专利名称：一种基质固相分散提取药物中阴离子及离子色谱检测方法
技术领域：
本发明涉及一种基质固相分散提取药物中阴离子及离子色谱检测方法，属于化学提取及离子色谱检测技术领域。
背景技术：
基质固相分散技术(MSPD,matrix solid-phase dispersion)是美国 Louisiana 州立大学的Barker教授在1989年提出并给予理论解释的一种快速样品处理技术。其优点是浓缩了传统的样品前处理中的样品匀化、组织细胞裂解、提取、净化等过程，不需要进行组织匀浆、沉淀、离心、PH调节和样品转移等操作步骤，避免了样品的损失。它是一种简单高效实用的提取净化方法，适用于各种分子结构和极性农药残留的提取净化，提高了分析速度、减少了试剂用量、适于自动化分析。目前我国植物药发展处于方兴未艾的时期，因此其中化学成分的定性定量分析在植物药研究过程中显得极其重要。各种色谱与质谱的连用技术是目前定性定量分析有机化学成分的主流，王广基等人采用高效液相-离子阱-飞行时间串联质谱仪对中药复杂体系中化学成分的快速筛选与鉴定(公开号CN 101382525A)，为植物药中有机成分分析提供了一种快速简便的方法，但对于植物药中的无机成分分析的报道还很少。植物药由于种类繁多且具有明显的疗效与较低的副作用，因此在临床方面的应用具有历史悠久的特点，然而植物药中的复杂有机、无机化学成分尚未阐明，这便是植物药药效物质基础、质量控制及作用药理研究中的主要瓶颈。目前我国植物药的发展仍处于方兴未艾的时期，因此，化学成分的定性定量分析在植物药研究过程中显得及其重要。各种色谱与质谱的联用技术是目前定性定量分析有机化学成分的主流，王广基等人采用高效液相-离子阱-飞行时间串联质谱仪对中药复杂体系中化学成分的快速筛选与鉴定(公开号CN 101382525A)对药物中有机成分分析提供了一种快速简便的方法，但对于药物中无机成分中的非金属元素分析鲜有报道。公知的基质固相分散技术(MSPD)主要用于农药残留检测(分析化学，2005， 33(9) :1318-1320)，在离子色谱分析测定方面尚未见报道，其主要原理是将吸附填料与样品同时放入研钵研磨，得到半干状态的混合物，然后放干或低温烘干，再装柱，用溶剂淋洗柱子，使待测物与杂质物质分离。赵海香等的专利涉及动物源性食品中磺胺类药物的基质固相分散一高效液相色谱测定方法(公开号CN101241114A)，但其使用的仍为传统的基质固相分散技术。由于传统的MSro技术，因底部吸附剂量少，使用溶剂把待测离子淋洗至溶剂中时，部分杂质离子与有机物同淋洗溶剂一起被洗脱，得到的离子色谱峰峰形紊乱，干扰测定；同时易造成离子色谱柱系统损坏。这些都限制了该方法在离子色谱分析测定中的广泛应用。
三、发明内容
本发明的目的是提供一种基质固相分散提取药物中阴离子及离子色谱检测方法， 将植物药原料与固相萃取剂石墨化碳和SPE碳十八共同研磨混匀后经固相萃取用去离子水淋洗，淋洗液即为含阴离子的提取液。用去离子水稀释淋洗液至所需浓度，并抽取该溶液使用O. 22 μ m的滤膜过滤，所得滤液为待分析液。离子色谱分析仪测试本发明包括以下步骤I.植物药原料中含阴离子液的提取将植物药原料用水清洗后再用去离子水冲洗3 5次，晒干或不超过60°C下烘干至水含量在3-5%，粉碎至粒度为O. 15 O. 25_，放入干燥器中备用。称取上述粒度的植物药原料O. 05g O. 5g与固相萃取剂石墨化碳O. 04 O. 8g 和碳十八O. 3 3g共同研磨混勻3-6min后，自然晾干至水含量在3-5%,得到原料药与固相萃取剂的混合物，取O. 4 O. 5g混合物装入固相萃取柱,在固相萃取柱底部填入O. 02 O. 03g碳十八，由萃取柱的上部加入8 9mL去离子水淋洗混合物原料,在固相萃取柱中进行分离与净化，从小柱的下部收集到的淋洗液即为植物药原料中含阴离子的提取液。用去离子水稀释提取液至所需浓度，并抽取3mL该溶液使用O. 22 μ m的滤膜过滤，所得的滤液为待检测的提取液。所述的固相萃取柱的结构如图I所示，其包括柱管1，筛板2，固相萃取剂与原料药的混合物3，SPE碳十八4。2.无机阴离子组分的同时测定分析(I)离子色谱分析仪测试条件离子色谱仪分离柱250mmX4mm，保护柱50mmX4mm，自动再生抑制器电流24mA ;色谱柱柱温30°C，温控电导检测器池温35°C。本发明中所设定的分析参数进样量为25 μ L (待检测的提取液)，流速为I. 5mL/ min,淋洗液为浓度2. 8mmol/L的碳酸氢钠与浓度为3. 5mmol/L的碳酸钠的混合液。取ImL提取液在上述所设定的参数下按照附图2中的离子色谱分析流程图进行阴离子检测。即淋洗瓶I中的淋洗液通过泵2输送至进样阀3中与待分析的提取液一起输送至保护柱4和分离柱5中，对不同的阴离子进行分离，通过大抑制器降低背景导电，提高灵敏度，并用检测池7，检测器8对阴离子进行检测。(2)结果所测七种无机阴离子 F-、Cr、N02-、Br_、N03-、P043-和 S042—在 O. 4 12mg/ L范围内具有良好的线性关系，检出限为I. 20 5. 00 μ g/L。其加标回收率为70% 98%， 精密度为2. 09% 5. 87%。与公知技术相比的优点I、植物药提取液中阴离子的分离与净化可同时完成。对填料层加以改进，使用双层分散剂(上层为原料药与固相萃取剂的混合物，下层为SPE碳十八)技术提取与净化，即在底部筛板上面放入一定量的吸附剂，避免了淋洗时净化不完全损坏离子色谱分离柱和干扰测定；2.基质固相分散提取7种常见的无机阴离子的离子色谱检测方法在最佳的色谱条件下能准确全面的分析；3.本方法对植物药的种类没有严格的限制。四
图I为固相萃取柱的结构图，图中I为柱管，2为筛板,3为固相萃取剂与原料药的混合物，4为SPE碳十八。图2为无机阴离子的离子色谱分析流程图，图中I为淋洗液，2为泵，3为进样阀，4 为保护柱，5为分离柱,6为抑制器,7为检测池,8为检测器。
五具体实施例方式实施例一I金丝梅原料药中无机阴离子的提取检测将金丝梅原料药用水清洗后再用去离子水冲洗3次，在60°C烘干至水含量为3%， 粉碎机碾至粒度为O. 15-0. 25_，放入干燥器中备用。称取上述粒度的金丝梅原料药O. Ig与石墨化碳O. 8g和SPE碳十八O. 3g共同研磨混勻3min后，自然晾干至水含量为3%,得到原料药与固相萃取剂的混合物,取O. 5g混合物装入固相萃取柱，其底部已填入碳十八O. 02g,由萃取柱的上部加入8mL去离子水淋洗原料，从萃取柱的下部收集淋洗液，得到含阴离子的提取液。用去离子水稀释淋洗液至lOOmL， 并抽取3mL该溶液使用O. 22 μ m的滤膜过滤，所得滤液为待检测的提取液。2、离子色谱检测(I)离子色谱分析仪测试条件用美国戴安公司Dionex ICS1500离子色谱仪,Chromeleon6. O色谱工作站，IonPac AS14分离柱250_X4mm, IonPac AG14保护柱50_X4mm, ASRS-300自动再生抑制器电流 24mA,色谱柱柱温30°C，DS6温控电导检测器检测温度35°C，进样量25 μ L，流速I. 5mL/min, 淋洗液为2. 8mmol/L碳酸氢钠与3. 5mmol/L碳酸钠的混合液。取ImL待分析的提取液在上述所设定的分析参数下按照附图2中的离子色谱分析流程图进行阴离子分析。(2)测定结果所测七种无机阴离子F—、Cl—、NO2' Br—、NO3' PO/—和S042—在O. 4 12mg/L范围内具有良好的线性关系，检出限为2 μ g/L。其加标回收率为80%，精密度为 3%。实施例2 :竹叶兰原料药中无机阴离子的提取与检测I.将原料药烘干至水含量为5%，粉碎至粒度为O. 15-0. 25mm，放入干燥器中备用；称取上述粒度的原料药O. 12g与固相萃取剂石墨化碳O. Ig和SPE碳十八O. 7g，共同研磨混匀6min后，自然晾干，得到原料药与固相萃取剂的混合物，取O. 4g混合物装入固相萃取柱(底部已填入O. 03g碳十八)，由固相萃取柱的上部加入9mL去离子水淋洗原料，从小柱的下部收集淋洗液，得到含阴离子的提取液；用去离子水稀释淋洗液至100m，并抽取3mL 该溶液使用O. 22 μ m的滤膜过滤，所得待检测的提取液。2、离子色谱分析(I)离子色谱分析仪测试条件与例I相同。取ImL提取液在上述所设定的分析参数下按照附图2中的离子色谱分析流程图进行阴离子分析。(2)测定结果所测七种无机阴离子F—、Cl—、NO2' Br—、NO3' PO/—和S042—在O. 4 12mg/L范围内具有良好的线性关系，检出限为5. μ g/L。其加标回收率为91 %，精密度为4. 6%。
权利要求
1.一种基质固相分散提取药物中阴离子及离子色谱检测方法，其特征在于其包括以下步骤D、植物药原料中含阴离子液的提取将植物药原料用水清洗后再用去离子水冲洗3 5次，晒干或不超过60°C下烘干至水含量在3-5%，粉碎至粒度为0. 15 0. 25mm，放入干燥器中备用；称取上述粒度的植物药原料0. 05g 0. 5g与固相萃取剂石墨化碳0. 04 0. 8g和碳十八0. 3 3g共同研磨混勻 3-6min后，自然晾干至水含量在3_5%，得到植物药原料与固相萃取剂的混合物，取0. 4 0.5g混合物装入固相萃取柱,在固相萃取柱底部填入0. 02 0. 03g碳十八，由萃取柱的上部加入8 9mL去离子水淋洗混合物原料，在固相萃取柱中进行分离与净化，从小柱的下部收集到的淋洗液即为植物药原料中含阴离子的提取液，用去离子水稀释提取液至所需浓度，并抽取3mL该溶液使用0. 22 y m的滤膜过滤，所得的滤液为待检测的提取液；所述固相萃取柱的结构包括柱管1，筛板2，固相萃取剂与原料药的混合物3，SPE碳十八4 ；2)、无机阴离子组分的同时测定分析(1)、离子色谱分析仪测试条件离子色谱仪分离柱250mmX 4mm，保护柱50mmX 4mm，自动再生抑制器电流24mA，色谱柱柱温30°C，温控电导检测器池温35°C ;进样量为25ii L，流速为I. 5mL/min，淋洗液为浓度2.8mmol/L的碳酸氢钠与浓度为3. 5mmol/L的碳酸钠的混合液；(2)、测试流程淋洗瓶(I)中的淋洗液通过泵(2)输送至进样阀(3)中与待检测提取液一起输送至保护柱(4)和分离柱(5)中，对不同的阴离子进行分离，通过抑制器(6)降低背景导电，提高灵敏度，并用检测池(7)，检测器(8)对阴离子进行检测。
2.根据权利要求I所述的基质固相分散提取药物中阴离子及离子色谱检测方法，其特征在于所述植物药为金丝梅或竹叶兰。
3.根据权利要求I所述的基质固相分散提取药物中阴离子及离子色谱检测方法，其特征在于所述离子色谱仪为美国戴安公司离子色谱仪。
全文摘要
本发明涉及一种基质固相分散提取药物中阴离子及离子色谱检测方法，将植物药原料与固相萃取剂石墨化碳和SPE碳十八共同研磨混匀后经固相萃�。萌ダ胱铀芟矗芟匆杭次趵胱拥奶崛∫�。用去离子水稀释淋洗液至所需浓度，并抽取该溶液使用0.22μm的滤膜过滤，所得滤液为待检测液。用离子色谱分析仪测试，所测七种无机阴离子F-、Cl-、NO2-、Br-、NO3-、PO43-和SO42-在0.4～12mg/L范围内具有良好的线性关系，检出限为1.20～5.00μg/L，其加标回收率为70％～98％，精密度为2.09％～5.87％。
文档编号G01N30/06GK102590416SQ20121002048
公开日2012年7月18日 申请日期2012年1月30日 优先权日2012年1月30日
发明者刘天成, 张英杰, 杨敏, 杨树科, 王红斌, 胡晓旭, 谭伟, 郭俊明 申请人:云南民族大学
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