专利名称：基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹膜基片及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹膜基片及其制备方法和应用，属于分析化学技术领域。
背景技术：
海产品砷污染问题一直是食品安全领域关注的焦点。与陆地生物不同，海洋生物普遍具有较强的砷富集能力，鱼类、贝类、海藻等人类经常食用的海产品中均含有较高浓度的砷。海产品中的砷主要以有机砷化物的形态存在(如甲基胂酸、甲基亚胂酸、砷糖、砷胆碱等)，约占总砷的95%左右。目前，砷糖和砷胆碱的毒性尚未被证实，但甲基亚胂酸已被证实具有较强的细胞和生殖毒性，而甲基胂酸可造成DNA损伤。近年来，海产品砷超标的事件屡次见诸报端，使公众对海产品的食用安全性产生了怀疑，严重影响了水产养殖业和出口贸易的发展。因而，控制并监测海产品中砷含量具有十分重要的意义。
目前，世界各国对海产品中砷含量都有严格限制，我国海产品中的砷主要采用GB/ T 5009. 11-2003《食品中总砷及无机砷的测定》中规定的银盐法和氢化物原子荧光光度法进行检测。氢化物原子荧光光度法是我国海产品中砷检测的主要方法，此方法仅能测定无机砷和总砷含量，不能检测有机砷化物。20世纪70年代以来，电化学分析法、光谱法、色谱法、质谱法和联用技术等先进的仪器测定方法逐步被应用于砷检测。其中，色谱技术可以准确分离海产品中的有机砷化物，但检测灵敏度不尽如人意；质谱法和联用技术(如气相色谱-质谱联用、液相色谱-质谱联用等)能够准确测定海产品中各种有机砷化物的含量，但这两种方法所需仪器昂贵，且样品前处理极为复杂，实用性不高。由此可见，目前急需建立一种简便、可靠且高特异性的针对海产品中有机砷化物的检测方法，以保障海产品的食用安全。
分子印迹技术是20世纪70年代发展起来的一种高分子合成技术，利用此技术合成的分子印迹聚合物(MIPs)具有构效预定性、特异识别性和广泛应用性的特点。由于MPs 对目标分子识别具有高特异性和选择性，故被用作仿生传感器的分子识别元件，这种与目标分子的识别作用可以通过电极或压电晶体等输出，并转换成可测信号，定量特异性检测样品中的各种有机小分子化合物。21世纪以来，随着分子印迹技术的迅速发展，其存在的问题也日益突显。目前存在问题表现在以下三方面(1)制备的MII^对目标物质识别的特异性不高，易受结构类似物的干扰，造成假阳性结果。(2)制备MPs的功能单体种类过少。 常用的功能单体仅有甲基丙烯酸、三氟甲基丙烯酸、丙烯酰胺、N-乙烯基吡咯烷酮、2-乙烯基吡啶、4-乙烯基吡啶等，已不能满足分子印迹技术发展的需求；(3)现阶段MPs的制备仅停留在试验阶段，用于实际样品检测的MII^较少见。因而，增强MII^对目标物质识别的特异性，开发并合成高特异性的特殊单体，构建以MPs为识别元件的传感器是分子印迹技术未来发展的方向。 发明内容
本发明要解决的技术问题是提供了一种检测速度快、灵敏度高的基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹膜基片。
本发明还提供了基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹膜基片的制备方法以及利用其进行海产品中有机砷化物检测的方法。
本发明是通过以下技术方案实现的所述的基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹膜基片，包括钼石英晶体基片，其特征在于以基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹聚合物作为识别元件在所述钼石英晶体基片表面形成反应层；所述基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹聚合物是将海产品中有机砷化物模板分子、核酸适配子功能单体、交联剂、致孔剂、引发剂和有机溶剂按摩尔比为0.1 2.5 3 0. 1 3 30 60 0. 01 0. 15 1. 0 10的比例聚合而成。
所述功能单体为核酸适配子；所述交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯、三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯、N，N-亚甲基二丙烯酰胺、3，5-二 (丙烯酰胺)苯甲酸、N，N-l，4-亚苯基二丙烯酰胺、二乙烯基苯、N, 0- 二丙烯酰-L-苯丙胺醇、季戊四醇三丙烯酸酯或季戊四醇四丙烯酸酯；所述引发剂为偶氮二异丁腈；所述致孔剂为二氯甲烷、氯仿、乙腈、甲醇、异丙醇、四氯化碳、N，N-二甲基酰胺或二甲基亚砜；所述有机溶剂为二氯甲烷或四氯化碳。
上述基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹膜基片的制备方法包括以下步骤(1)选择能与海产品中有机砷化物特异性识别并能够合成相应分子印迹聚合物的核酸适配子功能单体；(2)将海产品中有机砷化物模板分子、核酸适配子功能单体、交联剂、致孔剂、引发剂和有机溶剂按摩尔比=0. 1 2. 5 3 0.1 3 30 60 0. 01 0. 15 1. 0 10混合均勻制成基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹聚合物溶液；(3)利用基片表面修饰技术，将基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹聚合物修饰到钼石英晶体基片表面，形成反应层。
其中，将基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹聚合物修饰到钼石英晶体基片表面包括以下步骤(1)将钼石英晶体基片用去离子水清洗，再用纯甲醇浸泡1-3小时，然后用去离子水冲洗3-5遍，再用超声波清洗3-5min，晾干；(2)将晾干的钼石英晶体基片浸泡于基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹聚合物溶液中5-lOmin取出，用洗脱剂洗脱20-30min，在室温下干燥5-lOmin ；(3)重复步骤(2)的过程4-7次，制得所述基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹膜基片。
为使基片达到更好的性能，上述制备方法还包括以下步骤将制得的基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹膜基片浸入PH6. 8-7. 5的缓冲液，保存在4°C冰箱， 12 24h后使用。5
所述洗脱剂为乙腈、水、甲醇-乙酸或乙腈-乙酸；所述缓冲液为柠檬酸-磷酸溶液。
利用上述基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹膜基片进行海产品中有机砷化物检测的方法包括以下步骤将按上述任意一种方法制得的基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹膜基片连接到压电石英晶体微天平，对样品中的有机砷化物进行检测。
利用分子印迹膜基片对海产品中有机砷化物进行检测的工作原理为当有物质在石英晶片上吸附或沉淀时，晶体震荡频率发生变化(AF)，它与晶片上沉积物的质量变化 (ΔΜ)间有简单的线性关系。压电石英晶体微天平的钼石英晶体基片共振频率的变化AF 与吸附物质量m的关系如下AF=- 2F02(pqyq) -"2m/A其中=Ftl为石英基本振动频率，P q为石英的密度=2. 65X 103kg/m3, μ q为剪切模量= 2. 95 X IO10Pa, A为基片表面积。
本发明中使用的是AT-cut基片，石英基本振动频率Ftl=QMHz，基片表面积A = 0. 19士0.01 X 10_4m2，因此可以得至IJ AF=-L 83X 108m/A 本发明的有益效果1.本发明所开发的基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹膜基片制备方法，将核酸适配子与海产品中有机砷化物的特异性识别机制以及分子印迹聚合物对海产品中有机砷化物的特异性识别机制相结合，具有良好的分子识别性能，大大提高了检测海产品中有机砷化物的灵敏度和选择性。
2.将表面修饰技术应用到基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹膜基片的制备当中，使得基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹膜基片的制备具有可控性，提高了基片的灵敏度和准确性。
3.压电石英晶体微天平是一种高灵敏度的质量检测器，理论上检测灵敏度可达到 ng级，因此本发明对海产品中有机砷化物检测具有高特异性、高灵敏度、高检测精度，比电化学法检测灵敏度高，抗干扰能力强。
4.本发明的分子印迹膜基片的特异性强，样品中其它非特异性分子对检测结果无影响；检测速度快，完成一个基本检测过程仅需1. 5min的时间，可在短时间内实现大量样本的高通量筛�。怀杀镜停觳�1个样品仅需几分钱。
4.基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹膜基片检测海产品中有机砷化物的方法操作快速简单，反应及结果均由仪器自动完成和记录，避免了主观因素的影响， 并保证有很好的重复性，便于现场检测。
图1为基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹聚合物修饰到压电石英晶体微天平钼石英晶体基片表面过程示意图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1(一甲基胂酸)一种基于核酸适配子的一甲基胂酸分子印迹膜基片的制备方法，包括以下步骤(1)选择能与一甲基胂酸合成分子印迹聚合物的功能单体核酸适配子；(2)将模板分子一甲基胂酸，功能单体核酸适配子，交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)，致孔剂氯仿，引发剂偶氮二异丁腈，有机溶剂二氯甲烷按摩尔比为 0. 1 2. 5 0. 1 60 0. 05 2. 0混合均勻，得到基于核酸适配子的一甲基胂酸分子印迹聚合物溶液；(3)先将压电石英晶体微天平的钼石英晶体基片用去离子水清洗，再用纯甲醇浸泡1 小时，然后用去离子水冲洗3遍，再用超声波清洗3min，晾干，保证基片表面光亮无杂质；(4)如图1所示将钼石英晶体基片浸泡在基于核酸适配子的一甲基胂酸分子印迹聚合物溶液中5min，然后将钼石英晶体基片取出，用甲醇和乙酸混合液洗脱钼石英晶体基片表面20min，直至把这一层中的模版分子一甲基胂酸完全洗掉，在室温下干燥10 min，如此循环，重复上述过程5次。
(5)将(4)中制备的基片浸入到pH 6.8的柠檬酸-磷酸缓冲液中，保存在4°C的冰箱中14h，以便除去基片表面过量的基于核酸适配子的一甲基胂酸分子印迹聚合物，当基片用去离子水彻底清洗以后，制备成功基于核酸适配子的一甲基胂酸分子印迹膜基片。
将制得的基于核酸适配子的一甲基胂酸分子印迹膜基片连接到压电石英晶体微天平，对样品提取液中的一甲基胂酸进行检测，结果见表1。
实施例2 (二甲基胂酸)一种基于核酸适配子的二甲基胂酸分子印迹膜基片的制备方法，包括以下步骤(1)选择能与二甲基胂酸合成分子印迹聚合物的功能单体核酸适配子；(2)将模板分子二甲基胂酸，功能单体核酸适配子，交联剂三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯，致孔剂二氯甲烷，引发剂偶氮二异丁腈，有机溶剂二氯甲烷按摩尔比 0. 5 2. 5 3 50 0. 1 2. 5，混合均勻，得到基于核酸适配子的二甲基胂酸分子印迹聚合物溶液；(3)先将压电石英晶体微天平的钼石英晶体基片用去离子水清洗，再用纯甲醇浸泡3 小时，然后用去离子水冲洗5遍，再用超声波清洗5min，晾干，保证基片表面光亮无杂质；(4)将钼石英晶体基片浸泡在基于核酸适配子的二甲基胂酸分子印迹聚合物溶液中 lOmin，然后将钼石英晶体基片取出，用甲醇和乙酸混合液洗脱钼石英晶体基片表面25min， 直至把这一层中的模板分子二甲基胂酸完全洗掉，在室温下干燥5min，如此循环，重复上述过程6次。
(5)将(4)中制备的基片浸入到pH 6.8的柠檬酸-磷酸缓冲液中，保存在4°C的冰箱中12h，以便除去基片表面过量的基于核酸适配子的二甲基胂酸分子印迹聚合物，当基片用去离子水彻底清洗以后，制备成功基于核酸适配子的二甲基胂酸分子印迹膜基片。
将制得的基于核酸适配子的二甲基胂酸分子印迹膜基片连接到压电石英晶体微天平，对样品提取液中的二甲基胂酸进行检测，结果见表1。
实施例3 (甲基亚胂酸)一种基于核酸适配子的甲基亚胂酸分子印迹膜基片的制备方法，包括以下步骤(1)选择能与甲基亚胂酸合成分子印迹聚合物的功能单体核酸适配子；(2)将模板分子甲基亚胂酸，功能单体核酸适配子，交联剂N、N-亚甲基二丙烯酰胺，致孔剂甲醇，引发剂偶氮二异丁腈，有机溶剂四氯化碳按摩尔比 2 2. 5 2. 5 55 0.01 10，混合均勻，得到基于核酸适配子的甲基亚胂酸分子印迹聚合物溶液；(3)先将压电石英晶体微天平的钼石英晶体基片用去离子水清洗，再用纯甲醇浸泡2 小时，然后用去离子水冲洗4遍，再用超声波清洗3min，晾干，保证基片表面光亮无杂质；(4)将钼石英晶体基片浸泡在基于核酸适配子的甲基亚胂酸分子印迹聚合物溶液中 5min，然后将钼石英晶体基片取出，用甲醇和乙酸混合液洗脱钼石英晶体基片表面20min， 直至把这一层中的模版分子甲基亚胂酸完全洗掉，在室温下干燥10 min，如此循环，重复上述过程7次。
(5)将(4)中制备的基片浸入到pH 6.8的柠檬酸-磷酸缓冲液中，保存在4°C的冰箱中16h，以便除去基片表面过量的基于核酸适配子的甲基亚胂酸分子印迹聚合物，当基片用去离子水彻底清洗以后，制备成功基于核酸适配子的甲基亚胂酸分子印迹膜基片。
将制得的基于核酸适配子的甲基亚胂酸分子印迹膜基片连接到压电石英晶体微天平，对样品提取液中的甲基亚胂酸进行检测，结果见表1。
实施例4 (砷糖PO4)一种基于核酸适配子的砷糖PO4分子印迹膜基片的制备方法，包括以下步骤(1)选择能与砷糖PO4合成分子印迹聚合物的功能单体核酸适配子；(2)将模板分子砷糖PO4,功能单体核酸适配子，交联剂3，5_二(丙烯酰胺)苯甲酸，致孔剂异丙醇，引发剂偶氮二异丁腈，有机溶剂二氯甲烷按摩尔比 0. 5 2. 5 1 55 0.05 10，混合均勻，得到基于核酸适配子的砷糖PO4分子印迹聚合物溶液；(3)先将压电石英晶体微天平的钼石英晶体基片用去离子水清洗，再用纯甲醇浸泡1 小时，然后用去离子水冲洗3遍，再用超声波清洗3min，晾干，保证基片表面光亮无杂质；(4)将钼石英晶体基片浸泡在基于核酸适配子的砷糖PO4分子印迹聚合物溶液中5min， 然后将钼石英晶体基片取出，用甲醇和乙酸混合液洗脱钼石英晶体基片表面20min，直至把这一层中的模版分子砷糖PO4完全洗掉，在室温下干燥10 min，如此循环，重复上述过程5 次。
(5)将(4)中制备的基片浸入到pH7. 5的柠檬酸-磷酸缓冲液中，保存在4°C的冰箱中过夜，以便除去基片表面过量的基于核酸适配子的砷糖PO4分子印迹聚合物，当基片用去离子水彻底清洗以后，制备成功基于核酸适配子的砷糖PO4分子印迹膜基片。
将制得的基于核酸适配子的砷糖PO4分子印迹膜基片连接到压电石英晶体微天平，对样品提取液中砷糖PO4进行检测，结果见表1。
实施例5 (砷糖0H)一种基于核酸适配子的砷糖OH分子印迹膜基片的制备方法，包括以下步骤(1)选择能与砷糖OH合成分子印迹聚合物的功能单体核酸适配子；(2)将模板分子砷糖0H，功能单体核酸适配子，交联剂N，N-1,4-亚苯基二丙烯酰胺，致孔剂乙腈，引发剂偶氮二异丁腈，有机溶剂二氯甲烷按摩尔比为80. 3 2. 5 0. 1 50 0. 05 3混合均勻，得到基于核酸适配子的砷糖OH分子印迹聚合物溶液；(3)先将压电石英晶体微天平的钼石英晶体基片用去离子水清洗，再用纯甲醇浸泡1 小时，然后用去离子水冲洗3遍，再用超声波清洗3min，晾干，保证基片表面光亮无杂质；(4)如图1所示将钼石英晶体基片浸泡在基于核酸适配子的砷糖OH分子印迹聚合物溶液中5min，然后将钼石英晶体基片取出，用水洗脱钼石英晶体基片表面20min，直至把这一层中的模版分子砷糖OH完全洗掉，在室温下干燥10 min，如此循环，重复上述过程5次。
(5)将(4)中制备的基片浸入到pH6. 9的柠檬酸-磷酸缓冲液中，保存在4°C的冰箱中14h，以便除去基片表面过量的基于核酸适配子的砷糖OH分子印迹聚合物，当基片用去离子水彻底清洗以后，制备成功基于核酸适配子的砷糖OH分子印迹膜基片。
将制得的基于核酸适配子的砷糖OH分子印迹膜基片连接到压电石英晶体微天平，对样品提取液中的砷糖OH进行检测，结果见表1。
实施例6 (砷糖SO3)一种基于核酸适配子的砷糖SO3分子印迹膜基片的制备方法，包括以下步骤(1)选择能与砷糖SO3合成分子印迹聚合物的功能单体核酸适配子；(2)将模板分子砷糖SO3,功能单体核酸适配子，交联剂二乙烯基苯，致孔剂二氯甲烷， 引发剂偶氮二异丁腈，有机溶剂二氯甲烷按摩尔比0.5 2. 5 3 50 0. 1 2. 5，混合均勻，得到基于核酸适配子的砷糖S03分子印迹聚合物溶液；(3)先将压电石英晶体微天平的钼石英晶体基片用去离子水清洗，再用纯甲醇浸泡3 小时，然后用去离子水冲洗5遍，再用超声波清洗5min，晾干，保证基片表面光亮无杂质；(4)将钼石英晶体基片浸泡在基于核酸适配子的砷糖SO3分子印迹聚合物溶液中 lOmin，然后将钼石英晶体基片取出，用甲醇和乙酸混合液洗脱钼石英晶体基片表面25min， 直至把这一层中的模板分子砷糖SO3完全洗掉，在室温下干燥5min，如此循环，重复上述过程6次。
(5)将(4)中制备的基片浸入到pH 6.8的柠檬酸-磷酸缓冲液中，保存在4°C的冰箱中12h，以便除去基片表面过量的基于核酸适配子的砷糖SO3分子印迹聚合物，当基片用去离子水彻底清洗以后，制备成功基于核酸适配子的砷糖SO3分子印迹膜基片。
将制得的基于核酸适配子的砷糖SO3分子印迹膜基片连接到压电石英晶体微天平，对样品提取液中的砷糖SO3进行检测，结果见表1。
实施例7 (砷糖SO4)一种基于核酸适配子的砷糖SO4分子印迹膜基片的制备方法，包括以下步骤(1)选择能与砷糖SO4合成分子印迹聚合物的功能单体核酸适配子；(2)将模板分子砷糖SO4,功能单体核酸适配子，交联剂N，O-二丙烯酰-L-苯丙胺醇，致孔剂二甲基亚砜，引发剂偶氮二异丁腈，有机溶剂四氯化碳按摩尔比 2 2. 5 2. 5 40 0.01 5，混合均勻，得到基于核酸适配子的砷糖SO4分子印迹聚合物溶液；(3)先将压电石英晶体微天平的钼石英晶体基片用去离子水清洗，再用纯甲醇浸泡2 小时，然后用去离子水冲洗4遍，再用超声波清洗3min，晾干，保证基片表面光亮无杂质；(4)将钼石英晶体基片浸泡在基于核酸适配子的砷糖SO4分子印迹聚合物溶液中5min，然后将钼石英晶体基片取出，用甲醇和乙酸混合液洗脱钼石英晶体基片表面20min，直至把这一层中的模版分子砷糖SO4完全洗掉，在室温下干燥10 min，如此循环，重复上述过程7 次。
(5)将(4)中制备的基片浸入到pH 7. 1的柠檬酸-磷酸缓冲液中，保存在4°C的冰箱中16h，以便除去基片表面过量的基于核酸适配子的砷糖SO4分子印迹聚合物，当基片用去离子水彻底清洗以后，制备成功基于核酸适配子的砷糖SO4分子印迹膜基片。
将制得的基于核酸适配子的砷糖SO4分子印迹膜基片连接到压电石英晶体微天平，对样品提取液中的砷糖SO4进行检测，结果见表1。
实施例8 (砷胆碱)一种基于核酸适配子的砷胆碱分子印迹膜基片的制备方法，包括以下步骤(1)选择能与砷胆碱合成分子印迹聚合物的功能单体核酸适配子；(2)将模板分子砷胆碱，功能单体核酸适配子，交联剂季戊四醇三丙烯酸酯，致孔剂四氯化碳，引发剂偶氮二异丁腈，有机溶剂二氯甲烷按摩尔比 0.5 2.5 3 35 0.05 10，混合均勻，得到基于核酸适配子的砷胆碱分子印迹聚合物溶液；(3)先将压电石英晶体微天平的钼石英晶体基片用去离子水清洗，再用纯甲醇浸泡1 小时，然后用去离子水冲洗3遍，再用超声波清洗3min，晾干，保证基片表面光亮无杂质；(4)将钼石英晶体基片浸泡在基于核酸适配子的砷胆碱分子印迹聚合物溶液中5min， 然后将钼石英晶体基片取出，用乙腈-乙酸(混合比例为多少)混合液洗脱钼石英晶体基片表面25min，直至把这一层中的模版分子砷胆碱完全洗掉，在室温下干燥15 min,如此循环， 重复上述过程6次。
(5)将(4)中制备的基片浸入到pH7. 0的柠檬酸-磷酸缓冲液中，保存在4°C的冰箱中过夜，以便除去基片表面过量的基于核酸适配子的砷胆碱分子印迹聚合物，当基片用去离子水彻底清洗以后，制备成功基于核酸适配子的砷胆碱分子印迹膜基片。
将制得的基于核酸适配子的砷胆碱分子印迹膜基片连接到压电石英晶体微天平， 对样品提取液中砷胆碱进行检测，结果见表1。
表1本发明基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹膜基片检测效果
权利要求
1.一种基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹膜基片，包括金石英晶体基片，其特征在于以基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹聚合物作为识别元件在所述金石英晶体基片表面形成反应层；所述基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹聚合物是将海产品中有机砷化物模板分子、核酸适配子功能单体、交联剂、致孔剂、引发剂和有机溶剂按摩尔比为0.1 2.5 3 0. 1 3 30 60 0. 01 0. 15 1. 0 10的比例聚合而成。
2.根据权利要求1所述分子印迹聚合物，其特征在于有机砷化物为甲基胂酸、甲基亚胂酸、砷糖或砷胆碱。
3.根据权利要求1所述基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹膜基片，其特征在于所述交联剂为乙二醇二甲基丙烯酸酯、三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯、N, N-亚甲基二丙烯酰胺、3，5_ 二(丙烯酰胺)苯甲酸、N, N-l，4-亚苯基二丙烯酰胺、二乙烯基苯、N， 0-二丙烯酰-L-苯丙胺醇、季戊四醇三丙烯酸酯或季戊四醇四丙烯酸酯；所述引发剂为偶氮二异丁腈；所述致孔剂为二氯甲烷、氯仿、乙腈、甲醇、异丙醇、四氯化碳、N，N-二甲基酰胺或二甲基亚砜；所述有机溶剂为二氯甲烷或四氯化碳。
4.一种权利要求1或2或3所述基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹膜基片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤(1)选择能与海产品中有机砷化物特异性识别并能够合成相应分子印迹聚合物的核酸适配子功能单体；(2)将海产品中有机砷化物模板分子、核酸适配子功能单体、交联剂、致孔剂、引发剂和有机溶剂按摩尔比=0. 1 2. 5 3 0.1 3 30 60 0. 01 0. 15 1. 0 10混合均勻制成基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹聚合物溶液；(3)利用基片表面修饰技术，将基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹聚合物修饰到金石英晶体基片表面，形成反应层。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，将基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹聚合物修饰到金石英晶体基片表面包括以下步骤(1)将金石英晶体基片用去离子水清洗，再用纯甲醇浸泡1-3小时，然后用去离子水冲洗3-5遍，再用超声波清洗3-5min，晾干；(2)将晾干的金石英晶体基片浸泡于基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹聚合物溶液中5-lOmin取出，用洗脱剂洗脱20-30min，在室温下干燥5-lOmin ；(3)重复步骤(2)的过程4-7次，制得所述基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹膜基片。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于其还包括以下步骤将制得的基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹膜基片浸入PH6. 8-7. 5的缓冲液，保存在4°C冰箱，12 24h后使用。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于所述洗脱剂为乙腈、水、甲醇-乙酸或乙腈-乙酸；所述缓冲液为柠檬酸-磷酸溶液。
8.一种利用上述基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹膜基片进行海产品中有机砷化物检测的方法包括以下步骤将按上述任意一种方法制得的基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹膜基片连接到压电石英晶体微天平，对样品中的有机砷化物进行检测。
全文摘要
本发明公开了基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹膜基片及其制备方法和应用，以基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹聚合物作为识别元件在所述金石英体基片表面形成反应层；所述基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹聚合物是将海产品中有机砷化物模板分子、核酸适配子功能单体、交联剂、致孔剂、引发剂和有机溶剂按摩尔比为0.1～2.5∶3∶0.1～3∶30～60∶0.01～0.15∶1.0～10的比例聚合而成。将表面修饰技术应用到基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹膜基片的制备当中，使得基于核酸适配子的海产品中有机砷化物分子印迹膜基片的制备具有可控性，提高了基片的灵敏度和准确性。
文档编号G01N5/02GK102519820SQ20111044985
公开日2012年6月27日 申请日期2011年12月29日 优先权日2011年12月29日
发明者于京华, 刘素, 崔敏, 廉文静, 李 杰, 葛慎光, 邢宪荣, 颜梅, 黄加栋 申请人:济南大学
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