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专利名称：一种同时测定酒花中α-酸、β-酸和异α-酸的方法
技术领域：
本发明采用反相高效液相色谱法同时检测酒花中a -酸、P -酸和异a -酸的定量分析方法，实现了对酒花中a-酸、￠-酸中六种主要异构体和异a-酸中三种异构体的同时测定。本发明属于化学分析检测领域
背景技术：
酒花是酿造啤酒的重要原料，其a -酸和0 -酸既是其主要的风味物质，又是酒花中抑菌、防杂菌污染的主要物质。酒花的质量是影响啤酒质量一口感、风味及稳定性的重要因素之一，而其中最关键问题就是酒花中a -酸、0 -酸的含量及其新鲜度的准确测定与 辨别。a -酸主要包括_草酮(11111]11110116)、合_草酮(cohumulone)J[]_草酮(adhumulone)三种异构体，0 -酸主要包括蛇麻酮(Iupulone )、合蛇麻酮(colupulone)、加蛇麻酮(adlupulone)三种异构体。a -酸在加热、稀碱或光照下易发生异构化形成异a-酸，异a-酸是啤酒苦味的主要物质，它虽a-酸苦，但苦味更柔和。在麦汁煮沸1.0-1. 5h约有40%-60% a -酸转化成异a -酸。异a -酸主要有异合a -酸、异a -酸和异加a -酸。目前对a-酸、P -酸和异a -酸的检测方法是各自独立的，实验操作重复而浪费时间。还没有一种检测方法可以有效地同时分析测定3种a-酸、3种￠-酸和3种异a -酸9种物质，既节省时间又能有效的分离。从而在酒花异构颗�：鸵旃菇�膏的生产过程，检测酒花中a-酸、酸和异a-酸的变化关系，为生产工艺提供理论指导。同时该检测方法也可应用于麦汁煮沸过程不同品种酒花的a-酸与异a-酸的动力学变化的研究。

发明内容
本发明的目的是提供一个用反相高效液相色谱方法同时测定酒花中a-酸、^ -酸和异a -酸的方法。在添加一定量EDTANa2,实现3种a -酸、3种P -酸和3种异a-酸9种物质的同时测定。该方法提高液相检测的效率，节省时间，对九种化合物都能获得较好的分离效果。本发明测定酒花和麦汁中a -酸、0 -酸和异a -酸的方法包括如下步骤a.酒花样品制备对于酒花颗粒制品，将其磨成粉末状，称取样品5. 0g，置于250mL具塞锥形瓶中，用10-30mL甲醇和70_100mL乙醚萃取，于恒温20°C摇床振荡30min，加入0. lmol/L盐酸溶液30-50mL，再振荡30min，静置30min使其分层。取上层乙醚层5mL,用甲醇定容至50mL,充分均勻，用0. 45 u m有机滤膜过滤,存于样品瓶中，准备进样。对于酒花浸膏样品，准确称取0. lg，置于50mL烧杯中，用40mL甲醇溶解，置于超声波水浴10-20min，转移至IOOmL容量瓶中，用甲醇定容，充分混匀。用0. 45 y m有机滤膜过滤，存于样品瓶中，准备进样。b.标样制备取0. 0200g异a -酸用25mL色谱级甲醇溶于50mL烧杯；
0.2000ga-酸和￠-酸浸膏标样，用20mL色谱级甲醇充分溶解，定容于50mL棕色容量瓶中。取IOmL于50mL容量瓶，再倒入异a -酸标样溶解液，用甲醇定容。充分混匀，用0. 45 y m有机滤膜过滤，存于样品瓶中，准备进样。c.色谱条件如下色谱柱EC250/4Nuclesoil 100-5C18洗脱条件流动相有机B相为乙腈；无机A相为含有磷酸(85%)0. l%、0.2mMEDTANa2的水溶液。本发明采用梯度洗脱方法，洗脱程序为0_30min，0%B_60%B ；30-32min,60%B-70% ；32-50min,70%B-75%B ;50-55min,75%B_60%B。进样体积10 Ii L,流速 I. OmL/min,柱温 30°C .检测波长异a -酸的检测波长270nm，a -酸和P -酸的检测波长315nm。本发明同时可将酒花中a-酸、￠-酸6种主要异构体和异a-酸3种主要异构体共9种物质一次性分离，操作简单、准确可靠。


图I酒花浸膏样品色谱图I.异合潷草酮2.异潷草酮3.异加潷草酮4.合潷草酮5.潷草酮6.加潷草酮
7.合蛇麻酮8.蛇麻酮9.加蛇麻酮图2酒花颗粒样品色谱图I.异合潷草酮2.异潷草酮3.异加潷草酮4.合潷草酮5.潷草酮6.加潷草酮
7.合蛇麻酮8.蛇麻酮9.加蛇麻酮
具体实施例方式实施例I准确称取酒花浸膏样品，准确称取0. lg，置于50mL烧杯中，用40mL甲醇溶解，置于超声波水浴10-20min，转移至IOOmL容量瓶中，用甲醇定容，充分混匀。用0. 45 y m有机滤膜过滤，存于样品瓶中，进样分析。反相液相色谱分析条件色谱柱EC250/4Nuclesoil 100-5C18洗脱条件流动相有机B相为乙腈；无机A相为含有磷酸(85%)0. l%、0.2mMEDTANa2的水溶液。本发明采用梯度洗脱方法，洗脱程序为0_30min，0%B_60%B ；30-32min,60%B-70% ；32-50min,70%B-75%B ;50-55min,75%B_60%B。进样体积10 V- L,流速 I. OmL/min,柱温 30°C .检测波长异a -酸的检测波长270nm，a -酸和@ -酸的检测波长315nm。所得标样色谱图如图I。 实施例2称取磨成粉末状的颗粒酒花样品5. Og，置于250mL具塞锥形瓶中，用20mL甲醇和8OmL乙醚萃�。�于恒温20°C摇床振荡30min,加入0. lmol/L盐酸溶液40mL,再振荡30min,静止分层。取上层乙醚层5mL,用甲醇定容至50mL,充分均勻,用0. 45 U m有机滤膜过滤,存于样品瓶中，进样分析。反相液相色谱分析条件色谱柱EC250/4Nuclesoil 100-5C18
洗脱条件流动相有机B相为乙腈；无机A相为含有磷酸(85%)0. 1%、0.2禮EDTANa2的水溶液。本发明采用梯度洗脱方法，洗脱程序为0_30min，0%B_60%B ；30-32min,60%B-70% ；32-50min,70%B-75%B ;50-55min,75%B_60%B。进样体积10 v- L,流速 I. OmL/min,柱温 30°C。检测波长异a -酸的检测波长270nm，a -酸和@ -酸的检测波长315nm。所得样品色谱图如图2。取已知目的物含量的酒花样品一份，加入不同质量浓度的标准溶液，制备成高(异a -酸浓度 100mg/L, a -酸、P -酸 200mg/L)、中(异 a -酸浓度 50mg/L, a -酸、酸100mg/L)、低(异a -酸浓度10mg/L, a -酸、0 -酸20mg/L)三个浓度的混合液,按照上述方法和条件各测定6次，RSD值均在5%左右，表明该方法的稳定性和重现性很好。回收率 取其平均值，异a -酸的回收率在90%-100%之间，a -酸、0 -酸的回收率在100%-110%之间，由此可见方法可以可靠的同时测定酒花样品中a-酸、酸和异a-酸。
权利要求
1.一种同时测定酒花中a -酸、￠-酸和异a-酸的方法，其特征包括以下步骤 .1)样品制备取酒花颗粒样品粉末状样品5.Og，置于250mL具塞锥形瓶中，用10_30mL甲醇和70-100mL乙醚萃�。�于恒温20°C摇床振荡30min，加入0. lmol/L盐酸溶液30_50mL，再振荡30min,静置30min使其分层；取上层乙醚层5mL,用甲醇定容至50mL,充分均勻，用.0. 45 有机滤膜过滤，存于样品瓶中，准备进样；或取酒花浸膏样品0. lg，置于50mL烧杯中，用40mL甲醇溶解，置于超声波水浴10-20min，转移至IOOmL容量瓶中，用甲醇定容，充分混勻；用0. 45 y m有机滤I吴过滤,存于样品瓶中,准备进样； .2)将步骤I)制备好的样品用反相高效液相色谱分析，分析条件如下 色谱柱EC 250/4Nuclesoil 100-5C18 ； 洗脱条件流动相有机相为乙腈；无机相为含有磷酸(85%) 0. 1%、0. 2mM EDTANa2的水溶液。本发明采用梯度洗脱方法，洗脱程序为0-30min，0%B-60%B ；30-32min,60%B-70% ； .32-50min,70%B-75%B ；50-55min,75%B-60%B ； 进样体积10 u L,流速I. OmL/min,柱温30。。； 检测波长异a -酸的检测波长270nm，a -酸和P -酸的检测波长315nm。
全文摘要
本发明公开了一种用反相高效液相色谱同时检测酒花中α-酸、β-酸和异α-酸的方法，实现3种α-酸、3种β-酸和3种异α-酸9种物质的同时快速有效地分离。其特征在于色谱条件为色谱柱:EC 250/4Nuclesoil 100-5C18，流动相A水溶液(磷酸0.1%，0.2mM EDTANa2)；流动相B乙腈。流速为1.0mL/min，双波长检测UV270nm和UV315nm，柱温30℃，进样体积为10μL。该发明在酒花异构颗�：鸵旃菇�膏的生产过程，监测酒花中α-酸、β-酸和异α-酸的变化关系，为生产工艺提供理论参考。同时该检测方法也可用于麦汁煮沸过程酒花的α-酸与异α-酸的动力学变化的研究。方法的稳定性和重现性好，操作简单、准确可靠。
文档编号G01N30/06GK102721770SQ20121019730
公开日2012年10月10日 申请日期2012年6月15日 优先权日2012年6月15日
发明者刘春凤, 周芸芸, 李崎, 李永仙, 王金晶, 郑飞云 申请人:江南大学