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专利名称：：一种人参皂苷Rg₁检测分析方法
技术领域：
：本发明涉及药物质量分析领域，具体涉及一种人参皂苷Rgl检测分析方法。
背景技术：
：人参皂苷类成分为人参、三七、西洋参等药物的主要有效成分，分为三大类原人参二醇型，如人参皂苷RbpRb2、Rc、Rd、Rh^M-RbpM-Rd等；原人参三醇型，如人参皂苷Re、Rf、Rgl、Rg2、等；齐墩果酸型，如人参皂苷Ro、Ri等；其中人参皂苷Rgl具有很好的药理活性具有治疗心脑血管疾病、抗血栓、抗纤维化、治疗老年性痴呆、提高免疫力、对各种肿瘤有辅助治疗作用等，因此，人参皂苷Rgi是人参等药材的活性成分，在药品质量检测中，应作为定量指标。人参皂苷Rgl作为有效成分进行定量检测，其检测分析方法的研究从未停止过，主要分析方法有HPLC、GC、TLCS、MS、分光光度法、比色法、薄层光密度法、棒状薄层扫描法、液滴逆流色谱法等，在这些方法中，HPLC法因具有检测灵敏、准确、快速、操作简便、重现性好等优点而得到广泛的应用。文献"高效液相色谱_蒸发光散射法测定红药片中三七皂苷&及人参皂苷RgpRe、R^的含量"(《沈阳药科大学学报》第25巻第5期2008年5月；)等，公开了采用乙腈-水等度流动相的检测方法，这样的方法检测器使用的是蒸发光检测器，检测器价格昂贵，增加了检测费用；文献"高效液相色谱法测定三七中三七皂苷^及人参皂苷Rgl，Rl^的含量"(时珍国医国药2005年第16巻第8期)等，公开了采用乙腈_水梯度流动相的检测方法，这种方法在检测过程中至少要变化两种梯度，属于非线性变化，不利于检测结果的重现和条件优化，或因检测时间短，尚有部分皂苷类成分未检出，造成测定误差，或因检测时间长，造成检测周期延长，使得仪器、分析柱使用寿命縮短等；因此，医药工作者希望寻找到一种更为方便、实用、高效的检测分析方法，便于对人参皂苷Rgi进行定量分析。
发明内容基于上述原因，根据人参皂苷类成分之间物理化学性质的差异，我们通过长期实验研究，发明了使用特定的梯度流动相，既可保持人参皂苷Rgl的稳定性，又能够提高人参皂苷R^与相邻杂质的分离度及其它各杂质之间的分离度，使人参皂苷Rgi含量得到精确的测定，该检测方法方便、实用、高效，适合工业化生产中质量检测部门对产品质量的检测，即检测样本较大的产品的检测。我们通过长期实验研究确定的人参皂苷Rgl梯度流动相检测方法为采用紫外检测器检测，流动相为乙腈-水，在0-40分钟内梯度洗脱，梯度洗脱中保持流动相中乙腈体积百分比从20%变为50%，水的体积百分比从80%变为50%(这种体积百分比的变化为线性变化，如乙腈在40分钟内从20%变为50%，每分钟增加0.75%)。用此流动相在梯度时间内梯度洗脱，可以很好的将人参皂苷Rgi与其性质相近的杂质分离开，特别是与人参皂苷Rgl性质非常接近的杂质如人参皂苷Rb^人参皂苷Re或三七皂苷&与人参皂苷Rgl进行有效分离，分离度保持在2以上，保证了人参皂苷Rgl含量的精确性，延长了色谱柱和仪器的使用寿命，降低了检测费用。本发明通过以下技术方案实现的。—种人参皂苷Rgl的检测分析方法，包括人参药材、三七药材、西洋参药材、人参皂苷R^样品、含有人参、三七或西洋参的药物制剂、含有人参皂苷Rgi的药物制剂的高效液相色谱法检测分析，其中流动相为乙腈、水，在0-40分钟内梯度洗脱，梯度洗脱中保持流动相中乙腈体积百分比从20%变为50%，水的体积百分比从80%变为50%。本发明所述的具体检测分析方法包括但不限于下述所述方法采用高效液相色谱法进行含量测定；色谱柱C18反相色谱柱；色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速1.0ml/min;柱温25t:;检测波长203nm;理论板数按人参皂苷Rgl计应不低于2500;以水乙腈为流动相，按下述梯度洗脱条件进行梯度洗脱；0-40分钟，水的比例由80%降至50%，乙腈的比例由20%升至50%;对照品溶液的配制精密称取人参皂苷Rgi对照品到容量瓶中，加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；供试品溶液的配制精密称取或量取样品，经过处理后，放到容量瓶中，加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，采用按外标法以峰面积计算，即得。取人参皂苷Rgl样品、人参药材、参麦注射液、人参皂苷Rgl注射剂按照上述方法进行检测分析，检测结果见表l表l检测结果组别人参皂苷Rgi含量%人参药材3.97人参皂苷Rg!样品96.8参麦注射液标示暈的99.7人参皂苷Rgi注射剂标示量的101.3结论通过实验表明，采用本发明分析方法可以很好对人参、三七或西洋参等药材及其制剂进行质量分析，充分说明本发明检测分析方法具有科学意义。1.图l流动相为乙腈-水等度洗脱的高效液相色谱图，样品为人参皂苷Rgp批号为20080324;(横坐标是时间，纵坐标是电压)2.图2流动相为乙腈-水梯度洗脱的高效液相色谱图，样品为人参皂苷Rgp批号为20080811，按照本发明检测分析方法检测；(横坐标是时间，纵坐标是电压)0021]3.图3流动相为乙腈-水梯度洗脱的高效液相色谱图，样品为血栓通注射液，批号20080926，按照本发明检测分析方法检测；(横坐标是时间，纵坐标是电压)表2不同液相条件分离结果比较<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>实验结论图1的分离度较差，表明人参皂苷R^的色谱峰中含有其他成分，使得人参皂苷R^含量测定结果不准确；图2、3分离度良好，保证了人参皂苷R^含量的准确性；通过上述实验表明，本发明质量分析方法具有一定的科学意义。注将上述检测样品更换成三七、西洋参药材、含三七或西洋参制剂或含人参皂苷的制剂，图谱的效果相近。制备实施例实施例1西洋参药材药材检测采用高效液相色谱法进行含量测定；色谱柱C18反相色谱柱；色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速1.0ml/min;柱温25°C;检测波长203nm;理论板数按人参皂苷Rgl计应不低于2500;以水乙腈为流动相，按下述梯度洗脱条件进行梯度洗脱；0-40分钟，水的比例由80%降至50%，乙腈的比例由20%升至50%;对照品溶液的配制精密称取人参皂苷R^对照品到容量瓶中，加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；供试品溶液的配制精密称取或量取样品，经过处理后，放到容量瓶中，加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，采用按外标法以峰面积计算，即得。实施例2人参皂苷Rgl样品检测分析采用高效液相色谱法进行含量测定；色谱柱C18反相色谱柱；色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速1.0ml/min;柱温25°C;检测波长203nm;理论板数按人参皂苷Rgl计应不低于2500;以水乙腈为流动相，按下述梯度洗脱条件进行梯度洗脱；0-40分钟，水的比例由80%降至50%，乙腈的比例由20%升至50%;对照品溶液的配制精密称取人参皂苷Rgi对照品到容量瓶中，加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；供试品溶液的配制精密称取或量取样品，经过处理后，放到容量瓶中，加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，采用按外标法以峰面积计算，即得。实施例3心宁片的检测分析采用高效液相色谱法进行含量测定；色谱柱C18反相色谱柱；色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速1.0ml/min;柱温25°C;检测波长203nm;理论板数按人参皂苷Rgl计应不低于2500;以水乙腈为流动相，按下述梯度洗脱条件进行梯度洗脱；0-40分钟，水的比例由80%降至50%，乙腈的比例由20%升至50%;对照品溶液的配制精密称取人参皂苷Rgi对照品到容量瓶中，加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；供试品溶液的配制精密称取或量取样品，经过处理后，放到容量瓶中，加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，采用按外标法以峰面积计算，即得。实施例4参麦注射液的检测分析采用高效液相色谱法进行含量测定；色谱柱C18反相色谱柱；色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速1.0ml/min;柱温25t:;检测波长203nm;理论板数按人参皂苷Rgl计应不低于2500;以水乙腈为流动相，按下述梯度洗脱条件进行梯度洗脱；0-40分钟，水的比例由80%降至50%，乙腈的比例由20%升至50%;对照品溶液的配制精密称取人参皂苷Rgi对照品到容量瓶中，加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；供试品溶液的配制精密称取或量取样品，经过处理后，放到容量瓶中，加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，采用按外标法以峰面积计算，即得。实施例5血栓通注射液采用高效液相色谱法进行含量测定；色谱柱C18反相色谱柱；色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速1.0ml/min;柱温25t:;检测波长203nm;理论板数按人参皂苷Rgl计应不低于2500;以水乙腈为流动相，按下述梯度洗脱条件进行梯度洗脱；0-40分钟，水的比例由80%降至50%，乙腈的比例由20%升至50%;对照品溶液的配制精密称取人参皂苷Rgi对照品到容量瓶中，加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；供试品溶液的配制精密称取或量取样品，经过处理后，放到容量瓶中，加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，采用按外标法以峰面积计算，即得。实施例6西洋参含片的检测分析采用高效液相色谱法进行含量测定；色谱柱C18反相色谱柱；色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速1.0ml/min;柱温25t:;检测波长203nm;理论板数按人参皂苷Rgl计应不低于2500;以水乙腈为流动相，按下述梯度洗脱条件进行梯度洗脱；0-40分钟，水的比例由80%降至50%，乙腈的比例由20%升至50%;对照品溶液的配制精密称取人参皂苷Rgi对照品到容量瓶中，加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；供试品溶液的配制精密称取或量取样品，经过处理后，放到容量瓶中，加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，采用按外标法以峰面积计算，即得。注本发明所要求保护的具体技术方案，不限于上述实施例所表达的技术方案的具体组合。权利要求一种人参皂苷Rg1的检测分析方法，包括人参药材、三七药材、西洋参药材、人参皂苷Rg1样品、含有人参、三七或西洋参的药物制剂、含有人参皂苷Rg1的药物制剂的高效液相色谱法检测分析，其特征在于流动相为乙腈、水，在0-40分钟内梯度洗脱，梯度洗脱中保持流动相中乙腈体积百分比从20％变为50％，水的体积百分比从80％变为50％。2.根据权利要求1所述的一种人参皂苷Rgi的检测分析方法，其特征在于采用高效液相色谱法进行含量测定；色谱柱C18反相色谱柱；色谱条件与系统适用性实验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速1.Oml/min;柱温25t:;检测波长203nm;理论板数按人参皂苷Rgi计应不低于2500;以水乙腈为流动相，按下述梯度洗脱条件进行梯度洗脱；0-40分钟，水的比例由80%降至50%，乙腈的比例由20%升至50%;对照品溶液的配制精密称取人参皂苷R^对照品到容量瓶中，加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；供试品溶液的配制精密称取或量取样品，经过处理后，放到容量瓶中，加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，采用按外标法以峰面积计算，即得。全文摘要本发明公开了一种人参皂苷Rg1的检测分析方法，包括人参药材、三七药材、西洋参药材、人参皂苷Rg1样品、含有人参、三七或西洋参的药物制剂、含有人参皂苷Rg1的药物制剂的高效液相色谱法检测分析，其特征在于流动相为乙腈、水，在0-40分钟内梯度洗脱，梯度洗脱中保持流动相中乙腈体积百分比从20％变为50％，水的体积百分比从80％变为50％。用此流动相在梯度时间内梯度洗脱，可以很好的将人参皂苷Rg1与其性质相近的杂质分离开，与人参皂苷Rg1性质非常接近的杂质，分离度保持在2以上，保证了人参皂苷Rg1含量的精确性，该检测分析方法更为方便、简单。文档编号G01N33/15GK101762652SQ20081024073公开日2010年6月30日申请日期2008年12月24日优先权日2008年12月24日发明者孙学伟,孙德杰,李学敏,李志刚,米长江,阮爱华,顾群申请人:北京本草天源药物研究院