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专利名称：一种注射用益气复脉制剂中人参总皂苷的含量的测定方法
技术领域：
本发明涉及一种中药检测方法，特别涉及一种注射用益气复脉制剂中人参总皂苷的含量的测定方法。
背景技术：
注射用益气复脉(冻干)是由红参、麦冬、五味子制成的用于静脉滴注的中药复方制剂，具有益气复脉，养阴生津的疗效。主要用于冠心病劳累性心绞痛气阴两虚证，症见胸痹心痛，心悸气短、倦怠懒言、头晕目眩、面色少华、舌淡、少苔或剥苔，脉细弱或结代；冠心病所致慢性左心功能不全II、III级气阴两虚证，症见心悸、气短甚则气急喘促，胸闷隐痛，时作时止，倦怠乏力，面色苍白，动则汗出，舌淡、少苔或剥苔，脉细弱或结代。注射用益气复脉(冻干)性状本品为浅黄色的疏松块状物；有引湿性。取I瓶内容物,加水2 3ml溶解后，为棕红色澄明液体。用法用量静脉滴注。每日I次，每次8瓶，用250ml 500ml 5%葡萄糖注射液或生理盐水稀释后静脉滴注。每分钟约40滴。疗程2周。近红外光谱分析技术简便、快速，无须提取、稀释和破坏样品，且光纤漫反射技术可以直接测定固体样品，是一种理想的质量控制方法。近年来随着计算机技术和化学计量学的快速发展，近红外光谱技术已经广泛的应用于食品、石油化工、烟草和医药等行业。近红外光谱技术在人参类植物鉴别过程中也得到了应用，有文献报道该法已经成功地应用于高丽参和红参的鉴别及人参和红参Μ的鉴别，并实现了人参中的总皂苷、总糖和水分的定量，样品处理方便，分析精确度高，值得推广。现行的质量标准中人参总皂苷的测定方法采用紫外分光光度法，该法前处理复杂耗时，显色过程中对时间和温度要求苛刻，易产生误差，实际应用中存在一定局限。本研究建立了用近红外漫反射光谱技术测定注射用益气复脉(冻干)中人参总皂苷含量的模型，并用于该样品含量的预测，结果较为满意。

发明内容
本发明所述的检测注射用益气复脉中人参总皂苷含量的方法，包括以下步骤I)对照品的制备分别精密称取人参总皂苷对照品，加甲醇溶解，制得溶液。2)供试品溶液的制备取注射用益气复脉药物粉末，精密称定，用水溶解，过上树脂柱，以甲醇-水冲洗后，以甲醇洗脱，洗脱液过滤，制得溶液。3)测定方法分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，紫外分光光度法测定样品中人参总皂苷的含量。优选的检测方法，包括以下步骤
I)对照品的制备分别精密称取人参总皂苷含量对照品，制得每Iml各含约O. Img的溶液。2)供试品溶液的制备取注射用益气复脉粉I. 2g，精密称定，置烧杯中，用水IOmL溶解，上已处理好的Strata -X商品树脂柱(内径Icm,树脂床高约2cm ；300 μ m),流速约I. OmL · mirT1,弃去流出液，待流至树脂层液面时，以O. 5mol · IZ1NaOH甲醇-水(2 : 8) 5mL分两次冲洗后，继以用20 %甲醇冲洗后，最后以甲醇洗脱，洗脱液收集于IOmL量瓶中至刻度，摇匀，过O. 45 μ m
膜，即可。3)测定方法 分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，紫外分光光度法分别测定样品中人参总皂苷的含量。本发明方法的建立2实验部分2. I实验仪器和材料Matrix-F (SFDA版)型傅里叶变换近红外漫反射光谱仪(德国布鲁克公司)，光纤探头，定量分析软件为0PUS6. 5 ；HACH DR5000紫外分光光度计(美国哈希公司)；MettlerXS105电子天平；人参皂苷Re对照品(中国药品生物制品检定所，批号110754-200906);试剂均为分析纯，水为超纯水；注射用益气复脉(冻干)样品(天津天士力之骄药业有限公司提供，科研用样品，60批,分别编号为I 60)。2.2实验方法2. 2. I紫外分光光度法测定总皂苷60批样品，按注射用益气复脉(冻干)现行质量标准测量其总皂苷含量。2. 2. 2近红外光谱的采集60批样品，用布擦拭干净西林瓶底部，分别从西林瓶底部扫描其近红外光谱。具体扫描参数为测量温度26°C，湿度30%，开机预热光谱仪I小时，漫反射检测，扫描波长范围为4000 12000CHT1，扫描次数32次，分辨率8CHT1，每份样品扫描6张，取其平均光谱，如图I所示。3结果与讨论3. I总皂苷定量分析模型的建立3. I. I校正集和验证集样品的选择根据其总皂苷的含量测定结果，从收集到的60份样品中，选取前50批有代表性的样品做校正集，用于建立校正模型；剩余10批样品为验证集，对模型进行外部检验。校正集和验证集样品中总皂苷的含量分布范围见表I。表I校正集和验证集中总皂苷的含量分布范围表(mg/瓶)组成样品数最小值最大值平均值校正集 50 5.3 12.5 7.3
验证集 10 5.7 6.7 6.13. I. 2光谱预处理和波段的选择光谱预处理和波段的选择对近红外实验结果有一定的影响，值得注意。一般样品的原始近红外光谱中会含有基线漂移、光散射以及仪器噪音等干扰信号，选择合适的光谱预处理技术能剔除干扰信号，提取有用的特征信息，从而消除仪器不稳、环境变化和样品不均等因素带来的影响，提高模型预测的精度和稳定性M。目前的近红外分析软件虽然能进行全谱的数据处理，但由于所测的指标成分结构的特殊性，其在近红外光谱上的信息只会包含在一段特定波长范围内，全谱处理会带来冗余信息，影响预测模型的精度，故在建立模型时选取合理的波段也很重要[9]。运用0PUS6. 5数据分析软件，分析数据，以模型的决定因子(R2)和内部验证均方差(RMSECV)为指标，R2越接近于100，RMSECV越小说明模型越好。参考仪器自动优化条件，不断调节，最终发现以一阶导数加多元散射校正预处理技术在4246 4848CHT1及6098 7502cm-1波段范围内的效果最好。3. I. 3模型的建立运用偏最小二乘法(PLS)将50份校正集样品的NIR光谱与紫外分光光度法测得的总皂苷值进行回归关联，建立总皂苷校正模型，图2为总皂苷预测值和测定值的相关图，可以看出样品点比较均匀的分布在回归线两侧，采用内部交叉验证，得R2为90. 04，RMSECV为O. 614，最佳回归因子数(Rank)为9。校正集RMSECV与Rank之间的相关图如图3表示。3.2总皂苷定量分析模型的检验将10份验证集样品的近红外光谱输入校正模型，预测其总皂苷的含量，并与紫外分光光度法测定值进行比较。计算得模型预测均方差(RMSEP)为O. 517，10份样品的预测值和真实值之间RSD平均值为4. I %，。3. 3分析与讨论3.3.1因冻干粉针样品是药液直接放在西林瓶中减压冻干成形的，西林瓶中的内容物在颗粒的紧实度和厚度上有良好的一致性，且样品的含水量低，仅为约O. 4%，打开测定易吸潮，故选择用光纤探头直接从西林瓶底部进行扫描。同时在扫描时以空西林瓶背景，每份样品取6张光谱的平均值，用以消除西林瓶、样品颗粒度、厚度等不一致引入的干扰。3. 3. 2作为一种非侵入性的二级分析方法，近红外技术分析样品时的预测准确度主要取决于建立模型时所采用的测定方法的准确度，还与仪器，测量环境、建模样品的多少及代表性有关。因为注射用益气复脉现行测总皂苷的紫外分光光度法存在一定的误差，且建模样品浓度分布不均，导致了本研究中近红外预测模型的决定因子欠佳，10批样品的模型预测值和真值之间的不能完全重合。有关总皂苷测定方法的优化，将在以后不断积累样品，做进一步研究。4 结论本研究表明近红外漫反射光谱法在4246 4848CHT1及6098 7502CHT1波段范围、内，原始光谱经一阶导数和多元散射校正技术预处理，结合偏最小二乘法回归，可实现对注射用益气复脉(冻干)中人参总皂苷的快速定量分析，适合于生产上大量样品的快速测定。本发明效果好，操作简单，易于推广。


图160批样品的近红外光谱2校正集NIR预测值与真值之间的相关3校正集RMSECV与Rank之间的相关图
具体实施例方式
以下通过实施例，进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。实施例I包括以下步骤I)对照品的制备分别精密称取人参总皂苷含量对照品，制得每Iml各含约O. Img的溶液。2)供试品溶液的制备取注射用益气复脉粉I. 2g，精密称定，置烧杯中，用水IOmL溶解，上已处理好的Strata -X商品树脂柱(内径Icm,树脂床高约2cm ；300 μ m),流速约I. OmL · mirT1,弃去流出液，待流至树脂层液面时，以O. 5mol · IZ1NaOH甲醇-水(2 : 8) 5mL分两次冲洗后，继以用20 %甲醇冲洗后，最后以甲醇洗脱，洗脱液收集于IOmL量瓶中至刻度，摇匀，过O. 45 μ m
膜，即可。3)测定方法分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，紫外分光光度法分别测定样品中人参总皂苷的含量。
权利要求
1.一种注射用益气复脉制剂中人参总皂苷的含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤 1)对照品的制备 分别精密称取人参总皂苷对照品，加甲醇溶解，制得溶液。
2)供试品溶液的制备 取注射用益气复脉药物粉末，精密称定，用水溶解，过上树脂柱，以甲醇-水冲洗后，以甲醇洗脱，洗脱液过滤，制得溶液。
3)测定方法 分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，紫外分光光度法测定样品中人参总皂苷的含量。
2.根据权利要求I的检测方法，其特征在于，包括以下步骤 1)对照品的制备 分别精密称取人参总皂苷含量对照品，制得每Iml各含约O. Img的溶液。
2)供试品溶液的制备 取注射用益气复脉粉I. 2g，精密称定，置烧杯中，用水IOmL溶解，上已处理好的Strata -X商品树脂柱(内径Icm,树脂床高约2cm ；300 μ m)，流速约I. OmL · mirT1,弃去流出液，待流至树脂层液面时，以O. 5mol · IZ1NaOH甲醇-水(2 : 8) 5mL分两次冲洗后，继以用20 %甲醇冲洗后，最后以甲醇洗脱，洗脱液收集于IOmL量瓶中至刻度，摇匀，过O. 45 μ m膜，即可。
3)测定方法 分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，紫外分光光度法分别测定样品中人参总皂苷的含量。
3.根据权利要求I的测定方法，其特征在于，该方法精密度良好。
4.根据权利要求I的测定方法，其特征在于，供试品溶液在24h内稳定。
5.根据权利要求I的测定方法，其特征在于，该方法重复性良好。
6.根据权利要求I的测定方法，其特征在于，该方法回收试验良好。
7.根据权利要求I的测定方法，其特征在于，近红外漫反射光谱在4246 4848CHT1及6098 7502CHT1波段范围内。
全文摘要
本发明涉及一种注射用益气复脉制剂中人参总皂苷的含量的测定方法，该方法包括以下步骤1)对照品的制备分别精密称取人参总皂苷对照品，加甲醇溶解，制得溶液，2)供试品溶液的制备取注射用益气复脉药物粉末，精密称定，用水溶解，过上树脂柱，以甲醇-水冲洗后，以甲醇洗脱，洗脱液过滤，制得溶液，3)测定方法分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，紫外分光光度法测定样品中人参总皂苷的含量。
文档编号G01N21/33GK102759514SQ20111010904
公开日2012年10月31日 申请日期2011年4月28日 优先权日2011年4月28日
发明者叶正良, 周大铮, 李德坤, 韩晓萍 申请人:天津天士力之骄药业有限公司