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专利名称：免疫鉴定脑脊液的装置和方法
免疫鉴定脑脊液的装置和方法与相关申请的交叉引用本申请是2009年8月7日提交的美国临时申请No. 61/232，033 (其通过整体引用并入本文)的正式申请。公开领域本公开内容涉及样品中是否存在脑脊液(cerebrospinal fluid, CSF)的检测，其通过检测与在其他体液中的水平相比在CSF中富集的一种或更多种蛋白质来进行。本文描述了用于检测来自跨种族、年龄、性别、健康状态和遗传变异的广泛人群的混合体液样品中是否存在脑脊液的装置和方法。背景脑脊液(CSF)或脑脊髓液(liquor cerebrospinalis)存在于蛛网膜下腔以及围绕并穿过中枢神经系统(CNS)的腔室中。脑和脊髓浸泡于CSF中，CSF向神经元和胶质提供水分、营养、代谢废物的去除和静液冲击的缓冲。CSF通过扩散、胞饮和主动转运的组合过程通过侧脑室和第四脑室的脉络丛从动脉血中产生。该流体还包含产生自神经元和胶质的成分。在通过脑室系统扩散至蛛网膜下腔后，大部分CSF经硬脑膜静脉丛被蛛网膜颗粒重吸收进入血流。每天产生约500ml的脑脊液；成人的总体积为140-150ml，总CSF每6_8小时更新。在整个CNS中CSF与硬脑膜连接。大部分流体在吻端CNS产生，而且大部分最终在尾端脊髓排出，形成吻端至尾端的净流体流。CSF是等渗混合物，大部分成分为盐、葡萄糖、 蛋白质和水。来自腰区(lumbar region)的CSF含有15至45mg/dl蛋白质(0.3-1%血清蛋白质浓度)和50-80mg/dl葡萄糖(60%血液葡萄糖)。脑池和脑室CSF中的蛋白质浓度较低。CSF中的蛋白质类型可以分为两类构成健康个体CSF的主要成分的血液来源蛋白，以及脑来源蛋白。CSF中约20 %的蛋白质来源于脑实质，但其中只有一部分是脑特异的。尽管事实上大部分脑脊液蛋白质也存在于血清中，但是多种蛋白质来源是CSF特有的从神经元和胶质细胞释放的蛋白质，例如tau蛋白、S-100和神经元特异性烯醇酶 (neuron-specific enolase, NSE)。从软脑膜(1印tomeniges)释放的蛋白质，例如β -微量蛋白(β -trace protein) 和抑半胱氨酸蛋白酶蛋白C(cyStatin C)。在脉络丛中进行合成期间被糖基化或磷酸化差异性修饰的蛋白质，例如运甲状腺素蛋白(transthyretin，TTR)、血管紧张肽II和胰岛素样生长因子II。CSF和血浆的蛋白质谱有很大的重合，有相当数目的蛋白质是CSF特有的，或者在 CNS中通过磷酸化或糖基化独特地修饰。设计侧向流测试(Lateral Flow Test)(或者也称为侧向流免疫色谱测定或试条测试)来快速检测异质基质中是否存在给定分析物。目前市场上有多种侧向流测试用于家用测试、即时测试(point of care testing)或实验室使用，例如怀孕测试(例如FirstResponse ，ClearBlue )、HIV 测试(例如 OraQuick ADVANCE ，Clearview Complete)或衣原体测试(例如 Clearview Chlamydia，inSTIcheck Chlamydia)。需要与HIV 测试(如 OraQuick ADVANCE 或 Clearview Complete)类似的适于检测CSF的测试它是即时测试；该测试仅是定性的；操作者使用该测试仅需最低程度的训练；该测试在试片上有内部对照以确认准确取样。概述在一个实施方案中，用于检测样品中是否存在脑脊液的装置包含样品施加区，样品标记区，其包含针对CSF富集蛋白(CSF-enriched protein)的第一抗体，其中所述第一抗体与流动颗粒缀合；样品检测区，其包含针对所述CSF富集蛋白的第二抗体，其中将所述第二抗体固定到所述样品检测区，其中在第二区存在可检测条带指示所述样品中存在脑脊液。在另一实施方案中，检测样品中是否存在CSF的方法包括将所述样品与对CSF富集蛋白特异的结合伴侣(binding partner)接触，以及检测结合伴侣-CSF富集蛋白复合物是否存在，其中可检测复合物的存在指示所述样品中存在CSF。在上述实施方案中，所述CSF抗原是神经细胞粘附分子样蛋白同工型1(SEQ ID NO :1 ；登录号gi :62088238)；链A，与牛胰胰蛋白酶抑制剂(Bpti)复合的人中胰蛋白酶(Mesotrypsin) (SEQ ID NO :2 ；登录号 gi 162330095) ；CNTN2 接触蛋白 _2 前体(SEQ ID NO :3 ；登录号 gi I 4827022) ；CNTNl 接触蛋白 _1 的同工型 2 (SEQ ID NO 4 ；登录号gi:28373119)；与SPARC样蛋白1高度相似的cDNA(未命名的蛋白质产物) (SEQ ID NO :5 ；登录号gi 1194388050) ；NRCAM蛋白(神经元细胞粘附分子)[人(Homo sapiens)]可能的稍长片段( 96kDa)(登录号SEQ ID NO :6 ;gi | 68534652 和 SEQ ID NO 7 ；gi 1109731501) ；NCAM2神经细胞粘附分子2，同工型CRA_a(SEQ ID N0:8;登录号 gi 1119630409) ；SERPINA3丝氨酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子，进化枝A，成员3前体/ α 1-抗胰凝乳蛋白酶的同工型1/生长抑制蛋白25[人]或α 1_抗胰凝乳蛋白酶前体的稍长片段(SEQ ID NO :9;登录号gi I 46981961) ；AGT血管紧张肽原(SEQ ID NO 10 ；登录号gi 1553181)；血管紧张肽原前体(丝氨酸蛋白酶抑制因子(Serpin)AS) (SEQ ID NO=Il ； 登录号gi|4557^7)；未命名的蛋白质产物，也称为免疫球蛋白超家族，成员4B;在人中也称为细胞粘附分子 3 (SEQ ID NO 12 ；登录号 gi 1187608363) ；cDNA FLJ59893, dickkopf 同源物3前体(SEQ ID NO 13 ；登录号gi | 40548389) ；SERPINF1丝氨酸(或半胱氨酸)蛋白酶抑制因子，进化枝F( α-2抗纤溶酶(antiplasmin)，色素上皮衍生因子，Pedf)，成员1 同工型4因子(SEQ ID NO :14;登录号gi 115988024)；与GC维生素D结合蛋白相似的人蛋白质，预测为维生素D结合蛋白[黑猩猩(Pan troglodytes)] (SEQ ID NO :15 ；登录号 181482) ；CD14 人单核细胞抗原 CD14(CD14) (SEQ ID NO :16 ；登录号 gi 1117646212) ；CADM3 人细胞粘附分子3(CADM3)，转录变体1(SEQ ID NO 17 ；登录号gi | 90080503 ； SEQ ID N0: 18 ;gi 1187608363(人)；神经细胞粘附分子变体(SEQ ID NO :19 ；登录号 gi :62088238)； 与CLU cDNA FLJ57622相似的未命名蛋白质，与簇蛋白高度相似(SEQ ID NO :20 ；登录号gi 1189054091)；与簇蛋白高度相似的蛋白质(SEQ ID NO :21 ；登录号gi 1193787502)； LMAN2囊泡整合膜蛋白(Vesicular integral-membrane protein) VIP36 (SEQ ID NO :22 ；登录号gi 11578；34800)；簇蛋白同工型1 [人](SEQ ID NO :23 ；登录号NM_001831. 2)；超氧化物歧化酶3，细胞外前体(SEQ ID NO :24;登录号gi 1118582275)；纤维蛋白α C端片段(SEQ ID NO 25 ；登录号gi I 223057)；链A，人激肽释放酶6 (Hk6)活化形式或KLK6激肽释放酶6 的同工型1(SEQ ID NO :26;登录号gi I 21465970) ；APCS血清淀粉样P成分/链A或五聚体人血清淀粉样P成分(SEQ ID NO 27 ；登录号gi | 576259) ；FAM3C蛋白FAM3C/序列相似家族3，成员C前体[人]note="预测的成骨细胞蛋白；白介素样EMT诱导因子(SEQ ID NO 28 ；登录号gi I 556^272)；与未命名蛋白质产物[食蟹猴(Macaca fascicularis)]相似的蛋白质，也称为免疫球蛋白超家族，成员4B，在人中也称为细胞粘附分子3(SEQ ID NO 29 ；登录号gi 1187608363)；上述CSF抗原的CSF富集磷酸化或去磷酸化形式；或者两种或更多种上述CSF抗原的组合。在另一实施方案中，在体液、组织或微生物中检测反应物(reactant)的方法包括将所述体液、组织或微生物与两种或更多种抗体接触，其中每种抗体与所述反应物中的抗原特异地反应，其中与单种抗体的反应不指示所述反应物的阳性测试，以及其中与所述两种或更多种抗体的反应指示所述反应物的阳性测试。附图简述

图1是侧向流测定。通过滴管或通过直接浸蘸来将分析物添加到试片的左端。液体(约75 μ 1)被吸过试片到达右端。缀合物垫包含与可视颗粒(即金或胶乳微球)结合的可溶IgG。如果分析物溶液含有分析物，抗体缀合并且复合物沿试片迁移。混合物首先接触测试试片，其包含针对所述分析物的固定化抗体。然后分析物、可溶第一和可视标签与测试线结合。如果不存在分析物，可溶成分流过测试线。无论是否存在分析物，与指示剂结合的过量可溶IgG与结合至固定化抗球蛋白IgG相结合，所述抗球蛋白IgG与对照试片结合。图2显示CSF检测的多抗原方法的优势。上图显示多种测试条件的单抗原测定结果，下图显示多抗原测定的结果。沿X轴的柱表示不同的测定条件，Y轴表示测定显示的免疫反应性程度。上方阴影区表示在侧向流测定的测试线上有阳性比色反应。免疫反应性进入阴影区的测定产生阳性测试结果。柱1 上图的CSF柱表明单个抗原的免疫反应性足以产生阳性测试结果。或者在多抗原图(下方)中，每个产生部分信号的抗原组合累积产生阳性测定结果。柱2 被血液污染的CSF产生类似的阳性反应，具有较小但叠加的血液免疫反应性(上方粗边柱)。柱3:异常CSF/血液样品，其中抗原1免疫反应性弱。在单个抗原测定中，测定产生假阴性，但由于其他5种抗原的免疫反应性未减弱，多抗原测定仍高于测定阈值。柱4 不具抗原1的免疫反应性的CSF/血液。与柱3的结果相同。柱5 无CSF但血液中含有交叉反应性抗原。在这种情况下，单个抗原测定产生加阳性，但是由于单个抗原的免疫反应性不足以在多抗原测定中产生阳性信号，测定产生正确的阴性结果。柱6 无CSF 但抗原1的血液水平病理性升高。单抗原测定产生与升高的血液水平反应的假阳性。多抗原测定与血液中的病原性抗原1水平反应，但未达到假阳性的阈值。该测定用5种抗原/ 抗体1/抗体2的混合进行，但另一些实施方案可以包含2至多达10种的抗原/抗体1/抗体2混合。图3 =CSF和血液蛋白质的二维凝胶电泳。单个试验的实例，其中对100 μ g的Cy标签化CSF蛋白(A)与100 μ g的Cy3标签化血液蛋白(B)进行二维分离。A和B是使用不同激发和发射条件的同一凝胶的灰度图。pH范围为4-8。C)是两通道的RGB合并，其中黄色点表示显著重叠。D)是CSF或血液中富集>5倍的点的自动提取。所有样品均2次耗尽 (depleted)主要血清/CSF蛋白(参见方法部分)。图4 一些图3凝胶所示的CSF富集点的液相色谱-质谱分析。图5 =CSF富集蛋白FLJ55和dickkopf同源物3前体(DKK3)。A)FLJ55的免疫印迹。针对FLJ55的重组片段产生的亲和纯化多克隆兔抗人抗体在CSF样品但不在血清样品中在正确的分子量处产生免疫反应性。B)针对DKK3的重组片段产生的亲和纯化多克隆兔抗人抗体也在CSF样品但不在血清样品中在正确的分子量处产生免疫反应性。在两种情况下，过量的血清蛋白以高于血清的水平上样。C) 4个独立的CSF样品表明DKK2与不同的亲和纯化抗体的免疫反应性(左)。5个血液样品未能产生免疫反应性。泳道5的血液有高的非特异性背景。图6 :CSF中高度富集的血管紧张肽原的磷酸化形式。Cy3血液(绿色)和 Cy5CSF (红色)的RGB合并。我们鉴定出几种在血液中不存在的不重叠的新磷酸化形式(右边4个红色点)。在CSF和血液中存在至少3个其他组合(左边3个点)。图7 :CSF特异性翻译后修饰。去除所有经提取蛋白质的二级修饰之前(上图)和之后(中图)，CSF 2D凝胶蛋白质分布图谱的变化。下图的红点指示去除翻译后修饰后，特定蛋白质信号的降低。图8 产生CSF检测测试试片的实验流程图。图9 磷酸化的CSF蛋白。进行单个DIGE凝胶电泳，其中两个样品为耗尽血清蛋白的CSF。A)在碱性磷酸酶中孵育了 1小时的CSF样品的Cy3标记蛋白质。B)耗尽了血清蛋白的CSF的等同样品，其未用碱性磷酸酶处理。C)计算机生成的两个凝胶(A相比于B) 点体积之间的差异(蓝边)。所有蓝点代表磷酸化的CSF蛋白。详述本文描述了与在其他体液中相比在CSF中富集的蛋白质，以及通过检测这些蛋白质来检测样品中是否存在脑脊液(CSF)的方法。本文还描述了在跨种族、年龄、性别、健康状态和遗传变异的广泛人群的混合体液样品中检测是否存在CSF的装置和方法。用特异性蛋白结合伴侣(如抗体、配体、受体等)检测CSF富集蛋白。结合伴侣可以是天然或合成的结合伴侣。可以直接或间接地检测结合，例如用连接至结合伴侣的荧光标记。尽管所包含的几个实施方案使用抗体作为结合伴侣，应理解可以使用其他结合伴侣替代抗体。在一些实施方案中，对CSF富集蛋白的水平进行定量。该定量对鉴定脑损伤尤其有用。可以使用具有可检测标记之结合伴侣进行定量。“可检测部分”或“标记”是指可通过光谱、光化学、生物化学、免疫化学或化学方式检测的组合物。可用的标记包括32P、35S、 荧光染料、电子致密试剂、酶(例如ELISA中通常使用的)、生物素-链霉亲和素、地高辛 (dioxigenin)、可获得抗血清或单克隆抗体的半抗原和蛋白质。可检测部分通常产生可测量的信号，如可用来对样品中结合的可检测部分的量进行定量的放射活性、生色或荧光信号。可检测部分可以共价地或通过离子、范德华相互作用或氢键掺入或连接至结合伴侣。可检测部分可以被直接或间接地检测。间接检测可以包括将直接或间接第二可检测部分与所述可检测部分结合。在一些实施方案中，使用侧向流测定使用如对目的CSF蛋白特异的抗体进行CSF 检测。侧向流测定可以是单抗原测定或多抗原测定。在一个实施方案中，多抗原测试使用所有抗原一起提供单个易读结果(即试片测定中的单个条带)。在另一实施方案中，多抗原测定对几种抗原的每个进行定性或定量测试，以给出所存在抗原的更复杂图谱。该图谱可用于测定头部损伤的严重性，即当某些CSF特异蛋白质存在时头部损伤严重性低，当另一些CSF特异性蛋白质存在时严重性高，或者每种蛋白质的水平均给出损伤程度。单抗原测定尽管许多临床测定已成功地使用了侧向流技术，本文所述的独特和创新方法对该技术有如下扩展i)结合单种或多种CSF富集蛋白，从而增加测试的敏感性和特异性，和/ 或ii)检测CSF特异性翻译后修饰(例如磷酸化)。本文所用CSF富集蛋白或者CSF抗原或多肽是对CSF特异或者与其他体液相比在 CSF中大量富集的抗原或多肽。表1给出了已知在CSF中浓度高的几种蛋白质。这些不是本申请鉴定出的蛋白质，尽管在一些实施方案中，它们可以在多抗原测定中与本文鉴定的一种或更多种本文鉴定的蛋白质在测定中组合。表 权利要求
1.用于检测样品中是否存在脑脊液的装置，其包含样品施加区，样品标记区，其包含针对CSF富集蛋白的第一抗体，其中所述第一抗体与流动颗粒缀合；样品检测区，其包含针对所述CSF富集蛋白的第二抗体，其中将所述第二抗体固定到所述样品检测区，其中在第二区存在可检测条带指示所述样品中存在脑脊液。其中所述CSF富集蛋白是神经细胞粘附分子样蛋白同工型1 (SEQ ID N0:1;登录号 gi :62088238)；链A，与牛胰胰蛋白酶抑制剂(Bpti)复合的人中胰蛋白酶(SEQ ID NO 2 ；登录号 gi :162330095) ；CNTN2 接触蛋白-2 前体(SEQ ID NO :3 ；登录号 gi | 4827022)； CNTm接触蛋白-1的同工型2 (SEQ ID NO :4 ；登录号gi 28373119)；与SPARC样蛋白1高度相似的cDNA(未命名的蛋白质产物)(SEQ ID NO :5 ；登录号:gi 1194388050) ；NRCAM蛋白 (神经元细胞粘附分子)[人(Homo sapiens)]可能的稍长片段( 96kDa)(登录号SEQ ID NO 6 ；gi |68534652 和 SEQ ID NO 7 ；gi 1109731501) ；NCAM2 神经细胞粘附分子 2，同工型CRA_a(SEQ ID NO 8 ；登录号gi 1119630409) ；SERPINA3丝氨酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子，进化枝A，成员3前体/α 1-抗胰凝乳蛋白酶的同工型1/生长抑制蛋白25[人] 或α 1-抗胰凝乳蛋白酶前体的稍长片段(SEQ ID NO 9 ；登录号gi|46981961) ；AGT血管紧张肽原(SEQ ID N0:10;登录号gi|553181)；血管紧张肽原前体(丝氨酸蛋白酶抑制因子A8)(SEQ ID N0:11 ；登录号gi|4557^7)；未命名的蛋白质产物，也称为免疫球蛋白超家族，成员4B ；在人中也称为细胞粘附分子3 (SEQ ID NO 12 ；登录号gi 1187608363) ；cDNA FLJ59893, dickkopf 同源物 3 前体(SEQ ID NO 13 ；登录号 gi | 40548389) ；SERPINF1 丝氨酸(或半胱氨酸)蛋白酶抑制因子，进化枝F(a_2抗纤溶酶，色素上皮衍生因子，Pedf)，成员1同工型4因子(SEQ ID NO 14 ；登录号gi 115988024)；与GC维生素D结合蛋白相似的人蛋白质，预测为维生素D结合蛋白[黑猩猩(Pan troglodytes)] (SEQ ID NO :15 ；登录号 181482) ；CD14 人单核细胞抗原 CD14(CD14) (SEQ ID NO :16 ；登录号 gi 1117646212) ；CADM3 人细胞粘附分子3(CADM3)，转录变体1 (SEQ ID NO 17 ；登录号gi | 90080503 ；SEQ ID NO 18 ;gi 1187608363(人)；神经细胞粘附分子变体(SEQ ID NO :19 ；登录号 gi :62088238)； 与CLU cDNA FLJ57622相似的未命名蛋白质，与簇蛋白高度相似(SEQ ID NO :20 ；登录号gi 1189054091)；与簇蛋白高度相似的蛋白质(SEQ ID NO :21 ；登录号gi 1193787502)； LMAN2囊泡整合膜蛋白VIP36(SEQ ID NO :22 ；登录号gi 1157834800)；簇蛋白同工型1 [人] (SEQ ID NO :23 ；登录号NM_001831. 2)；超氧化物歧化酶3，细胞外前体(SEQ ID NO :24 ； 登录号gi 1118582275)；纤维蛋白α C端片段(SEQ ID NO :25 ；登录号gi | 223057)；链A， 人激肽释放酶6 (Hk6)活化形式或KLK6激肽释放酶6的同工型1 (SEQ ID NO 26 ；登录号 gi I 21465970) ；APCS血清淀粉样P成分/链A或五聚体人血清淀粉样P成分(SEQ ID N0 27 ；登录号gi I 576259) ；FAM3C蛋白FAM3C/序列相似家族3，成员C前体[人]note =“预测的成骨细胞蛋白；白介素样EMT诱导因子(SEQ ID N0:28 ；登录号gi | 556^272)；与未命名蛋白质产物[食蟹猴(Macaca fascicularis)]相似的蛋白质，也称为免疫球蛋白超家族，成员4B，在人中也称为细胞粘附分子3(SEQ ID NO :29 ；登录号gi 1187608363)；上述CSF 抗原的CSF富集磷酸化或去磷酸化形式；或者两种或更多种上述CSF抗原的组合。
2.权利要求1的方法，其中所述装置包含2至10种不同的抗体，它们每种与不同的CSF 富集蛋白特异地结合。
3.权利要求2的方法，其中所述装置提供单个的组合结果，或者所述装置对每种抗体提供单独的结果。
4.权利要求2的方法，其中使用低于阈值水平的每种抗体。
5.权利要求2的方法，其中所述装置包含4至10种不同的抗体，它们每种与不同的CSF 富集蛋白特异地结合，而且其中阳性测试不需要与所有抗体结合。
6.权利要求1的方法，其还包括对所述样品中CSF富集蛋白的水平进行定量。
7.权利要求1的方法，其中所述针对CSF富集蛋白的第一抗体与所述CSF富集蛋白中的翻译后修饰结合。
8.检测样品中是否存在CSF的方法，其包括将所述样品与对CSF富集蛋白特异的结合伴侣接触，以及检测结合伴侣-CSF富集蛋白复合物是否存在，其中可检测复合物的存在指示所述样品中存在CSF;其中所述CSF富集蛋白是神经细胞粘附分子样蛋白同工型1(SEQ ID N0:1;登录号 gi :62088238)；链A，与牛胰胰蛋白酶抑制剂(Bpti)复合的人中胰蛋白酶(SEQ ID NO 2 ；登录号 gi :162330095) ；CNTN2 接触蛋白-2 前体(SEQ ID NO :3 ；登录号 gi | 4827022)； CNTm接触蛋白-1的同工型2 (SEQ ID NO :4 ；登录号gi 28373119)；与SPARC样蛋白1高度相似的cDNA(未命名的蛋白质产物)(SEQ ID NO :5 ；登录号:gi 1194388050) ；NRCAM蛋白 (神经元细胞粘附分子)[人(Homo sapiens)]可能的稍长片段( 96kDa)(登录号SEQ ID NO 6 ；gi |68534652 和 SEQ ID NO 7 ；gi 1109731501) ；NCAM2 神经细胞粘附分子 2，同工型CRA_a(SEQ ID NO :8 ；登录号gi 1119630409) ；SERPINA3丝氨酸蛋白酶抑制因子肽酶抑制因子，进化枝A，成员3前体/α 1-抗胰凝乳蛋白酶的同工型1/生长抑制蛋白25[人] 或α 1-抗胰凝乳蛋白酶前体的稍长片段(SEQ ID NO :9 ；登录号gi | 46981961) ；AGT血管紧张肽原(SEQ ID N0:10;登录号gi|553181)；血管紧张肽原前体(丝氨酸蛋白酶抑制因子A8)(SEQ ID N0:11 ；登录号gi|4557^7)；未命名的蛋白质产物，也称为免疫球蛋白超家族，成员4B ；在人中也称为细胞粘附分子3 (SEQ ID NO 12 ；登录号gi 1187608363) ；cDNA FLJ59893, dickkopf 同源物 3 前体(SEQ ID NO 13 ；登录号 gi | 40548389) ；SERPINF1 丝氨酸(或半胱氨酸)蛋白酶抑制因子，进化枝F(a_2抗纤溶酶，色素上皮衍生因子，Pedf)，成员1同工型4因子(SEQ ID NO 14 ；登录号gi 115988024)；与GC维生素D结合蛋白相似的人蛋白质，预测为维生素D结合蛋白[黑猩猩(Pan troglodytes)] (SEQ ID N0:15;登录号 181482) ；CD14 人单核细胞抗原 CD14(CD14) (SEQ ID NO :16 ；登录号 gi 1117646212) ；CADM3 人细胞粘附分子3(CADM3)，转录变体1 (SEQ ID NO 17 ；登录号gi | 90080503 ； SEQ ID NO 18 ;gi 1187608363(人)；神经细胞粘附分子变体(SEQ ID NO 19 ；登录号 gi 62088238)； 与CLU cDNA FLJ57622相似的未命名蛋白质，与簇蛋白高度相似(SEQ ID NO :20 ；登录号gi 1189054091)；与簇蛋白高度相似的蛋白质(SEQ ID NO :21 ；登录号gi 1193787502)； LMAN2囊泡整合膜蛋白VIP36(SEQ ID NO :22 ；登录号gi 1157834800)；簇蛋白同工型1 [人] (SEQ ID NO :23 ；登录号NM_001831. 2)；超氧化物歧化酶3，细胞外前体(SEQ ID NO :24 ； 登录号gi 1118582275)；纤维蛋白aC端片段(SEQ ID NO :25 ；登录号gi | 223057)；链A，人激肽释放酶6 (Hk6)活化形式或KLK6激肽释放酶6的同工型1 (SEQ ID NO 26 ；登录号 gi I 21465970) ；APCS血清淀粉样P成分/链A或五聚体人血清淀粉样P成分(SEQ ID NO 27 ；登录号gi I 576259) ；FAM3C蛋白FAM3C/序列相似家族3，成员C前体[AJnote =“预测的成骨细胞蛋白；白介素样EMT诱导因子(SEQ ID N0:28 ；登录号gi | 556^272)；与未命名蛋白质产物[食蟹猴(Macaca fascicularis)]相似的蛋白质，也称为免疫球蛋白超家族，成员4B，在人中也称为细胞粘附分子3 (SEQ ID NO :29 ；登录号gi 1187608363)；上述CSF 抗原的CSF富集磷酸化或去磷酸化形式；或者两种或更多种上述CSF抗原的组合。
9.权利要求8的方法，其中所述结合伴侣包含可检测标记。
10.权利要求9的方法，其还包括对所述样品中结合伴侣-CSF富集蛋白复合物进行定量。
11.权利要求8的方法，其中所述结合伴侣是抗体，而且检测包括差异性抗体结合。
12.权利要求8的方法，其中所述结合伴侣是抗体而且检测包括原位免疫测定。
13.权利要求8的方法，其中所述样品是组织、血液、血清、血浆、尿液、鼻和耳流出物、 唾液、汗液或泪液。
14.权利要求8的方法，其中所述样品来自怀疑有脑损伤的个体。
15.权利要求8的方法，其包括将所述样品与2至10种不同抗体接触，每种所述抗体与不同的CSF富集蛋白特异地结合。
16.权利要求15的方法，其中使用低于阈值水平的每种抗体。
17.权利要求8的方法，其中所述结合伴侣是抗体，而且所述测定包括将所述样品与4 至10种不同抗体接触，每种所述抗体与不同的CSF富集蛋白特异地结合，而且其中阳性测试不需要与所有抗体结合。
18.权利要求8的方法，其中所述结合伴侣是与所述CSF富集蛋白中的翻译后修饰相结合的抗体。
19.检测体液、组织或微生物中的反应物的方法，其包括将所述体液、组织或微生物与两种或更多种抗体接触，其中每种抗体与所述反应物中的抗原特异地反应，其中与单种抗体的反应不指示所述反应物的阳性测试，以及其中与所述两种或更多种抗体的反应指示所述反应物的阳性测试。
20.权利要求19的方法，其中所述两种或更多种抗体与CSF富集蛋白结合，而且所述测试适于指示样品中CSF的存在。
全文摘要
本公开内容涉及样品中是否存在脑脊液(cerebrospinal fluid，CSF)的检测，其通过检测与在其他体液中的水平相比在CSF中富集的一种或更多种抗原来进行。装置和方法适于在来自跨种族、年龄、性别、健康状态和遗传变异的广泛人群的混合体液样品中检测脑脊液是否存在。
文档编号G01N33/68GK102576019SQ201080045270
公开日2012年7月11日 申请日期2010年8月6日 优先权日2009年8月7日
发明者文森特·皮埃里博内 申请人:亲和标记技术公司