专利名称：中药凉茶及草药饮料产品质量控制色谱指纹图谱构建方法
技术领域：
本发明涉及一种质量控制色谱指纹图谱的构建方法，尤其是涉及一种中药凉茶及草药饮料系列产品质量控制色谱指纹图谱的构建方法。
背景技术：
我国的饮料工业是改革开放后发展起来的新兴行业，起步比较晚，但发展非常迅速。全国饮料总产量保持持续稳定增长。
随着人们健康意识的增强，人们开始选择健康的饮品，中药凉茶及草药饮料的需求量也不断增加。然而，目前中药凉茶及草药饮料的质量控制，都是以某一成分的含量作为指标，或者侧重感官指标、某些理化指标、微生物指标等，一直没有一个能完善反馈其本质的标准。2009年5月广州市质量技术监督局发布了广州市地方技术规范DBJ440100/T 30—2009《植物饮料卫生要求》，对凉茶等植物饮料作出质量指标要求。但是《植物饮料卫生要求》只对植物饮料作出了原辅材料、感官指标、卫生理化指标、微生物指标及食品添加剂要求，没有从中草药成分上体现其有效化学成分的质量控制标准，给不法商家一个只用香精、白砂糖、水等调配伪造植物饮料的可乘之机，既不利于保护消费者的权益和安全健康，也不利于维护具体品牌植物饮料的信誉。因此鉴别评价中药凉茶及草药饮料时对凉茶及饮料的成分进行整体、综合分析显得迫在眉睫。
发明内容
本发明要解决的技术问题是，克服现有技术的不足，提供一种中药凉茶及草药饮料产品质量控制色谱指纹图谱构建方法，通过对样品进行除杂浓缩、HPLC分析，分离检测凉茶及饮料中的各种成分，得到中药凉茶及草药饮料系列产品独有的指纹图谱，作为其整体质量控制的手段。本发明解决其技术问题所采用的技术方案是，一种中药凉茶及草药饮料产品质量控制色谱指纹图谱构建方法，包括三种样品前处理方法和HPLC指纹图谱分析，具体包括以下步骤
(I)样品前处理；选取以下方法中的一种处理样品
①冷冻干燥-提取法取中药凉茶或草药饮料，一 40°C以下冷冻干燥至干，取所得固体，加入与原所取凉茶或饮料体积比为I 一 9 3的有机溶剂，超声、振荡或回流提取，6000-13 000 rpm条件下离心5-15 min,取上清液,N2吹干；残洛按5_30 : I的浓缩比加入有机溶剂或色谱流动相，超声或振荡提取复溶；
所述有机溶剂优选甲醇、丙酮、乙酸乙酯、乙腈、乙醇、四氢呋喃、异丙醇、乙醚、二氯甲烷中的一种；
所述提取时超声的功率彡20 W，频率彡25 KHz，时间为10 — 120min ；
所述提取时振荡的提取温度为20-55°C，频率彡300 rpm,时间为0. 5 — 10 h ;
所述回流的温度为溶剂沸点，回流时间为0. 5 — 5 h ;所述色谱流动相优选乙腈与水的混合物或甲醇与水的混合物；
所述复溶时超声功率彡20 W，频率彡25 KHz，时间为I 一 3 min ；
所述复溶时振荡频率为100-2 000 rpm，温度为室温，时间为I 一 3min ；
所述浓缩比为原所取中药凉茶或草药饮料与有机溶剂或色谱流动相的体积比；
②热蒸发干燥-提取法取中药凉茶或草药饮料，在55-10(TC下热蒸发干燥至干，取所得固体，加入与原所取凉茶或饮料体积比为I 一 9 3的有机溶剂超声、振荡或回流提取，6000-13 000 rpm下离心5-15 min，取上清液，N2吹干；残渣按5_30 I的浓缩比加入有机溶剂或色谱流动相，超声或振荡提取复溶；
所述有机溶剂优选甲醇、丙酮、乙酸乙酯、乙腈、乙醇、四氢呋喃、异丙醇、乙醚、二氯甲烷中的一种；
所述提取时超声的功率彡20 W，频率彡25 KHz，时间为10 — 120min ；
所述提取时振荡的提取温度为20-55°C，频率彡300 rpm,时间为O. 5 — 10 h ;
所述复溶时超声功率彡20 W，频率彡25 KHz，时间为I 一 3 min ；
所述复溶时振荡频率为100-2 000 rpm，温度为室温，时间为I 一 3min ；
所述回流的温度为溶剂沸点，回流时间为O. 5 — 5 h ;
所述浓缩比为原所取中药凉茶或草药饮料与有机溶剂或色谱流动相的体积比；
所述色谱流动相优选乙腈与水的混合物或甲醇与水的混合物；
③固相萃取法将固相萃取小柱用I倍柱管体积量的甲醇活化，然后用I倍柱管体积量的水平衡，取中药凉茶或草药饮料上样，I倍柱管体积量的水洗上样后的固相萃取小柱除杂，抽干或上样后直接抽干，取2-4倍柱床体积量的有机溶剂洗脱，所得洗脱液用N2吹干，残渣按5-30 I的浓缩比加入有机溶剂或色谱流动相，超声或振荡提取复溶；
固相萃取小柱优选C18、氰基或氨基固相萃取小柱；
所述有机溶剂优选甲醇、丙酮、乙酸乙酯、乙腈、乙醇、四氢呋喃、异丙醇、乙醚、二氯甲烷中的一种；
所述浓缩比为原所取中药凉茶或草药饮料与有机溶剂或色谱流动相的体积比；
所述色谱流动相优选乙腈与水的混合物或甲醇与水的混合物；
所述超声的功率彡20 W，频率彡25 KHz，时间为I 一 3min ；
所述复溶时振荡频率为100-2 000 rpm，温度为室温，时间为I 一 3min ；
(2)HPLC指纹图谱分析将经步骤(I)处理得到的样品过O. 45 μ m有机膜，使用HPLC-UV进行指纹图谱分析；检测波长为205 nm，色谱柱为反相C18柱，所用流动相为加酸的水和加酸的有机溶剂进行梯度洗脱。本发明对中药凉茶或草药饮料系列产品前处理是为了除去样品中大量的糖等杂质、对目标分析物进行浓缩。使用本发明构建的中草药凉茶及饮料系列产品质量控制色谱指纹图谱，可用于对产品进行宏观而精细的成分质量控制；填补了目前中药凉茶或草药饮料质量控制上只有原辅材料要求、感官指标、卫生指标而无相关植物化学成分宏观质量控制指标的方法学空白。
图I为实施例I应用冷冻干燥-提取法所得三种产品的图谱；图2为实施例2应用热蒸发干燥-提取法所得三种产品的图谱；
图3为实施例3应用固相萃取法所得三种产品的图谱。
具体实施例方式以下结合具体实施例对本发明作进一步详细说明。实施例I 一 3所使用的三种中药凉茶产品均是XXX凉茶饮料。实施例I
本实施例包括以下步骤
(1)冷冻干燥-提取法处理样品分别量取20mL相同原料的三种中药凉茶产品，-40°C条件下冷冻干燥至干后，在所得固体残渣中加入20 mL甲醇，功率150W、频率40KHz条件下 超声提取30 min,10 000 rpm条件下离心10 min，取上清液，N2吹干，往所得残渣中加入2mL甲醇，功率150W、频率40KHz条件下超声复溶；
(2)HPLC指纹图谱分析将经步骤(I)处理得到的样品过0.45 um有机膜，HPLC分析，其高效液相色谱条件如下
仪器=HPLC-UV
色谱柱
权利要求
1.一种中药凉茶及草药饮料产品质量控制色谱指纹图谱构建方法，其特征在于，包括以下步骤 (1)样品前处理；选取以下方法中的一种处理样品 ①冷冻干燥-提取法取中药凉茶或草药饮料中草药饮料，-400C以下冷冻干燥至干，取所得固体，加入与原所取凉茶或饮料体积比为I 一 9 3的有机溶剂，超声、振荡或回流提�。�6 000-13 000 rpm条件下离心5-15 min，取上清液，N2吹干；残渣按5-30 I的浓缩比加入有机溶剂或色谱流动相，超声或振荡提取复溶； 所述提取时超声的功率≥20 W，频率≥25 KHz，时间为10 — 120 min ； 所述提取时振荡的温度为20-55 °C，频率≤300 rpm,时间为0. 5 — 10 h ; 所述回流的温度为溶剂沸点，回流时间为0. 5 — 5 h ; 所述复溶时超声功率≥20 W，频率≥25 KHz，时间为I 一 3 min ； 所述复溶时振荡频率为100-2 000 rpm，温度为室温，时间为I 一 3 min ; 所述浓缩比为原所取中药凉茶或草药饮料与有机溶剂或色谱流动相的体积比； ②热蒸发干燥-提取法取中药凉茶或草药饮料，在55-10(TC下热蒸发干燥至干，取所得固体，加入与原所取凉茶或饮料体积比为I 一 9 3的有机溶剂超声、振荡或回流提�。�6000-13 000 rpm下离心5-15 min，取上清液，N2吹干；残渣按5_30 I的浓缩比加入有机溶剂或色谱流动相，超声或振荡提取复溶； 所述提取时超声的功率≥20 W，频率≥25 KHz，时间为10 — 120min ； 所述提取时振荡的提取温度为20-55°C，频率≤300 rpm,时间为0. 5 — 10 h ; 所述回流的温度为溶剂沸点，回流时间为0. 5 — 5 h ; 所述复溶时超声功率彡20 W，频率彡25 KHz，时间为I 一 3 min ； 所述复溶时振荡频率为100-2 000 rpm，温度为室温，时间为I 一 3min ； 所述浓缩比为原所取中药凉茶或草药饮料与有机溶剂或色谱流动相的体积比； ③固相萃取法将固相萃取小柱用I倍柱管体积量的甲醇活化，然后用I倍柱管体积量的水平衡，取中药凉茶或草药饮料上样，I倍柱管体积量的水洗上样后的固相萃取小柱除杂，抽干或上样后直接抽干，取2-4倍柱床体积量的有机溶剂洗脱，所得洗脱液用N2吹干，残渣按5-30 I的浓缩比加入有机溶剂或色谱流动相，超声或振荡提取复溶； 所述浓缩比为原所取中药凉茶或草药饮料与有机溶剂或色谱流动相的体积比； 所述超声的功率≥20 W，频率≥25 KHz，时间为I — 3 min ; 所述复溶时振荡频率为100-2 000 rpm，温度为室温，时间为I 一 3min ； (2)HPLC指纹图谱分析。
2.根据权利要求I所述的中药凉茶及草药饮料产品质量控制色谱指纹图谱构建方法，其特征在于，所述有机溶剂为甲醇、丙酮、乙酸乙酯、乙腈、乙醇、四氢呋喃、异丙醇、乙醚、二氯甲烷中的一种。
3.根据权利要求I或2所述的中药凉茶及草药饮料产品质量控制色谱指纹图谱构建方法，其特征在于，所述色谱流动相为乙腈与水的混合物或甲醇与水的混合物。
4.根据权利要求I或2所述的中药凉茶及草药饮料产品质量控制色谱指纹图谱构建方法，其特征在于，固相萃取法中，所述固相萃取小柱为C18、氰基或氨基固相萃取小柱。
全文摘要
中药凉茶及草药饮料产品质量控制色谱指纹图谱构建方法，包括以下步骤(1)样品前处理；选取以下方法中的一种处理样品①冷冻干燥-提取法；②热蒸发干燥-提取法；③固相萃取法；(2)HPLC指纹图谱分析。使用本发明构建的中药凉茶及草药饮料产品质量控制色谱指纹图谱，可用于对产品进行宏观而精细的成分质量控制；填补了目前中药凉茶及草药饮料凉茶等中草药饮料质量控制上只有原辅材料要求、感官指标、卫生指标而无相关植物化学成分宏观质量控制指标的方法学空白。
文档编号G01N30/14GK102706983SQ20121022082
公开日2012年10月3日 申请日期2012年6月29日 优先权日2012年6月29日
发明者吴青, 李媛, 李彬, 王 华, 陈波 申请人:湖南师范大学
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