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专利名称：一种血站阴性滤除白细胞的洗脱和固定方法及专用过滤器的制作方法
技术领域：
本发明涉及制备医用配制品的方法，尤其涉及一种血站阴性滤除白细胞的洗脱和固定方法及专用过滤器。
背景技术：
准确的白细胞计数对临床医生的诊断有极高的参考价值，尤其是现在国家严格控制抗生素的临床使用情况，因此血细胞分析仪对白细胞计数的准确性要求很高。血细胞分析仪白细胞计数准确性需要通过质控品来监测，因此白细胞质控品就显得尤为重要。国内外现有的白细胞质控品一般为微粒或动物细胞替代，微粒价格昂贵，容易产生基质效应，生产工艺繁琐复杂。而目前尚无合理利用血站废弃的传染学指标为阴性的白细胞资源的方法。

发明内容
本发明的目的就是提出一种血站阴性滤除白细胞的洗脱及固定方法，以解决背景技术存在白细胞质控品一般为微粒或动物细胞替代，微粒价格昂贵，容易产生 基质效应，生产工艺繁琐复杂；而血站废弃的传染学指标为阴性的白细胞尚无合理利用方法的问题。解决该技术问题所采用的技术方案是一种血站阴性滤除白细胞的洗脱和固定方法，其特征在于该方法的步骤是A、将血站采集后的全血经白细胞滤器过滤后，滤器中粘附在滤纸上的白细胞用1#保养液将其洗脱下来，并用过滤器过滤洗脱下来的白细胞；B、将白细胞加入2#保养液置于离心机中分离纯化，2#保养液白细胞的体积比=2 5 I ；C、将纯化的白细胞中加入固定液固定，固定液白细胞的体积比=I 30-80 ;D、将固定后的白细胞根据使用需要调节浓度，或是作为单项指标测试的质控品使用，或是将其加入含有其他指标的质控品使用；其中，1#保养液是在50 100毫升磷酸盐缓冲溶液中加入2. I 2. 9g枸橼酸钠、0. 2 0. 5g枸橼酸、I. 0 4. 3g多聚葡萄糖、0. 02 0. 3g腺嘌呤配制成的溶液；2#保养液是含有0.01 1.0%戊二醛的1#保养液溶液；固定液是0.01 12. 6%的醛类化合物水溶液。其中，步骤B用2#保养液置于离心机中分离纯化是置于离心机中洗涤2 4次。步骤C所述的固定，固定温度在10 25°C之间，其中10 20°C时固定时间在2小时以上，而21 25°C时固定时间在2小时之内。固定液是0.01 12. 6%的醛类化合物水溶液中所述醛类包含甲醛、多聚甲醛、乙二醛、戊二醛、苯甲醛。最佳固定液是以I 10毫升的30% 50%的戊二醛置于10% 30%的枸橼酸的金属盐溶液中，配制成0. 9% I. 2%的戊二醛枸橼酸金酸盐溶液。一种如上所述的一种白细胞的洗脱及固定方法所使用的专用过滤器，其特征在于该过滤器为漏斗式的细胞双层滤器，其过滤层为玻璃纤维滤膜。本发明与背景技术比较所具有的有益效果是由于采用上述技术方案，将血站废弃的传染学指标为阴性的白细胞充分利用，既对资源做到了合理利用，又与血细胞分析仪的检测标本做到制备介质一致，降低基质效应。主要应用于血液学质控中，可以单独作为白细胞质控，也可添加到其他血液成分中做为全血质控，经过大量实验证实本发明简单可行，所得白细胞质控稳定性良好，可以大量制备。由于取材简便，更适宜大量应用。与其他用粒子或动物血细胞替代处理的白细胞固定方法简便，成本低廉，更适合国情需要。


图I是本发明专用过滤器的结构示意图。
具体实施例方式实施例I :一种血站阴性滤除白细胞的洗脱和固定方法，其特征在于该方法的步骤是A、将血站采集后的全血经白细胞滤器过滤后，滤器中粘附在滤纸上的白细胞用1#保养液将其洗脱下来，并用过滤器过滤洗脱下来的白细胞；B、将白细胞加入2#保养液置于离心机中中洗涤2次，2#保养液白细胞的体积比=2 I ;C、将纯化的白细胞中加入固定液固定，固定液白细胞的体积比=I 30，固定温度10 20°C，固定时间在2小时以上；D、将固定后的白细胞根据使用需要调节浓度，或是作为单项指标测试的质控品使用，或是将其加入含有其他指标的质控品使用；其中，1#保养液是在50毫升磷酸盐缓冲溶液中加入2. Ig枸橼酸钠、0. 2g枸橼酸、I. Og多聚葡萄糖、0. 02腺嘌呤配制成的溶液；2#保养液是含有0.01%戊二醛的1#保养液溶液；固定液是0.01%的甲醛化合物水溶液。参考图1，上述一种白细胞的洗脱及固定方法所使用的专用过滤器，其特征在于该过滤器为漏斗式的细胞双层滤器，其过滤层为玻璃纤维滤膜。实施例2 :—种血站阴性滤除白细胞的洗脱和固定方法，其特征在于该方法的步骤是A、将血站采集后的全血经白细胞滤器过滤后，滤器中粘附在滤纸上的白细胞用1#保 养液将其洗脱下来，并用过滤器过滤洗脱下来的白细胞；B、将白细胞加入2#保养液置于离心机中中洗涤3次，2#保养液白细胞的体积比=3 I ;C、将纯化的白细胞中加入固定液固定，固定液白细胞的体积比=1 50，固定温度21 25°C，固定时间在2小时以内；D、将固定后的白细胞根据使用需要调节浓度，或是作为单项指标测试的质控品使用，或是将其加入含有其他指标的质控品使用；其中，1#保养液是在70毫升磷酸盐缓冲溶液中加入2. 5g枸橼酸钠、0. 3g枸橼酸、2. 5g多聚葡萄糖、0. Ig腺嘌呤配制成的溶液；2#保养液是含有0. 18%戊二醛的1#保养液溶液；固定液是3%的多聚甲醛化合物水溶液。参考图1，上述一种白细胞的洗脱及固定方法所使用的专用过滤器，其特征在于该过滤器为漏斗式的细胞双层滤器，其过滤层为玻璃纤维滤膜。实施例3 :—种血站阴性滤除白细胞的洗脱和固定方法，其特征在于该方法的步骤是A、将血站采集后的全血经白细胞滤器过滤后，滤器中粘附在滤纸上的白细胞用1#保养液将其洗脱下来，并用过滤器过滤洗脱下来的白细胞；B、将白细胞加入2#保养液置于离心机中中洗涤4次，2#保养液白细胞的体积比=4 I ;C、将纯化的白细胞中加入固定液固定，固定液白细胞的体积比=1 70，固定温度21 25°C，固定时间在2小时以内；D、将固定后的白细胞根据使用需要调节浓度，或是作为单项指标测试的质控品使用，或是将其加入含有其他指标的质控品使用；其中，1#保养液是在85毫升磷酸盐缓冲溶液中加入2. 7g枸橼酸钠、0. 4g枸橼酸、3. 5g多聚葡萄糖、0. 2g腺嘌呤配制成的溶液；2#保养液是含有0.58%戊二醛的1#保养液溶液；固定液是7%的苯甲醛化合物水溶液。参考图1，上述一种白细胞的洗脱及固定方法所使用的专用过滤器，其特征在于该过滤器为漏斗式的细胞双层滤器，其过滤层为玻璃纤维滤膜。实施例4:一种血站阴性滤除白细胞的洗脱和固定方法，其特征在于该方法的步骤是A、将血站采集后的全血经白细胞滤器过滤后，滤器中粘附在滤纸上的白细胞用1#保养液将其洗脱下来，并用过滤器过滤洗脱下来的白细胞；B、将白细胞加入2#保养液置于离心机中中洗涤4次，2#保养液白细胞的体积比=5 I ;C、将纯化的白细胞中加入固定液固定，固定液白细胞的体积比=1 80，固定温度21 25°C，固定时间在2小时以内；D、将固定后的白细胞根据使用需要调节浓度，或是作为单项指标测试的质控品使用，或是将其加入含有其他指标的质控品使用；其中，1#保养液是在100毫升磷酸盐缓冲溶液中加入
2.9g枸橼酸钠、0. 5g枸橼酸、4. 3g多聚葡萄糖、0. 3g腺嘌呤配制成的溶液；2#保养液是含有1.0%戊二醛的1#保养液溶液；固定液是12. 6%的戊二醛化合物水溶液。参考图1，上述一种白细胞的洗脱及固定方法所使用的专用过滤器，其特征在于该过滤器为漏斗式的细胞双层滤器，其过滤层为玻璃纤维滤膜。实施例5 :—种血站阴性滤除白细胞的洗脱和固定方法，其特征在于该方法的步骤是A、将血站采集后的全血经白细胞滤器过滤后，滤器中粘附在滤纸上的白细胞用1#保养液将其洗脱下来，并用过滤器过滤洗脱下来的白细胞；B、将白细胞加入2#保养液置于离心机中中洗涤4次，2#保养液白细胞的体积比=5 I ;C、将纯化的白细胞中加入固定液固定，固定液白细胞的体积比=1 80，固定温度21 25°C，固定时间在2小时以内；D、将固定后的白细胞根据使用需要调节浓度，或是作为单项指标测试的质控品使用，或是将 其加入含有其他指标的质控品使用；其中，1#保养液是在100毫升磷酸盐缓冲溶液中加入
2.9g枸橼酸钠、0. 5g枸橼酸、4. 3g多聚葡萄糖、0. 3g腺嘌呤配制成的溶液；2#保养液是含有1.0%戊二醛的1#保养液溶液；固定液是以5毫升的40%的戊二醛置于20%的枸橼酸的金属盐溶液中，配制成1.0%的戊二醛枸橼酸金酸盐溶液。参考图1，上述一种白细胞的洗脱及固定方法所使用的专用过滤器，其特征在于该过滤器为漏斗式的细胞双层滤器，其过滤层为玻璃纤维滤膜。
权利要求
1.一种血站阴性滤除白细胞的洗脱和固定方法，其特征在于该方法的步骤是:A、将血站采集后的全血经白细胞滤器过滤后，滤器中粘附在滤纸上的白细胞用IM呆养液将其洗脱下来，并用过滤器过滤洗脱下来的白细胞；B、将白细胞加入2#保养液置于离心机中分离纯化，2#保养液白细胞的体积比=2 5 : I ;C、将纯化的白细胞中加入固定液固定，固定液白细胞的体积比=I 30 80 ;D、将固定后的白细胞根据使用需要调节浓度，或是作为单项指标测试的质控品使用，或是将其加入含有其他指标的质控品使用；其中，IM呆养液是在50 100毫升磷酸盐缓冲溶液中加入2. I 2. 9g枸橼酸钠、0. 2 0. 5g枸橼酸、I. 0 4. 3g多聚葡萄糖、0. 02 0. 3g腺嘌呤配制成的溶液;2#保养液是含有0. 01 I.0%戊二醛的1#保养液溶液；固定液是0. 01 12. 6%的醛类化合物水溶液。
2.根据权利要求I所述的一种白细胞的洗脱及固定方法，其特征在于步骤B用2#保养液置于离心机中分离纯化是置于离心机中洗涤2 4次。
3.根据权利要求I或2所述的一种白细胞的洗脱及固定方法，其特征在于步骤C所述的固定，固定温度在10 25°C之间，其中10 20°C时固定时间在2小时以上，而21 25°C时固定时间在2小时之内。
4.根据权利要求I或2所述的一种白细胞的洗脱及固定方法，其特征在于固定液是0.01 12.6%的醛类化合物水溶液中所述醛类包含甲醛、多聚甲醛、乙二醛、戊二醛、苯甲醛。
5.根据权利要求3所述的一种白细胞的洗脱及固定方法，其特征在于固定液是0.01 12. 6%的醛类化合物水溶液中所述醛类包含甲醛、多聚甲醛、乙二醛、戊二醛、苯甲醛。
6.根据权利要求I或2所述的一种白细胞的洗脱及固定方法，其特征在于最佳固定液是以I 10毫升的30% 50%的戊二醛置于10% 30%的枸橼酸的金属盐溶液中，配制成0. 9% I. 2%的戊二醛枸橼酸金酸盐溶液。
7.根据权利要求3所述的一种白细胞的洗脱及固定方法，其特征在于最佳固定液是以I 10毫升的30% 50%的戊二醛置于10% 30%的枸橼酸的金属盐溶液中，配制成0.9% I. 2%的戊二醛枸橼酸金酸盐溶液。
8.根据权利要求4所述的一种白细胞的洗脱及固定方法，其特征在于最佳固定液是以I 10毫升的30% 50%的戊二醛置于10% 30%的枸橼酸的金属盐溶液中，配制成0.9% I. 2%的戊二醛枸橼酸金酸盐溶液。
9.一种如根据权利要求I所述的一种白细胞的洗脱及固定方法所使用的专用过滤器，其特征在于该过滤器为漏斗式的细胞双层滤器，其过滤层为玻璃纤维滤膜。
全文摘要
本发明涉及一种血站阴性滤除白细胞的洗脱和固定方法及专用过滤器。所要解决的问题就是背景技术存在的白细胞质控品为微粒或动物细胞替代，价格昂贵，易产生基质效应，工艺复杂；血站废弃的白细胞尚无利用方法的问题。其技术方案要点是A、将血站采集后的全血经白细胞滤器过滤后，滤器中粘附在滤纸上的白细胞用1#保养液将其洗脱下来，并用过滤器过滤洗；B、将白细胞加入2#保养液置于离心机中分离纯化，2#保养液∶白细胞的体积比＝2～5∶1；C、将纯化的白细胞中加入固定液固定，固定液∶白细胞的体积比＝1∶30-80；D、将固定后的白细胞根据使用需要调节浓度。可应用于从血站阴性滤除白细胞中制取白细胞质控品，方法简便，成本低廉。
文档编号G01N1/28GK102749238SQ20121023733
公开日2012年10月24日 申请日期2012年7月4日 优先权日2012年7月4日
发明者张国联, 李宛泽 申请人:烟台卓越生物技术有限责任公司