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专利名称：一种测试片的制作方法
技术领域：
本实用新型属于检测装置领域，具体地涉及一种包括荧光物质层的测试片。
背景技术：
1990年，Beggs等综合胶体金和免疫分析技术，建立了胶体金免疫层析法(GICA)，用于检测人尿和血清中的HCG。由于该方法只需肉眼观察即可，非专业人士也可操作，使急诊、基层医院、病人床边和现场等远离大型实验室的地方开展相关检测成为可能，所以应用范围相当广泛。这种免疫分析技术已经超过20年的发展，但其基本的工作原理并未改变，它只用于定性或半定量检测(根据测试区部分灰度深浅定量)，且灵敏度不够，因此，限制了该方法的进一步应用。后来，对现有的胶体金层析方法进行了改进，在胶体金免疫层析法中结合使用了荧光定量分析的方法，即采用带有荧光的测试区，当胶体金结合测试区的荧光物质后，影响荧光物质的荧光强度，从而定量检测待测物。然而，该改进方法中测试区的荧光强度弱或荧光分布不均，常常会影响测试结果的可比性，不利于批量处理测试结果。因此，本领域仍然需要研发一种适用于该改进的层析法且测试区荧光强、分布均匀的测试片。

实用新型内容本实用新型的目的在于提供包括一荧光物质层的测试片，所述测试片的测试区荧光稳定、强度一致且分布均勻，非常适用突光分析方法。本实用新型提供了一种测试片，其包括:背衬片以及位于背衬片上的样品垫、结合垫、膜片、荧光物质层和吸收垫；其中，所述样品垫贴附于所述背衬片的一端；所述吸收垫贴附于所述背衬片的另一端；所述结合垫贴附于所述背衬片上，且与所述样品垫部分重叠；所述膜片贴附于所述背衬片上，且分别与所述结合垫和所述吸收垫部分重叠；所述膜片上设置有测试区，所述测试区位于所述结合垫和所述吸收垫之间；所述荧光物质层贴附于所述背衬片上，且位于所述膜片的下方。在另一优选例中，所述荧光物质层位于所述测试区的下方。在另一优选例中，所述膜片上还设置有对照区，所述对照区位于所述测试区和所述吸收垫之间或位于所述测试区和所述结合垫之间，且与所述测试区不相连。在另一优选例中，所述荧光物质层位于所述测试区和所述对照区的下方。在另一优选例中，所述荧光物质层为背衬片的胶面或为单独的薄膜。应理解，在本实用新型范围内中，本实用新型的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
图1为本实用新型的测试片结构示意图。图2为本实用新型的测试片膜片处的剖面图。
具体实施方式
本发明人意外地发现在测试片的测试区下或包含测试区的部位下设置一荧光物质层，使得该测试片具有高强度且强度分布均匀的荧光，更适用于荧光分析方法。在此基础上，发明人完成了本实用新型。测试片现在更详细地描述本实用新型测试片的构造和制法。应注意，测试片的具体构造可以变化，这取决于意图用测试片来进行的具体测试。在实施例之外的测试片构造，也落于本实用新型范围之中。如图1和图2所示，测试片可包括背衬片2，其长度与测试片相同。加样区3位于测试片的一端，样品垫31位于加样区，可通过粘合剂粘贴于加样区。吸收区7位于测试片的另一端，在加样区的远端，吸收垫71位于吸收区。结合区4位于加样区和吸收区之间，在加样区的近端和吸收区的远端，结合垫4粘贴于结合区，所述结合垫紧邻样品垫、且与所述样品垫部分重叠(例如将所述结合垫的一段置于样品垫和背衬片之间)。在结合区和吸收区之间设置有一膜片56 (也称层析膜)，该膜片粘贴于背衬片，且分别与结合垫和吸收垫部分重叠(例如将膜片的一端置于所述结合垫和背衬片之间；将膜片的另一端置于所述吸收垫和背衬片之间)。测试区5 (也称检测线T)位于该膜片56上。较佳地，所述测试区与结合垫/或吸收垫之间均具有适当的空间(如约5 — 8mm)。优选地，所述膜片上还设置有对照区6 (也称质控线C)，所述对照区可以位于测试区和吸收区之间，也可以位于测试区和结合区之间，并与测试区之间有适当的空间(如约3 — 5mm)。所述测试片还包括荧光物质层8，所述荧光物质层紧密地粘附于背衬片和膜片之间，例如通过粘贴剂粘贴于背衬片和膜片之间。该荧光物质层的长度与膜片的长度相同，或者基本相同(优选地，所述膜片的长度略长于该荧光物质层，从而使得膜片的两端可粘附于背衬片上)。更优选地，所述的荧光物质层仅位于测试区和对照区下方，或者仅位于测试区的下方。应理解，在保证测试区下方存在荧光物质层的基础上，发明人可任意设置该荧光物质层的长度，所述的荧光物质层还可延长至测试片的其它部位，例如荧光物质层可位于结合垫和膜片下，膜片和吸收垫下，结合垫、膜片和吸收垫下，或者位于样品垫、结合垫、膜片和吸收垫下(即与测试片长度相同)。 该荧光物质可以来自于背衬片的胶面，也可以是单独的薄膜。背衬片可以用任何稳定的、无孔的已知材料制成，其强度应足以支承材料和粘于其的测试片。因为许多测定用水作为扩散介质，因此背衬片较佳地是基本上不透水的。在一个优选例中，背衬片是用聚氯乙烯膜制成的(如PVC胶板)。[0033]样品垫可用任何已知的吸收性材料制成。可使用的材料例子包括:纤维素、硝酸纤维素、乙酸纤维素、玻璃纤维、尼龙、聚电解质离子交换膜、丙烯共聚物/尼龙、和聚醚砜。结合垫或膜片可以用任何已知的材料制成，只要该材料有足够孔隙度从而允许在表面和内部发生流体的毛细管作用。结合垫或膜片应有足够的孔隙度，从而允许涂有抗体或抗原的颗粒移动。结合垫或膜片还可被含待检测分析物的样品中所用的液体润湿(例如，对于水性液体具有亲水性，对于有机溶剂具有疏水性)。通过例如在美国专利N0.4，340，482或N0.4，618，533中所述的方法(这些方法描述了将疏水表面转变成亲水表面)，可以改变其疏水性从而使其具有亲水性以便用于水性液体。可用于制造结合垫或膜片的材料例子包括:聚脂膜、纤维素、硝酸纤维素、乙酸纤维素、玻璃纤维、尼龙、聚电解质离子交换膜、丙烯共聚物/尼龙、和聚醚砜(polyethersulfone)。在一个优选例中，结合垫是用聚脂膜制成的，膜片是用硝酸纤维素制成的。吸收垫可以用任何能吸收作为样品和缓冲液的液体的已知材料制成。吸收垫的吸收能力应足够大，以便吸收添加至测试片的液体。适用于吸收垫的材料的例子包括纤维素、玻璃纤维和厚吸水纸。制作方法本测试片的制作方法可采用现有的测试片制作方法，如图1所示:分别将样品垫、结合垫、膜片、吸收垫、荧光物质层通过粘合剂粘贴于背衬片。现对本实用新型测试片的制作方法作进一步地说明:方法1:1.1选择带有胶面的PVC板，作为背衬片，所述PVC板的胶面中含有荧光物质，在一定激发光照射下可发出荧光，所述胶面作为荧光物质层。1.2将层析膜(作为膜片)粘贴于PVC板，然后按图1所示依次将吸收垫、结合垫(如胶体金结合垫)、样品垫粘贴于PVC板。1.3在层析膜上设置测试区和任选地设置对照区。优选地所述测试区在靠近结合垫的一侧，所述对照区在测试区和吸收垫之间。方法I制得的测试片中，荧光物质层的长度与测试片长度一致，即所述荧光物质层位于样品垫、结合垫、膜片和样品垫下。方法2:2.1选择带有胶面的PVC板，作为背衬片；2.2按图1所示，首先将含有荧光物质的薄膜(作为荧光物质层)粘贴于PVC板，再将层析膜覆盖于该薄膜上，层析膜长度略长于该薄膜且完全覆盖该薄膜，层析膜两端超出薄膜的部分粘贴于PVC板上；其中，所述的薄膜两面均为光面。2.3按图1所示，依次将吸收垫、结合垫(如胶体金结合垫)、样品垫粘贴于PVC板即可。2.4在层析膜上设置测试区和任选地设置对照区。优选地所述测试区在靠近结合垫的一侧，所述对照区在测试区和吸收垫之间。方法2制得的测试片中，所述荧光物质层位于所述膜片下，略短于所述膜片。方法3:[0052]3.1选择带有胶面的PVC板，作为背衬片；3.2选择含有荧光物质的薄膜，作为荧光物质层，所述的薄膜一面是光面，另一面是胶面；3.3按图1所示，首先将荧光薄膜粘贴于PVC板，薄膜的胶面朝上，光面朝下(即光面朝向背衬片)；再将层析膜粘贴于荧光薄膜的胶面；3.4按图1所示，依次将吸收垫、结合垫(如胶体金结合垫)、样品垫粘贴于PVC板即可。3.5在层析膜上设置测试区和任选地设置对照区。优选地所述测试区在靠近结合垫的一侧，所述对照区在测试区和吸收垫之间。方法3制得的测试片中，所述荧光物质层位于所述膜片下，其长度与所述膜片相同或略短于所述膜片。本实用新型的测试片用于现有的结合使用荧光定量分析方法的胶体金免疫层析法中，具体地工作流程例如:(1.1)将捕获剂(如链亲和素，即Streptavidin或SA)固定于检测线处。(1.2)将待测物样品加在样品垫(如玻璃纤维)上，样品中的待测物(如抗原)在毛细作用下向吸水垫方向移动，途经载有结合剂(如针对抗原的金标抗体、biotin标记的抗体)的结合垫后，将所述结合剂完全复溶，层析过程中抗原与结合剂形成“金标抗体-抗原-biotin抗体”的3元复合物,被检测线处的捕获剂(如Streptavidin)捕获；3元复合物中的金淬灭检测线处的荧光。(1.3)多余的游离金标抗体继续前移，被固定在质控线处的对照剂(如抗金标抗体的抗体)捕获，呈现红色，说明检测有效。(1.4)分别测定膜条检测线处的荧光强度Ft及检测线与质控线中间处的荧光强度F。，计算&/FT的值，值越大说明待测物浓度越高，反之则越低；如样本中无待测物时，不能形成3元复合物，则Fe/FT ^ I。荧光物质和吸光物质的选择如上所述的工作流程中，本实用新型测试片的结合垫含有特异性结合待测物(如抗原)的胶体金标记的结合剂(称为金标抗体)，其中，当作为吸光物质的胶体金在测试区富集时，影响测试区的荧光强度，从而定量检测待测物。应理解，所述结合垫上还可含有其它已知的吸光物质。当然，用于本实用新型测试片的荧光物质和吸光物质应配合使用，基本原则是荧光物质的激发或发射光谱与吸光物质的吸收光谱部分或完全重叠。最优的是完全重叠，如此会有较高的检测灵敏度。代表性的荧光物质是本领域现有的荧光物质，例如包括(但并不限于):荧光素、羧基突光素、2-甲氧基突光素、4,5-二甲氧基突光素、罗丹明、藻红蛋白(Phycoerythrin,PE)、量子点、稀土元素离子(如Eu3+)及其螯合物等组合，只要所选荧光物质的激发或发射光谱与所选吸光物质的吸收光谱有重叠即可。代表性的吸光物质是本领域现有的吸光物质，例如包括(但并不限于):胶体金、纳米金棒、纳米银棒等组合，只要所选吸光物质的吸收光谱与所选荧光物质的激发或发射光谱重叠即可。下面结合具体实施，进一步阐述本实用新型。应理解，这些实施例仅用于说明本实用新型而不用于限制本实 用新型的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例1测试片I[0065]1.1选择带有胶面的PVC板，作为背衬片，所述PVC板的胶面中含有荧光物质罗丹明B，在一定激发光照射下可发出荧光，所述胶面作为荧光物质层；1.2将硝酸纤维素膜(作为膜片)粘贴于PVC板，然后按图1所示依次将厚吸水纸、胶体金结合垫、玻璃纤维粘贴于PVC板；1.3在硝酸纤维素膜上设置一测试区和一对照区；所述测试区在靠近结合垫的一侦牝所述对照区在测试区和吸收垫之间，测试区和对照区之间的距离为5mm，即得制得测试片I。实施例2测试片22.1选择带有胶面的PVC板，作为背衬片；2.2按图1所示，首先将含有罗丹明B的薄膜(作为荧光物质层)粘贴于PVC板；再将硝酸纤维素膜(作为膜片)覆盖于罗丹明B薄膜上，层析膜长度略长于罗丹明B薄膜且完全覆盖该薄膜，层析膜两端超出该薄膜的部分粘贴于PVC板上；其中，所述的罗丹明B薄膜两面均为光面；2.3按图1所示，依次将吸收垫、胶体金结合垫、样品垫粘贴于PVC板；2.4在硝酸纤维素膜上设置一测试区和一对照区；所述测试区在靠近结合垫的一侦牝所述对照区在测试区和吸收垫之间，测试区和对照区之间的距离为5mm，即得测试片2。实施例3测试片33.1选择带有胶面的PV C板，作为背衬片；
3.2选择含有荧光物质(如罗丹明B)的薄膜，作为荧光物质层，所述的薄膜一面是光面，另一面是胶面；3.3按图1所示，首先将荧光薄膜粘贴于PVC板，薄膜的胶面朝上，光面朝下(即光面朝向背衬片)；再将硝酸纤维素膜(作为膜片)粘贴于荧光薄膜的胶面；3.4按图1所示，依次将吸收垫、胶体金结合垫、样品垫粘贴于PVC板；3.5在硝酸纤维素膜上设置一测试区和一对照区；所述测试区在靠近结合垫的一侦牝所述对照区在测试区和吸收垫之间，测试区和对照区之间的距离为5mm，即得测试片3。实施例4检测试验取实施例1制备的测试片1，定量检测血清中甲胎蛋白(AFP)的浓度。4.1、金标抗体的制备4.1.1胶体金-抗体保存液
权利要求1.种测试片，其特征在于，包括:背衬片以及位于背衬片上的样品垫、结合垫、膜片、荧光物质层和吸收垫； 其中，所述样品垫贴附于所述背衬片的一端； 所述吸收垫贴附于所述背衬片的另一端； 所述结合垫贴附于所述背衬片上，且与所述样品垫部分重叠； 所述膜片贴附于所述背衬片上，且分别与所述结合垫和所述吸收垫部分重叠； 所述膜片上设置有测试区，所述测试区位于所述结合垫和所述吸收垫之间； 所述荧光物质层贴附于所述背衬片上，且位于所述膜片的下方。
2.权利要求1所述的测试片，其特征在于，所述荧光物质层位于所述测试区的下方。
3.权利要求1所述的测试片，其特征在于，所述膜片上还设置有对照区，所述对照区位于所述测试区和所述吸收垫之间或位于所述测试区和所述结合垫之间，且与所述测试区不相连。
4.权利要求4所述的测试片，其特征在于，所述荧光物质层位于所述测试区和所述对照区的下方。
5.权利要求1所述的测试片，其特征在于，所述荧光物质层为背衬片的胶面或为单独的薄膜。
专利摘要本实用新型公开了一种测试片。具体地，本实用新型公开的测试片包括背衬片、样品垫、结合垫、膜片以及吸收垫等，可用于生物样本的定量检测。
文档编号G01N33/558GK202929039SQ201220624739
公开日2013年5月8日 申请日期2012年11月22日 优先权日2012年11月22日
发明者不公告发明人 申请人:李家奕