专利名称：香草醛-硫酸比色法测定光甘草定含量的方法
技术领域：
本发明属于植物含量测定技术领域，尤其涉及到一种香草醛-硫酸比色法测定光甘草定含量的方法。
背景技术：
光果甘草glabra L.)中所特含的异黄烷类简称为光甘草定 (i^^rii/i/ )，异黄烷类具有多种多样的药物活性而备受关注。光甘草定的分子式为C2tlH2tlO4 ，分子量为324. 37。有资料表明，光甘草定可用来作美白祛斑化妆品中的添加剂，通过抑制酪氨酸酶和多巴色素互变酶TRP-2的活性，阻碍5，6- 二羟基吲哚DHI的聚合来阻止黑色素的形成，从而达到美白皮肤的效果。还有资料表明，光甘草定具有以下特性
(1)具有较强的抗氧化活性，抗氧自由基能力和维生素E相近；
(2)具有抗菌、抗胞毒、抗乳腺癌细胞增殖作用，以及明显的降血压、降血脂和较强的保护神经作用，其应用前景十分广阔。目前关于分析光甘草定含量的方式采用的是高效液相色谱法，高效液相色谱法所使用的高效液相色谱仪价格昂贵，检测费用高，检测时间较长，对操作人员的要求也很高。虽然比色法是目前测定物质含量较为常用的定量分析方法，然而在香草醛-硫酸条件下使用比色法测定光甘草定含量的方法至今未见报道。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一种香草醛-硫酸比色法测定光甘草定含量的方法，该方法分为两大步骤，第一步骤是显色液吸光度值信息的采集过程，第二步骤是光甘草定标准检测溶液-平均吸光度值的线性回归方程建立过程，该方法所需要时间比高效液相色谱法大大缩短，并且显色液在室温60min内稳定可靠，非常适合大量待测光甘草定含量的集中检测。为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案
一种香草醛-硫酸比色法测定光甘草定含量的方法，该方法主要涉及到光甘草定的标准品纯度HPLC ^ 98%，无水甲醇，质量百分比浓度是98%的硫酸，香草醛，恒温水浴锅，比色皿，紫外可见分光光度计；该方法通过B环具有间苯二酚结构且C环C2、C3是单键的光甘草定与香草醛试剂发生反应并在质量百分比浓度是98%的硫酸酸性条件下使反应液显色， 再利用紫外可见分光光度计测定该显色液在其最大吸收波长534nm下的吸光度值，从而完成显色液吸光度值信息的采集过程在所述酸性条件下，显色液的颜色深浅与光甘草定的含量呈显著线性正相关关系，符合朗伯-比尔定律，从而为光甘草定标准检测溶液-平均吸光度值的线性回归方程建立奠定了基�。鱿咝曰毓榉匠涛院蟠夤飧什荻ê康牟舛ㄌ峁┝硕勘曜�。
所述显色液吸光度值信息的采集过程如下 ①配制浓度为20 mg/mL的香草醛甲醇溶液
用烧杯称取2. Og的香草醛，向烧杯中加入少量无水甲醇以溶解香草醛，将溶解后的香草醛甲醇溶液转移到100 mL的第一容量瓶中，再用少量无水甲醇润洗烧杯2-3次，并将润洗后的香草醛甲醇溶液也转移到第一容量瓶中，再向第一容量瓶中加入无水甲醇溶液至 100 mL刻度为止，摇勻后得到浓度为20 mg/mL的香草醛甲醇溶液。②配制体积百分比浓度为30%的硫酸甲醇溶液
用移液管准确量取30 mL质量百分比浓度是98%的硫酸并置于100 mL的第二容量瓶中，再向第二容量瓶中加入70 mL的无水甲醇，摇勻后得到体积百分比浓度为30%的硫酸甲醇溶液。 ③配制浓度为0. 5 mg/mL的光甘草定标准溶液
用烧杯称取12. 5 mg光甘草定的标准品，向烧杯中加入少量无水甲醇以溶解光甘草定的标准品，将溶解后光甘草定的标准品甲醇溶液置于25mL的第三容量瓶中，再用少量无水甲醇润洗烧杯2-3次，并将润洗后光甘草定的标准品甲醇溶液也转移到第三容量瓶中，再向第三容量瓶中加入无水甲醇溶液至25 mL刻度为止，摇勻后得到浓度为0. 5 mg/mL的光甘草定标准溶液。④配制一十四份浓度范围在0. 01 0. 5 mg/mL的光甘草定标准检测溶液
分别吸取③中光甘草定标准溶液一十四份，所述一十四份0. 5 mg/mL光甘草定标准溶液的吸取量依次为 0. 1 mL、0. 3 mL、0. 5 mL、0. 7 mL、0. 9 mL、l. 1 mL、l. 3 mL、1.4 mL、2. 0 mL、2. 6 mL、3. 2 mL、3. 8 mL、4. 4 mL和5. 0 mL，并分别置于一"h四个5 mL容量瓶中，再向一十四个5 mL容量瓶中依次加入无水甲醇至5 mL刻度为止，摇勻后得到一十四份浓度依次为 0.01 mg/mL、0.03 mg/mL、0. 05 mg/mL、0. 07 mg/mL、0· 09 mg/mL、0. 11 mg/mL>0. 13 mg/ mL、0. 14 mg/mL>0. 2 mg/mL、0. 26 mg/mL、0. 32 mg/mL、0. 38 mg/mL、0. 44 mg/mL 禾口 0. 5 mg/ mL的光甘草定标准检测溶液，或简称为一十四份浓度范围在0.01 0.5 mg/mL的光甘草定标准检测溶液。⑤采集吸光度值
从上述④中得到的一十四份浓度范围在0. 01 0. 5 mg/mL的光甘草定标准检测溶液中各吸取0. 5 mL并分别加入到一十四个10 mL的具塞试管中，然后对所述一十四个10 mL 的具塞试管分别加入2. 5 mL上述①中配制的浓度为20 mg/mL的香草醛甲醇溶液和2. 5 mL上述②中配制的体积百分比浓度为30%的硫酸甲醇溶液，然后对所述一十四个10 mL的具塞试管进行封盖并摇晃混勻后置于20 °C水浴中保温20 min后取出，每个具塞试管得到 5.5 mL的澄清显色液，共得到一十四份所述显色液；从每个具塞试管中提取小于1 / 3的所述显色液并置于比色皿中，利用紫外可见分光光度计采集所述显色液的吸光度值信息， 这样在使用同一比色皿情况下得到一十四份所述显色液的一十四个不同数值的吸光度值信息，这一十四个不同数值的吸光度值信息称为一组，在相同条件下共做三组平行试验以获取三组不同数值的吸光度值信息；将三组中相同浓度所述显色液所采集的三个吸光度值进行算术平均，即得到三组相同浓度所述显色液的平均吸光度值，按此方式能够得到三组中其它浓度所述显色溶液的平均吸光度值，共得到一十四个平均吸光度值，所述一十四个平均吸光度值与上述④中得到的一十四份浓度范围在0. 01 0. 5 mg/mL的光甘草定标准
5检测溶液相对应。所述光甘草定标准检测溶液-平均吸光度值的线性回归方程建立过程如下 ⑥以上述④中所述一"h四份浓度依次为0.01 mg/mL、0. 03 mg/mL、0. 05 mg/mL、0. 07
mg/mL、0. 09 mg/mL、0. 11 mg/mL、0. 13 mg/mL、0. 14 mg/mL、0. 2 mg/mL、0. 26 mg/mL、0. 32 mg/mL、0. 38 mg/mL、0. 44 mg/mL和0. 5 mg/mL的光甘草定标准检测溶液为χ轴，以上述⑤中所述一十四个平均吸光度值为y轴建立光甘草定标准检测溶液-平均吸光度值的线性回归方程，通过EXECL软件的计算所述线性回归方程由y=4. 4483x和y=l. 4208x+0. 4013表示， 其中y=4.4483x是光甘草定标准检测溶液在其浓度为0.01 mg/mL、0. 03 mg/mL、0. 05 mg/ mL、0. 07 mg/mL,0. 09 mg/mL,0. 11 mg/mL,0. 13 mg/mL 禾口 0. 14 mg/mL 时的线性回归方程， 线性浓度范围:(0. 01- 0. 14 )mg/mL，相关系数R2=O. 9999 ；y=l. 4208x+0. 4013是光甘草定标准检测溶液在其浓度为 0. 14 mg/mL、0. 2 mg/mL、0. 26 mg/mL、0. 32 mg/mL、0. 38 mg/mL、 0.44 mg/mL和0.5 mg/mL时的线性回归方程，线性浓度范围(0. 14- 0.5) mg/mL，相关系数 R2 =0.9957 ；可以看出:x=0. 14 mg/mL 是 y=4. 4483x 和 y=l. 4208x+0. 4013 的分界拐点，在所述分界拐点时两个线性曲线具有不同斜率。由于采用如上所述的技术方案，本发明具有如下优越性
1、本发明相对高效液相色谱法而言同样具有结果准确、精密度高等优点，代替了贵重的高效液相色谱仪，使得检测成本显著降低。2、本发明基于B环具有间苯二酚结构且C环C2、C3是单键的光甘草定与香草醛试剂发生反应并在酸性条件下生成深浅不同的红色络合物的显色溶液，显色溶液在534nm波长下具有最大光吸收率，利用紫外可见分光光度计采集测定显色溶液的吸光度值，符合朗伯-比尔定律，在此基础上建立光甘草定含量-吸光度值的线性回归方程。3、本发明的方法操作简便、快速，完成全部检测操作过程只需不到一小时，检测时间大大缩短，且显色液在室温60min内稳定可靠，从而非常适合对大量待测光甘草定含量的集中检测，尤其适合于工业提取和精制光甘草定过程中各生产阶段的动态检测。
图1是光甘草定标准检测溶液浓度-平均吸光度值标准曲线
具体实施例方式香草醛又称香兰素(Ka/7i#i/7)。有资料报道，香草醛是中药材定性鉴别和定量分析常用的显色剂，这一机理是基于c环C2、C3之间是单键且具有间苯二酚或间苯三酚A-环结构的黄酮类化合物，能与香草醛试剂发生反应生成红色络合物。光甘草定的B环具有间苯二酚结构且C环中C2、C3是单键，因而光甘草定与香草醛在酸性条件下也能显色生成红色络合物，这为本发明提供了基础条件。虽然基础条件成立， 但显色反应的灵敏度与反应体系中酸的浓度相关，酸浓度低则水分大其灵敏度就差。经过单因素试验，本发明选择了质量百分比浓度是98%的浓硫酸作为反应体系的酸性条件，大大提高了显色反应的灵敏度及稳定性，而质量百分比浓度是36. 6%的浓盐酸由于所含水分较大造成显色反应的灵敏度大大降低从而不合适用作此反应体系。本发明所用光甘草定的标准品从市场购得，所用光甘草定的标准品纯度
6HPLC ^ 98%。本发明是一种香草醛-硫酸比色法测定光甘草定含量的方法，该方法通过B环具有间苯二酚结构且C环C2、C3是单键的光甘草定与香草醛试剂发生反应并在质量百分比浓度是98%的硫酸酸性条件下使反应液显色，再利用紫外可见分光光度计测定该显色液在其最大吸收波长534nm下的吸光度值，从而完成显色液吸光度值信息的采集过程在所述酸性条件下，显色液的颜色深浅与光甘草定的含量呈显著线性正相关关系，符合朗伯-比尔定律，从而为光甘草定标准检测溶液-平均吸光度值的线性回归方程建立奠定了基础，所述线性回归方程为以后待测光甘草定含量的测定提供了定量标准。本发明所述显色液吸光度值信息的采集过程如下 ①配制浓度为20 mg/mL的香草醛甲醇溶液
用烧杯称取2. Og的香草醛，向烧杯中加入少量无水甲醇以溶解香草醛，将溶解后的香草醛甲醇溶液转移到100 mL的第一容量瓶中，再用少量无水甲醇润洗烧杯2-3次，并将润洗后的香草醛甲醇溶液也转移到第一容量瓶中，再向第一容量瓶中加入无水甲醇溶液至 100 mL刻度为止，摇勻后得到浓度为20 mg/mL的香草醛甲醇溶液。注意①中几次所述少量无水甲醇溶液的加入量不一定相等，但无水甲醇在①中的总加入量必须严格控制在100 mL。②配制体积百分比浓度为30%的硫酸甲醇溶液
用移液管准确量取30 mL质量百分比浓度是98%的硫酸并置于100 mL的第二容量瓶中，再向第二容量瓶中加入70 mL的无水甲醇，摇勻后得到体积百分比浓度为30%的硫酸甲醇溶液。体积百分比浓度为30%的硫酸甲醇溶液为显色反应提供酸性环境。③配制浓度为0. 5 mg/mL的光甘草定标准溶液
用烧杯称取12. 5 mg光甘草定的标准品，向烧杯中加入少量无水甲醇以溶解光甘草定的标准品，将溶解后光甘草定的标准品甲醇溶液置于25mL的第三容量瓶中，再用少量无水甲醇润洗烧杯2-3次，并将润洗后光甘草定的标准品甲醇溶液也转移到第三容量瓶中，再向第三容量瓶中加入无水甲醇溶液至25 mL刻度为止，摇勻后得到浓度为0.5 mg/mL的光甘草定标准溶液。注意③中几次所述少量无水甲醇的加入量不一定相等，但无水甲醇在③中的总加入量必须严格控制在25 mL。④配制一十四份浓度范围在0. 01 0. 5 mg/mL的光甘草定标准检测溶液
分别吸�、壑泄飧什荻ū曜既芤阂皇姆荩鲆皇姆�0. 5 mg/mL光甘草定标准溶液的吸取量依次为 0. 1 mL、0. 3 mL、0. 5 mL、0. 7 mL、0. 9 mL、l. 1 mL、l. 3 mL、1.4 mL、2. 0 mL、2. 6 mL、3. 2 mL、3. 8 mL、4. 4 mL和5. 0 mL，并分别置于一"h四个5 mL容量瓶中，再向一十四个5 mL容量瓶中依次加入无水甲醇至5 mL刻度为止，摇勻后得到一十四份浓度依次为 0.01 mg/mL、0.03 mg/mL、0. 05 mg/mL、0. 07 mg/mL、0· 09 mg/mL、0. 11 mg/mL>0. 13 mg/ mL、0. 14 mg/mL>0. 2 mg/mL、0. 26 mg/mL、0. 32 mg/mL、0. 38 mg/mL、0. 44 mg/mL 禾口 0. 5 mg/ mL的光甘草定标准检测溶液，或简称为一十四份浓度范围在0.01 0.5 mg/mL的光甘草定标准检测溶液。上述④中应对一"h四份浓度范围在0.01 0.5 mg/mL的光甘草定标准检测溶液做出不同标记，或是对一十四个5 mL容量瓶做出不同标记也可，以防混乱。⑤采集吸光度值
从上述④中得到的一十四份浓度范围在0. 01 0. 5 mg/mL的光甘草定标准检测溶液中各吸取0. 5 mL并分别加入到一十四个10 mL的具塞试管中，然后对所述一十四个10 mL 的具塞试管分别加入2. 5 mL上述①中配制的浓度为20 mg/mL的香草醛甲醇溶液和2. 5 mL上述②中配制的体积百分比浓度为30%的硫酸甲醇溶液，然后对所述一十四个10 mL的具塞试管进行封盖并摇晃混勻后置于20 °C水浴中保温20 min后取出，每个具塞试管得到 5.5 mL的澄清显色液，共得到一十四份所述显色液；从每个具塞试管中提取小于1 / 3的所述显色液并置于比色皿中，利用紫外可见分光光度计采集所述显色液的吸光度值信息， 这样在使用同一比色皿情况下得到一十四份所述显色液的一十四个不同数值的吸光度值信息，这一十四个不同数值的吸光度值信息称为一组，在相同条件下共做三组平行试验以获取三组不同数值的吸光度值信息；将三组中相同浓度所述显色液所采集的三个吸光度值进行算术平均，即得到三组相同浓度所述显色液的平均吸光度值，按此方式能够得到三组中其它浓度所述显色溶液的平均吸光度值，共得到一十四个平均吸光度值，所述一十四个平均吸光度值与上述④中得到的一十四份浓度范围在0. 01 0. 5 mg/mL的光甘草定标准检测溶液相对应。上述比色皿必须使用同一只，每采集一次吸光度值信息后要快速清洗该比色皿， 只有在同一比色皿和同一紫外可见分光光度计下所采集的吸光度值才可能最大限度地减少测量误差。上述紫外可见分光光度计使用的型号是UV-2800型，它能够精确测定所述显色溶液的吸光度值。所述显色液在室温60min内稳定可靠，这为采集所述显色液的吸光度值信息提供了保证。本发明所述光甘草定标准检测溶液-平均吸光度值的线性回归方程建立过程如下
⑥以上述④中所述一"h四份浓度依次为0.01 mg/mL,0. 03 mg/mL、0. 05 mg/mL、0. 07 mg/mL、0· 09 mg/mL、0· 11 mg/mL、0. 13 mg/mL、0. 14 mg/mL、0. 2 mg/mL>0. 26 mg/mL>0. 32 mg/mL,0. 38 mg/mL、0. 44 mg/mL和0.5 mg/mL的光甘草定标准检测溶液为χ轴，以上述⑤中所述一十四个平均吸光度值为y轴建立光甘草定标准检测溶液-平均吸光度值的线性回归方程，通过EXECL软件的计算所述线性回归方程由y=4. 4483x和y=l. 4208x+0. 4013表示， 其中y=4. 4483x是光甘草定标准检测溶液在其浓度为0. 01 mg/mL、0. 03 mg/mL、0. 05 mg/ mL、0. 07 mg/mL,0. 09 mg/mL,0. 11 mg/mL,0. 13 mg/mL禾口0. 14 mg/mL时的线性回归方程，线性浓度范围:(0.01- 0. 14 ) mg/mL，相关系数 R2 =0.9999 ；其中 y=l. 4208x+0. 4013 是光甘草定标准检测溶液在其浓度为 0. 14 mg/mL、0. 2 mg/mL、0. 26 mg/mL、0. 32 mg/mL、0. 38 mg/ mL、0. 44 mg/mL和0.5 mg/mL时的线性回归方程，线性浓度范围(0. 14- 0.5) mg/mL，相关系数 R2 =0.9957 ；可以看出:x=0. 14 mg/mL 是 y=4. 4483x 和 y=l. 4208x+0. 4013 的分界拐点， 在所述分界拐点时两个线性曲线具有不同斜率。y=4. 4483x和y=l. 4208x+0. 4013为以后待测光甘草定含量的测定提供了定量标准。CN 102384907 A
说明书
6/8页 图1是根据所述线性回归方程所建立的光甘草定标准检测溶液-平均吸光度值标准曲线，图中横坐标即χ轴为光甘草定标准检测溶液的浓度范围，图中浓度(mg/mL)代表光甘草定标准检测溶液的浓度；图中纵坐标即y轴为平均吸光度值的范围，图中A代表平均吸光度值。所述线性回归方程的应用实例
从光甘草定精制过程中随机抽取其样品A，将样品A按上述③步骤配置成样品A待测溶液，然后再利用所述线性回归方程计算样品A待测溶液的浓度。将0. 5 mL的样品A待测溶液加入到10 mL的具塞试管中，向具塞试管中依次加入 2. 5 mL浓度为20 mg/mL香草醛甲醇溶液和2. 5 mL体积百分比浓度为30%的硫酸甲醇溶液，对具塞试管进行封盖并摇晃混勻，然后将具塞试管置于20 °C水浴中保温20 min后取出，得到样品A待测溶液的澄清显色液。从上述具塞试管中提取小于1 / 3的所述显色液并置于比色皿中，利用紫外可见分光光度计采集所述显色液的吸光度值信息，在相同条件下共做三组平行试验以获取三组不同数值的吸光度值信息。将三组不同数值的吸光度值进行算术平均，得到样品A待测溶液所述显色液的平均吸光度值，将平均吸光度值代入线性回归方程，计算出样品A待测溶液中光甘草定的浓度是0. 124 mg/mL。根据上述方式同样可以计算出样品B待测溶液中光甘草定的浓度是0. 221 mg/
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回收率实验 1.回收率实验1
各取5mL浓度是0. 124 mg/mL的样品A待测溶液六份并分别置于六个10 mL试管中， 再向六个10 mL试管中依次加入浓度为0. 5 mg/mL的光甘草定标准溶液0 mL、0. 2 mL、0. 4 mL、0. 6 mL、0. 8 mL和1. 0 mL，对六个10 mL试管作出六个加入量标记，然后在六个作出标记的试管中分别加入无水甲醇至IOmL刻度止，充分混勻后得到六份稀释的样品A溶液。上述六份样品A待测溶液中光甘草定的原含量值均为0. 124mg/mLX5mL=0. 62 mg ，光甘草定标准溶液中光甘草定的加入值分别为0 mg、0. 1 mg、0. 2 mg、0. 3 mg、0. 4 mg和 0. 5 mg。取所述六份稀释的样品A溶液各0. 5mL,按上述⑤的步骤并根据所述线性回归方程可以分别计算出所述六份稀释的样品A溶液中的光甘草定浓度，并计算出所述六份稀释的样品A溶液中的光甘草定的总测定值，总测定值分别为0. 620 mg、0. 721 mg、0. 819 mg、 0. 92 mg、l. 022 mg 禾口 L 121 mg。用所述总测定值减去所述原含量值即为光甘草定标准溶液中光甘草定加入量的实测值，所述实测值和加入值的比值即为回收率，用EXECL软件求出所述回收率值之间的标准偏差，所述标准偏差和回收率算术平均值的比值就是回收率试验的相对标准偏差。具体结果详见下表
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权利要求
1. 一种香草醛-硫酸比色法测定光甘草定含量的方法，该方法主要涉及到光甘草定的标准品纯度HPLC ^ 98%，无水甲醇，质量百分比浓度是98%的硫酸，香草醛，恒温水浴锅， 比色皿，紫外可见分光光度计；该方法通过B环具有间苯二酚结构且C环C2、C3是单键的光甘草定与香草醛试剂发生反应并在质量百分比浓度是98%的硫酸酸性条件下使反应液显色，再利用紫外可见分光光度计测定该显色液在其最大吸收波长534nm下的吸光度值，从而完成显色液吸光度值信息的采集过程在所述酸性条件下，显色液的颜色深浅与光甘草定的含量呈显著线性正相关关系，符合朗伯-比尔定律，从而为光甘草定标准检测溶液-平均吸光度值的线性回归方程建立奠定了基础，所述线性回归方程为以后待测光甘草定含量的测定提供了定量标准；其特征是所述显色液吸光度值信息的采集过程如下①配制浓度为20mg/mL的香草醛甲醇溶液用烧杯称取2. Og的香草醛，向烧杯中加入少量无水甲醇以溶解香草醛，将溶解后的香草醛甲醇溶液转移到100 mL的第一容量瓶中，再用少量无水甲醇润洗烧杯2-3次，并将润洗后的香草醛甲醇溶液也转移到第一容量瓶中，再向第一容量瓶中加入无水甲醇溶液至 100 mL刻度为止，摇勻后得到浓度为20 mg/mL的香草醛甲醇溶液；②配制体积百分比浓度为30%的硫酸甲醇溶液用移液管准确量取30 mL质量百分比浓度是98%的硫酸并置于100 mL的第二容量瓶中，再向第二容量瓶中加入70 mL的无水甲醇，摇勻后得到体积百分比浓度为30%的硫酸甲醇溶液；③配制浓度为0.5 mg/mL的光甘草定标准溶液用烧杯称取12. 5 mg光甘草定的标准品，向烧杯中加入少量无水甲醇以溶解光甘草定的标准品，将溶解后光甘草定的标准品甲醇溶液置于25mL的第三容量瓶中，再用少量无水甲醇润洗烧杯2-3次，并将润洗后光甘草定的标准品甲醇溶液也转移到第三容量瓶中，再向第三容量瓶中加入无水甲醇溶液至25 mL刻度为止，摇勻后得到浓度为0.5 mg/mL的光甘草定标准溶液；④配制一十四份浓度范围在0.01 0. 5 mg/mL的光甘草定标准检测溶液分别吸�、壑泄飧什荻ū曜既芤阂皇姆荩鲆皇姆�0. 5 mg/mL光甘草定标准溶液的吸取量依次为 0. 1 mL、0. 3 mL、0. 5 mL、0. 7 mL、0. 9 mL、l. 1 mL、1.3 mL、1.4 mL、2. 0 mL、2. 6 mL、3. 2 mL、3. 8 mL、4. 4 mL和5. 0 mL，并分别置于一"h四个5 mL容量瓶中，再向一十四个5 mL容量瓶中依次加入无水甲醇至5 mL刻度为止，摇勻后得到一十四份浓度依次为 0.01 mg/mL、0.03 mg/mL、0. 05 mg/mL、0· 07 mg/mL、0. 09 mg/mL、0· 11 mg/mL、0. 13 mg/ mL、0. 14 mg/mL、0. 2 mg/mL、0. 26 mg/mL、0. 32 mg/mL、0. 38 mg/mL、0. 44 mg/mL 禾口 0. 5 mg/ mL的光甘草定标准检测溶液，或简称为一十四份浓度范围在0. 01 0. 5 mg/mL的光甘草定标准检测溶液；⑤采集吸光度值从上述④中得到的一十四份浓度范围在0. 01 0. 5 mg/mL的光甘草定标准检测溶液中各吸取0. 5 mL并分别加入到一十四个10 mL的具塞试管中，然后对所述一十四个10 mL 的具塞试管分别加入2. 5 mL上述①中配制的浓度为20 mg/mL的香草醛甲醇溶液和2. 5 mL上述②中配制的体积百分比浓度为30%的硫酸甲醇溶液，然后对所述一十四个10 mL的具塞试管进行封盖并摇晃混勻后置于20 °C水浴中保温20 min后取出，每个具塞试管得到 5.5 mL的澄清显色液，共得到一十四份所述显色液；从每个具塞试管中提取小于1 / 3的所述显色液并置于比色皿中，利用紫外可见分光光度计采集所述显色液的吸光度值信息， 这样在使用同一比色皿情况下得到一十四份所述显色液的一十四个不同数值的吸光度值信息，这一十四个不同数值的吸光度值信息称为一组，在相同条件下共做三组平行试验以获取三组不同数值的吸光度值信息；将三组中相同浓度所述显色液所采集的三个吸光度值进行算术平均，即得到三组相同浓度所述显色液的平均吸光度值，按此方式能够得到三组中其它浓度所述显色溶液的平均吸光度值，共得到一十四个平均吸光度值，所述一十四个平均吸光度值与上述④中得到的一十四份浓度范围在0. 01 0. 5 mg/mL的光甘草定标准检测溶液相对应；所述光甘草定标准检测溶液-平均吸光度值的线性回归方程建立过程如下⑥以上述④中所述一"h四份浓度依次为0.01 mg/mL,0. 03 mg/mL、0. 05 mg/mL、0. 07 mg/mL>0. 09 mg/mL、0· 11 mg/mL、0. 13 mg/mL、0. 14 mg/mL、0. 2 mg/mL、0. 26 mg/mL、0. 32 mg/mL,0. 38 mg/mL、0. 44 mg/mL和0.5 mg/mL的光甘草定标准检测溶液为χ轴，以上述⑤中所述一十四个平均吸光度值为y轴建立光甘草定标准检测溶液-平均吸光度值的线性回归方程，通过EXECL软件的计算所述线性回归方程由y=4. 4483x和y=l. 4208x+0. 4013表示， 其中y=4.4483x是光甘草定标准检测溶液在其浓度为0.01 mg/mL、0. 03 mg/mL、0. 05 mg/ mL、0. 07 mg/mL,0. 09 mg/mL,0. 11 mg/mL,0. 13 mg/mL 禾口 0. 14 mg/mL 时的线性回归方程， 线性浓度范围:(0. 01- 0. 14 )mg/mL，相关系数R2=O. 9999 ；y=l. 4208x+0. 4013是光甘草定标准检测溶液在其浓度为 0. 14 mg/mL、0. 2 mg/mL、0. 26 mg/mL、0. 32 mg/mL、0. 38 mg/mL、 0.44 mg/mL和0.5 mg/mL时的线性回归方程，线性浓度范围(0. 14- 0.5) mg/mL，相关系数 R2 =0.9957 ；可以看出:x=0. 14 mg/mL 是 y=4. 4483x 和 y=l. 4208x+0. 4013 的分界拐点，在所述分界拐点时两个线性曲线具有不同斜率。
全文摘要
一种香草醛-硫酸比色法测定光甘草定含量的方法，显色液吸光度值信息的采集过程包括配制浓度为20mg/mL的香草醛甲醇溶液、配制体积百分比浓度为30%的硫酸甲醇溶液、配制浓度为0.5mg/mL的光甘草定标准溶液、配制浓度范围在0.01～0.5mg/mL的光甘草定标准检测溶液和采集吸光度值，显色液在室温60min内稳定可靠，这为采集所述显色液的吸光度值信息提供了保证，最后建立线性回归方程。经回收率实验和重现性实验证明本发明的方法分析稳定，重现性符合要求，证明本发明的方法是完全可靠的，所述线性回归方程为以后待测光甘草定含量的测定提供了定量标准，可以获得与高效液相色谱相同的检测结果和精度。
文档编号G01N21/78GK102384907SQ20111023029
公开日2012年3月21日 申请日期2011年8月12日 优先权日2011年8月12日
发明者唐浩国, 张麦茹, 朱文学, 李欣, 樊金玲 申请人:河南科技大学
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