以测定雷公藤甲素、雷公藤红素和雷公藤内酯甲三种成分的含量，还对其微观的成分组成进行分析，制定了指纹图谱共有模式，从定性和定量方面都达到了最先进的水平。
文档编号G01N30/02GK103033570SQ20111030112
公开日2013年4月10日 申请日期2011年9月29日 优先权日2011年9月29日
发明者莫国强, 谢培山, 郭忠慧, 颜玉贞, 何风雷, 谢琳 申请人:广州陈李济药厂有限公司