一种透射电镜检测古代丝织品的方法
【专利摘要】本发明公开了一种透射电镜检测古代丝织品的方法，采用免疫技术的原理来检测古代丝织品。即将胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体浸渍于文物样的表面，洗涤干净后，形成抗原抗体复合物，然后将丝织品文物样切成很小的薄片，置于透射电镜下观察，可以根据样品表面有没有黑色的金纳米颗粒出现来定性分析。本发明的有益成果为：1本发明采用免疫技术的原理对古代丝织品进行了检测，一方面，灵敏度高，操作简单。另一方面能够避免来自其它蛋白质的干扰，特异性强。2与现有技术相比，本发明成本低，操作简便，易于分析。
【专利说明】—种透射电镜检测古代丝织品的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于古代丝织品的检测领域，尤其涉及一种透射电镜检测古代丝织品的方法。
【背景技术】
[0002]丝绸是中华民族宝贵的文化和物质遗产，但是近年来关于丝绸的起源问题却众说纷�。岩杂幸桓黾虮愕目蒲劬荨９赜诠糯砍竦募觳猓车募觳夥椒ㄖ饕邢晕⒕倒鄄欤馄祝势追治龅龋怯捎谑艿侥乖峄肪车挠跋欤砍褚丫貌豢埃婺咳牵⑶沂艿皆又实母扇牛淄汲鱿趾芏嘣臃澹笃诮馕黾�。
【发明内容】
[0003]本发明要解决的技术问题是:针对上述现有技术存在的问题提出一种快速、简单的透射电镜检测古代丝织品的方法。
[0004]为此本发明所采取的技术方案是:一种透射电镜检测古代丝织品的方法，其特征在于采用步骤如下:
A)PBS7.4 洗涤液配制:KC1 0.2g，KH2P04 0.27g，NaCl 8.0g，Na2HP04 1.42g，用 800ml 蒸馏水溶解并定容至1000ml，用HC1调节PH至7.4 ;
B)金纳米粒子的制备:采用枸橼酸三钠还原氯金酸的方法制备粒径为25-50nm的金纳米粒子；即将100ml的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液加热至沸腾，迅速加入1.0-1.5ml的质量浓度为1%的枸橼三钠溶液，继续煮沸15min，溶液呈现出红色，即制备出金纳米粒子；
C)金标记兔抗丝素蛋白抗体的制备:用0.lmol/1的K2C03溶液将100ml的胶体金溶液调节PH至9.0，边搅拌边加入兔抗丝素蛋白抗体20-50 μ L ;所述抗体浓度为3.15mg/ml ;接着加入5ml的质量浓度为1%_10%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在9000-11000r/min下离心40_60min，弃去上清液；将沉淀溶于0.01mol/l的PH为8.2的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，即Tris-HCl溶液，所述Tris-HCl溶液中各组分质量浓度比例为
0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖；于4°C下保存；
D)从丝织品文物样中抽取两条单纤，分别标记为1、11，放置于打孔皿中；1设为空白对照，II为实验组；用PH为7.4的PBS溶液洗涤I组和II组，保证文物表面的附着物洗涤干净；然后在I组加入80-120 μ L的PBS溶液，II组加入80-120 μ L的由ΡΗ7.4的PBS溶液稀释10-50倍的胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体溶液；37°C下孵育lh ;然后在B组中加入2ml的PH为7.4的PBS溶液，进行洗涤；洗涤三次，每次三分钟；
E)采用超薄切片机将I组和II组分别切成50-70nm厚的超薄切片，然后进行透射电镜制样观察；若I没有观察到黑色的纳米颗粒，II观察到了黑色的纳米颗粒，证明所检测的文物样为丝织品。
[0005]本发明采用免疫技术的原理来检测古代丝织品。即将胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体浸溃于文物样的表面，洗涤干净后，形成抗原抗体复合物，然后将丝织品文物样切成很小的薄片，置于透射电镜下观察，可以根据样品表面有没有黑色的金纳米颗粒出现来定性分析。
[0006]本发明的有益成果为:1本发明采用免疫技术的原理对古代丝织品进行了检测，一方面，灵敏度高，操作简单。另一方面能够避免来自其它蛋白质的干扰，特异性强。2与现有技术相比，本发明成本低，操
作简便，易于分析。
【具体实施方式】
[0007]实施例1采用步骤如下:
A)PBS7.4 洗涤液配制:KC1 0.2g，KH2P04 0.27g，NaCl 8.0g，Na2HP04 1.42g，用 800ml 蒸馏水溶解并定容至1000ml，用HC1调节PH至7.4 ;
B)金纳米粒子的制备:采用枸橼酸三钠还原氯金酸的方法制备粒径为25nm的金纳米粒子；即将100ml的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液加热至沸腾，迅速加入质量浓度为1.0ml的1%的枸橼三钠溶液，继续煮沸15min，溶液呈现出红色，即制备出金纳米粒子；
C)金标记兔抗丝素蛋白抗体的制备:用0.lmol/1的1(20)3溶液将100ml的胶体金溶液调节PH至9.0,边搅拌边加入兔抗丝素蛋白抗体20 μ L ;所述抗体浓度为3.15mg/ml ;接着加入5ml的质量浓度为1%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在9000r/min下离心40min，弃去上清液；将沉淀溶于0.01mol/l的PH为8.2的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，即Tris-HCl溶液，所述Tris-HCl溶液中各组分质量浓度比例为0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖；于4°C下保存；
D)从丝织品文物样中抽取两条单纤，分别标记为1、II，放置于打孔皿中；1设为空白对照，II为实验组；用PH为7.4的PBS溶液洗涤I组和II组，保证文物表面的附着物洗涤干净；然后在I组加入80 μ L的PBS溶液，II组加入80 μ L的由ΡΗ7.4的PBS溶液稀释10倍的胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体溶液；37°C下孵育lh ;然后在B组中加入2ml的PH为7.4的PBS溶液，进行洗涤；洗涤三次，每次三分钟；
E)采用超薄切片机将I组和II组分别切成50nm厚的超薄切片，然后进行透射电镜制样观察；若I没有观察到黑色的纳米颗粒，II观察到了黑色的纳米颗粒，证明所检测的文物样为丝织品。
[0008]实施例2采用步骤如下:
A)PBS7.4 洗涤液配制:KC1 0.2g，KH2P04 0.27g，NaCl 8.0g，Na2HP04 1.42g，用 800ml 蒸馏水溶解并定容至1000ml，用HC1调节PH至7.4 ;
B)金纳米粒子的制备:采用枸橼酸三钠还原氯金酸的方法制备粒径为40nm的金纳米粒子；即将100ml的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液加热至沸腾，迅速加入1.3ml的质量浓度为1%的枸橼三钠溶液，继续煮沸15min，溶液呈现出红色，即制备出金纳米粒子；
C)金标记兔抗丝素蛋白抗体的制备:用0.lmol/1的1(20)3溶液将100ml的胶体金溶液调节PH至9.0,边搅拌边加入兔抗丝素蛋白抗体35 μ L ;所述抗体浓度为3.15mg/ml ;接着加入5ml的质量浓度为5%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在10000r/min下离心50min，弃去上清液；将沉淀溶于0.01mol/l的PH为8.2的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，即Tris-HCl溶液，所述Tris-HCl溶液中各组分质量浓度比例为0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖；于4°〇下保存；
D)从丝织品文物样中抽取两条单纤，分别标记为1、11，放置于打孔皿中；1设为空白对照，II为实验组；用PH为7.4的PBS溶液洗涤I组和II组，保证文物表面的附着物洗涤干净；然后在I组加入100 μ L的PBS溶液，II组加入100 μ L的由ΡΗ7.4的PBS溶液稀释30倍的胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体溶液；37°C下孵育lh ;然后在B组中加入2ml的PH为7.4的PBS溶液，进行洗涤；洗涤三次，每次三分钟；
E)采用超薄切片机将I组和II组分别切成60nm厚的超薄切片，然后进行透射电镜制样观察；若I没有观察到黑色的纳米颗粒，II观察到了黑色的纳米颗粒，证明所检测的文物样为丝织品。
[0009]实施例3采用步骤如下:
A)PBS7.4 洗涤液配制:KC1 0.2g，KH2P04 0.27g，NaCl 8.0g，Na2HP04 1.42g，用 800ml 蒸馏水溶解并定容至1000ml，用HC1调节PH至7.4 ;
B)金纳米粒子的制备:采用枸橼酸三钠还原氯金酸的方法制备粒径为50nm的金纳米粒子；即将100ml的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液加热至沸腾，迅速加入1.5ml的质量浓度为1%的枸橼三钠溶液，继续煮沸15min，溶液呈现出红色，即制备出金纳米粒子；
C)金标记兔抗丝素蛋白抗体的制备:用0.lmol/1的1(20)3溶液将100ml的胶体金溶液调节PH至9.0,边搅拌边加入兔抗丝素蛋白抗体50 μ L ;所述抗体浓度为3.15mg/ml ;接着加入5ml的质量浓度为10%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在11000r/min下离心60min，弃去上清液；将沉淀溶于0.01mol/l的PH为8.2的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，即Tris-HCl溶液，所述Tris-HCl溶液中各组分质量浓度比例为0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖；于4°〇下保存；
D)从丝织品文物样中抽取两条单纤，分别标记为1、11，放置于打孔皿中；1设为空白对照，II为实验组；用PH为7.4的PBS溶液洗涤I组和II组，保证文物表面的附着物洗涤干净；然后在I组加入120 μ L的PBS溶液，II组加入120 μ L的由ΡΗ7.4的PBS溶液稀释50倍的胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体溶液；37°C下孵育lh ;然后在B组中加入2ml的PH为
7.4的PBS溶液，进行洗涤；洗涤三次，每次三分钟；
E)采用超薄切片机将I组和II组分别切成70nm厚的超薄切片，然后进行透射电镜制样观察；若I没有观察到黑色的纳米颗粒，II观察到了黑色的纳米颗粒，证明所检测的文物样为丝织品。
【权利要求】
1.一种透射电镜检测古代丝织品的方法，其特征在于采用步骤如下:
A)PBS7.4 洗涤液配制=KCl 0.2g，KH2PO4 0.27g，NaCl 8.0g，Na2HPO4 1.42g，用 800ml 蒸馏水溶解并定容至1000ml，用HCl调节PH至7.4 ; B)金纳米粒子的制备:采用枸橼酸三钠还原氯金酸的方法制备粒径为25-50nm的金纳米粒子；即将10ml的质量浓度为0.01%的氯金酸溶液加热至沸腾，迅速加入1.0-1.5ml的质量浓度为1%的枸橼三钠溶液，继续煮沸15min，溶液呈现出红色，即制备出金纳米粒子； C)金标记兔抗丝素蛋白抗体的制备:用0.lmol/1的K2CO3溶液将10ml的胶体金溶液调节PH至9.0,边搅拌边加入兔抗丝素蛋白抗体20-50 μ L ;所述抗体浓度为3.15mg/ml ;接着加入5ml的质量浓度为1%_10%的聚乙二醇20000溶液，室温下搅拌5min，然后在.9000-11000r/min下离心40_60min，弃去上清液；将沉淀溶于0.01mol/l的PH为8.2的三羟甲基氨基甲烷缓冲液，即Tris-HCl溶液，所述Tris-HCl溶液中各组分质量浓度比例为.0.15%的吐温-20、1%的牛血清蛋白、5%的蔗糖；于4°C下保存； D)从丝织品文物样中抽取两条单纤，分别标记为1、11，放置于打孔皿中；1设为空白对照，II为实验组；用PH为7.4的PBS溶液洗涤I组和II组，保证文物表面的附着物洗涤干净；然后在I组加入80-120 μ L的PBS溶液，II组加入80-120 μ L的由ΡΗ7.4的PBS溶液稀释10-50倍的胶体金标记的兔抗丝素蛋白抗体溶液；37°C下孵育Ih ;然后在B组中加入.2ml的PH为7.4的PBS溶液，进行洗涤；洗涤三次，每次三分钟； E)采用超薄切片机将I组和II组分别切成50-70nm厚的超薄切片，然后进行透射电镜制样观察；若I没有观察到黑色的纳米颗粒，II观察到了黑色的纳米颗粒，证明所检测的文物样为丝织品。
【文档编号】G01N23/00GK104406992SQ201410845958
【公开日】2015年3月11日 申请日期:2014年12月31日 优先权日:2014年12月31日
【发明者】李毅, 杨颖超, 王秉 申请人:浙江理工大学
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