专利名称：稳定的扶正解毒超微粉中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定方法
技术领域：
本发明涉及一种高效液相色谱方法，特别涉及一种中药成分的含量测定技术。
背景技术：
扶正解毒超微粉是根据《中华人民共和国兽药典》2010版二部扶正解毒散项下规定，由黄芪、板蓝根和淫羊藿三味中药按一定比例组合超微粉碎而成的成方制剂，具有扶正祛邪、清热解毒的功效。主治鸡法氏囊病。超微粉碎是近20年迅速发展起来的一项高新技术,用于中药领域能把原材料加工成微米甚至纳米级的微粉。鉴于粉碎是中药生产及应用中的基本加工技术，超微粉碎也愈来愈引起人们的关注，虽然在中药制药行业中起步较晚，开发研制的品种相对较少，但已显露出特有的优势和广阔的应用前景，并已成为近几年来中药界的研究热点。超微粉碎中药最大的优势是有效提高了药物的生物利用度。从药物学原理来说，药物的溶出速度与药物的颗粒比表面积呈正相关，而比表面积与颗粒粒径成反比。因此，药物的粒径越�。蚱浔砻婊酱螅接兄谝┪镉行С煞值娜艹�。超微粉碎中药及其颗粒达至IJ超细粉末的水平，其比表面积显著增大，药物在胃肠道里的溶解度明显增加，从而增加药物的生物利用度，并加快药物起效时间。此外，由于纳米或微米粒的粘附性及小的粒径，既有利于延长局部用药时滞留性的增加，也有利于延长药物与肠壁接触时间，加大接触面积，从而提高药物口服吸收的生物利用度。如甘草饮片超微粉碎后甘草酸的溶出有显著增加。传统中药饮片往往采用煎煮的方法，目前虽已进行了中药制剂的改良，但只是提取中药所含的小部分成分，占总成分的10% 30%，药效大受影响。使用超微粉碎技术可充分提取中药成分，具有吸收快及使用方便等优点。药典中扶正解毒散项下质量标准未规定其各有效成分的鉴别方法和含量测定方法，为了完善扶正解毒散质量标准，为其质量标准的制定提供依据，本发明对扶正解毒超微粉中黄芪的成分毛蕊异黄酮葡萄糖苷进行含量测定方法的探索，并确定一种稳定的扶正解毒超微粉中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定方法。
发明内容
本发明旨在解决扶正解毒超微粉中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定问题，以解决扶正解毒超微粉中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定无法使用中国兽药典中所规定的黄芪中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定方法。具体方法技术方案如下
一种高效液相色谱法测定扶正解毒超微粉中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量的方法，其色谱条件为
a.填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；
b.流动相为混合比例为20:80的乙腈和O.2%甲酸溶液；C.紫外检测器的检测波长为260nm。d.所用流动相流速为lml/min ； e.进样体积为10 μ I。1.毛蕊异黄酮葡萄糖苷标准曲线的绘制
a.标准品溶液的制备精密称取毛蕊异黄酮葡萄糖苷标准品O. 01042g,置于200ml容量瓶中，用甲醇溶解，定容至200ml。b.用甲醇稀释不同浓度的标准品溶液精密量取原浓度标准品溶液5ml，加甲醇定容至10ml，混匀后，再精密量取5ml至另一容量瓶中，加甲醇定容至10ml，按照此方法倍比稀释，制成浓度分别为 52.1 μ g/ml、26. 05 μ g/ml、13. 03 μ g/ml、6. 51 μ g/ml、3. 26 μ g/ml的毛蕊异黄酮葡萄糖苷标准品溶液。
c.以不同浓度的毛蕊异黄酮葡萄糖苷标准品溶液响应的峰面积对浓度作图，得到毛蕊异黄酮葡萄糖苷的标准曲线。见附图
。2.供试品的制备
取扶正解毒超微粉约lg，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流4小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。3.精密度试验
取供试品溶液，精密吸取10 μ I进样，重复5次，记录峰面积，计算该方法精密度。试验结果见表。表毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定方法精密度试验结果
序号 I2345
峰_ mu丨斑於腿观丨纖選I服觀 平均值224.75
RSD (%>0.51%
由结果可见，毛蕊异黄酮葡萄糖苷的相对标准偏差为O. 58%，表明本方法的进样精密度良好。4.方法的专属性试验
阴性样品溶液精密称取除黄芪外扶正解毒超微粉约lg，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，加热回流4小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，即得。对照品溶液取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含50 μ g的溶液，即得。5.回收率试验
供试品溶液的制备精密称取扶正解毒超微粉约lg，6份，置圆底烧瓶中，分别加入毛蕊异黄酮葡萄糖苷标准品溶液1ml，精密加入甲醇49ml，称定重量，加热回流4小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。对照品溶液取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每Iml含50 μ g的溶液，即得。表毛蕊异黄酮葡萄糖苷回收率试验结果
权利要求
1.一种稳定的扶正解毒超微粉中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，其特征在于步骤如下(1)采用高效液相色谱法测定；(2)色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-O.2% 甲酸溶液(20:80)为流动相；检测波长为260nm，理论板数按毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰计算应不低于3000;(3)对照品溶液的制备取毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每 Iml含50 μ g的溶液，即得；(4)供试品溶液的制备取本品粉末约lg，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇 50ml，称定重量，加热回流4小时，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过， 精密量取续滤液25ml，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度， 摇匀，即得；(5)测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ 1，注入液相色谱仪，测定， 即得。
2.如权利要求1所述，稳定的扶正解毒超微粉中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，其特征在于采用高效液相色谱法。
3.如权利要求1所述，扶正解毒超微粉中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，其特征在于以乙腈-O. 2 %甲酸溶液(20:80 )为流动相。
4.如权利要求1所述，稳定的扶正解毒超微粉中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，其特征在于以毛蕊异黄酮葡萄糖苷为对照品。
5.如权利要求1所述，稳定的扶正解毒超微粉中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，其特征在于所用检测器为紫外检测器。
6.稳定的扶正解毒超微粉中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，其特征在于检测波长为260nm。
7.稳定的扶正解毒超微粉中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，其特征在于所用溶剂为甲醇。
全文摘要
本发明公开一种稳定的扶正解毒超微粉中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法，以乙腈-0.2％甲酸溶液(20:80)为流动相，检测波长260nm，以毛蕊异黄酮葡萄糖苷为对照品，用甲醇回流、过滤、蒸干、溶解处理样品，采用高效液相色谱法-紫外检测器检测扶正解毒超微粉中毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量。此方法线性关系良好、精密度、重现性良好，可作为扶正解毒超微粉中毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量测定方法，简单、快速、易操作。
文档编号G01N30/02GK102998394SQ20121052873
公开日2013年3月27日 申请日期2012年12月11日 优先权日2012年12月11日
发明者郭振环, 于瑞, 刘海新, 刘琴, 李秋霞, 王文文 申请人:河南省康星药业股份有限公司
专业数控铣床产品供应商
20年生产经验，实力工厂，精工品质，质量有保障
