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专利名称：存储寿命长的高性能电泳凝胶的制作方法
技术领域：
本发明涉及聚丙烯酰胺电泳和用于此类电泳的聚丙烯酰胺凝胶电泳。2.现有技术聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)之所以在研究和诊断以及生物化学实验领域被广泛应用，主要是因为聚丙烯酰胺凝胶的透光性和电中性，还因其对凝胶分离物质分子量广谱的灵活性和适应性。这种灵活性来自制造者控制凝胶孔隙度的能力，这种控制是通过改变丙烯酰胺单体的浓度和双丙烯酰胺交联剂与丙烯酰胺单体之比。PAGE尤其适合十二烷基硫酸钠(SDS)存在下的蛋白质分离，其中，SDS可以含于凝胶中，也可以含于电泳缓冲液中。 常用缓冲剂是三羟甲基氨基甲烷(〃 Tris")和二(2-羟乙基)氨基-三羟甲基甲烷(〃 双-Tris")。知名蛋白质分离用聚丙烯酰胺凝胶之一是最早Laemmli所述的凝胶(U.K.， 自然(Nature) 227 :680 (1970))，它含有Tris-HCl缓冲液，ρΗ8· 8。然而，ρΗ如此之高的凝胶易随时间而水解，即便冷藏亦是如此。水解会造成凝胶内各蛋白质迁移距离缩短，蛋白质条带分辨率降低。如果为了避免水解而降低ΡΗ，则会对凝胶内分离蛋白质分辨率的锐利度造成一定程度的损失，并且，常常还会丧失有效分析蛋白质化合物的能力。解决这一问题的方法之一是在凝胶中加三乙醇胺，如本申请人的同时在审美国专利申请12/552，104(申请日2009年9月1日)所述。本发明则提供另一种方法。

发明内容
目前发现即便长期储存也能抗水解，并且能在电泳条件下将蛋白质分离和拆分为清晰条带的聚丙烯酰胺凝胶是含有两性电解质的那些，所述两性电解质为牛磺酸、天冬酰胺或牛磺酸与天冬酰胺的混合物。还发现含牛磺酸、天冬酰胺或上述两者的预混成凝胶溶液可长期储存，然后加入聚合催化剂形成凝胶，所得凝胶上的蛋白质分离其分辨率没有明显下降，尽管所述溶液经历了长期储存。所述预混溶液含有单体和交联剂，以及可选的用于形成产物凝胶的缓冲剂及其它组分，但是，该溶液不含任何聚合催化剂。此外，不论是经储存的凝胶还是经储存的预混成凝胶溶液都都含有电泳凝胶常用的缓冲液，主要的例子是Tris和双-Tris缓冲液。本发明某些凝胶和预混溶液中还含有一种常规两性电解质， 例如甘氨酸和tricine(N-三(羟甲基)甲基甘氨酸)，与牛磺酸或天冬酰胺构成联合两性电解质。某些实施方式中还包含可选的其它组分，诸如稳定剂、PH调节剂、条带锐化剂和其它缓冲剂。当预成形和储存备用时，本发明凝胶的优点之一是存储寿命长，即能够抵抗储存期间的水解作用。本发明凝胶的优点还包括，与其它组成的凝胶相比，蛋白质拆分带更锐
5利，不论凝胶在用前是否经历储存，是否用经储存的溶液制备，还是当天即配即用或即制即用。本发明的优点还在于本发明凝胶在近中性PH锐利拆分蛋白质的能力。本发明的优点还在于本发明凝胶在高电压下锐利拆分蛋白质的能力和相应缩短分离时间的能力。本发明凝胶尤其适合高浓度均勻(非梯度)凝胶和最高浓度较高的梯度凝胶。发明人所谓“本发明凝胶在长期储存中能抗水解”或“预混成凝胶溶液经长期储存后能够制成抗水解凝胶”是指，如后文所示，尽管经历储存，所得凝胶保留了提供分析用蛋白质电泳分离的能力。体现本发明优点的存储期超过1天，优选3天或以上，更优选7天或以上，更优选1个月或以上，更优选6个月或以上，甚至可长达一年。储存条件一如预成形电泳凝胶储存常用的那样。这通常包括10°C以下冷藏，或约1-10°C冷藏，通常为4°C左右冷藏。本发明适用于任何尺寸和形状的凝胶，包括管状和板状凝胶，以及积层凝胶与拆分凝胶的组合。以下将详细阐述本发明的上述及其它特征、目的和优点。
具体实施例方式本发明聚丙烯酰胺凝胶是按照本领域熟知的方法，由丙烯酰胺单体和丙烯酰胺交联剂在聚合催化剂存在下聚合而成的。“丙烯酰胺交联剂”指这样一种分子，其在丙烯酰胺单体聚合过程中与丙烯酰胺单体反应从而形成交联。可采用本领域已知的丙烯酰胺交联剂，广泛使用的知名丙烯酰胺交联剂之一是N，N'-亚甲基-双丙烯酰胺，亦称“双丙烯酰胺”或简称为“bis. ”。其它丙烯酰胺交联剂有二丙烯酸乙二醇酯(ED)、二烯丙基酒石酸二酰胺(DATD)和二羟基亚乙基双丙烯酰胺(DHEBA)。本发明适合孔隙度范围广泛的多种聚丙烯酰胺凝胶，然而，如前所述，特别适用于高浓度因而低孔隙度的凝胶或具有多个不同高浓度区域的凝胶(例如梯度凝胶)。根据本领域常规用途，全部单体(即丙烯酰胺加交联剂)的总浓度以重量百分比表示，并以符号T 指代，交联剂与单体总量之比也以重量百分比表示，并以符号C指代。T值和C值对本发明来说至关重要，但在大多数应用中，T的范围约为4%至25%，优选约8%至约15%，C的范围约为2%至10%，优选约2. 5%至约5%。本发明优选的高浓度凝胶中，T的范围约为12% 至20%。对于均勻浓度凝胶来说，T值优选约15%至约18%，对梯度凝胶来说，T值的上限优选约15%至约25%，最优约20%。对梯度凝胶来说，T值通常有由一最低浓度(约4%) 升至一最高浓度(约12%至约20%)。常见的例子中，梯度凝胶的T值由4%升至12%，或由4%升至15%，或由4%升至20%，同时，优选C值如前所述。促进所述单体聚合形成凝胶的本领域已知催化剂有例如过硫酸铵(APS)，N，N'-四亚甲基乙二胺(TEMED)，核黄素和 β - 二甲氨基丙腈，它们都按催化有效量使用，各自的催化有效量对本领域技术人员来说是显而易见的。典型的催化剂浓度之一是每毫升(mL)凝胶溶液0. 3-3. 0 μ g，而常见的例子之一是APS加TEMED组合，各自的浓度在该范围内。如前所述，如果是制成凝胶前需长期储存的预混溶液，加入一种或多种催化剂的时间点为适用者即将制作凝胶的时候，通常是临近凝胶使用之前或在使用当天。凝胶和预混溶液中牛磺酸或天冬酰胺的浓度没有限定，但多数情况下，浓度约 100-300mM、优选约150_250mM时可获得最佳结果。牛磺酸与天冬酰胺之间，优选的是牛磺酸。如有甘氨酸或Tricine，其浓度也没有限定，但多数情况下，甘氨酸或Tricine浓度约为50-200mM、优选约100-150mM时可获得最佳结果。牛磺酸(或天冬酰胺)与甘氨酸(或 Tricine)浓度之比以大于1.0为佳，最好约为1. 25至2. 0。同样，Tris或双-Tris的浓度也没有限定，但多数情况下，约50mM至约200mM可获得最佳结果。典型的现有技术聚丙烯酰胺凝胶制备物中，单体溶液的PH可用合适的酸调节到所需范围，此类酸的例子有盐酸、 硫酸、乙酸、硼酸、磷酸和羟基乙酸。根据需要，可将PH调至6. 4-9.0。优选中性范围例如 6. 4-7.0的pH。现在认为，本发明的最佳实施方式是含有75mM 1Tris-HCldOOmM牛磺酸、 125mM甘氨酸、23mM HCl和各类单体T值为4_12、4_15%或4-20% T、C = 2. 6%的梯度凝胶。某些实施方式中，用于形成凝胶的溶液和用到预混溶液的本发明实施方式中的预混溶液还包含一种弱酸或两种或更多种弱酸的组合。所述弱酸的例子有柠檬酸、马来酸、磷酸、乙酸和硼酸。优选柠檬酸和马来酸，最好是柠檬酸。如果存在弱酸，其浓度优选约 0. 01mol/L(10mM)至约 0. 50mol/L(500mM)，最优约为 0. 01mol/L(IOmM)至约 0. 05mol/ L(50mM)。还可以加入中性盐来进一步提高条带分辨率，尤其是在长期储存之后。合适的盐有例如氯化钠、硫酸钠、磷酸钠、氯化钾和磷酸钾。如果含盐，其浓度优选约0. Olmol/ L(IOmM)至约 0. 50mol/L(500mM)，最优约 0. 01mol/L (IOmM)至约 0. 05mol/L (50mM)。本发明凝胶用于电泳分离，方式与常规电泳凝胶的相同。将样品上样到成形凝胶上，施加跨凝胶的电势差，由此引起蛋白质穿越凝胶的迁移，迁移速度与蛋白质质量、电荷或上述两者相关，由此，根据各自不同的迁移速度，蛋白质分离为位于凝胶内迁移路径上不同位置的条带。如前所述，本发明优点之一是凝胶能够在高电压下运行，并因此缩短了运行时间，然而却不降低分辨率。有效电压差约为每厘米(cm)凝胶长度35至75伏特，优选每厘米约40-50伏特。实施例1本实施例展示的是用Tris-HCl和不同浓度牛磺酸制备的本发明聚丙烯酰胺凝胶的性能，全部凝胶都于4°C储存72小时后用于电泳分离。采用标准蛋白质混合物，含肌球蛋白、β -半乳糖苷酶、牛血清白蛋白、卵白蛋白、 碳酸酐酶、大豆胰蛋白酶抑制剂、溶菌酶和抑肽酶。所用样品缓冲液含62. 5mM Tris-HCl, 2%十二烷基硫酸钠、25%甘油和0.01%溴酚蓝，pH 6.8，所用电泳缓冲液含25福Tris, 192mM甘氨酸和0. 十二烷基硫酸钠、pH 8. 3。进行200V的恒压电泳分离。除非另作说明，所有百分比均为重量百分比。在板式凝胶电泳盒中，用10%丙烯酰胺/双丙烯酰胺水溶液(T = 10% )浇铸一系列聚丙烯酰胺凝胶，溶液中双丙烯酰胺占单体混合物的2. 6% (C = 2.6%)。浇铸溶液中还含有 150mM Tris-HCl 和浓度分别为 20mM、40mM、80mM、150mM、160mM、200mM和 250mM 的牛磺酸。该盒制作的凝胶为8cmX8cm，凝胶厚度为1mm。浇铸后，立即将凝胶于4°C保存一个周末(即72小时左右)。然后在每块凝胶上，在10根平行泳道中进行蛋白质混合物的电泳，电泳在MINI-PROTEAN III电泳槽上进行，采用标准Tris-甘氨酸SDS (十二烷基硫酸钠)电泳缓冲液，200V恒压，电泳时间为33至50分钟。结果如下20mM牛磺酸凝胶第50分钟时，蛋白质分布正常，仅高分子量蛋白质没有形成锐利条带；40mM牛磺酸凝胶染料前沿在第25分钟开始扭曲，至48分钟时，染料前沿是直的，不扭曲，但高分子量蛋白质没有形成锐利条带；SOmM牛磺酸凝胶染料前沿在前38分钟是直的，高分子量蛋白质条带比较明显， 但仍然宽且不集中；150mM牛磺酸凝胶第38分钟时，染料前沿呈波浪状，高分子量蛋白质条带比SOmM 牛磺酸凝胶中更清晰，但仍不够集中；160mM牛磺酸凝胶第38分钟时，染料前沿呈波浪状，结果与150mM牛磺酸凝胶中的相似；200mM牛磺酸凝胶第33分钟时，染料前沿和蛋白质分布正常；高分子量蛋白质条带更锐利、更明显；250mM牛磺酸凝胶第38分钟时，蛋白质分布扭曲，高分子量蛋白质不如200mM凝胶锐利；以上结果提示虽然区别凝胶表现都合格，但200mM凝胶的全部范围内各分子量蛋白质条带最清晰，染料前沿扭曲最小。实施例2本实施例是本发明聚丙烯酰胺凝胶存储寿命的加速测试。如实施例1所述，在板式凝胶电泳盒中用τ = 10%,C = 2. 6%的丙烯酰胺/双丙烯酰胺水性溶液浇铸相同尺寸的凝胶。三份凝胶含75mM Tris-HCl和200mM牛磺酸，pH 6. 5 ；另三份凝胶含75mM Tris-HCl, 83mM天冬酰胺和300mM甘氨酸，pH 6. 5。两种凝胶中各取一块立即使用，其余则于37°C保存不同时间后使用(37°C—天相对于4°C典型温度的一个月)。Tris-牛磺酸凝胶分别保存 14天和18天，Tris-天冬酰胺-甘氨酸凝胶分别保存8天和15天。如实施例1所述，在所有凝胶上进行标准蛋白质混合物的电泳。所有情况下，凝胶均提供了可接受蛋白质分布，这提示凝胶在储存期间保持稳定。实施例3本实施例显示本发明凝胶在200V以上不同电泳电压下的不同效果。按照实施例1 和2，用T = 10%和C = 2.6%含150mM iTris-HCl和200mM牛磺酸、pH 6.5的丙烯酰胺/双丙烯酰胺水溶液在板式凝胶电泳盒中浇铸8cmX8cmX Imm的凝胶。全部凝胶都是在将组分混好后立即浇铸。将两种复杂蛋白质混合物上样到各凝胶，一份来自大豆提取物，另一份来自大鼠肝脏，另外还有4份标准品，各含不同染料标记的人造蛋白质的混合物，这些蛋白质混合物所跨的电泳迁移率范围覆盖了所述大豆提取物和大鼠肝脏样品中蛋白质的迁移率范围。标准品来自Bio-Rad实验室(赫拉克勒斯，加利福尼亚，美国)(Bio-Rad Laboratories, Inc. (Hercules, California, USA)),通用商品名为“超准蛋白”(“Precision Plus Protein")标准品。加了相同样品的相同凝胶在MINI-PROTEAN III电泳槽和TETRA电泳槽中电泳。分别用以下电压进行分离200V (25V/cm凝胶长度)、300V (37. 5V/cm凝胶长度)、 350V (43. 75V/cm凝胶长度)和400V (50V/cm凝胶长度)。每次的电泳时间以及内腔(上缓冲液腔)和外腔(下缓冲液腔)的最终温度如表I所示。表 I变压测试结果最终温度
电压电泳时间内腔温度外腔温度200V32分钟34 0C29 "C3 OOV22分钟47 36 0C350V16分钟52 0C4VC400V9分钟60 0C35.6V400V电泳凝胶的图像显示移动较快的条带不如较低电压下凝胶上的相应条带锐利，各中心泳道上条带的弯曲比各外围泳道明显。但是，各凝胶上，蛋白质条带都清楚的彼此分开，可以识别，而且，所有凝胶上的条带分布情况基本一致。这些结果提示提高电压可缩短分离时间，但不明显降低分辨率，也不会令缓冲液的温度升得过高而破坏凝胶或干扰分离。实施例4本实施例显示加聚合催化剂之前经长期储存的不同成凝胶预混溶液的效果。预混溶液都是丙烯酰胺/双丙烯酰胺的水溶液，T = 10%, C = 2. 6%，并含有150mM Tris-HCl 和200mM牛磺酸，pH 6.5。配好后立即将它们在加速老化实验条件下存放不同时期，该实验采用37°C作为储存温度，而不是通常的4°C。各溶液存放了各指定时间后，将2. 0μ L TEMED 和0. 5mg APS加入1毫升各溶液，将所得溶液浇铸成8cmX 8cmX Imm的凝胶。在凝胶上加大豆提取物样品和大鼠肝脏样品，还有三份“超准蛋白”标准品样品，在TETRA电泳槽中进行200V电泳。在预混溶液储存期的第0天浇铸两块相同凝胶并走电泳，另四块在37°C存放6天后(相对于4°C存放6个月)走电泳，还有两块在37°C存放13天后(相对于4°C存放13个月)。结果都是条带清晰，目测可分辨，只是，储存13天后浇铸的凝胶上的条带不如储存第0天和6天后浇铸的深和锐利。比较实施例本实施例将含丝氨酸作为联合两性电解质的凝胶与含牛磺酸作为联合两性电解质的凝胶进行了性能比较。前者不属于本发明，后者属于本发明。凝胶组成如下表II所示。除此之外，两种凝胶与前述实施例中的相同，并且都是当日(6小时之内)配制、浇铸和使用。表II比较实验中的凝胶组成本发明凝胶含丝氨酸凝胶
丙烯酰胺/双丙烯酰胺丙烯酰胺/双丙烯酰胺 T= 10%, C=2.6%T= 10%, C=2.6%
75mM Tris75mM Tris
200mM牛磺酸200mM丝氨酸
125mM甘氨酸125mM甘氨酸
37mM HCl37mMHCl
pH: 6.5pH: 6.5将各凝胶之ー置于MINI-PROTEAN III电泳槽中，并将各凝胶之ー置于TETRA电泳 槽中(也是Bio-Rad实验室的产品)。按实施例1所述在全部凝胶上进行标准蛋白混合物 的电泳。比较显示含丝氨酸凝胶上的中部条带不如牛磺酸凝胶上相应条带清晰。在权利要求中，所有“一”都包括复数含义，“包含”或其变体例如“包括”、“含”等 都表示可加入其它可选而未被排除的步骤或元素。说明书中引用的全部专利、专利申请及 其它出版物文献都通过引用納入本发明之中。引用的文献或其它普通现有技术与本说明书 的讲述不一致，倾向于遵从本说明书的教导。这包括某个单词或词组的业内解释与本说明 书对其做出的定义之间的不一致。
权利要求
1.聚丙烯酰胺凝胶，包含交联的聚丙烯酰胺、选自三(羟甲基)氨基甲烷和二(2-羟乙基)氨基-三(羟甲基)甲烷的缓冲剂和选自牛磺酸和天冬酰胺的两性电解质。
2.如权利要求1所述的聚丙烯酰胺凝胶，所述两性电解质是牛磺酸。
3.如权利要求1所述的聚丙烯酰胺凝胶，所述聚丙烯酰胺按重量计约占所述凝胶的 4%至 25%。
4.如权利要求1所述的聚丙烯酰胺凝胶，所述聚丙烯酰胺按重量计约占所述凝胶的 4%至25%，所述丙烯酰胺交联剂按重量计约为所述聚丙烯酰胺的2%至10%，所述两性电解质的浓度约为IOOmM至约300mM，所述凝胶的pH约为6. 4至9. 0。
5.如权利要求1所述的聚丙烯酰胺凝胶，所述聚丙烯酰胺按重量计约占所述凝胶的 8%至15%，所述丙烯酰胺交联剂按重量计约为所述聚丙烯酰胺的2. 5%至5%，所述两性电解质是浓度约150mM至约250mM的牛磺酸，所述凝胶的pH约6. 4至7. 0
6.如权利要求1所述的聚丙烯酰胺凝胶，所述凝胶是梯度凝胶，其具有的聚丙烯酰胺浓度梯度按重量计由最低约4 %升至最高约12 %至约20 %。
7.用于浇铸聚丙烯酰胺电泳凝胶的预混溶液，所述预混溶液包含溶于水中的以下组分(i)丙烯酰胺单体，(ii)丙烯酰胺交联剂，(iii)选自三(羟甲基)氨基甲烷和二(2-羟乙基)氨基-三(羟甲基)甲烷的缓冲剂和(iv)选自牛磺酸和天冬酰胺的两性电解质。
8.如权利要求7所述的预混溶液，所述两性电解质是牛磺酸。
9.如权利要求7所述的预混溶液，所述丙烯酰胺单体和所述丙烯酰胺交联剂之和按重量计约占所述预混溶液的4 %至25 %。
10.如权利要求7所述的预混溶液，所述丙烯酰胺单体和所述丙烯酰胺交联剂之和按重量计约占所述预混溶液的4%至25%。
11.如权利要求7所述的预混溶液，所述丙烯酰胺交联剂按重量计约占所述丙烯酰胺单体和所述丙烯酰胺交联剂之和的2%至10%。
12.如权利要求7所述的预混溶液，所述两性电解质的浓度约为IOOmM至约300mM.
13.如权利要求7所述的预混溶液，所述丙烯酰胺单体与所述丙烯酰胺交联剂之和按重量计约占所述预混溶液的4 %至25 %，所述丙烯酰胺交联剂按重量计约占所述丙烯酰胺单体与所述丙烯酰胺交联剂之和的2 %至10 %，所述两性电解质的浓度约为IOOmM至 300mM,所述预混溶液的pH约为6. 4至约9. 0。
14.如权利要求7所述的预混溶液，所述丙烯酰胺单体与所述丙烯酰胺交联剂之和按重量计约占所述预混溶液的8 %至约15 %，所述丙烯酰胺交联剂按重量计约占所述丙烯酰胺单体与所述丙烯酰胺交联剂之和的2. 5%至5 %，所述两性电解质是浓度约150mM至 250mM的牛磺酸，所述预混溶液的pH约为6. 4至7. 0。
15.如权利要求7所述的预混溶液，所述丙烯酰胺交联剂是双丙烯酰胺。
16.一种形成聚丙烯酰胺电泳凝胶的方法，所述方法包括(a)将包含溶于水中的以下组分的预混溶液储存超过M小时，(i)丙烯酰胺单体，( )丙烯酰胺交联剂，(iii)选自三(羟甲基)氨基甲烷和二 O-羟乙基)氨基-三(羟甲基)甲烷的缓冲剂，和(iv)选自牛磺酸和天冬酰胺的两性电解质；(b)向所述预混溶液加入聚合催化剂引发所述丙烯酰胺与丙烯酰胺交联剂聚合形成交联的聚丙烯酰胺，并由此将所述预混溶液转化为凝胶。
17.如权利要求16所述的方法，所述时间超过7天。
18.如权利要求16所述的方法，所述时间在7天至1年之间。
19.如权利要求16所述的方法，所述时间在1个月至1年之间。
20.如权利要求16所述的方法，所述时间在6个月至1年之间。
21.如权利要求16所述的方法，步骤(a)进行的温度约为1-10°C。
22.如权利要求16所述的方法，所述两性电解质是牛磺酸。
23.如权利要求16所述的方法，所述丙烯酰胺单体与所述丙烯酰胺交联剂之和按重量计约占所述预混溶液的4 %至25 %。
24.如权利要求16所述的方法，所述丙烯酰胺交联剂按重量计约占所述丙烯酰胺单体与所述丙烯酰胺交联剂之和的2%至10%。
25.如权利要求16所述的方法，所述两性电解质在所述预混溶液中的浓度约为IOOmM 至约300mM。
26.如权利要求16所述的方法，所述丙烯酰胺单体与所述丙烯酰胺交联剂之和按重量计约占所述预混溶液的4%至25%，所述丙烯酰胺交联剂按重量计约占所述丙烯酰胺单体与所述丙烯酰胺交联剂之和的2%至10%，所述两性电解质的浓度约为IOOmM至约300mM， 所述预混溶液的PH约为6. 4至约9. 0。
27.如权利要求16所述的方法，所述丙烯酰胺单体与所述丙烯酰胺交联剂之和按重量计约占所述预混溶液的8%至15，所述丙烯酰胺交联剂按重量计约占所述丙烯酰胺单体与所述丙烯酰胺交联剂之和的2. 5%至5%，所述两性电解质是浓度约150mM至约250mM的牛磺酸，所述预混溶液的PH约为6. 4至约7. 0。
28.如权利要求16所述的方法，所述丙烯酰胺单体与所述丙烯酰胺交联剂之和按重量计约占所述预混溶液的4 %至25 %。
29.一种通过电泳分离液体样品中蛋白质的方法，所述方法包括(a)将所述样品上样到含交联聚丙烯酰胺、选自三(羟甲基)氨基甲烷和二(2-羟乙基)氨基-三(羟甲基)甲烷的缓冲剂和选自牛磺酸和天冬酰胺的两性电解质的聚丙烯酰胺凝胶上；(b)施加跨凝胶的电势差，由此引起蛋白质穿越凝胶的迁移，迁移速度与蛋白质的质量、电荷或上述两者相关，由此，根据各自不同的迁移速度分离为凝胶内的各条带。
30.如权利要求四所述的方法，所述两性电解质是牛磺酸。
31.如权利要求四所述的方法，所述聚丙烯酰胺按重量计约占所述凝胶的4%至25%。
32.如权利要求四所述的方法，所述聚丙烯酰胺按重量计约占所述凝胶的4%至25%， 所述丙烯酰胺交联剂按重量计为所述聚丙烯酰胺的约2%至约10%，所述两性电解质的浓度约为IOOmM至约300mM，所述凝胶的pH约6. 4至9. 0。
33.如权利要求四所述的方法，所述聚丙烯酰胺按重量计约占所述凝胶的8%至15，所述丙烯酰胺交联剂按重量计约占所述聚丙烯酰胺的2. 5%至5%，所述两性电解质是浓度约150mM至约250mM的牛磺酸，所述凝胶的pH约为6. 4至约7. 0。
34.如权利要求四所述的方法，所述凝胶是梯度凝胶，其具有的聚丙烯酰胺浓度梯度按重量计由最低约4%升至最高约12%至约20%。
35.如权利要求四所述的方法，所述电势差约为每厘米凝胶35至75伏特。
36.如权利要求四所述的方法，所述电势差约为每厘米凝胶40至50伏特。
全文摘要
本发明制作了用作电泳介质的聚丙烯酰胺凝胶，其具有高分辨率和对储存期间水解作用的高抗性，所述凝胶包含作为两性电解质的牛磺酸、天冬酰胺或上述两者和作为缓冲剂的三(羟甲基)氨基甲烷或二(2-羟乙基)氨基-三羟甲基甲烷，以及其它常规组分。
文档编号G01N27/447GK102292633SQ201080006324
公开日2011年12月21日 申请日期2010年1月26日 优先权日2009年1月27日
发明者C·劳维尔, C·帕纳托尼, S·彼得森 申请人:生物辐射实验室股份有限公司