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Genet. 19 :225-232(1998)ºÍ US2007/0099208 Al (ÆäÖÐÿ¸öÒÔÒýÓ÷½Ê½²¢Èë±¾ÎÄ)ÖÐËùÊö¡£ÖéÉÏÈéÒºPCRÒ²¿ÉÒÔʹÓã¬ÀýÈç,ÈçDressmanµÈÈË,Proc. Natl. Acad. Sci. USAlOO :8817-8822(2003)¡¢WO 05/010145 »òÃÀ¹úרÀû¹«¿ªºÅ 2005/0130173 »ò 2005/0064460 (ÆäÖÐÿ¸öµÄÈ«²¿ÄÚÈÝÒÔÒýÓ÷½Ê½²¢Èë±¾ÎÄ)ÖÐËùÊö¡£ÆäËûÊÊÓÃÓÚ±¾ÎIJûÊöµÄËùÊö·½·¨ºÍϵͳµÄÓÃ;µÄ²âÐò¼¼ÊõΪ½¹Á×Ëá²âÐò¡¢ÄÉÃ׿ײâÐòÒÔ¼°Á¬½Ó·¨²âÐò¡£ÌرðÓÐÓõÄʾÀýÐÔ½¹Á×Ëá²âÐò¼¼ÊõºÍÑùÆ·±»ÃèÊöÓÚUS 6£¬210£¬891¡¢ US 6£¬258£¬568¡¢US 6£¬274£¬320 ºÍ Ronaghi, Genome Research 11 :3-11 (2001)(ÆäÖÐÿ¸öÒÔÒýÓ÷½Ê½²¢Èë±¾ÎÄ)¡£Ò²ÓÐÓõÄʾÀýÐÔÄÉÃ׿׼¼ÊõºÍÑùÆ·±»ÃèÊöÓÚDeamerµÈÈË£¬Acc. Chem. Res. 35 :817-825(2002) ;Li µÈÈË£¬Nat. Mater. 2 :611-615 (2003) ;Soni µÈÈË£¬Clin Chem. 53 1996-2001 (2007)¡¢Healy µÈÈË£¬Nanomed. 2 :459-481 (2007)ºÍ Cockroft µÈÈË£¬J. am. Chem. Soc. 130 :818-820 ;ÒÔ¼°US 7£¬001£¬792 (ÆäÖÐÿ¸öÒÔÒýÓ÷½Ê½²¢Èë±¾ÎÄ)¡£¾ßÌ嵨£¬ÕâЩ·½·¨ÀûÓÃÖØ¸´µÄÊÔ¼ÁµÝËͲ½Öè¡£±¾ÎÄÌá³öµÄÒÇÆ÷»ò·½·¨¿ÉÅäÖÃÓÐÖüÆ÷¡¢·§ÃÅ¡¢ÉäÁ÷ÏßºÍÆäËûÉäÁ÷²¿¼þÒÔ¼°ÓÃÓÚÄÇЩ²¿¼þµÄ¿ØÖÆÏµÍ³£¬ÒÔÒýÈëÊÔ¼Á²¢¸ù¾ÝËùÐèµÄ·½°¸(ÀýÈçÈçÉÏËùÊöµÄ²Î¿¼ÎÄÏ×ÖÐÌá³öµÄÄÇЩ·½°¸)¼ì²â¹âÐźš£¸÷ÖÖÑùÆ·ÖеÄÈκÎÒ»Öֿɱ»ÓÃÓÚÕâЩϵͳ£¬ÀýÈç¾ßÓÐͨ¹ýÈéÒºPCRÉú³ÉµÄÖéµÄ»ùµ×¡¢¾ßÓÐÁãģʽ²¨µ¼µÄ»ùµ×¡¢¾ßÓм¯³ÉCMOS¼ì²âÆ÷µÄ»ùµ×¡¢ ÔÚÖ¬ÖÊË«²ãÖоßÓÐÉúÎïÄÉÃ׿׵Ļùµ×¡¢¾ßÓкϳÉÄÉÃ׿׵ĹÌ̬»ùµ×ÒÔ¼°±¾ÁìÓòÒÑÖªµÄÆäËû»ùµ×¡£ÕâЩÑùÆ·±»ÃèÊöÓÚÉÏÎÄËùÊöµÄ²Î¿¼ÎÄÏ×Öеĸ÷ÖÖ²âÐò¼¼Êõ±³¾°²¢½øÒ»²½±»ÃèÊöÓÚ US2005/0042648¡¢US 2005/0079510¡¢US 2005/0130173 ºÍ WO 05/010145 (ÆäÖÐÿ¸öÒÔÒýÓ÷½Ê½²¢Èë±¾ÎÄ)¡£¿ÉÒÔ°´ÕÕ²»Í¬µÄʵʩ·½Ê½±»¼ì²â(ÀýÈ磬µ±´æÔÚÓÚÖ§³Å½á¹¹ÉÏÃæ»òÄÚ²¿Ê±)µÄʾÀýÐÔ±ê¼Ç°üÀ¨µ«²»ÏÞÓÚ·¢É«ÍÅ¡¢·¢¹âÍÅ¡¢Ó«¹âÍÅ¡¢¹âѧ±àÂëµÄÄÉÃ×Á£×Ó¡¢ÒÔÑÜÉä¹âÕ¤±àÂëµÄ¿ÅÁ£¡¢µç»¯Ñ§·¢¹âµÄ±ê¼Ç(ÈçRu(bpy)32+)»ò¿ÉÒÔ»ùÓÚ¹âÑ§ÌØÐÔ±»¼ì²âµ½µÄ²¿·Ö¡£¿ÉÒÔÓÐÓõÄÓ«¹âÍŰüÀ¨£¬ÀýÈçÓ«¹âïçϵ¸´ºÏÎï(°üÀ¨ÄÇЩîðºÍ﫵ĸ´ºÏÎï)¡¢Ó«¹âËØ¡¢ÂÞµ¤Ã÷¡¢ Ëļ׻ùÂÞµ¤Ã÷¡¢Êïºì¡¢³àÞººì¡¢Ïã¶¹ËØ¡¢¼×»ùÏã¶¹ËØ¡¢ÜÅ¡¢¿×ȸʯÂÌ¡¢Cy3¡¢Cy5¡¢¶þ±½ÒÒÏ©¡¢Ó«¹â»Æ(Lucifer 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" Analytical Biochemistry242(I),84-9 ; Ronaghi, M. (2001) " Pyrosequencing sheds light on DNAsequencing. " Genome Res. 11(1), 3-11 £»Ronaghi, M.µÈÈË¡¤ (1998) " Asequencing method based on real-timepyrophosphate. " Science 281 (5375)£¬363 ;ÃÀ¹úרÀûºÅ 6£¬210£¬891 ;ÃÀ¹úרÀûºÅ 6£¬258£¬568ºÍÃÀ¹úרÀûºÅ6£¬274£¬320£¬ÆäÅû¶µÄÈ«²¿ÄÚÈÝÒÔÒýÓ÷½Ê½²¢Èë±¾ÎÄ)¡£ÔÚ½¹Á×Ëá²âÐòÖУ¬ÊͷŵÄPPi¿ÉÒÔͨ¹ýÓÉÏÙÜÕÈýÁ×ËáÏÙÜÕ(ATP)ÁòËữøÁ¢¼´±»×ª»»ÎªATP½øÐмì²â£¬ÒÔ¼°Éú³ÉµÄATPˮƽͨ¹ýÓ«¹âËØÃ¸²úÉúµÄ¹â×Ó½øÐмì²â¡£ÔÚÕâÖÖÇé¿öÏ£¬ËùÊöÉäÁ÷Æ÷¼þ 112¿É°üÀ¨Êý°ÙÍòµÄ¿×£¬ÆäÖÐÿ¸ö¿×¾ßÓÐÔÚÆäÉϾßÓпË¡À©ÔösstDNAµÄµ¥Ò»²¶»ñÖ顣ÿ¸ö¿×»¹¿É°üÀ¨ÆäËû½ÏСµÄÖé×Ó(ÀýÈç¿ÉЯ´ø¹Ì¶¨»¯Ã¸(ÀýÈçATPÁòËữøºÍÓ«¹âËØÃ¸)»ò±ãÓÚ½«ËùÊö²¶»ñÖé±£³ÖÔÚËùÊö¿×ÖеÄÖé×Ó)¡£ËùÊöSBSÄ£¿é157¿É±»ÅäÖÃÒÔÏòËùÊöÁ÷Ìå¿ØÖÆÄ£¿é151·¢³öÃüÁÒÔÁ¬Ðø½øÐÐЯ´øµ¥Ò»ÀàÐͺËÜÕËáµÄÁ÷ÌåµÄÑ»·(ÀýÈ磬µÚIÑ»·A ;µÚ 2Ñ»·G ;µÚ3Ñ»·C ;µÚ4Ñ»·T ;µÚ5Ñ»·¦¡ ;µÚ6Ñ»·G ;µÚ7Ñ»·C ;µÚ8Ñ»·T £» µÈµÈ)¡£µ±ºËÜÕËá±»²ôÈëµ½DNAÖÐʱ£¬½¹Á×Ëá±»ÊÍ·Å£¬´Ó¶øÒý·¢Á´Ê½·´Ó¦£¬ÆäÖвúÉú¹ââ§·¢¡£ ËùÊö¹ââ§·¢¿ÉÒÔͨ¹ýËùÊö¼ì²âÆ÷×é¼þµÄÑùÆ·¼ì²âÆ÷½øÐмì²â¡£¼ì²âÊý¾Ý¿É±»´«´ïµ½ËùÊöϵͳ¿ØÖÆÄ£¿é150¡¢ËùÊöͼÏñ·ÖÎöÄ£¿é158ºÍ/»òËùÊöSBSÄ£¿é157½øÐд¦Àí¡£ËùÊö¼ì²âÊý¾Ý¿É´æ´¢ÆðÀ´ÓÃÓÚÒÔºóµÄ·ÖÎö»ò¿Éͨ¹ýËùÊöϵͳ¿ØÖÆÆ÷102½øÐзÖÎö¶øÍ¼Ïñ¿É±»·¢Ë͵½ËùÊöÓû§½çÃæ140¡£ÔÚһЩʵʩ·½Ê½ÖУ¬Óû§¿ÉÒÔͨ¹ýËùÊöÓû§½çÃæ140ÌṩÓû§ÊäÈ룬ÒÔÑ¡Ôñ½«ÓÉËùÊö²â¶¨ÏµÍ³100ÔËÐеIJⶨ·½°¸¡£ÔÚÆäËûʵʩ·½Ê½ÖУ¬ËùÊö²â¶¨ÏµÍ³100¿É×Ô¶¯¼ì²âÒѱ»²å½øËùÊöÆ÷¼þÖ§¼Ü110µÄÉäÁ÷Æ÷¼þ112µÄÀàÐͲ¢ÓëÓû§È·ÈÏ´ýÔËÐеIJⶨ·½°¸¡£Ìæ´úµØ£¬ËùÊö²â¶¨ÏµÍ³100¿ÉÌṩÊýÁ¿ÓÐÏÞµÄÒÔÈ·¶¨ÀàÐ͵ÄÉäÁ÷Æ÷¼þ112ÔËÐеIJⶨ·½°¸¡£Óû§¿ÉÒÔÑ¡ÔñËùÐèµÄ²â¶¨·½°¸£¬È»ºóËùÊö²â¶¨ÏµÍ³100¿É¸ù¾ÝÔ¤±à³ÌÖ¸ÁîÖ´ÐÐËùÑ¡¶¨µÄ²â¶¨·½°¸¡£Í¼2ºÍ3ʾ³ö°´ÕÕÒ»¸öʵʩ·½Ê½±»ÅäÖÃÓÃÓÚÑùÆ·µÄÉúÎïºÍ»¯Ñ§·ÖÎöµÄ¹¤×÷Õ¾160¡£ ÈçͼËùʾ£¬ËùÊö¹¤×÷Õ¾160Ïà¶ÔÓÚÏ໥´¹Ö±µÄX¡¢YºÍZÖᶨλ¡£ÔÚËùʾµÄʵʩ·½Ê½ÖУ¬µØÇòÒýÁ¦gƽÐÐÓÚËùÊöZÖáÑÓÉì¡£ËùÊö¹¤×÷Õ¾160¿É°üÀ¨¹¤×÷Õ¾¿Ç162 (»ò¹¤×÷Õ¾Íâ¿Ç)£¬Æä±»Ê¾ÓÚͼ2ºÍͼ3µÄÆÊÊÓͼÖС£ËùÊö¿Ç162±»ÅäÖÃÒÔÈÝÄÉËùÊö¹¤×÷Õ¾160µÄ¸÷ÖÖÔª¼þ¡£ÀýÈ磬ËùÊö¹¤×÷Õ¾160¿É°üÀ¨ÈçÉÏÎÄËùÊöµÄ¹ØÓÚËùÊö²â¶¨ÏµÍ³100 (ͼI)µÄÀàËÆÔª¼þ¡£ÈçͼËùʾ£¬ËùÊö¹¤×÷Õ¾160¾ßÓйâѧ̨164£¬ËùÊö¹âѧ̨164¾ßÓжà¸ö°²×°ÖÁÆäµÄ¹âѧ²¿¼þ¡£ËùÊö¹âѧ²¿¼þ¿ÉÒÔÊǹâѧ×é¼þ(Èç¸ù¾Ýͼ38µÈÃèÊöµÄËùÊö¹âѧ×é¼þ602)µÄÒ»²¿·Ö¡£ËùÊö¹âѧ̨164¿ÉÒÔ¾ßÓÐÏà¶ÔÓÚËùÊö¿Ç162µÄ¹Ì¶¨Î»Öá£ËùÊö¹¤×÷Õ¾160»¹¿É°üÀ¨¿ÉÒÆ¶¯µØñîºÏÖÁËùÊö¹âѧ̨164µÄÑùƷ̨166¡£ËùÊöÑùƷ̨166¿É¾ßÓÐÔÚÆäÉÏÖ§³Å¾ßÓÐÓйØÑùÆ·µÄÉäÁ÷Æ÷¼þµÄ»¬¶¯Æ½Ì¨168¡£ÔÚËùʾµÄʵʩ·½Ê½ÖУ¬ËùÊöÉäÁ÷Æ÷¼þÊÇÔÚÏÂÎĸüÏêϸµØÃèÊöµÄÉäÁ÷Æ÷¼þ300¡£ËùÊöƽ̨168±»ÅäÖÃΪÏà¶ÔÓÚËùÊö¹âѧ̨164ÒÔ¼°£¬¸ü¾ßÌ嵨£¬Ïà¶ÔÓÚËùÊö¹âѧ×é¼þ602µÄ³ÉÏñ͸¾µ»¬¶¯¡£Îª´Ë£¬ËùÊöƽ̨168¿ÉÒÔÑØËùÊöXÖáË«Ïò»¬¶¯£¬ÒÔ±ãËùÊöÉäÁ÷Æ÷¼þ300¿É±»ÖÃÓÚËùÊöÑùƷ̨166ÉÏÒÔ¼°ÒÔ±ãËùÊö³ÉÏñ͸¾µ¿ÉÒÔÔÚËùÊöÉäÁ÷Æ÷¼þ300µÄÉÏ·½»¬¶¯ÒÔʹÆäÖеÄÑùÆ·³ÉÏñ¡£ÔÚÆäËûʵʩ·½Ê½ÖУ¬ËùÊöƽ̨168¿ÉÒÔÊǾ²Ö¹µÄ¶øËùÊöÑùƷ̨166¿ÉÒÔÑØËùÊöXÖáË«Ïò»¬¶¯£¬ÒÔÏà¶ÔÓÚËùÊö¹âѧ×é¼þ602µÄ³ÉÏñ͸¾µÉèÖÃËùÊöÉäÁ÷Æ÷¼þ300¡£Òò´Ë£¬ËùÊöƽ̨ºÍÑùƷ̨ÓÉÓÚËùÊöÑùƷ̨¡¢Æ½Ì¨»òÁ½ÕßµÄÒÆ¶¯¶ø¿ÉÒÔÊÇÏà¶ÔÓڱ˴˿ÉÒÆ¶¯µÄ¡£ÈÔÈçͼËùʾ£¬ËùÊö¹¤×÷Õ¾160¿É°üÀ¨Óû§½çÃæ172¡¢¼ÆËãϵͳ174(ͼ2)ÒÔ¼°Á÷Ìå´æ´¢µ¥Ôª176ºÍ178 (ͼ4)¡£ËùÊöÓû§½çÃæ172¿ÉÒÔÊDZ»ÅäÖÃÒÔÏòÓû§ÏÔʾÐÅÏ¢²¢ÇÒÒ²½Ó
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