专利名称：多元免疫测定板的制作方法
技术领域：
本发明多元免疫测定板涉及一种酶免疫测定中的芯片反应装置，广泛应用于医疗检测、分析等领域。
酶免疫测定具有高度的敏感性和特异性，几乎所有的可溶性抗原抗体系统均可用以检测。它的最小可测值达ng甚至pg水平。与放射免疫分析相比，酶免疫测定的优点是标记试剂比较稳定，且无放射性�：�。因此，酶免疫测定的应用日新月异，酶免疫测定的新方法、新技术不断发展。ELISA应用广泛，可用以检测的项目包括以下几个方面1.病原体及其抗体广泛应用于传染病的诊断。2.蛋白质各种免疫球蛋白、补体组分、肿瘤标志物，各种血浆蛋白质、同工酶、激素。3.非肽类激素如T3、T4、雌激素、皮质醇等。4.药物和毒品如地高辛、苯巴比妥、庆大霉素、吗啡等。
但酶免疫测定在医学检验中的普及应归功于商品试剂盒和自动或半自动检测仪器的问世。商品ELISA试剂盒中包含包被好的固相载体、酶结合物底物和洗涤液等。ELISA所有仪器除定量测定中必需的出色仪(专用的称为ELISA测读仪)外，洗涤板也极有用。洗涤机的使用不仅省时省工，而且也利于操作标准化，对中小型实验室是实用且易于接受的。半自动和自动化ELISA分析仪亦趋成熟，并在大中型临床检验实验室中取得应用。前者适用于所有的96孔板的ELISA测定；后者只与特定试剂配套使用。
虽然，ELISA具有高度的敏感性和特异性，应用广泛，种类繁多，但现在使用的商品化ELISA试剂盒其96孔板每孔只包被一种抗原或抗体，所以一种试剂盒只能检测一种抗原或抗体。如需检测几种不同的指标，则需用不同的试剂盒重复几乎相同的试验步骤，浪费人力物力，也延长了诊断的时间。
本发明的目的可通过下述技术方案实现一种多元免疫测定板，是将抗原(或抗体)点阵于孔板的每一个孔中，抗原(或抗体)通过化学键连接于孔板上而被固定，作为固相载体的孔板表面经过封闭后，加入待测样品，与孔板上固定的生物分子进行杂交反应，洗去未结合的物质后，加入标记过的二抗(或抗原)再进行杂交，洗去未结合的物质后检测标记信号。检测到的标记信号的强弱与样品中待测成分的含量成一定正相关。其原理参见
图1多元免疫测定板检测抗原原理图，及图2多元免疫测定板检测抗体原理图所示。
其中，所述孔板是96孔板，此96孔板的底部可以是聚苯乙烯塑料、或表面带有活化基团的玻璃片、醋酸纤维薄膜、硝酸纤维薄膜、尼龙膜、硅片、钢片、陶瓷片、塑料片及底部贴有或带有醋酸纤维薄膜、硝酸纤维薄膜、尼龙膜、硅片、钢片、陶瓷片、塑料片等的一种。
待测样品可以是血清、体液、组织液、组织的细胞裂解液中的一种或一种以上。
所述二抗或抗原的标记物可以是荧光染料或化学发光物质。
本发明多元免疫测定板的制备方法，包括第一，点样方法(1)用高速点样机器人，根据抗原的种类确定点阵的排列方式和点样位置；(2)点样针从多孔板取出样品后直接点阵于96孔板的底部；(3)室温过夜或37℃温育1小时，以固定样品；(4)在载体表面加上封闭液，37℃温育1小时；(5)用缓冲液充分洗涤并室温干燥；第二步，二抗的标记用荧光染料或化学发光物质标记二抗，除去未结合成分后，4℃保存备用。
杂交反应样品加入点好样的96孔板反应孔，37℃温育大约30分钟后，使待检测物质结合于固相底部，再滴加标记二抗或者抗原，37℃避光温育30分钟。洗净并室温晾干。
最后，结果的检测反应结束后，利用专业的阅读分析系统进行结果的判读。
本发明的特点、优点、使用效果第一，多指标同时检测，此96孔板由于将几种不同的抗原(或抗体)点阵于固相载体96孔板上的每一个孔中，因而可以每孔同时检测几种不同的指标。摒弃了以往ELISA检测几种不同指标时重复操作的烦琐，节省了人力物力，也缩短了诊断的时间。第二，可以灵活地检测样品。利用96孔板拆卸、拼装的灵活，可以随意的按需随时进行检测与诊断，以最快的速度得到结果，为病人和医生争取宝贵的治疗时间。第三，更节省待测样品的量。由于能同时进行几种不同指标的检测，不需用几种不同的试剂盒几次检测，因而大大节省了待测样品的量。第四，可以节省大量的资金。因本发明96孔板外观与以前的96孔板相同，已成熟和普及的酶免疫测定商品化的自动或半自动仪器设备如洗涤机、ELISA全自动反应设备等都可以被使用，所以不用重新购置仪器。
附图2，多元免疫测定板检测抗体原理图。
附图3，同时进行多种疾病的检测示意图。
权利要求
1，一种多元免疫测定板，是将抗原(或抗体)点阵于孔板的每一个孔中，特征在于抗原(或抗体)通过化学键连接于孔板上而被固定，作为固相载体的孔板表面经过封闭后，加入待测样品，与孔板上固定的生物分子进行杂交反应，洗去未结合的物质后，加入标记过的二抗(或抗原)再进行杂交，洗去未结合的物质后检测标记信号。
2，根据权利要求1所述的多元免疫测定板，特征在于所述孔板是96孔板，此96孔板的底部可以是聚苯乙烯塑料、或表面带有活化基团的玻璃片、醋酸纤维薄膜、硝酸纤维薄膜、尼龙膜、硅片、钢片、陶瓷片、塑料片及底部贴有或带有醋酸纤维薄膜、硝酸纤维薄膜、尼龙膜、硅片、钢片、陶瓷片、塑料片等的一种。
3，根据权利要求1、2所述的多元免疫测定板，特征在于所述的待测样品可以是血清、体液、组织液、组织的细胞裂解液中的一种或一种以上。
4，根据权利要求3所述的多元免疫测定板，特征在于所述二抗或抗原的标记物可以是荧光染料或化学发光物质。
5，根据权利要求3所述的多元免疫测定板的制备方法，特征在于第一点样方法(1)用高速点样机器人，根据抗原的种类确定点阵的排列方式和点样位置；(2)点样针从多孔板取出样品后直接点阵于96孔板的底部；(3)室温过夜或37℃温育1小时，以固定样品；(4)在载体表面加上封闭液，37℃温育1小时；(5)用缓冲液充分洗涤并室温干燥；第二步，二抗的标记用荧光染料或化学发光物质标记二抗，除去未结合成分后，4℃保存备用。
6，根据权利要求5所述的多元免疫测定板的制备方法，特征在于其杂交反应是将样品加入点好样的96孔板反应孔，37℃温育约30分钟，使待检测物质结合于固相底部，再滴加标记二抗或者抗原，37℃避光温育30分钟，洗净并室温晾干后，利用专业的阅读分析系统进行结果的判读。
全文摘要
本发明多元免疫测定板涉及一种酶免疫测定中的芯片反应装置，广泛应用于医疗检测、分析等领域。多元免疫测定板，是将抗原(或抗体)点阵于孔板的每一个孔中，抗原(或抗体)通过化学键连接于孔板上而被固定，作为固相载体的孔板表面经过封闭后，加入待测样品，与孔板上固定的生物分子进行杂交反应，洗去未结合的物质后，加入标记过的二抗(或抗原)再进行杂交，洗去未结合的物质后检测标记信号。可以多指标同时检测；利用96孔板拆卸、拼装的灵活，可以随意的按需随时进行检测与诊断；节省了待测样品的量；可以使用已成熟和普及的酶免疫测定商品化的自动或半自动仪器设备如洗涤机、ELISA全自动反应设备等，节省资金。
文档编号G01N33/533GK1399132SQ02112229
公开日2003年2月26日 申请日期2002年6月25日 优先权日2002年6月25日
发明者张涛, 李宾, 彭永济, 邓富桥, 任一萍, 葛海鹏 申请人:上海晶泰生物技术有限公司
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