专利名称：一种藿香正气水的质量控制方法
技术领域：
本发明涉及中成药的质量控制方法，特别是涉及采用高效液相色谱(HPLC)指纹图谱来控制藿香正气水质量的控制方法。
背景技术：
藿香正气水是夏季常用解暑药物，主要由藿香、苍术、陈皮、厚朴、白芷、茯苓、大腹皮、半夏、甘草、紫苏等中药组成，具有止吐，镇痛、解痉，增强细胞免疫功能和抑菌作用。
中药指纹图谱是指某些中药材或中药制剂经适当处理后，采用一定的分析手段， 得到的能够标示其化学特征的色谱图。中药指纹图谱是一种综合的，可量化的鉴定手段，它是建立在中药化学成分系统研究的基础上，主要用于评价中药材以及中药制剂半成品质量的真实性、优良性和稳定性.由于中药及其制剂均为多组分复杂体系，尤其是复方中药成分复杂，其中所含的任意成分含量的高低都不能代表其整体的疗效。如果只用其中一、两种成分来说明其内在质量，具有一定的片面性，更无法判断无药效的指标成分。因此，评价其质量应采用与之相适应的，能提供鉴别其准确可靠的检测方法。目前，国际上多采用指纹图谱对中草药的各种成分进行质量控制。采用中药指纹图谱方式，一方面可以通过指纹图谱的特征性，有效的鉴别样品的真伪；另一方面通过对主要指纹图谱特征峰的面积或比例的控制，能有效地控制产品的质量，确保产品质量的稳定一致，进一步可使中药质量与其药效真正结合起来，有从而达到保证产品服用安全有效的目的。
藿香正气水由十味中药组成，化学成分较复杂。2010版中国药典仅对和厚朴酚、厚朴酚、甘草苷、橙皮苷四个成分进行含量测定，然而复方中药药效的发挥是多组分共同作用的结果，且所控制成分在复方的药效作用亦不明确。所以当前亟待解决的是根据其临床药理药效建立一个合理控制质量方法，更好的控制藿香正气水的质量，从而保证用药的安全有效。发明内容
本发明的目的在于提供一种藿香正气水的质量控制方法。
本发明采取的技术方案为一种藿香正气水的质量控制方法，包括如下步骤1)待测产品溶液的制备取藿香正气水待测产品300 u L，用水定容至I mL，乙酸乙酯萃取3次，每次2 mL，合并萃取液，挥干乙酸乙酯，用甲醇定容至10 mL，摇匀，过滤， 即得；2)将待测产品溶液按以下色谱条件进行高效液相色谱测定，得待测产品的高极性部分指纹图谱色谱柱采用Diamonsil C18 ;采用梯度洗脱，流动相A为0. 05%甲酸水溶液，B为乙睛， C为甲醇；流速I. 0 mL min—1 ;检测波长为270nm ;柱温35°C ;进样量20uL ；3)将待测产品溶液按以下色谱条件进行高效液相色谱测定，得待测产品的中低极性部分指纹图谱色谱柱采用GraceSmart RP18 ;采用梯度洗脱，流动相A为水，B为乙睛；流速1.0 mL min—1 ;检测波长为280nm ;柱温30°C ;进样量20uL；4)将待测产品的高极性部分指纹图谱和中低极性部分指纹图谱分别与相应的藿香正气水高极性部分标准指纹图谱、中低极性部分标准指纹图谱进行比较，计算相似度， 识别两者所具有的共同吸收峰的数量，以确定待测产品是否合格。
优选的，待测产品的高极性部分指纹图谱与藿香正气水高极性部分标准指纹图谱比对，其相似度应为0. 90 I. 00。
优选的，待测产品的中低极性部分指纹图谱与藿香正气水中低极性部分标准指纹图谱比对，其相似度应为0. 90 I. 00。
通过本发明建立的藿香正气水高极性部分标准指纹图谱，各共有峰以3号峰甘草苷为参照峰，共有峰7个，其中，单峰面积超过总峰面积5%的吸收峰有3个，分别为3、4、5号峰；计算其相对保留时间，结果如下相对保留时间=1 (0. 862±0. 002)，2 (0. 926±0. 001)， 3 (I. 000),4 (I. 440±0. 002)，5 (2. 281 ±0. 004)，6 (2. 393±0. 021)，7 (2. 557±0. 006)。
通过本发明建立的藿香正气水高极性部分标准指纹图谱中，1、2、3、5号峰来自甘草，4号峰来自陈皮，6、7号峰来自白芷。
通过本发明建立的藿香正气水高极性部分标准指纹图谱中，3号峰为甘草苷，5号峰为甘草素，4号峰为橙皮苷，7号峰为白当归素。
通过本发明建立的藿香正气水中低极性部分标准指纹图谱，各共有峰以6号峰川陈皮素为参照峰，共有峰15个，其中，单峰面积超过总峰面积5%的吸收峰有6个，分别为I、6、9、12、14、15号峰；计算其相对保留时间，结果如下相对保留时间1 (0. 294±0. 002)，2(0. 323±0. 001)，3 (0. 686±0. 001)，4 (0. 830±0. 000)，5 (0. 890±0. 001)，6 (1.000)， 7 (I. 047±0. 000)，8 (I. 091±0. 001)，9 (I. 201 ±0. 001 )，10 (I. 337 ± 0. 001 )，11 (I. 502±0. 001)，12 (I. 542±0. 001)，13 (I. 647±0. 001 )，14 (I. 769±0. 002)，15 (2. 005±0. 003)。
通过本发明建立的藿香正气水中低极性部分标准指纹图谱中，I号峰来自甘草、3、4、6、7、9来自陈皮，10、13来自白芷，12、14来自厚朴。
通过本发明建立的藿香正气水中低极性部分标准指纹图谱中，3号峰为5，7，8， 3’，4’ -五甲氧基黄酮,5号峰为5, 7,8,4’ -四甲氧基黄酮,6号峰为川陈皮素，7号峰为3,5, 6，7，8，3’，4’-七甲氧基黄酮，9号峰为桔皮素，10号峰为欧前胡素，12号峰为和厚朴酚，13 号峰为异欧前胡素，14号峰为厚朴酚。
由于藿香正气水成分复杂，采用等度洗脱时各组分峰分离不理想，不能有效检测样品中各成分峰，故采用梯度洗脱的方式，先后尝试了甲醇-甲酸水，甲醇-水，甲醇-醋酸 /K，乙腈-甲酸水，乙腈-/K，乙腈-醋酸水，甲醇-乙腈-甲酸水等不同的流动相系统，并且尝试了多种不同梯度条件，最后确定了本发明的梯度洗脱方式及色谱条件，能较好地使样品中各色谱峰分离且出峰最多。
本发明采用不同溶剂和不同提取方法制备待测产品溶液，进行优化考查，结果表明本发明的制备方法最优，得到的图谱清晰。
本发明所涉及的藿香正气水，由于各药材之间所含的化学成分复杂，对指纹图谱的制定造成干扰，导致各部分指纹图谱特征不稳定，所以必须严格控制流动相的色谱条件， 才能得到良好的指纹图谱，也就是说，本发明涉及制剂的指纹图谱不是将甘草、陈皮、白芷和厚朴药材或制剂的指纹图谱简单叠加就能得到的，由于处方中10味药材所含成分相互之间的干扰影响，导致本发明涉及制剂中甘草、陈皮、白芷和厚朴部分的指纹图谱特征峰发生改变，而只有采用本发明经过反复实验加以确定的条件，才能得到理想的指纹图谱。
本发明所述的高极性部分指纹图谱和中低极性部分指纹图谱，是以白当归素的峰为分界线将藿香正气水的色谱分别用两部分表示，高极性部分指纹图谱是主要是藿香正气水中极性较大的化合物，最后出现的峰为白当归素，中低极性部分指纹图谱是继白当归素的峰之后出现的色谱峰组成的图谱。本发明分别对这两部分进行研究，每部分的峰清晰，若一次性同时研究藿香正气水的整个色谱图，许多药效成分的峰会不明显或不出现，导致质量控制不全面。
本发明的有益效果是本发明以藿香正气水中主要有效成分为基�。⒘艘桓龊侠砜刂频闹柿糠椒ǎ苡行Э刂撇返闹柿浚痉⒚鞯闹柿靠刂品椒ň芏�、稳定性、重复性均较高，确保产品质量的稳定一致，从而保证产品的安全有效。
本发明采用高效液相色谱指纹图谱来控制藿香正气水质量的控制方法能更加完善的控制藿香正气水成品的质量，本发明以甘草、陈皮、白芷和厚朴的化学成分特征为主的指纹图谱，代表了藿香正气水的药理活性，不仅能有效地表征藿香正气水的内在质量，更适合于生产过程中产品质量的有效控制。
图I是藿香正气水的高极性部分标准指纹图谱；图2是高极性部分标准指纹图谱的建立中参照物的指纹图谱；图3是藿香正气水的中低级性部分标准指纹图谱；图4是中低极性部分标准指纹图谱的建立中参照物的指纹图谱；图5是11批藿香正气水高极性部分的指纹图谱(叠加显示)；图6是11批藿香正气水中低级性部分的指纹图谱(叠加显示)。
具体实施方式
下面结合具本的实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限如此。
一种藿香正气水的质量控制方法，包括如下步骤1)待测产品溶液的制备取藿香正气水待测产品300 u L，用水定容至I mL，乙酸乙酯萃取3次，每次取乙酸乙酯2 mL，合并萃取液，挥干乙酸乙酯，用甲醇定容至10 mL, 摇匀，过滤，即得；2)将待测产品溶液按以下色谱条件进行高效液相色谱测定，得待测产品的高极性部分指纹图谱色谱柱采用Diamonsil C18 ;采用梯度洗脱，流动相A为0. 05%甲酸水溶液，B为乙睛，C 为甲醇，梯度洗脱条件见表I ;流速I. 0 mL IirT1 ;检测波长为270nm ;柱温35°C ;进样量 20 u L ；3)将待测产品溶液按以下色谱条件进行高效液相色谱测定，得待测产品的中低极性部分指纹图谱色谱柱采用GraceSmart RP18 ;采用梯度洗脱，流动相A为水，B为乙睛，梯度洗脱条件见表3 ;流速I. 0 mL min—1 ;检测波长为280nm ;柱温30°C ;进样量20uL ；4)将待测产品的高极性部分指纹图谱和中低极性部分指纹图谱分别与相应的藿香正气水高极性部分标准指纹图谱、中低极性部分标准指纹图谱进行比较，计算相似度， 识别两者所具有的共同吸收峰的数量，以确定待测产品是否合格；5)结果分析待测产品的高极性部分指纹图谱与藿香正气水高极性部分标准指纹图谱比对，其相似度为0. 90 I. 00，共有吸收峰数量相同，且待测产品的中低极性部分指纹图谱与藿香正气水中低极性部分标准指纹图谱比对，其相似度为0. 90 I. 00，共有吸收峰数量相同，则可判断待测产品为合格产品，否则，待测产品为不合格产品。
藿香正气水高极性部分标准指纹图谱的建立I) 色谱条件色谱柱采用Diamonsil C18 (250mmX4. 6mm, 5 y m);梯度洗脱条件见表I,流动相A为0.05%甲酸水溶液，B为乙睛，C为甲醇；流速I. 0 mL .mirT1 ;检测波长为270nm ;柱温35°C； 进样量20iiL ; I梯哎沆晚嚴11 时M 丨爾％ 0,05%中酸水％ 乙W%
权利要求
1.一种藿香正气水的质量控制方法，包括如下步骤1)待测产品溶液的制备取藿香正气水待测产品300u L，用水定容至I mL，加乙酸乙酯萃取3次，每次2 mL，合并萃取液，挥干乙酸乙酯，用甲醇定容至10 mL，摇匀，过滤，即得；2)将待测产品溶液按以下色谱条件进行高效液相色谱测定，得待测产品的高极性部分指纹图谱色谱柱采用Diamonsil C18 ;采用梯度洗脱，流动相A为0. 05%甲酸水溶液，B为乙睛， C为甲醇；流速I. 0 mL min—1 ;检测波长为270nm ;柱温35°C ;进样量20uL ；3)将待测产品溶液按以下色谱条件进行高效液相色谱测定，得待测产品的中低极性部分指纹图谱色谱柱采用GraceSmart RP18 ;采用梯度洗脱，流动相A为水，B为乙睛；流速1.0 mL min—1 ;检测波长为280nm ;柱温30°C ;进样量20uL；4)将待测产品的高极性部分指纹图谱和中低极性部分指纹图谱分别与相应的藿香正气水高极性部分标准指纹图谱、中低极性部分标准指纹图谱进行比较，计算相似度，识别两者所具有的共同吸收峰的数量，以确定待测产品是否合格。
2.根据权利要求I所述的藿香正气水的质量控制方法，其特征在于待测产品的高极性部分指纹图谱与藿香正气水高极性部分标准指纹图谱比对，其相似度应为0. 90 I. 00。
3.根据权利要求I所述的藿香正气水的质量控制方法，其特征在于待测产品的中低极性部分指纹图谱与藿香正气水中低极性部分标准指纹图谱比对，其相似度应为0. 90 I. 00。
4.根据权利要求I所述的藿香正气水的质量控制方法，其特征在于藿香正气水高极性部分标准指纹图谱，各共有峰以3号峰甘草苷为参照峰，共有峰7个，其中，单峰面积超过总峰面积5%的吸收峰有3个，分别为3、4、5号峰；计算其相对保留时间，结果如下 相对保留时间1 (0. 862±0. 002),2 (0. 926±0. 001)，3 (I. 000),4 (I. 440±0. 002)，5 (2. 281±0. 004)，6 (2. 393±0. 021)，7 (2. 557±0. 006)。
5.根据权利要求4所述的藿香正气水的质量控制方法，其特征在于藿香正气水高极性部分标准指纹图谱中，1、2、3、5号峰来自甘草，4号峰来自陈皮，6、7号峰来自白芷。
6.根据权利要求4所述的藿香正气水的质量控制方法，其特征在于藿香正气水高极性部分标准指纹图谱中，3号峰为甘草苷，5号峰为甘草素，4号峰为橙皮苷，7号峰为白当归素。
7.根据权利要求I所述的藿香正气水的质量控制方法，其特征在于藿香正气水中低极性部分标准指纹图谱，各共有峰以6号峰川陈皮素为参照峰，共有峰15个，其中，单峰面积超过总峰面积5%的吸收峰有6个，分别为1、6、9、12、14、15号峰；计算其相对保留时间，结果如下相对保留时间1 (0. 294±0. 002),2 (0. 323±0. 001)，3 (0. 686±0. 001)，4(0. 830±0. 000)，5 (0. 890±0. 001)，6 (I. 000),7 (I. 047±0. 000)，8 (I. 091 ±0. 001 )，9(I. 201±0. 001)，10 (I. 337±0. 001)，11 (I. 502±0. 001 )，12 (I. 542±0. 001 )，13 (I. 647±0. 001)，14 (I. 769±0. 002)，15 (2. 005±0. 003)。
8.根据权利要求7述的藿香正气水的质量控制方法，其特征在于藿香正气水中低极性部分标准指纹图谱中，I号峰来自甘草、3、4、6、7、9来自陈皮，10、13来自白芷，12、14来自厚朴。
9.根据权利要求7所述的藿香正气水的质量控制方法，其特征在于藿香正气水中低极性部分标准指纹图谱中，3号峰为5，7，8，3’，4’-五甲氧基黄酮，5号峰为5，7，8，4’-四甲氧基黄酮，6号峰为川陈皮素，7号峰为3, 5,6, 7,8, 3’，4’ -七甲氧基黄酮,9号峰为桔皮素， 10号峰为欧前胡素，12号峰为和厚朴酚，13号峰为异欧前胡素，14号峰为厚朴酚。
全文摘要
本发明公开了一种藿香正气水的质量控制方法，包括待测产品溶液的制备；测定待测产品溶液的指纹图谱；与制定的以甘草苷为参照物的高极性部分标准指纹图谱和以川陈皮素为参照物的中低极性部分标准指纹图谱进行比较，以判断待测产品是否合格。本发明以藿香正气水中主要有效成分为基�。⒘艘桓龊侠砜刂频闹柿糠椒ǎ苡行Э刂撇返闹柿浚痉⒚鞯闹柿靠刂品椒ň芏�、稳定性、重复性均较高，确保产品质量的稳定一致，从而保证产品的安全有效。
文档编号G01N30/88GK102539602SQ201110447219
公开日2012年7月4日 申请日期2011年12月28日 优先权日2011年12月28日
发明者吴韶辉, 张洪坤, 李康, 黄洋 申请人:广东药学院
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