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专利名称：环维黄杨星d含量的高效液相色谱测定法的制作方法
技术领域：
本发明涉及环维黄杨星D含量测定法，特别是涉及环维黄杨星D含量的高效液相色谱测定法。
背景技术：
黄杨科植物小叶黄杨Buxus mincrophylla Sieb.et Zucc.var.sinica Rehd.et Wils.及其同属全株植物，经提取及常规精制所得的生物碱总碱，称为“黄杨宁”，属于药用植物的“有效部位”，其含主成分“环维黄杨星D”含量为60～80％；如果再采用高效液相制备柱技术分离纯化后，其主成分“环维黄杨星D”含量则上升为90％以上，可改称为“环维黄杨星D”，属于药用植物的“有效成分”。
“黄杨宁”主成分“环维黄杨星D”及其“杂质”，因为它们都是生物碱，所以《中国药典》2000年版一部所载的方法是测定生物碱的经典方法，该方法简便，但专属性差，只要是生物碱都能检测出来，所以得到的结果是生物碱的总碱。而且这几种生物碱有一个共同的特点，其结构中都没有共轭双键，所以没有紫外吸收，这就增加了检测的难度。

发明内容
本发明的目的是提供一种灵敏度高、专属性强的环维黄杨星D的高效液相色谱含量测定法。
利用高效液相色谱法进行物质含量测定主要是根据待测物质的理化性质确定分离模式，选择主要的色谱条件色谱柱、流动相组成和检测器类型。本方法利用氨基柱、特定的流动相和检测波长是其关键，采用紫外末端吸收，很好地解决了吸收问题。
本发明的目的可以通过以下措施来实现一种环维黄杨星D含量的高效液相色谱测定法，其色谱条件中固定相用氨丙基硅烷键合硅胶为填冲剂；流动相采用磷酸氢二钾—乙腈体系。
本发明的目的还可以通过下列措施来实现所述的环维黄杨星D含量的高效液相色谱测定法，采用紫外检测器，检测波长为200～220nm。
本发明的优点
本发明采用高效液相色谱技术，灵敏度高、专属性强，能很好地将“黄杨宁”中与主成分“环维黄杨星D”结构相似的几种生物碱有效地分开，从而能测定它们各自的含量。


图1为黄杨宁高效液相色谱法210nm波长测定的色谱图；图2为黄杨宁高效液相色谱法200nm波长测定的色谱图；图3为环维黄杨星D高效液相色谱法220nm波长测定的色谱图。
具体实施例方式
以下通过实施例对本发明作进一步说明。
色谱柱采用江苏汉邦科技有限公司产品(Lichrospher NH2，4.6×250mm，5μm)。
实施例1色谱条件与系统适应性 固定相用氨丙基硅烷键合硅胶为填冲剂；磷酸氢二钾溶液(取磷酸氢二钾4.0g，加水溶解并稀释成1000ml)—乙腈(体积比为30∶70)为流动相；流速为1ml/min；检测波长为210nm；柱温为40℃；供试品溶液色谱图中，环维黄杨星D峰与其他生物碱峰均应达基线分离；理论塔板数按环维黄杨星D峰计算，应不低于1000。
对照品溶液的制备取经用五氧化二磷为干燥剂，60℃恒温减压干燥至恒重的环维黄杨星D对照品(对照品标准对照品中环维黄杨星D在含量测定项下记录的色谱图中，其峰面积应大于总峰面积的98％，下同)7mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加流动相适量，超声处理使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备精密称取“黄杨宁”25mg，置50ml容量瓶中，加流动相适量，超声处理使溶解，并用流动相稀释至刻度50ml，摇匀，即得。
测定法取供试品溶液1ml，用流动相稀释至10ml，摇匀，作为预试液，取20μl预试液注入高效液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高约为记录满量程的20％。再分别取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，见图1，测量环维黄杨星D峰面积，按外标法以峰面积计算，结果示含量为73.5480％。
实施例2色谱条件与系统适应性 固定相用氨丙基硅烷键合硅胶为填冲剂；磷酸氢二钾溶液(取磷酸氢二钾4.0g，加水溶解并稀释成1000ml)—乙腈(体积比为20∶80)为流动相；流速为1ml/min；检测波长为200nm；柱温为40℃；供试品溶液色谱图中，环维黄杨星D峰与其他生物碱峰均应达基线分离；理论塔板数按环维黄杨星D峰计算，应不低于1000。
对照品溶液的制备取经用五氧化二磷为干燥剂，60℃恒温减压干燥至恒重的环维黄杨星D对照品7mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加流动相适量，超声处理使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备精密称取“黄杨宁”约25mg，置50ml容量瓶中，加流动相适量，超声处理使溶解，并用流动相稀释至刻度50ml，摇匀，即得。
测定法取供试品溶液1ml，用流动相稀释至10ml，摇匀，作为预试液，取20μl预试液注入高效液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高约为记录满量程的20％。再分别取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，见图2，测量环维黄杨星D峰面积，按外标法以峰面积计算，结果示含量为62.4219％。
实施例3色谱条件与系统适应性 固定相用氨丙基硅烷键合硅胶为填冲剂；磷酸氢二钾溶液(取磷酸氢二钾5.0g，加水溶解并稀释成1000ml)—乙腈(体积比为25∶75)为流动相；流速为1ml/min；检测波长为220nm；柱温为40℃；供试品溶液色谱图中，环维黄杨星D峰与其他生物碱峰均应达基线分离；理论塔板数按环维黄杨星D峰计算，应不低于1000。
对照品溶液的制备取经用五氧化二磷为干燥剂，60℃恒温减压干燥至恒重的环维黄杨星D对照品7mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加流动相适量，超声处理使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得。
供试品溶液的制备精密称取“环维黄杨星D”20mg，置50ml容量瓶中，加流动相适量，超声处理使溶解，并用流动相稀释至刻度50ml，摇匀，即得。
测定法取供试品溶液1ml，用流动相稀释至10ml，摇匀，作为预试液，取20μl预试液注入高效液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高约为记录满幅度的20％。再分别取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，见图3，测量环维黄杨星D峰面积，按外标法以峰面积计算，结果示含量为96.1299％。
权利要求
1.一种环维黄杨星D含量的高效液相色谱测定法，其特征在于其色谱条件中固定相用氨丙基硅烷键合硅胶为填冲剂；流动相采用磷酸氢二钾—乙腈体系。
2.根据权利要求1所述的环维黄杨星D含量的高效液相色谱测定法，其特征在于采用紫外检测器，检测波长为200～220nm。
全文摘要
本发明公开了一种环维黄杨星D含量的高效液相色谱测定法。该方法的色谱条件中固定相用氨丙基硅烷键合硅胶为填冲剂；流动相采用磷酸氢二钾－乙腈体系；采用紫外检测器，检测波长为200～220nm。该方法灵敏度高、专属性强，能很好地将“黄杨宁”中与主成分“环维黄杨星D”结构相似的几种生物碱有效地分开，从而能测定它们各自的含量。
文档编号G01N30/74GK1540339SQ20031010614
公开日2004年10月27日 申请日期2003年10月27日 优先权日2003年10月27日
发明者袁厚亮, 李泓 申请人:南京小营制药厂