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专利名称：地黄叶总苷指纹图谱测定方法
技术领域：
本发明涉及一种图谱测定方法，特别是涉及一种地黄叶总苷指纹图谱测定法。
背景技术：
地黄叶总苷是从地黄叶中提取出的用于治疗慢性肾小球肾炎的药物，地黄叶总苷 中50%以上的主要有效成分为acteoside (毛蕊花糖苷)、cisacteoside、isoacteoside、 hydroxyacteoside、methoxyacteoside、jionosideAl、jionosideBl 等多禾中苯乙酉享苷类。其 中主要成分毛蕊花糖苷占地黄叶总苷的25%以上。而在现有技术中，对含量测定仅以毛蕊 花糖苷这一单一成份做对照测定以衡量地黄叶总苷的含量，不能完全反映其药效作用成分 的真实情况，影响其药物的临床疗效。

发明内容
本发明的目的，是建立地黄叶总苷指纹图谱的测定方法，通过此测定方法可控制 地黄叶总苷的质量。采用色谱指纹图谱质量控制方式以分析为手段，从中获取反映中药 内在质量的信息，通过对指纹特征的分析比较，评价中药内在质量的真实性、一致性和稳定 性。本发明的技术方案
一种地黄叶总苷指纹图谱的测定方法，该测定方法如下
色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；甲醇冰乙酸水 =30 36 0. 5 1. 5 :62 70为流动相，流速lml/min，检测波长330nm，柱温，理论板 数按麦角留苷峰计算，应不低于8500 ；
对照品溶液的制备取毛蕊花糖苷对照品8mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇冰 醋酸水=30 36 0. 5 1. 5 :62 70混合溶剂溶解并稀释至刻度，摇勻，即得每Iml含 麦角甾苷0. 16mg；
供试品溶液的制备取本品细粉60mg，精密称定，置50ml量瓶中，加入甲醇冰醋酸 水=30 36 0. 5 1. 5 :62 70混合溶液45ml，超声处理20分钟，放冷，加上述混合溶剂 稀释至刻度，摇勻，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液1ml，置IOml量瓶中，用上述混合溶 剂剂稀释至刻度，摇勻，即得；
分别取对照品与供试品溶液各20ul，注入高效液相色谱仪，确定出供试品色谱中麦角 甾苷保留时间tK，用保留时间tK-A分别乘以0. 379,0. 597、1. 366，得到三个不同的保留时间 tK-H、tK-M、tK-J，在供试品色谱中，应同时在这三个保留时间上出现三个色谱峰；其出峰时 间误差应小于士 15%。更具体的测定方法是
色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；甲醇冰乙酸水=33 1 66为流动相，流速lml/min，检测波长330nm，柱温35°C，理论板数按麦角甾苷峰计算，应 不低于8500 ；
3对照品溶液的制备取毛蕊花糖苷对照品8mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇冰 醋酸水=33 1 66混合溶剂溶解并稀释至刻度，摇勻，即得每Iml含麦角留苷0. 16mg ；
供试品溶液的制备取本品细粉60mg，精密称定，置50ml量瓶中，加入甲醇冰醋酸 水=33 1 66混合溶液45ml，超声处理20分钟，放冷，加上述混合溶剂稀释至刻度，摇勻， 滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液1ml，置IOml量瓶中，用上述混合溶剂剂稀释至刻度，摇 勻，即得；
分别取对照品与供试品溶液各20ul，注入高效液相色谱仪，确定出供试品色谱中麦角 甾苷保留时间tK，用保留时间tK-A分别乘以0. 379,0. 597、1. 366，得到三个不同的保留时间 tK-H、tK-M、tK-J，在供试品色谱中，应同时在这三个保留时间上出现三个色谱峰；其出峰时 间误差应小于士 15%。本发明的有益效果
与现有技术相比，本发明不仅能从液相色谱的整体特征上把握地黄叶总苷的质量情 况，而且通过保留时间和指纹峰特性，能够更好的表征地黄叶总苷的成分特异性。采用本发 明方法构建的地黄叶总苷高效液相色谱指纹图谱，可用于地黄叶总苷的产品质量检测与评 价。地黄叶总苷的HPLC指纹图谱作为控制其质量的手段，既避免了以单一化学成分为对比 参照来判定其质量的片面性，又减少了为保证质量合格而人为处理的可能性。本发明为完 整准确评价地黄叶总苷的质量提供了有效的方法，从而使其进一步的产品质量及疗效得到 了保证。
具体实施例方式实施例1
本地黄叶总苷指纹图谱的测定方法
色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；甲醇冰乙酸水 =30 0. 5 62为流动相，流速lml/min，检测波长330nm，柱温35°C，理论板数按麦角甾苷峰 计算，应不低于8500。对照品溶液的制备取毛蕊花糖苷对照品8mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲 醇冰醋酸水=30 0. 5 62混合溶剂溶解并稀释至刻度，摇勻，即得每Iml含麦角甾苷 0. 16mg0供试品溶液的制备取本品细粉60mg，精密称定，置50ml量瓶中，加入甲醇冰醋 酸水=30 0. 5 62混合溶液45ml，超声处理20分钟，放冷，加上述混合溶剂稀释至刻度， 摇勻，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液1ml，置IOml量瓶中，用上述混合溶剂剂稀释至刻 度，摇勻，即得。分别取对照品与供试品溶液各20ul，注入高效液相色谱仪，确定出供试品色谱中 麦角甾苷保留时间tK，用保留时间tK-A分别乘以0. 379,0. 597、1.366，得到三个不同的保留 时间tK-H、tK-M、tK-J。在供试品色谱中，应同时在这三个保留时间上出现三个色谱峰；其出 峰时间误差应小于士 15%。实施例2:
本地黄叶总苷指纹图谱的测定方法
色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；甲醇冰乙酸水=33 1 66为流动相，流速lml/min，检测波长330nm，柱温35 °C，理论板数按麦角甾苷峰计 算，应不低于8500。对照品溶液的制备取毛蕊花糖苷对照品8mg，精密称定，置50ml量瓶中，加 甲醇冰醋酸水=33 1 66混合溶剂溶解并稀释至刻度，摇勻，即得每Iml含麦角甾苷 0. 16mg0供试品溶液的制备取本品细粉60mg，精密称定，置50ml量瓶中，加入甲醇冰 醋酸水=33 1 66混合溶液45ml，超声处理20分钟，放冷，加上述混合溶剂稀释至刻度， 摇勻，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液1ml，置IOml量瓶中，用上述混合溶剂剂稀释至刻 度，摇勻，即得。分别取对照品与供试品溶液各20ul，注入高效液相色谱仪，确定出供试品色谱中 麦角甾苷保留时间tK，用保留时间tK-A分别乘以0. 379,0. 597、1.366，得到三个不同的保留 时间tK-H、tK-M、tK-J。在供试品色谱中，应同时在这三个保留时间上出现三个色谱峰；其出 峰时间误差应小于士 15%。实施例3:
本地黄叶总苷指纹图谱的测定方法
色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；甲醇冰乙酸水 =36 1. 5 70为流动相，流速lml/min，检测波长330nm，柱温35°C，理论板数按麦角甾苷峰 计算，应不低于8500。对照品溶液的制备取毛蕊花糖苷对照品8mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲 醇冰醋酸水=36 1. 5 70混合溶剂溶解并稀释至刻度，摇勻，即得每Iml含麦角甾苷 0. 16mg0供试品溶液的制备取本品细粉60mg，精密称定，置50ml量瓶中，加入甲醇冰醋 酸水=36 1. 5 70混合溶液45ml，超声处理20分钟，放冷，加上述混合溶剂稀释至刻度， 摇勻，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液1ml，置IOml量瓶中，用上述混合溶剂剂稀释至刻 度，摇勻，即得。分别取对照品与供试品溶液各20ul，注入高效液相色谱仪，确定出供试品色谱中 麦角甾苷保留时间tK，用保留时间tK-A分别乘以0. 379,0. 597、1.366，得到三个不同的保留 时间tK-H、tK-M、tK-J。在供试品色谱中，应同时在这三个保留时间上出现三个色谱峰；其出 峰时间误差应小于士 15%。
权利要求
1.一种地黄叶总苷指纹图谱的测定方法，其特征在于，该测定方法是色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；甲醇冰乙酸水 =30 36 0. 5 1. 5 :62 70为流动相，流速lml/min，检测波长330nm，柱温，理论板 数按麦角留苷峰计算，应不低于8500 ；对照品溶液的制备取毛蕊花糖苷对照品8mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇冰 醋酸水=30 36 0. 5 1. 5 :62 70混合溶剂溶解并稀释至刻度，摇勻，即得每Iml含 麦角甾苷0. 16mg；供试品溶液的制备取本品细粉60mg，精密称定，置50ml量瓶中，加入甲醇冰醋酸 水=30 36 0. 5 1. 5 :62 70混合溶液45ml，超声处理20分钟，放冷，加上述混合溶剂 稀释至刻度，摇勻，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液1ml，置IOml量瓶中，用上述混合溶 剂剂稀释至刻度，摇勻，即得；分别取对照品与供试品溶液各20ul，注入高效液相色谱仪，确定出供试品色谱中麦角 甾苷保留时间tK，用保留时间tK-A分别乘以0. 379,0. 597、1. 366，得到三个不同的保留时间 tK-H、tK-M、tK-J，在供试品色谱中，应同时在这三个保留时间上出现三个色谱峰；其出峰时 间误差应小于士 15%。
2.根据权利要求1所述的地黄叶总苷指纹图谱的测定方法，其特征在于更具体的测定 方法是 色谱条件与系统适应性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填料；甲醇冰乙酸水=33 1 66为流动相，流速lml/min，检测波长330nm，柱温35°C，理论板数按麦角甾苷峰计算，应 不低于8500 ；对照品溶液的制备取毛蕊花糖苷对照品8mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇冰 醋酸水=33 1 66混合溶剂溶解并稀释至刻度，摇勻，即得每Iml含麦角留苷0. 16mg ；供试品溶液的制备取本品细粉60mg，精密称定，置50ml量瓶中，加入甲醇冰醋酸 水=33 1 66混合溶液45ml，超声处理20分钟，放冷，加上述混合溶剂稀释至刻度，摇勻， 滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液1ml，置IOml量瓶中，用上述混合溶剂剂稀释至刻度，摇 勻，即得；分别取对照品与供试品溶液各20ul，注入高效液相色谱仪，确定出供试品色谱中麦角 甾苷保留时间tK，用保留时间tK-A分别乘以0. 379,0. 597、1. 366，得到三个不同的保留时间 tK-H、tK-M、tK-J，在供试品色谱中，应同时在这三个保留时间上出现三个色谱峰；其出峰时 间误差应小于士 15%。
全文摘要
一种地黄叶总苷指纹图谱的测定方法，该方法不仅能从液相色谱的整体特征上把握地黄叶总苷的质量情况，而且通过保留时间和指纹峰特性，能够更好的表征地黄叶总苷的成分特异性。采用本发明方法构建的地黄叶总苷高效液相色谱指纹图谱，可用于地黄叶总苷的产品质量检测与评价。该方法地黄叶总苷的HPLC指纹图谱作为控制其质量的手段，既避免了以单一化学成分为对比参照来判定其质量的片面性，又减少了为保证质量合格而人为处理的可能性。本测定方法为完整准确评价地黄叶总苷的质量提供了有效的技术手段，从而进一步地使其产品质量及疗效得到了保证。
文档编号G01N30/02GK102072941SQ20101055137
公开日2011年5月25日 申请日期2010年11月19日 优先权日2010年11月19日
发明者张孝齐, 杨建 , 边宝林 申请人:四川美大康药业股份有限公司