专利名称：一种植物油中微量脂溶性茶多酚的检测方法
技术领域：
本发明属于植物油的检测技术领域，尤其是涉及植物油中微量茶多酚的检测方 法，更具体地涉及一种植物油中脂溶性茶多酚的检测方法。
背景技术：
茶多酚(Tea PolypHenols)是茶叶中多酚类物质的总称，是形成茶叶色香味的主 要成份之一，也是茶叶中有保健功能的主要成份之一。脂溶性茶多酚是茶叶的有效提取物 茶多酚经过化学截枝改性而成的，为棕色油状物或粉末状，无毒、无异味，是一种高效的具 有特定生理功能的生物抗氧化剂，可以添加在植物油脂中，其抗氧化能力可与特丁基对苯 二酚(TBHQ)媲美，大于没食子酸丙酯(PG)、2，6_二叔丁基对甲苯(BHT)、叔丁基对羟基茴香 醚(BHA)。添加于食品中无异味，无沉淀，不会引起产品内在质量的变化。茶多酚具有较强 的清除体内自由基、抗衰老、防治高脂血症引起的疾病、增强人体免疫功能等作用，已被诸 多研究所证实，茶多酚及其衍生物的开发利用已引起国内外茶学、医药学及食品等领域的 极大关注。食用植物油经精炼各个工序后，脱除了维生素E、磷脂等大部分天然抗氧化剂，易 发生氧化反应，导致油脂变质。同时，一些富油食品中的油脂在空气中易发生氧化反应，产 生自由基和过氧化物，过氧化物进一步分解成小分子的醛、酮、酸等有机化合物，对人体健 康有极大的损害。将茶多酚应用在植物油脂领域，取代合成抗氧化剂，一方面可以防止油脂 氧化变质，另一方面可以增加植物油脂中微量营养成分，有利于营养健康。水溶性茶多酚的研究已经十分广泛，脂溶性茶多酚的报道还不多，其较高含量的 检测可以参照水溶性茶多酚的方法，但在植物油脂中加入微量脂溶性茶多酚的检测技术国 内外还没有报道。在GB2760-2007中规定茶多酚在基本不含水的脂肪和油里最大添加量为 0.4g/kgo
发明内容
本发明的目的在于改进已有技术的不足而提供一种操作简便、成本低廉、重复性 好、准确度高的植物油中微量脂溶性茶多酚的检测方法。本发明的目的是这样实现的，一种植物油中微量脂溶性茶多酚的检测方法，其特 点是该方法包括以下步骤(1)制作没食子酸乙酯标准曲线以及分析脂溶性茶多酚的有效成分含量；(2)制作脂溶性茶多酚加标曲线在纯净植物油中加入脂溶性茶多酚，配制6种 以上含有0-400ppm脂溶性茶多酚的油样2-15g，其中必须有植物油空白样品1份，即含有 Oppm的脂溶性茶多酚，分别加入有机溶剂、碱液进行皂化、萃�。幂腿∫海腿∫憾ㄈ荩� 取一定量溶液，加入显色剂反应50-70min，显色后，在特定波长下测定吸光度A3，绘制加标 曲线1，为y = 9*10_7Χ2+0· 0002χ+0. 0014，R2 = 0. 999，χ为油样中脂溶性茶多酚的浓度，单 位为ppm，y为吸光度A3;
(3)检测待测油样中脂溶性茶多酚的含量取3份以上等量待测油样及等量的植 物油空白样品1份，分别加入有机溶剂、碱液进行皂化、萃�。幂腿∫海腿∫憾ㄈ荩� 一定量溶液，加入显色剂反应50-70min，显色后，在特定波长下测定植物油空白样品的吸光 度Atl，待测油样的吸光度为八#，所测Ati-Aci的值代入加标曲线，即得出油样品中脂溶性茶多 酚的含量。为了进一步实现本发明的目的，可以是所述的制作脂溶性茶多酚加标曲线是(1)在纯净植物油中加入脂溶性茶多酚，配制6种以上含有0-400ppm脂溶性茶多 酚的油样2-15g，其中必须有植物油空白样品1份，即含有Oppm的脂溶性茶多酚；(2)在待测油样及空白样中加入5_15mL乙醚并转移至60mL分液漏斗中，加入 2-7mL5% KOH进行皂化萃取，静置10-30min后分取下层，用10%盐酸调节pH至6_7，剩余 的醚层再用2-10mL5% KOH重复萃取2次，每次各15-25min，收取下层，用10%盐酸调节pH 至6-7，合并3次萃取液，转移至25mL容量瓶中，加水定容至刻度待测，得待测液；(3)显色反应用移液管分别移取待测液0. 5-1. 5mL于IOmL试管内，加入3_7mL 福林酚试剂，摇勻，反应:3min 8min，加入2_6mL 5_10 %的碳酸钠溶液，摇勻，室温下放置 50-70min，得样液；(4)将样液置于IOmm比色皿，在750-780nm波长条件下，用分光光度计测定吸光度 A3，绘制加标曲线1，为y = 9*10_7X2+0. 0002X+0. 0014，R2 = 0. 999，χ为油样中脂溶性茶多 酚的浓度，单位为ppm，y为吸光度A3。为了进一步实现本发明的目的，可以是所述的检测待测油样中脂溶性茶多酚的含
量是(1)取3份以上等量待测油样及1份等量的植物油空白样品，均为2_15g ；(2)在待测油样及空白样中加入5_15mL乙醚并转移至60mL分液漏斗中，加入 2-7mL5% KOH进行皂化萃取，静置10-30min后分取下层，用10%盐酸调节pH至6_7，剩余 的醚层再用2-10mL5% KOH重复萃取2次，每次各15-25min，收取下层，用10%盐酸调节pH 至6-7，合并3次萃取液，转移至25mL容量瓶中，加水定容至刻度待测，得待测液；(3)显色反应用移液管分别移取待测液0. 5-1. 5mL于IOmL试管内，加入3_7mL 福林酚试剂，摇勻，反应:3min 8min，加入2-6mL5_10 %的碳酸钠溶液，摇勻，室温下放置 50-70min，得样液；(4)将样液置于IOmm比色皿，在750-780nm波长条件下，用分光光度计测定植物油 空白样品的吸光度Atl，待测油样的吸光度为六#，所测Ati-Aci的值代入加标曲线，即得出油样 品中脂溶性茶多酚的含量。为了进一步实现本发明的目的，可以是制作脂溶性茶多酚加标曲线和检测待测油 样中脂溶性茶多酚的含量，先将待测溶液加入有机溶剂，上样到硅胶层析柱，用有机溶剂洗 脱层析柱，收集洗脱液，减压蒸干，然后加入有机溶剂、碱液皂化，萃取，得萃取液，得到的加 标曲线2为y = 9*10_7X2+0. 00019X+0. 0013，R2 = 0. 9991，χ均为油样中脂溶性茶多酚的 浓度，单位为ppm，y为吸光度A3。为了进一步实现本发明的目的，可以是用20_30mL石油醚溶解待测油样后上样， 待样液接近全部过柱时，用10_15mL石油醚继续淋洗，最后用10-15mL含2%冰乙酸的甲醇 洗脱层析�。占状枷赐岩海�40°C以下减压蒸干，然后加入有机溶剂、碱液皂化，萃�。幂腿∫�。为了进一步实现本发明的目的，可以是所述的制作没食子酸乙酯标准曲线以及分 析脂溶性茶多酚的有效成分含量是配制6种以上浓度在0. 01-0. 05mg/mL之间的没食子酸 乙酯标准溶液，利用酒石酸亚铁比色法，在MOnm波长条件下用分光光度计测定吸光度Al， 以没食子酸乙酯浓度χ为横坐标，单位为mg/mL，以吸光度y为纵坐标，绘制标准工作曲线y =14. 248x, R2 = 0. 9994 ；准确称取0. 1-0. 3g脂溶性茶多酚，加入2_15mL无水乙醇，用超声波辅助溶解， 用水定容至25mL容量瓶中，取ImL加水稀释到50mL容量瓶中待测，利用酒石酸亚铁比色 法，在MOnm波长条件下用分光光度计测定吸光度A2，依据没食子酸乙酯标准曲线y = 14. 248x，得到脂溶性茶多酚相对于没食子酸乙酯的浓度，再乘以换算系数1. 5，即得脂溶性 茶多酚的有效成分含量，精密度RSD在0. 05% -0. 089%之间，其中χ为浓度，单位为mg/mL， y为吸光度A2。本发明不使用GC、HPLC等大型实验设备，通过显色反应，实现现场测定植物油脂 中含有脂溶性茶多酚含量，具有实验仪器简单、成本低廉、操作简便、重复性好，易于准确测 定油脂中脂溶性茶多酚的含量，能够很方便的应用于生产现场的监督和管理，特别适合基 层使用，具有良好的应用前景。本发明使用的没食子酸乙酯标准溶液为采用购置sigma公司的没食子酸乙酯标 准品配制浓度在0. 01-0. 05mg/mL之间的标准溶液；脂溶性茶多酚标准溶液是称取脂溶性 茶多酚0. 1-0. 3g，加入适量乙醇，超声波辅助溶解，用水定容配制成浓度为0. 05-0. 25mg/ mL的溶液。本发明是将没食子酸乙酯标准溶液在MOnm波长条件下显色，测得吸光度Al，得 到标准工作曲线y = 14. 248x, R2 = 0. 9994 ；将脂溶性茶多酚标准溶液在540nm波长条件下显色，每个样品取三份，分别测得 吸光度A2，依据标准曲线y = 14. M8x，得到对应的相对于没食子酸乙酯的浓度，再乘以换 算系数1. 5，即得脂溶性茶多酚的有效成分含量，精密度RSD在0. 05% -0. 089%之间。其中χ为浓度，单位为mg/mL，y为吸光度，线性相关系数R2 = 0. 9994用来表示标 准曲线线性的好坏，一般在0. 999以上，理想状态是1。本发明中，没食子酸乙酯和脂溶性茶多酚中最主要的成分均为“表没食子儿茶素 没食子酸酯”(-)-EGCG，(-)-EGCG占儿茶素的50%以上，大约相当于脂溶性茶多酚总量的 1/3，即IOmg没食子酸乙酯与15mg脂溶性茶多酚相当。因此，没食子酸乙酯和脂溶性茶多 酚的换算系数为1.5，该系数是在制定GB8313-1987时以茶叶的乙酸乙酯提取物作为100% 纯品得到的。本发明中，由于脂溶性茶多酚具有抗氧化功能，加入量非常少时起到了抗氧化作 用，有部分损失，添加量达到一定浓度时，添加量与测得量呈线性关系，在有层析洗脱步骤 的检测方法得到的加标曲线2为y = 9*10_7Χ2+0· 00019Χ+0. 0013，R2 = 0. 9991，而没有层 析洗脱步骤的检测方法得到的加标曲线1为y = 9*10_7x2+0. 0002x+0. 0014，R2 = 0. 999，其 中χ为浓度，单位为ppm，y为吸光度，二者的精度略有差异。本发明可以检测的为花生油、葵花仁油、大豆油、山茶油、菜籽油、棉籽油、茶籽油、 棕榈油、芝麻油、玉米油、红花油、亚麻油、葡萄籽油、橄榄油、米糠油、小麦胚芽油、猪油、牛油、羊油、鱼油等植物油脂中的任意一种或者多种植物油脂混合的调和油。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步详细说明。实施例1，一种植物油中微量脂溶性茶多酚的检测方法，是制作没食子酸乙酯标准曲线以及分析脂溶性茶多酚的有效成分含量配制6种以 上浓度在0. 01-0. 05mg/mL之间的没食子酸乙酯标准溶液，本实施例是选取0. 015mg/mL、 0. 02mg/mL、0. 025mg/mL、0. 03mg/mL、0. 035mg/mL、0. 04mg/mL、0. 045mg/mL 没食子酸乙酉旨标 准溶液，利用酒石酸亚铁比色法，在MOnm波长条件下用分光光度计测定吸光度Al，以没食 子酸乙酯浓度χ为横坐标，以吸光度y为纵坐标，绘制标准工作曲线为y= 14. 248x, R2 = 0. 9994 ；准确称取0. 2g脂溶性茶多酚，加入2-15mL无水乙醇，用超声波辅助溶解，用水定容 至25mL容量瓶中，取ImL加水稀释到50mL容量瓶中待测，利用酒石酸亚铁比色法，在540nm 波长条件下用分光光度计测定吸光度A2，依据没食子酸乙酯标准曲线y= 14. 248x，得到脂 溶性茶多酚相对于没食子酸乙酯的浓度，再乘以换算系数1. 5，即得脂溶性茶多酚的有效成 分含量为26. 61 %，精密度RSD在0. 05% -0. 089%之间，其中，χ为浓度，单位为mg/mL，y为 吸光度；制作脂溶性茶多酚加标曲线在纯净植物油中加入脂溶性茶多酚，配制6种以上 含有0-400ppm脂溶性茶多酚的油样2-15g，其中必须有植物油空白样品1份，即含有Oppm 的脂溶性茶多酚，本实施例中选取其他六份油样的浓度分别为50ppm、100ppm、150ppm、 200ppm、250ppm、300ppm，在待测油样及空白样中分别加入5_15mL乙醚并转移至60mL分液 漏斗中，加入2-7mL5% KOH进行皂化萃�。仓�10-30min后分取下层，用10%盐酸调节pH 至6-7，剩余的醚层再用2-10mL5% KOH重复萃取2次，每次各15-25min，收取下层，用10% 盐酸调节PH至6-7，合并3次萃取液，转移至25mL容量瓶中，加水定容至刻度待测，得待测 液，用移液管分别移取待测液05-1. 5mL于IOmL试管内，加入3_7mL福林酚试剂，摇勻，反应 3min 8min，加入2_6mL 7. 5%的碳酸钠溶液，摇勻，室温下放置50-70min，得样液，将样液 置于IOmm比色皿，在750-780nm波长条件下，用分光光度计测定吸光度A3，绘制加标曲线， 为y = 9*10_7X2+0. 0002x+0. 0014，R2 = 0. 999，χ为油样中脂溶性茶多酚的浓度，单位为ppm， y为吸光度A3;检测待测油样中脂溶性茶多酚的含量是准确称取三份IOg待测大豆调和油样， 以及一份空白油样，用IOmL乙醚溶解，转移至60mL分液漏斗中，加入5mL6% KOH进行皂化 萃�。�60min后取下层，用10%盐酸调pH值至6 7，剩余的溶液用5mL 0.5% KOH再萃取 两次，各30min，取下层，用10%盐酸调pH值至6 7，合并3次萃取相，转移至60mL分液漏 斗中，加入IOmL石油醚反萃�。植悖琁Omin后取下层，转移至25mL容量瓶中，加水定容至 刻度，同时以不添加脂溶性茶多酚的油样作为空白，方法同上；取待测液、水，水用于做试剂 空白对照用，各ImL于IOmL试管内，在每个试管分别加入5. OmL的福林酚试剂，摇勻，反应 ;3min anin内加入4. 0mL7. 5%的碳酸钠溶液，摇勻，室温下放置60min，于IOmm比色皿、在 765nm波长条件下用分光光度计测定吸光度A#，空白为Atl，所测Att-Atl的值代入加标曲线 1 :y = 9*10_7X2+0. 0002x+0. 0014，R2 = 0. 999，取平均值即得出油样品中脂溶性茶多酚的含 量为192ppm，精密度RSD在0.5% -0. 97%之间。
实施例2，一种植物油中微量脂溶性茶多酚的检测方法，制作没食子酸乙酯标准曲 线以及分析脂溶性茶多酚的有效成分含量的方法与实施例1相同，制作脂溶性茶多酚加标 曲线是在纯净花生油中加入脂溶性茶多酚，配制6种以上含有0-400ppm脂溶性茶多酚 的油样2-15g，其中必须有一份植物油空白样品1份，即含有Oppm的脂溶性茶多酚，本实 施例中选取其他七份油样的浓度分别为lOOppm、150ppm、200ppm、250ppm、300ppm、350ppm、 400ppm，每一份油样都经过如下步骤取一支层析管，称取Ig层析用硅胶，悬于石油醚中后 湿法装柱，准确称取油样5g，用25mL石油醚溶解后上样，待样品接近全部过柱时，用12mL石 油醚继续淋洗，最后用12mL含2%冰乙酸的甲醇洗脱层析柱，收集甲醇洗脱液，于40°C以下 减压蒸干，用IOmL乙醚溶解残渣并转移至60mL分液漏斗中，加入5mlL5% KOH进行皂化萃 �。笮街栌胧凳├�1相同，得到的加标曲线2为y = 9*10_7Χ2+0· 00019Χ+0. 0013，R2 = 0. 9991，χ均为油样中脂溶性茶多酚的浓度，单位为ppm，y为吸光度A3 ；检测待测油样含量是准确称取五份5g待测花生油油样，以及空白油样一份， 每一份分别用25mL石油醚溶解后上样，待样品接近全部过柱时，用12mL石油醚继续淋 洗，最后用12mL含2%冰乙酸的甲醇洗脱层析柱，收集甲醇洗脱液，于40°C以下减压蒸 干，用IOmL乙醚溶解残渣并转移至60mL分液漏斗中，加入5mL5% KOH进行皂化萃�。� 续步骤与实施例1相同，测定吸光度A#，空白为Atl，所测Aff-Atl的值代入加标曲线2 :y =9*10_7Χ2+0· 00019χ+0. 0013，R2 = 0. 9991，取平均值即得油样中脂溶性茶多酚的含量为 95ppm,精密度 RSD 在 0. 58 % -0. 95 % 之间。本发明中，由于脂溶性茶多酚具有抗氧化功能，加入量非常少时起到了抗氧化作 用，有部分损失，添加量达到一定浓度时，添加量与测得量呈线性关系在低浓度样品添加量 与响应值呈二次方关系，在高浓度呈线性关系。本发明中用脂溶性茶多酚对空白油样进行了添加回收分析，结果表明，在 100-300ppm加标水平，回收率会随加标水平的提高而有规律的上升，加标回收率在 80% -101. 05%之间，可以用于实际检测，本发明的方法简易、快速、准确、灵敏度高。
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权利要求
1.一种植物油中微量脂溶性茶多酚的检测方法，其特征是该方法包括以下步骤(1)制作没食子酸乙酯标准曲线以及分析脂溶性茶多酚的有效成分含量；(2)制作脂溶性茶多酚加标曲线在纯净植物油中加入脂溶性茶多酚，配制6种以上含 有0-400ppm脂溶性茶多酚的油样2-15g，其中必须有植物油空白样品1份，即含有Oppm的 脂溶性茶多酚，分别加入有机溶剂、碱液进行皂化、萃�。幂腿∫海腿∫憾ㄈ荩∫欢� 量溶液，加入显色剂反应50-70min，显色后，在特定波长下测定吸光度A3，绘制加标曲线1， 为y = 9*10_7X2+0. 0002x+0. 0014，R2 = 0. 999，χ为油样中脂溶性茶多酚的浓度，单位为ppm， y为吸光度A3;(3)检测待测油样中脂溶性茶多酚的含量取3份以上等量待测油样及等量的植物油 空白样品1份，分别加入有机溶剂、碱液进行皂化、萃�。幂腿∫海腿∫憾ㄈ荩∫欢� 量溶液，加入显色剂反应50-70min，显色后，在特定波长下测定植物油空白样品的吸光度 Atl，待测油样的吸光度为六#，所测Ati-AciW值代入加标曲线，即得出油样品中脂溶性茶多酚 的含量。
2.根据权利要求1所述的一种植物油中微量脂溶性茶多酚的检测方法，其特征是所述 的制作脂溶性茶多酚加标曲线是(1)在纯净植物油中加入脂溶性茶多酚，配制6种以上含有0-400ppm脂溶性茶多酚的 油样2-15g，其中必须有植物油空白样品1份，即含有Oppm的脂溶性茶多酚；(2)在待测油样及空白样中加入5-15mL乙醚并转移至60mL分液漏斗中，加入 2-7mL5% KOH进行皂化萃�。仓�10-30min后分取下层，用10%盐酸调节pH值至6_7，剩 余的醚层再用2-10mL5% KOH重复萃取2次，每次各15-25min，收取下层，用10%盐酸调节 PH值至6-7，合并3次萃取液，转移至25mL容量瓶中，加水定容至刻度待测，得待测液；(3)显色反应用移液管分别移取待测液0.5-1. 5mL于IOmL试管内，加入3_7mL福 林酚试剂，摇勻，反应:3min 8min，加入2_6mL 5_10 %的碳酸钠溶液，摇勻，室温下放置 50-70min，得样液；(4)将样液置于IOmm比色皿，在750-780nm波长条件下，用分光光度计测定吸光度A3， 绘制加标曲线1，为y = 9*10_7χ2+0· 0002χ+0. 0014，R2 = 0. 999，χ为油样中脂溶性茶多酚的 浓度，单位为ppm，y为吸光度A3。
3.根据权利要求1所述的一种植物油中微量脂溶性茶多酚的检测方法，其特征是所述 的检测待测油样中脂溶性茶多酚的含量是(1)取3份以上等量待测油样及1份等量的植物油空白样品，均为2-15g；(2)在待测油样及空白样中加入5-15mL乙醚并转移至60mL分液漏斗中，加入 2-7mL5% KOH进行皂化萃取，静置10-30min后分取下层，用10%盐酸调节pH值至6_7，剩 余的醚层再用2-10mL5% KOH重复萃取2次，每次各15-25min，收取下层，用10%盐酸调节 PH值至6-7，合并3次萃取液，转移至25mL容量瓶中，加水定容至刻度待测，得待测液；(3)显色反应用移液管分别移取待测液0.5-1. 5mL于IOmL试管内，加入3_7mL福 林酚试剂，摇勻，反应:3min 8min，加入2-6mL5_10 %的碳酸钠溶液，摇勻，室温下放置 50-70min，得样液；(4)将样液置于IOmm比色皿，在750-780nm波长条件下，用分光光度计测定植物油空白 样品的吸光度Atl，待测油样的吸光度为々#，所测Ati-Aci的值代入加标曲线，即得出油样品中脂溶性茶多酚的含量。
4.根据权利要求1或2所述的一种植物油中微量脂溶性茶多酚的检测方法，其特征是 制作脂溶性茶多酚加标曲线和检测待测油样中脂溶性茶多酚的含量，先将待测溶液加入有 机溶剂，上样到硅胶层析柱，用有机溶剂洗脱层析柱，收集洗脱液，减压蒸干，然后加入有机 溶剂、碱液皂化，萃�。幂腿∫海玫降募颖昵�2为y = 9*10_7X2+0. 00019X+0. 0013，R2 =0. 9991，χ均为油样中脂溶性茶多酚的浓度，单位为ppm，y为吸光度A3。
5.根据权利要求4所述的一种植物油中微量脂溶性茶多酚的检测方法，其特征是用 20-30mL石油醚溶解待测油样后上样，待样液接近全部过柱时，用10-15mL石油醚继续淋 洗，最后用10-15mL含2%冰乙酸的甲醇洗脱层析�。占状枷赐岩海�40°C以下减压蒸 干，然后加入有机溶剂、碱液皂化，萃�。幂腿∫�。
6.根据权利要求1所述的一种植物油中微量脂溶性茶多酚的检测方法，其特征是所述 的制作没食子酸乙酯标准曲线以及分析脂溶性茶多酚的有效成分含量是配制6种以上浓 度在0. 01-0. 05mg/mL之间的没食子酸乙酯标准溶液，利用酒石酸亚铁比色法，在540nm波 长条件下用分光光度计测定吸光度Al，以没食子酸乙酯浓度χ为横坐标，单位为mg/mL，以 吸光度y为纵坐标，绘制标准工作曲线y = 14. 248x, R2 = 0. 9994 ；准确称取0. 1-0. 3g脂溶性茶多酚，加入2-15mL无水乙醇，用超声波辅助溶解，用水 定容至25mL容量瓶中，取ImL加水稀释到50mL容量瓶中待测，利用酒石酸亚铁比色法，在 MOnm波长条件下用分光光度计测定吸光度A2，依据没食子酸乙酯标准曲线y = 14. 248x, 得到脂溶性茶多酚相对于没食子酸乙酯的浓度，再乘以换算系数1. 5，即得脂溶性茶多酚的 有效成分含量，精密度RSD在0. 05% -0. 089%之间，其中χ为浓度，单位为mg/mL，y为吸光 度A2。
全文摘要
本发明公开了一种植物油中微量脂溶性茶多酚的检测方法，是首先制作没食子酸乙酯标准曲线以及分析脂溶性茶多酚的有效成分含量、制作脂溶性茶多酚加标曲线、然后检测待测油样的吸光度，所测吸光度的值代入加标曲线，即得出油样品中脂溶性茶多酚的含量，本发明具有操作简便、成本低廉、重复性好、准确度高的特点。
文档编号G01N21/78GK102128827SQ20101057721
公开日2011年7月20日 申请日期2010年12月8日 优先权日2010年12月8日
发明者崔同, 王晓玲, 王洋, 王珊珊 申请人:山东鲁花集团有限公司
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