专利名称：测定小体积体液样品中的标志物的方法
技术领域：
本发明涉及一种测定小体积体液样品中的标志物的方法。
背景技术：
这类方法用于快速测定小体积体液样品中一种或多种标志物的存在。已知方法和装置公开于例如下列文献中W0 2004/033101A1, WO 2007/000048A1以及WO2009/14360A1。WO 2007/000048A1描述了一种用于检测小流体样品中一种或多种标志物的含有3种以上多孔膜的护理现场(point-of-care)装置，用于从全血中识别标志物。所描述的阵列包括第一步骤膜，其能够截留红细胞并含有检测剂；第二步骤膜，其所具有的孔隙度与第一步骤相比进一步截留红细胞，且样品溶血极少；以及第三步骤膜，其孔隙度低于第二步骤且含有捕获探针。文献US 2005/0244986A1公开了一种分析检测装置，其可用于例如妊娠测定中。 操作时，液体样品施加于检测装置的下端。该检测装置设有功能区。环形区可作为对照，无论所施加检测的液体样品是否含有待测分析物，均可给出例如有色的信号。对分析物的测定在另一个环形区中进行。使用者通过比较两个区中产生的信号来确定分析物是否存在于所施加的液体样品中。文献WO 2007/149043A1公开了一种在液体样品上进行测定的测定装置，其使用能够与抗原结合且含有标记的检测结合物。文献US 2009/0253119A1涉及一种包含检测条的测流测定法和系统，用于检测并定量在样品、诸如含有细胞和流体的样品中的分析物检测。文献EPl 975 619 Al提供了一种色谱检测装置，其包含从样品展开方向的上游侧起依次布置的第一血细胞分离部件、第二血细胞分离部件和色谱载体。发明概述本发明的目标在于提供一种测定小体积体液样品中的标志物的改进方法，其中避开了用于测定标志物的流动检测元件的不正确使用。这个目标通过权利要求I的一种测定小体积体液样品中的标志物的方法解决。另夕卜，还提供了一种用于测定权利要求I的流动检测元件的正确检测性能的方法。本发明的有利发展在从属权利要求中公开。在光学检测测定过程中，可以测量选自下列光谱参数的一种或多种光谱参数吸收，荧光，反射，发射和透射。流动检测元件上的一个或多个功能区可以设有两个以上的功能亚区。例如，流动检测元件上可以设置多个检测亚区。通过测定正确的检测性能，例如，可以避免将液体样品施加于检测元件未配置好的流动检测元件上。可以针对体液和/或体液的组分配置流动检测元件。在此使用时，“组分”必需与后来可以加入到体液中的物质区别开来。所添加的物质也可以指混合物或者混合的物质。在体液的情况下，举例来说，这样的物质可以在从患者中采体液后加入到该体液中，例如可以加入抗体。相反，在此限定的组分是体液本身的一部分。全血样品的组分例子有血清和血浆。例如，如果将液体样品施加于未配置流动检测元件的流动检测元件上将会产生错误的结果。所提出的方法确保了正确执行液体样品中标志物的测定。这是因为其中有一个测定正确的检测性能的步骤，其让使用者知道是否提供了正确的检测性能，即，是否将正确的液体施加于流动检测元件。优�。ü寥〖觳馇床舛ㄒ禾逖分械谋曛疚锸峭ü褂靡恢只蚨嘀旨觳獠ǔさ墓庋Ъ觳饫赐瓿傻�。在优选实施方案中，测定正确的检测性能的步骤是通过使用不同于检测波长的一种或多种波长进行光学测定来执行的。例如，可选择不同于检测波长的荧光和/或吸收波长。“流体连通的”在此使用时指的是流体、例如样品可以基本上无阻碍地通过本发明装置的一个区室或部分。所述特点优选与液体样品的实际存在与否无关。测定正确的检测性能的步骤，特别是为了正确的样品使用时，可以在液体样品施 加于流动检测元件和测定标志物之间的时间期间的第一次测定之后，再重复进行一次或几次。即使在标志物测定以后，也可以对正确的检测性能进行检测，优选将其作为检测测定的一个附加步骤。为测定一个或多个功能区或其中的正确检测性能、特别是正确的样品使用起见，可以执行所述步骤。在所施加的液体的一部分到达一个功能区后，可以在这一个功能区执行测定正确的检测性能的步骤。在这种情况下，对这一个功能区所测量的至少一种的光学参数与指定给这一个功能区的一种或多种预定的光学参数进行比较。通常，“对一个功能区测量”在此使用时指的是测量所述参数是为了表征这一个功能区。光学测量可以在这一个功能区以内的区域和/或位于这一个功能区以外的区域进行。为测定一种或多种标志物，可以配置一个检测区或者多个检测亚区。可以用所述方法测定的标志物的例子在下文描述。降钙素原(PCT)已成为败血症诊断的已确定的生物标志物PCT反映细菌感染的严重程度并特别应用于监测感染发展成败血症、严重败血症或败血性休克的进程。PCT可用于测量全身炎性反应的活性，控制治疗成功并评估预后(Assicot M等Lancet1993，341:515-8;Clec’h C等降钙素原在败血性休克患者中的诊断和预后价值。CritCare Med 2004;32:I166-9;Lee YJ et al，Yonesei Med J 2004，45，29-37;Meisner MCur Opin Crit Care 2005, 11, 473-480;Wunder C 等 Infamm Res 2004，53，158-163)。败血症患者中PCT水平的升高和死亡率相关(Oberhoffer M等Clin Chem Lab Med1999;37:363-368)。肾上腺髓质素(ADM)这种肽作为一种从人嗜铬细胞瘤中分离出的含有52个氨基酸的新型降压肽，在1993年被首次描述(Kitamura等(1993)，Biochem. Biophys. Res.Commun. 192:553-560)。同年，编码含有185个氨基酸的前体肽的cDNA以及该前体肽的完整氨基酸序列也被公布(Kitamura 等(1993)，Biochem. Biophys. Res. Commun. 194:720-725)。该前体肽被引为“肾上腺髓质素原前体”(pre-piO-ADM)，其特别是在N端含有一段21个氨基酸的信号序列。ADM肽含有pre-peo-ADM的95-146位氨基酸，通过对pre_peo_ADM的蛋白水解切割而形成。在切割pre-peo-ADM中形成的一些肽段已被具体表征，特别是具有生理活性的肽肾上腺髓质素(ADM)和“PAMP”，后者是含有ρι -ρι -ADM中21个氨基酸的信号肽之后的20个氨基酸(22-41)的肽。另一个具有未知功能和很高的离体(exvivo)稳定性的片段是肾上腺髓质素原中区(MR-proADM) (Struck等(2004)，Peptides25 (8) : 1369-72),对它已开发了一种可靠的定量方法(Morgenthaler等(2005), Clin.Chem. 51(10) : 1823-9)。ADM是一种有效的血管舒张剂。其降压效果尤其与ADM C端部分中的肽段相关。另一方面，ADM的N端肽序列表现出增压效果(Kitamura等(2001)，Peptides22， 1713-1718)。内皮素(ET) -I是一种来源于内皮的内源性强力血管收缩剂(YanagisawaM, Kurihara H, Kimura S，Gogo K, Masaki T, J Hypertens Suppl 1988; 6: S188-91 hET-Ι 通过激活平滑肌细胞上的ET(A)和ET(B)受体、引起细胞内钙离子增加来发挥它的血管作用(Yanagisaw 等，JHypertens Suppl 1988;6:S 188-91)。成熟的内皮素-I 来源于更大的称为内皮素原-I的前体。内皮素原-I可以按照描述(Struck J, Morgenthaler NG, BergmannPeptides. 2005Dec ;26(12) : 2482_6)，经蛋白水解加工成各种片段。这些片段在血液循环中 经历蛋白水解性降解，这种降解或快或慢地发生，其取决于片段类型以及循环中存在的蛋白酶的种类和浓度/活性。这些片段的一个例子是C端内皮素原-l(CT-pix)ET-l)，其可用夹心免疫分析法测量(Papassotiriou J, Morgenthaler NG, Struck J, Alonso C, BergmannA.Clin Chem. 2006Jun;52(6):1144-51)。B型利钠尿肽(BNP)是心力衰竭的定量标志物。B型利钠尿肽(BNP)及其氨基端片段、N端B型利钠肽原(ΝΤ-ρι·οΒΝΡ)的使用显著提高了 ED诊断的准确率[Januzzi，J.L. , Jr.,等，Am J Cardiiol, 2005. 95(8) :P. 948-54 ;Maisel, A. S.,等，N Engl JMed, 2002. 347(3) :p. 161-7]，从而改善了对患者的评估和治疗[Moe, G. W.,等，Circulatioη, 2007. 115(24) :ρ. 3103-10; 8. Mueller, C.,等，N Engl J Med, 2004. 350 (7) :p. 647-54] 循环中心房利钠尿肽(ANP)的浓度比BNP高出约50-100倍[Pandey, K. N.，Peptides, 2005. 26(6) :p. 901-32]。所以，ANP提高反映出的生物学信号可以是病理生理学方面的，因此在诊断方面比BNP的信号更为重要。尽管如此，人们对ANP及其前体的诊断性能知之甚少[Cowie,M. R.,等，Lancet, 1997. 350 (9088) :ρ· 1349-53]。成熟的 ANP 来源于其前体N端-proANP，该前体在循环中比成熟的肽更稳定，所以被认为是更可靠的分析物[Vesely, D. L. , IUBMB Life, 2002. 53 (3) :ρ· 153-Pandey, Κ. N. , Peptides, 2005. 26 (6) :ρ· 901-32]。作为利钠尿肽家族中的一员，心房利钠尿肽(ANP)可调节几项生理参数，包括利尿和尿钠排泄以及降低动脉血压(ΒΡ)。其主要在心脏的心房中产生，且占循环中利钠尿肽的98%(Vesely DL. Life 2002;53:153-159)。ANP来源于对其前体激素原的切割，该前体在循环中比成熟的肽更稳定。不同于现有免疫测定法使用的proANP的N端或C端中的表位，称为中区-proANP (MR-proANP)的该前体激素的中区片段(NT-proANP的53-90位氨基酸)相对更能抵抗外蛋白酶的降解(Morgenthaler NG 等 Clin Chem 2004; 50:234-236; GersztenRE 等 Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 2008)。肌红蛋白是一种153个氨基酸的单链球蛋白，中心含有一个血红素(含铁卟啉)辅基，剩余的脱辅基蛋白质围绕中心折叠。肌红蛋白是肌肉损伤的敏感标志物，使其作为胸疼患者心脏病发作的潜在标志物(M. Weber, M. Rau, K. Madlener, A. Elsaesser, D. Bankovic, V.Mitrovic 和 C. Hamm(2005)Clinical Biochemistry 38:1027)。CK-MB 和心脏肌I丐蛋白 T、即cTnT与ECG和临床征象联合使用，以诊断急性心肌梗塞(AMI)。心脏肌钙蛋白是一种由T (cTcT)、I (cTcI)和C三种亚基构成的蛋白质复合物，其中T和I仅存在于心肌组织中并被用作用于诊断意图的标志物(Rottbauer W等，Eur Heart J 1996;17:3-8)。精氨酸加压素(AVP)，也称作加压素、精氨加压素或抗利尿激素(ADH)，是一种见于大多数哺乳动物包括人类的激素(Caldwell HK, Young WS 111(2006). In Lajtha A, LimR. Handbook of Neurochemistry and Molecular Neurobiology:Neuro-active Proteinsand Peptides (3rd edition ed.)(神经化学和分子神经生物性手册神经活性的蛋白和肽(第三版))· Berlin:Springer. Pp. 573-607. ISBN 0-387-30348-0)。加压素是一种肽类激素。其来源于合成于下丘脑并储存于垂体后叶囊泡中的前激素原前体。加压素释放的减少或肾脏对加压素敏感度的降低均会导致尿崩症，一种以高钠血(血钠浓度增高)、多尿(过量尿液产生)以及烦渴(口渴)为特征的病症。
在此使用时，术语诸如“测定标志物”等包括检测样品中标志物的存在或不存在和/或定量标志物的量和/或浓度。因此，需要根据标志物的可检测性存在、即测定法的检测限来理解存在或不存在。“标志物”是指示生理或病理状况的物质。它们包括，例如，作为由于心脏组织的恶化从心肌细胞释放到血液循环中的蛋白的心脏分析物、指示妊娠的激素、用于监测糖尿病状况的血糖、以及由于感染产生的多种蛋白质或毒素。在有的实施方案中，标志物是准备用本发明的测定法、装置、方法和应用来检测和/或定量的蛋白质或肽。这包括长度为所述蛋白质或肽的至少12个氨基酸、优选至少15个氨基酸的片段。本发明的这类蛋白质或肽的具体例子是与心血管事件的诊断和/或预后相关的标志物，例如肌红蛋白，肌钙蛋白T (cTnT)和I (cTnl)，肌酐激酶MB (CK-MB)，FABP，⑶F-15，ST-2，降钙素原(PCT)，C-反应蛋白(CRP)，肾上腺髓质素原及其片段包括中区肾上腺髓质素原(MR-proADM)、肾上腺髓质素、PAMP> C端肾上腺髓质素原(CT-proADM),内皮素原_1及其片段包括C端内皮素原-I (CT-proET-1)、大-内皮素-1、内皮素_1、NT_内皮素原-1，proANP及其片段包括中区心房利钠尿肽原(MR-proANP)、N端proANP (NT-proANP)、ANP，加压素原及其片段包括C端精氨酸加压素原肽(CT-pix)AVP，“和肽素”)、加压素、后叶激素运载蛋白II，proBNP及其片段包括BNP和N端proBNP (NT-proBNP)。应该理解，在此所描述的标志物蛋白质和/或肽，包涵所述标志物蛋白质和/或肽的至少12个氨基酸的片段，优选包涵至少15个氨基酸长度作为标志物。此外，分别与妊娠或排卵相关的激素如人绒毛膜促性腺激素(hCG)和促黄体激素(LH)的激素也可以用本发明或其各种实施方案来检测。其他针对疾病如癌症的抗原，特别是前列腺癌抗原(前列腺血清抗原，PSA)，也可以用本发明来检测，这也在本发明的范围之内。本发明的其他应用包括与下列感染相关的标志物的识别病毒感染，如肝炎；细菌和真菌感染，包括肠胃溃瘍的幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori);其他由炭疽杆菌(Bacillus anthracis)、体風(Pediculus humanis)、跳蚤(siphonatera)和革兰氏阳性细菌如化胺性链球菌(Streptococcus pyognes)、肺炎链球菌(Streptococcus pneunoniae)和粪链球菌(Streptococcus faecalis)所引起的感染,这些都是非限制性例子。本发明也可用于检测药物，包括滥用药物。本发明也考虑到了诸如测定血液中葡萄糖含量的酶法测定。需要认识的是，本装置的使用不局限于这些具体的标志物或，实际上，不局限于全血，而是同样适用于其他分析程序，例如以上所述的例子。在优选实施方案中，测定正确的检测性能的步骤包含如下步骤，通过光学测定所施加的液体样品是体液还是体液组分，针对测定体液或者体液组分中的标志物来配置流动检测元件，以此来确定正确的样品使用。根据优选实施方案，本方法还包含下列步骤施加小体积全血样品，并且光学测定该全血样品为未溶血还是溶血的血液。在优选实施方案中，光学检测定包含测量照射到流动检测元件上受关注区域中的光的发射信号的步骤。所测得的发射信号可以和参考信号作比较，用于确定检测的是未溶血还是溶血的血液。在此使用时，“全血样品”特指未处理或基本未处理的血液样品。在另一个优选实施方案中，测量步骤包含光学测量流体连通到且处于检测区和对照区之间的区域的步骤。因为这种情况下该研究区域处于检测区的下游，所以光学测量提供了关于先进入检测区的那部分液体样品的信息。 在优选实施方案中，提供流动检测元件的步骤包括下述步骤提供流动检测元件，所述流动检测元件具有位于施加区和检测区之间且和这两个区流体连通的桥接区，以及位于检测区上游且和其流体连通的对照区。桥接区可以通过与施加区及检测区流体连通的桥膜提供。所述桥膜的平均孔径为8. 0±2 μ m，对血清或血浆的毛细流动2cm距离小于30秒和/或4cm距离小于180秒，其中血清或血浆在桥膜中的毛细流动小于第一种多孔材料但高于检测区。另外，检测区和对照区可以由一种或多种膜构成。优选地，该膜由多孔材料制成。根据一个进一步的实施方案，测定正确的检测性能的步骤包含光学测量选自下列的至少一种功能区的步骤施加区，桥接区，检测区和对照区。在一个进一步的实施方案中，测定正确的检测性能的步骤包含光学测量位于多个功能区之外的流动检测元件区域的步骤。所述测量可以作为在一个功能区内的测量的替代或者补充。例如，可以对位于两个功能区之间的流动检测元件区域进行光学测量。对于一个功能区中的正确液体的光学测量，可以对位于所关注的功能区上游和/或下游的区域来执行。在一个优选实施方案中，所述方法进一步包含下述步骤施加小体积全血样品，光学测定红细胞渗漏到流动检测元件上的关注区域。如果，例如，需要测定全血样品中的标志物，则通常需要避免红细胞自己渗漏到检测区。通过上述实施方案，可以检查出这类渗漏是否发生。如果测定正确检测性能的步骤显示发生了这类渗漏，这就告知了使用者在那些条件下收集的测量结果可能并不准确。根据一个进一步的实施方案，测定正确检测性能的步骤包含在不同时间进行多次光学测量的步骤。多次光学测量可以在流动检测元件受关注的同一区域或者不同区域进行。在另一个实施方案中，测定标志物的步骤包含至少一个下列的步骤测定液体样品中标志物的存在，以及测定液体样品中的标志物的浓度。在又一个实施方案中，测定正确的检测性能的步骤包含光学测定所施加的液体样品是体液还是体液组分的步骤，所述体液或体液组分选自全血样品，血清样品，血浆样品，尿液样品，脑脊液样品，粪便样品，唾液样品和淋巴样品。根据本发明的另一方面，提供了一种测定流动检测元件的正确检测性能的方法，所述方法包含以下步骤-提供一种具有多个功能区的流动检测元件，所述多个功能区至少部分流体连通并且含有施加区和检测区，所述检测区与施加区流体连通并被配置用于测定体液和/或体液组分中的标志物检测，-将小体积液体样品施加于流动检测元件的样品施加区，-测定正确的检测性能，其中测定正确的检测性能的步骤包含下列步骤测量功能区的至少一种光学参数，和将所测量的所述至少一种光学参数与指定给这一个或多个功能区的至少一种预定的光学参数进行比较。
如果在测定正确的检测性能的步骤中检测出不正确的检测性能，这可能表明分析系统阻碍进一步的分析。例如，分析系统可能被阻塞以致不能进一步使用要施加液体样品的流动检测元件。在一个优选实施方案中，分析系统的使用者会获得警告信号。警告信号可包含声音信号和视频信号至少其一。
接下来将参考不同的实施方案为例对本发明作进一步阐释。在附图中，图I显示了流动检测元件的俯视示意2显示了光学发射信号(相对单位)取决于沿着流动检测元件I提供不同培养时间的全血样品的的相对位置(相对单位)。发明的优选实施方案的描述对以下实例的描述仅为阐明而不是希望限制本发明的范围。形式的变化以及等同取代被视为根据情况可能提示或提供的变通手段。尽管在此使用了特定的术语，但此类术语只为描述性的意义，而不是为了限制。图I显示了流动检测元件的俯视示意图。流动检测元件也可称为护理现场装置，其包含容纳了膜主体2的装置主体1，膜主体I上设置了多个功能区。所述功能区流体连通，包含以下区施加区3，桥接区4，检测区5以及对照区6。“护理现场”(point of care，P0C)检测被定义为在靠近患者护理位置处或附近进行的任何诊断检测(，在 Kost GJ 编著，Principles and practice of point-of-caretesting(《护理现场检测的原理与实践》中，Kost的Goals, guidelines and principles forpoint-of-care testing(护理现场检测的目标、指导和原理))· Phiuladelphia:LippincottWilliams and Wilkins. 2002, Chapter I, pp 3-12)。通过将分析移到更接近患者，消除了部分中间步骤，有利于更短时间获得结果以及更快管理反应，从而改善后果不。POC检测的优点有更快的改变时间(turn-around-time, TAT),更快的医疗决定,避免长时间样品运输以及只需小样本体积(Heinschink 等，Pint-of-care testing. Laboratoriums Medizin2002. 26(1-2) :61-67)。施加区3被配置为接收小体积体液，该体液然后至少部分在膜主体中分别流到检测区5和对照区6。在此使用时，“样品施加区”特指施加样品的装置部分，举例，所述施加可以通过将样品施加区浸入到样品里，或者通过用样品转移工具例如注射器或移液管来施加样品。所以样品施加区是装置中的开口，其可以为例如袋或凹口的形式，通过它可以将样品施加到第一种多空材料上。流动沿着在施加区3和对照区5之间形成的样品流道发生。膜主体2可以设有一种或多种膜元件，在一个实施方案中所述膜元件提供在一叠膜中。由多空膜材料提供的流道具有允许毛细流动的尺寸。在一个实施方案中，检测区4被配置用于测定全血样品中标志物的存在。流动检测元件可以按如下使用。很明显，当与提供在施加区3内和/或相邻的第一种多空材料接触时，所施加的样品的红细胞将开始和血浆分离，在其流动过程中，标志物将与检测剂相遇，所述检测剂通常为但不限于针对标志物表位的标记抗体，从而形成标志物-检测剂复合物。在所描述的实施方案中，标志物-检测剂复合物随后移动到由桥接膜提供的桥接区4，在这儿，红细胞的迁移进一步受阻/延迟。标志物-检测剂复合物随后朝着由检测膜提供的检测区5移动并 遇上固定化的捕获探针，所述探针通常为但不限于针对标志物另一表位或检测剂表位的抗体。标志物-检测剂复合物与固定化的捕获探针的反应形成可以用肉眼或合适仪器看到的集中的捕获斑。在检测区5中捕获斑下游的任选对照区6将含有对照试剂。在优选实施方案中，对照试剂可以为抗-动物IgG。或者，代替对照区6，检测装置的膜上的透明封条的长度变化可以使得样品在到达检测膜末端时以可控的方式蒸发，从而产生容易测出的信号。本发明的范围还包括一次检测流体样品中的一种标志物或甚至多种标志物。相应的，本领域的技术人员能够领会可以在本发明的护理现场装置上沉积一种或多种检测剂和/或一种或多种捕获探针。原则上，该测定法，亦即用于检测标志物的检测剂和捕获探针的组合可以基于应用于诊断领域的任何类型。所述测定法可以为非竞争性测定法，即夹心测定法，或竞争性测定法(The Immunoassay Handbook (免疫测定手册)，David Wild 编著，ElsevierLTD, Oxford;第三版· (2005年5月)，ISBN-13:978-0080445267;Hultschig C等，Curr OpinChem Biol. 2006Feb;10(I):4-10. PMID:16376134)。在此使用时，捕获探针可以选自核酸分子，碳水化合物分子，PNA分子，适配体，蛋白质，抗体，肽或糖蛋白，优选抗体。在检测装置中技术人员可用的捕获探针的任何标记种类及相应的检测系统均可使用。已知的标记包括但不局限于金属、荧光、电化学发光和酶标记。金属标记由于其显著的敏感性而特别优选。在金属里，最优选金，主要由于其在这类反应中的广泛应用且特点为人熟知。在有的实施方案中，第一种多孔材料含有可以和全血样品中待测标志物结合的抗体-金粒-结合物。在此需要理解，抗体-金粒-结合物原样置于第一种多孔材料中，当并且抗体-金粒-结合物与样品接触时会悬浮在样品中并和样品一块传送。所以，很明显，抗体-金粒-结合物可以不是不可逆地固定于第一种多孔材料上。但是，在有的实施方案中，可以采用将抗体-金粒-结合物固定于第一种多孔材料上，其在与样品接触后可逆，例如其容易水解。所用金标抗体的优选粒度为大约20_65nm，但根据广为了解的因素，例如标志物的临床截止点以及反应物的亲和力，可以接受可观的变化。另外，通过使用可还原的银盐将其沉积为可见的产物，可以增强金信号使其容易察觉到。典型的反应性盐是乳酸银，其作为可还原的银离子源，使用氢醌作为还原剂。金属银围绕每个金粒子形成容易分辨的黑色沉积物。或者，如果使用了例如辣根过氧化物酶的酶标，可以根据标准程序通过添加过氧化氢以及染料如CIS邻苯二胺来检测反应。可以在本发明范围内很好使用的其他标记是美国专利6046585中描述的顺磁标记(所述专利在此以其全文引为参考)，其能够使得标志物检测的灵敏度更高。在本申请的情景中，“检测剂”是一种材料，经常是液体样品中要检测的标志物的抗体。在有的实施方案中，其被可释放地结合在液体样品的施加点处或其下游的第一种多孔材料载体上。对大多数免疫化学分析而言，用可检测的标记如胶体金进行标记，并且与待测标志物形成复合物。在桥接膜的血清进行毛细流动的情景中，术语“水平变化”特指血清流向中的流速变化。
在此使用时，“从血细胞中分离血清”指的是截留血细胞，特别是红细胞，而血清前进到达装置的相邻区室或部分，例如下一个膜。因此，优选至少95%，更优选至少99%，更加优选至少99. 5%，最优选大约100%的红细胞被截留。通过参考上述非限制性实施方案描述的用于测定体液中标志物存在的方法包括测定正确的样品使用的步骤。该步骤通过光谱测量完成。检测并分析选自吸收、荧光、透射、反射和发射的一种或多种光谱参数来测定施加到流动检测元件的施加区3并到达功能区之一的部分液体样品是否是所配置的流动检测元件的一种目标体液，还是体液的一种组分。优选地，对区域6进行光学研究来测定正确的样品使用。例如，可以对位于检测区5和对照区6之间的区域7进行光学研究来测定到达检测区5和/或对照区6的液体样品的种类。例如，可分析区域7的光学参数发射。在一个优选实施方案中，上述方法含有下述步骤施加小体积全血样品，并光学测定红细胞渗漏到流动检测元件上的关注区域中。如果，例如，需要测量全血样品中的标志物，则通常需要避免红细胞自己渗漏到检测区5。通过上述实施方案，可以检查出这类渗漏是否发生。如果测定正确样品使用的步骤显示发生了这类渗漏，那么这就告知使用者在那些条件下收集的测量结果可能并不准确。图2显示了光学发射信号(相对单位)取决于流动检测元件I上提供不同培养时间的全血样品的的相对位置(相关单位)。流动检测元件I (参见图I)从左到右扫描至少包含对照区6、区域7和检测区5。在左手侧，指定给对照区6的发射信号的所谓对照带并不随时间变化。右手侧的发射信号的增强则说明有红细胞渗漏到流动检测元件I上的检测区5。在说明书、权利要求书和附图至少其一中所公开的特征，可以是独立或以各种组合取作实现本发明各种实施方案的材料。
权利要求
1.一种测定小体积体液样品中的标志物的方法，所述方法包括以下步骤 提供具有多个功能区(3，4，5，6，7)的流动检测元件，所述多个功能区(3，4，5，6，7)至少部分流体连通且包含施加区(3 )和检测区(5 )，所述检测区(5 )与施加区(3 )流体连通且配置用于测定体液和/或体液组分中的标志物， 向流动检测元件的样品施加区(3)施加小体积液体样品， 测定正确的检测性能，其中测定正确的检测性能的步骤包含以下步骤 -测量一个或多个功能区(3 ；4 ；5 ；6 ；7)的至少一种光学参数，以及-将所测量的所述至少一种光学参数与指定给所述一个或多个功能区(3 ；4 ；5 ；6 ；7)的至少一种预定的光学参数进行比较，以及， -如果确定了正确的检测性能，则通过对检测区(5)读数来测定液体样品中的标志物。
2.权利要求I的方法，其中测定正确的检测性能的步骤包括通过光学测定到达多个功能区(3，4，5，6，7)中的一个区的一部分所施加的液体样品是体液还是体液的组分来测定正确的样品使用的步骤。
3.权利要求2的方法，所述方法还包括以下步骤 施加小体积的全血样品，以及 光学测定到达检测区(5)的一部分全血样品是未溶血的还是溶血的血液。
4.权利要求2或3的方法，其中测量步骤包括光学测量流体连通于且位于检测区(5)和对照区(6)之间的区域的步骤。
5.根据至少一个前述权利要求的方法，其中提供流动检测元件的步骤包括提供具有至少一个下列区域的流动检测元件的步骤位于施加区(3)和检测区(5)之间且与它们流体连通的桥接区(4)，以及位于检测区(5)上游且与其流体连通的对照区(6)。
6.根据至少一个前述权利要求的方法，其中测定正确的检测性能的步骤包括下述步骤光学测量选自下列功能区的至少一个功能区(3，4，5，6，7):施加区(3)，桥接区(4)，检测区(5)和对照区(6)。
7.根据至少一个前述权利要求的方法，其中测定正确的检测性能的步骤包括光学测量流动检测元件位于所述多个功能区(3，4，5,6,7)之外的区域的步骤。
8.根据至少一个前述权利要求的方法，所述方法还包括以下步骤 施加小体积的全血样品，以及 光学测定渗漏到流动检测元件上关注区域的红细胞渗漏。
9.根据至少一个前述权利要求的方法，其中测定正确的检测性能的步骤包括在不同时间进行多次光学测量的步骤。
10.根据至少一个前述权利要求的方法，其中测定标志物的步骤包括至少一个下列步骤 测定标志物在液体样品中的存在，以及 测定标志物在液体样品中的浓度。
11.根据至少一个前述权利要求的方法，只要从属于权利要求3，其中测定正确的样品使用的步骤包括光学测定到达一个功能区(3 ；4 ；5 ；6 ；7)的所施加的液体样品部分是体液还是体液的组分的步骤，所述体液或体液的组分选自全血样品，血清样品，血浆样品，尿液样品，脑脊液样品，粪便样品，唾液样品和淋巴样品。
12.测定流动检测元件的正确检测性能的方法，所述方法包括以下步骤 提供具有多个功能区(3，4，5，6，7)的流动检测元件，所述多个功能区(3，4，5，6，7)至少部分流体连通且包含施加区(3 )和检测区(5 )，所述检测区(5 )与施加区(3 )流体连通且配置用于测定体液和/或体液组分中的标志物， 向流动检测元件的样品施加区(3)施加小体积液体样品， 测定正确的检测性能，其中测定正确的检测性能的步骤包括以下步骤 -测量功能区(3 ；4 ；5 ；6 ；7)的至少一种光学参数，以及 -将所测量的所述至少一种光学参数与指定给所述一个或多个功能区(3 ；4 ；5 ；6 ；7)的至少一种预定的光学参数进行比较。
全文摘要
本发明涉及一种测定在小体积体液样品中的标志物的方法，所述方法包含以下步骤提供一种具有多个功能区(3，4，5，6，7)的流动检测元件，所述多个功能区(3，4，5，6，7)至少部分流体连通且包含施加区(3)和检测区(5)，所述检测区(5)与施加区(3)流体连通且配置用于测定体液和/或体液组分中的标志物；向流动检测元件的样品施加区(3)施加小体积液体样品，测定正确的检测性能，其中测定正确的检测性能的步骤包含以下步骤测量一个或多个功能区(3；4；5；6；7)的至少一种光学参数，将所测量的所述至少一种光学参数与指定给所述一个或多个功能区(3；4；5；6；7)的至少一种预定的光学参数进行比较，以及，如果确定了正确的检测性能，则通过对检测区(5)读数来测定液体样品中的标志物。另外，还提供了一种测定流动检测元件的正确检测性能的方法。
文档编号G01N21/86GK102770751SQ201180010746
公开日2012年11月7日 申请日期2011年2月22日 优先权日2010年2月23日
发明者弗洛里安·�？斯� 申请人:B.R.A.H.M.S 有限公司
专业数控铣床产品供应商
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