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专利名称：一种现场用高灵敏度黄曲霉毒素速测试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型属于免疫检测技术领域，特别是涉及一种现场用高灵敏度黄曲霉毒素速测试剂盒。
背景技术：
目前，黄曲霉毒素是一组化学结构类似的化合物，目前已分离鉴定出12种包括Bl，B2，Gl，G2，Ml，M2，Pl，Q，Hl，GM，B2a和毒醇;其中BI为毒性及致癌性最强的物质。黄曲霉毒素检测方法有1)薄层层析(Thin-Layer Chromatography, TLC)是在黄曲霉毒素研究方面应用最广的分离技术。自1990年它被列为AOAC (Association of OfficialAgricultural Chemists)标准方法,该方法同时具有定性和定量分析黄曲霉毒素的功能。2)液相色谱(Liquid Chromatography, LC)与薄层层析在许多方面具有相似性二者互相补充。通常用TLC进行前期的条件设定，选择适宜的分离条件后再用LC进行黄曲霉毒素的定量测定。薄膜层析法和液相色谱法是目前绝大多数检测机构都在使用的方法，由于其检测周期长，程序复杂所需试剂繁多等缺点已远远不能满足现代检测要求。3)利用具有高度专一性的单克隆抗体或多克隆抗体设计的黄曲霉毒素的酶联免疫法(ELISA)也是目前最常用的黄曲霉毒素检测方法，该法适合在一般实验室里进行，检测程序较多还需要特殊的读盘仪器，得由专业技术人员执行，不适合现场快速检测。4)试纸条检测法，该法适合现场快速检测，但因灵敏度低且没有同时进行阳性和阴性对照，容易造成假阳性或假阴性的结果。
发明内容本实用新型为解决现有技术存在的问题，提供了一种现场用高灵敏度黄曲霉毒素速测试剂盒。本实用新型目的是提供一种具有操作简单，使用方便，准确快速，灵敏度高，而且又能进行阳性和阴性对照检测等特点的现场用高灵敏度黄曲霉毒素速测试剂盒。本实用新型现场用高灵敏度黄曲霉毒素速测试剂盒采用如下技术方案一种现场用高灵敏度黄曲霉毒素速测试剂盒，其特点是速测试剂盒包括液滴瓶和测试条，液滴瓶分别装有示踪液、阳性对照液、阴性对照液和显色液，测试条有经黄曲霉毒素抗体包被、封闭液封闭过的反应槽，液滴瓶内示踪液含有预标记的黄曲霉毒素。本实用新型现场用高灵敏度黄曲霉毒素速测试剂盒还可以采用如下技术措施所述的现场用高灵敏度黄曲霉毒素速测试剂盒，其特点是速测试剂盒设有塑料吸管。所述的现场用高灵敏度黄曲霉毒素速测试剂盒，其特点是液滴瓶内示踪液含有至少一个或以上预标记的黄曲霉毒素B1，B2, Gl, G2, Ml, M2, PI, Q, HI, GM, B2a或毒醇。所述的现场用高灵敏度黄曲霉毒素速测试剂盒，其特点是示踪液中预标记用标记物为碱性磷酸酶或过氧化氢酶或胶体金。所述的现场用高灵敏度黄曲霉毒素速测试剂盒，其特点是液滴瓶中显色液是示踪液中的黄曲霉毒素标记酶的底物。所述的现场用高灵敏度黄曲霉毒素速测试剂盒，其特点是液滴瓶中阳性对照液含有与包被在反应槽中的黄曲霉毒素抗体结合的黄曲霉毒素。所述的现场用高灵敏度黄曲霉毒素速测试剂盒，其特点是液滴瓶中阴性对照液含有缓冲液。所述的现场用高灵敏度黄曲霉毒素速测试剂盒，其特点是测试条为I 一 12个，每个测试条有3 - 12个反应槽。本实用新型具有的优点和积极效果现场用高灵敏度黄曲霉毒素速测试剂盒，由于采用了本实用新型全新的技术方案，与现有技术相比，本现场用高灵敏度黄曲霉毒素速测试剂盒具有结构简单，使用方便，不需要仪器就能检测，检测灵敏度比免疫层析试纸条高出十倍以上等优点。本实用新型在一次现场用免疫检测实验中，能同时测定样品，阳性对照和阴性对照，避免了使用免疫层析试纸条时可能隐藏的假阴性和假失效的结果(现行的免疫层析试纸条是“单份”测定试纸条，无法实现同时测定一组阳性和阴性的对照物)，因此，能正确地界定检测结果及有效性。

图1是本实用新型现场用高灵敏度黄曲霉毒素速测试剂盒结构示意图。图中，1、测试条，2、示踪液液滴瓶，3、显色液液滴瓶，4、阳性对照液液滴瓶，5、阴性对照液液滴瓶。
具体实施方式
为能进一步了解本实用新型的技术内容、特点及功效，兹列举以下实例，并配合附图详细说明如下参照附图1。实施例1一种现场用高灵敏度黄曲霉毒素速测试剂盒，包括液滴瓶、测试条和塑料吸管。液滴瓶分别装有示踪液、阳性对照液、阴性对照液和显色液，测试条有经黄曲霉毒素抗体包被、封闭液封闭过的反应槽，液滴瓶内示踪液含有预标记的黄曲霉毒素。液滴瓶内示踪液含有下述至少一个或以上预标记的黄曲霉毒素BI, B2, Gl, G2, Ml, M2, PI, Q, HI, GM, B2a 或毒醇。示踪液中预标记用标记物为碱性磷酸酶或过氧化氢酶或胶体金。液滴瓶中显色液是示踪液中的黄曲霉毒素标记酶的底物。液滴瓶中阳性对照液含有能与包被在反应槽中的黄曲霉毒素抗体结合的黄曲霉毒素。液滴瓶中阴性对照液含有缓冲液，不含黄曲霉毒素。本实施例示踪液中所述的黄曲霉毒素标记物是能直接或间接产生肉眼可见颜色的标记物(如碱性磷酸酶，过氧化氢酶，胶体金)；所述的预标记的黄曲霉毒素能特异性地与包被在反应槽中的黄曲霉毒素抗体结合。阳性对照液含黄曲霉毒素能与示踪液中预标记的黄曲霉毒素竞争，消弱预标记的黄曲霉毒素与包被在反应槽中的黄曲霉毒素抗体结合；[0029]本实施例的具体实施过程如图1所示。一种新型现场用高灵敏度黄曲霉毒素速测试剂盒，包括装在塑料真空袋里的4条测试条I和示踪液液滴瓶2，显色液液滴瓶3，阳性对照液液滴瓶4及阴性对照液液滴瓶5各I个。测试条是成形塑胶条，每个测试条含有8个反应槽可用于同时测定阳性对照，阴性对照以及1-6个待测样品。反应槽是事先经含1-10微克/毫升(ug/ml)黄曲霉毒素抗体的PBS缓冲液包被后，用2%BSA封闭液封闭过的。示踪液是含有10纳克/毫升(ng/ml)过氧化氢酶标记的黄曲霉毒素，溶解在含1%BSA的PBS缓冲液。阳性对照液是含O. 5纳克/毫升(ng/ml)黄曲霉毒素，溶解在含1%BSA的PBS缓冲液。阴性对照液是含1%BSA的PBS缓冲液，不含黄曲霉毒素。显色液是过氧化氢酶的底物TMB (O. 2mg/ml)和H2O2 (O. 03%)混合液。实施例2一种新型现场用高灵敏度黄曲霉毒素速测试剂盒，包括一个测试条，示踪液，阳性对照液，阴性对照液，显色液、洗涤液、终止液和塑料吸管；测试条含有多个反应槽，所述的反应槽是事先经黄曲霉毒素抗体包被，封闭液封闭过的；示踪液含有预标记的黄曲霉毒素抗体。本实施例的具体实施过程测试条制备选择具有固定形状，含有可盛装液体的多个反应槽，常温常压下化学性质稳定不与待测的样品及检测系统中的物质发生化学反应的成形板。所述的反应槽与蛋白类分子有高亲和力。用IOOmM Tris-HCl (pH8)缓冲液将黄曲霉毒素抗体稀释至O. l-30ug/ml,取100微升(每个槽)添加于测试条的槽中，静置I小时或以上；洗槽后用150微升(每个槽)2%牛血清蛋白-PBS缓冲液封闭I小时或以上，再洗槽后，于45度。C烘干，用铝箔袋真空包装，置于冰箱备用。所述的黄曲霉毒素抗体可以是单一的黄曲霉毒素也可以是不同黄曲霉毒素的混合所述的特异性抗体可以是单克隆抗体也可以是多克隆抗体，可以从市场购得也可以按公知的抗体制备方法来获得。示踪液制备将预先标记好的黄曲霉毒素一种或多种混合，用1%牛血清蛋白-PBS缓冲液释至0.01-5000mg/ml，无菌过滤后装在液滴瓶里，置于冰箱备用。所述的黄曲霉毒素标记物是能直接或间接产生肉眼可见颜色的一种标记物(如碱性磷酸酶，过氧化氢酶，胶体金)。阳性对照液制备所述的阳性对照液含黄曲霉毒素。将黄曲霉毒素用1%牛血清蛋白-PBS缓冲液释O. 01-5mg/ml,无菌过滤后装在液滴瓶里，置于冰箱备用。阴性对照液制备所述的阴性对照液含有1%牛血清蛋白-PBS缓冲液，该阴性缓冲液不含黄曲霉毒素，无菌过滤后装在液滴瓶里，置于冰箱备用。显色液制备所述的显色液是示踪液中所含黄曲霉毒素标记酶的底物混合液。将示踪液中所含抗体标记酶的底物用适当的缓冲液稀释成工作浓度，无菌过滤后装在避光液滴瓶里，置于冰箱备用。例过氧化氢酶显色液制备将TMB溶解于用50ml柠檬酸缓冲液(pH4. 5)，调浓度至O. 2mg/ml，再加过氧化氢至O. 03% (此TMB-过氧化氢混合液即为过氧化氢酶显色液)，无菌过滤后装在避光液滴瓶里，置于冰箱备用。[0043]本实施例新型现场用高灵敏度黄曲霉毒素速测试剂盒的检测过程，包含下述几个步骤I)加样反应取一测试条,给每个反应槽作记号,如:反应槽1-8 ;在各反应槽中加入3滴示踪液，再分别在反应槽I和反应槽2中加入2滴阳性对照液和阴性对照液，用不同的塑料吸管分别吸取不同待测样品，在反应槽3-8中分别滴加2滴待测样品，轻晃混匀后室温下静置5-30分钟。2)洗涤倒掉反应槽中液体并用过滤水(或自来水)冲洗反应槽5次或以上；每次冲洗后，将反应槽倒向摔在吸水纸(如卫生纸)上以除去反应槽内水珠。3)显色在每个反应槽内加入6滴显色液，轻晃测试条并观察反应槽中颜色变化，直至阴性反应槽内有清晰的颜色出现，4)结果分析比较各反应槽(阳性对照，阴性对照和各样品)的颜色深浅程度以确定该被检样品是阳性还是阴性。由于阳性对照或阳性样品中黄曲霉毒素能与示踪液中预标记的黄曲霉毒素相互竞争地与反应槽上黄曲霉毒素抗体结合，而阴性对照不能；因此，正常情况下阳性样品不显色，阴性显色。如果被检样品的颜色明显比阴性对照浅，说明该被检样品为阳性；如果被检样品的颜色与阴性对照相同或更深说明该被检样品为阴性；如果被检样品的颜色比阴性对照稍浅，比阳性对照深说明该被检样品为阳性，其黄曲霉毒素浓度低于阳性对照；如果阳性对照的颜色与阴性对照相同或更深说明该实验失败。本实施例在一次实验中同时测定样品，阳性对照和阴性对照，从而能正确地界定检测结果和有效性；具有结构简单，快捷方便，检测灵敏度高等特点。
权利要求1.一种现场用高灵敏度黄曲霉毒素速测试剂盒，其特征是速测试剂盒包括液滴瓶和测试条，液滴瓶分别装有示踪液、阳性对照液、阴性对照液和显色液，测试条有经黄曲霉毒素抗体包被、封闭液封闭过的反应槽。
2.按照权利要求1所述的现场用高灵敏度黄曲霉毒素速测试剂盒，其特征是速测试剂盒设有塑料吸管。
3.按照权利要求1所述的现场用高灵敏度黄曲霉毒素速测试剂盒，其特征是测试条为I 一 12个，每个测试条有3 — 12个反应槽。
专利摘要本实用新型涉及一种现场用高灵敏度黄曲霉毒素速测试剂盒。本实用新型属于免疫检测技术领域。一种现场用高灵敏度黄曲霉毒素速测试剂盒，其特点是速测试剂盒包括液滴瓶和测试条，液滴瓶分别装有示踪液、阳性对照液、阴性对照液和显色液，测试条有经黄曲霉毒素抗体包被、封闭液封闭过的反应槽，液滴瓶内示踪液含有预标记的黄曲霉毒素。本实用新型实现在一次实验中同时测定样品、阳性对照和阴性对照，从而能准确地界定检测结果和有效性；具有操作简单，准确快速，现场操作，灵敏度高，检测效率高等优点。
文档编号G01N33/569GK202837305SQ20122032781
公开日2013年3月27日 申请日期2012年7月9日 优先权日2012年7月9日
发明者邹潮 申请人:哈德逊(天津)生物技术有限责任公司