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专利名称：一种硫糖肽含量的测定方法
技术领域：
本发明涉及化学药物硫糖肽技术领域，特别涉及一种硫糖肽含量的测定方法。
背景技术：
硫糖肽在消化性溃疡方面具有独特的疗效，可由于其原料紧缺，多数国家只能依靠进口，我国在这方面的研究也刚起步。因此在优化硫糖肽合成工艺的基础上，质量研究等成为硫糖肽研究的主要方向。含量的测定又是质量研究一个重要方面，可目前在国内外含量的测定均是一项空白，因此建立一种专属性和准确度好的含量测定方法显得尤为迫切。在国外也只有韩国、意大利等少数国家对硫糖肽含量测定方法进行了研究，但没有相关文章或者专利公开，在国内也还是一项空白。

发明内容
为了解决以上问题，本发明提供了一种快速、准确的硫糖肽含量的测定方法，填补了这一技术上的空白。一种硫糖肽含量的测定方法，包括以下步骤
(1)取硫糖肽供试品与标准品，分别加水溶解成lOmg/mL的供试品溶液和标准品溶液；
(2)使用高效液相色谱仪，色谱柱中装填以烷醇季铵为功能基的乙基乙烯苯-二乙烯基苯树脂，装填量为2mmX 250mm，以pH值为3. 0的0. 04wt%的磷酸二氢钠溶液为流动相A， 以PH值为3. 0的高氯酸钠-磷酸盐溶液为流动相B，进行线性梯度洗涤，流速为0. 22mL/ min,检测波长为205nm，进样量为IOyL;
(3)记录色谱图，利用外标法测定供试品中的硫糖肽含量。流动相B是取高氯酸钠77. 7g、磷酸二氢钠0. 2g用水溶解并稀释至500ml，用磷酸调节PH值至3.0得到的。步骤(2)中的线性梯度洗涤操作步骤如下
0-35min,流动相A所占体积由50%均勻变为10%，流动相B所占体积由50%均勻变为
90% ；
35-45min,流动相A所占体积由10%均勻变为50%，流动相B所占体积由90%均勻变为
50% ；
45-60min,流动相A、B所占体积均保持在50%。色谱柱为ASll阴离子交换柱，色谱柱前设有阴离子保护柱，装填量为2mmX50mm。0. 04wt%的磷酸二氢钠溶液用磷酸调节pH为3. 0。本发明的有益效果
(1)对流动相的PH、种类、浓度及梯度变化比例进行了调整，保留时间提前至19min左右，峰形也有很大改善；
(2)对紫外检测波长，流速、进样量等进行了调整，以使检测灵敏度提高；
(3)该方法测定硫糖肽具有很好的专属性和准确度；利用该方法成功测定生产中各批次硫糖肽的含量，从而成为硫糖肽质量控制的一个重要方面。


附图1为实施例1供试品硫糖肽的谱图， 附图2为实施例1硫糖肽标准品的谱图。
具体实施例方式实施例1
一种硫糖肽含量的测定方法，其特征是包括以下步骤
(1)取硫糖肽供试品与标准品，分别加水溶解成lOmg/mL的供试品溶液和标准品溶液；
(2)使用高效液相色谱仪，使用戴安公司的ASll阴离子交换柱，柱中装填以烷醇季铵为功能基的乙基乙烯苯-二乙烯基苯树脂，装填量为2mmX250mm，色谱柱前设有AGll阴离子保护柱，装填量为2mmX50mm ；
以PH值为3. O的0. (Mwt%的磷酸二氢钠溶液为流动相A，以pH值为3. O的高氯酸钠-磷酸盐溶液为流动相B，进行线性梯度洗涤，流速为0. 22mL/min ；检测波长为205nm，进样量为 IOuL ；流动相A为0. 04wt%的磷酸二氢钠溶液用磷酸调节pH为3. 0，流动相B是取高氯酸钠77. 7g、磷酸二氢钠0. 2g用水溶解并稀释至500ml，用磷酸调节pH值至3. O得到的； 线性梯度洗涤操作步骤如下
0-35min,流动相A所占体积由50%均勻变为10%，流动相B所占体积由50%均勻变为
90% ；
35-45min,流动相A所占体积由10%均勻变为50%，流动相B所占体积由90%均勻变为
50% ；
45-60min,流动相A、B所占体积均保持在50% ；
(3 )记录色谱图，硫糖肽供试品的谱图如图1所示，标准品的谱图如图2所示，利用外标法测定供试品中的硫糖肽含量；计算公式如下
权利要求
1.一种硫糖肽含量的测定方法，其特征是包括以下步骤(1)取硫糖肽供试品与标准品，分别加水溶解成lOmg/mL的供试品溶液和标准品溶液；(2)使用高效液相色谱仪，色谱柱中装填以烷醇季铵为功能基的乙基乙烯苯-二乙烯基苯树脂，装填量为2mmX 250mm，以pH值为3. 0的0. 04wt%的磷酸二氢钠溶液为流动相A， 以PH值为3. 0的高氯酸钠-磷酸盐溶液为流动相B，进行线性梯度洗涤，流速为0. 22mL/ min,检测波长为205nm，进样量为IOyL;(3)记录色谱图，利用外标法测定供试品中的硫糖肽含量。
2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于流动相B是取高氯酸钠77.7g、磷酸二氢钠0. 2g用水溶解并稀释至500ml，用磷酸调节pH值至3. O得到的。
3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于步骤(2)中的线性梯度洗涤操作步骤如下0-35min,流动相A所占体积由50%均勻变为10%，流动相B所占体积由50%均勻变为90% ；35-45min,流动相A所占体积由10%均勻变为50%，流动相B所占体积由90%均勻变为50% ；45-60min,流动相A、B所占体积均保持在50%。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的测定方法，其特征在于色谱柱为ASll阴离子交换柱，色谱柱前设有阴离子保护柱，装填量为2mmX50mm。
5.根据权利要求1-3中任一项所述的测定方法，其特征在于0.04wt%的磷酸二氢钠溶液用磷酸调节PH为3.0。
全文摘要
本发明涉及化学药物硫糖肽技术领域一种硫糖肽含量的测定方法，包括以下步骤配制10mg/ml的供试品溶液和标准品溶液；使用高效液相色谱仪，色谱柱中装填以烷醇季铵为功能基的乙基乙烯苯-二乙烯基苯树脂，以pH值为3.0的0.04wt%的磷酸二氢钠溶液为流动相A，以pH值为3.0的高氯酸钠-磷酸盐溶液为流动相B，进行线性梯度洗涤，流速为0.22mL/min;检测波长为205nm，进样量为10μl，记录色谱图，利用外标法测定供试品中的硫糖肽含量。保留时间提前至19min左右，峰形也有很大改善；检测灵敏度提高；具有很好的专属性和准确度。
文档编号G01N30/02GK102305834SQ20111022778
公开日2012年1月4日 申请日期2011年8月10日 优先权日2011年8月10日
发明者孙廷华, 李娟 , 王朋田 申请人:山东众山生物科技有限公司