专利名称：蛋白质浓度评价方法、分析用具、以及分析装置的制作方法
技术领域：
本公开涉及蛋白质浓度评价方法、分析用具、以及分析装置。
背景技术：
作为简便地测定尿之类的溶解有蛋白质的水溶液试样的蛋白质浓度的方法，已知有将因结合蛋白质而产生颜色转变的PH指示色素作为蛋白质的指示剂利用的方法(专利文献I)。这些蛋白质指示剂本来是颜色随着pH而变化，然而如果将pH维持一定，则可以将颜色的变化与蛋白质的浓度加以关联。作为此种蛋白质指示剂，可以举出四溴酚蓝(TBPB)、或四氯苯 )—3，4，5，6—四溴磺酞。另外，由于一旦pH变化，颜色就会不依赖于蛋白质的浓度地发生变化，因此在使用这些蛋白质指示剂的情况下，为了使PH—定，适当地并用缓冲剂(专利文献I及2)。现有技术文献专利文献专利文献1:日本特开平5— 249122号公报专利文献2 :美国专利3，485，587号
发明内容
发明要解决的问题但是，在尿等试样超过缓冲效果地显示出与给定的pH不同的pH的情况下，仅使用所述蛋白质指示剂得到的蛋白质浓度就会与所述试样中的实际的蛋白质浓度不同，从而会有在疾病等的判定中导致假阳性或假阴性的问题。所以，本公开提供一种蛋白质浓度评价方法，是使用所述蛋白质指示剂来评价(assay)试样中的蛋白质浓度的方法，可以实现精度高的评价。本公开作为一个方式，提供一种蛋白质浓度评价方法，是评价试样的蛋白质浓度的方法，包括对使所述试样与蛋白质指示剂接触后的显色进行光学分析、测定所述试样的pH、以及基于所述光学分析的结果及所述测定出的pH、和蛋白质浓度评价用数据来评价所述试样的蛋白质浓度，所述蛋白质指示剂是发色随着pH及蛋白质浓度而变化的蛋白质指示剂，所述蛋白质浓度评价用数据包含表示与所述测定出的pH对应的所述光学分析结果的评价的方式的信息。本公开作为另一个方式，提供一种分析用具，是在基板上形成有多个试剂层的分析用具，具备含有发色随着PH及蛋白质浓度而变化的蛋白质指示剂的试剂层A、以及含有PH指示剂的试剂层B，所述试剂层A及所述试剂层B含有缓冲剂以形成相同的缓冲条件。
本公开作为另一个方式，提供一种分析装置，其具备对使所述试样与蛋白质指示剂接触后的显色进行光学分析的测定部、测定所述试样的PH的测定部、基于所述光学分析的结果及所述测定出的PH和蛋白质浓度评价用数据来评价所述试样的蛋白质浓度的评价部、以及输出评价后的数据的输出部，所述蛋白质指示剂是发色随着PH及蛋白质浓度而变化的蛋白质指示剂，所述蛋白质浓度评价用数据包含表示与所述测定出的PH对应的所述光学分析结果的评价的方式的信息。根据本公开，在一个或多个实施方式中可以提高使用了蛋白质指示剂的蛋白质浓度评价的精度，在进一步的一个或多个实施方式中，可以抑制假阳性或假阴性的发生。
图1A和图1B分别是一个实施方式中的分析用具10的侧视图及俯视图；图2是表示一个实施方式中的分析装置的构成例的功能框图；图3是表示一个实施方式中的分析装置的其他的构成例的功能框图；图4是表示一个实施方式中的分析装置的动作的一例的流程图；图5是表示一个实施方式中的分析装置的动作的其他的例子的流程图；图6是采用了一个实施方式中的尿分析装置的全自动尿化学分析装置的外观立体图；图7是表示使用难以受到溶液中的蛋白质浓度影响的pH指示剂在各种蛋白质浓度下测定PH的结果的一例的曲线图。符号说明I 基板2试剂层3试剂层4试剂层10分析用具
具体实施例方式尿中所含的蛋白质一般也被称作尿蛋白。已知尿蛋白的浓度在正常个体的情况下，平均约为10 20mg/dL，然而当在肾脏、尿管、膀胱等中有异常时，该浓度就会变化(上升)。所以，就成为这些疾病的指标这一点而言，尿蛋白的测定十分重要。在用于尿蛋白测定等的分析用具中使用的蛋白质指示剂一般来说是也可以作为PH指示剂使用的指示剂，非常容易受到pH的影响。由此，以往在使用此种蛋白质指示剂时经常与用于将PH维持一定的缓冲剂组合使用。但是，根据测定对象试样，也会有超过缓冲效果而使pH变动的情况。如果仅用所述蛋白质指示剂来测定与设想的pH值不同的pH的试样，就会缺乏测定精度，进而可能在疾病的有无等判断中成为假阳性或假阴性的原因。本公开基于如下的见解，即，如果使用所述蛋白质指示剂与测定对象试样接触时的测定对象试样的PH，来适当地修正所述蛋白质指示剂的光学分析结果，就可以提高蛋白质浓度评价的精度，从而可以进一步抑制假阳性或假阴性的发生。即，本公开在一个方式中，提供一种蛋白质浓度评价方法(以下也称作“本公开的评价方法”。)，是评价试样的蛋白质浓度的方法，包括对使所述试样与蛋白质指示剂接触后的显色进行光学分析、测定所述试样的pH、以及基于所述光学分析的结果及所述测定出的PH值和预先制成的蛋白质浓度评价用数据来评价所述试样的蛋白质浓度，所述蛋白质指示剂是发色随着PH及蛋白质浓度变化的蛋白质指示剂，所述蛋白质浓度评价用数据包含与所述测定出的PH值对应的所述光学分析结果的评价方法。[蛋白质指示剂]本说明书中所说的“蛋白质指示剂”是指发色随着pH及蛋白质浓度而变化的指示剂。所述蛋白质指示剂在一个或多个实施方式中是指如下的物质，即，一旦与溶液中的蛋白质接触，就会呈现出颜色转变，从而可以进行所述溶液中的蛋白质的存在的检测和/或浓度的测定。作为所述蛋白质指示剂，已知有很多颜色随着PH的变化而变化的指示剂。在本说明书中，在没有特别提及的情况下，所述蛋白质指示剂是指颜色可以随着PH的变化而变化的指示剂。作为所述蛋白质指示剂，可以使用以往公知的或者今后开发的指示剂，例如可以使用专利文献I等中公开的指示剂，可以举出八齒素磺酞型色素(octahalosulfophthalein-type dye)、八齒素酹酞型色素(octahalophenolphthalein-type dye)、或者它们的组合。更具体来说，作为所述蛋白质指示剂，可以举出选自由四溴酚蓝、四氯酚蓝、3'，3"，5，5" —四碘一3，4，5，6—四溴酚磺酞、3，3" —二碘一5，5"，3，4，5，6—六溴酚磺酞、甲基黄(4一二甲基氨基偶氮苯)及它们的组合构成的组的指示剂。它们当中，从灵敏度和/或精度的观点考虑，优选四溴酚蓝。本公开中，所谓“使试样与蛋白质指示剂接触”例如可以包括将液体试样与所述蛋白质指示剂的溶液混合、将干燥状态的具备含有所述蛋白质指示剂的试剂垫(试剂层)的试剂片(条)浸溃到液体试样中等，然而接触的方式并不限定于这些，可以采取以往公知以及今后开发的方式。本说明书中所说的“进行光学分析”没有特别限制，例如可以举出进行包括使用分光器等基于对象物的透过光或散射光获取关于对象物的信息的分光分析。作为光学分析的结果，例如可以获得所需的波长下的、对象物体的吸光度、透过率、或反射率等。作为一例，可以将如下操作作为光学分析，所述操作即，检测与试样接触了的蛋白质指示剂或PH指示剂的透过光或散射光，根据检出的光，算出蛋白质指示剂或PH指示剂的吸光度、透过率或反射率等表示光学的特征的值。而且，光学分析的方式并不限定于这些。使用了其他的光学的方法和/或分光法的测定也包含于光学分析中。本说明书中所说的“对使试样与蛋白质指示剂接触后的显色进行光学分析”，例如如果所述接触是液体试样与所述蛋白质指示剂溶液的混合，则是指对其混合液进行光学分析，如果所述接触是干燥状态的含有所述蛋白质指示剂的试剂垫(试剂层)浸溃到液体试样中，则是指进行对于浸�：蟮乃鍪约恋娴墓庋Х治觯欢⒉幌薅ㄓ谡庑┓绞剑梢圆扇∫酝姆绞�。另外，本说明书中所说的“显色”，可以包括从无色发出的颜色、以及从其他的颜色转变颜色后的颜色。本说明书中的“试样”是可能含有蛋白质的物质，是指利用本公开的评价方法评价蛋白质浓度的对象，以下也称作“评价对象试样”。本公开的评价方法中，从提高使用了蛋白质指示剂的蛋白质浓度评价的精度的观点考虑，评价对象试样优选为液体，更优选为水性液体。从相同的观点考虑，优选评价对象的蛋白质溶解于所述液体中。
本公开的评价方法中，作为与评价对象试样接触的所述蛋白质指示剂，相对于评价对象试样ImL设为O. Olmg Img是一般的方式,从提高使用了蛋白质指示剂的蛋白质浓度评价的精度以及经济性的观念考虑，优选相对于评价对象试样ImL为O. 02mg O. 5mg。[缓冲剂]在使用了所述蛋白质指示剂的蛋白质浓度的测定方法中，通常为了将pH维持一定，在与评价对象试样混合时经常使用缓冲剂。也可以在本公开的评价方法中的所述蛋白指示剂与评价对象试样的接触时也使用缓冲剂。作为缓冲剂，可以使用与以往相同的材料，可以根据想要维持的PH适当地选择。作为具体例，例如可以举出柠檬酸缓冲剂、富马酸缓冲剂、酒石酸、甘氨酸、以及苹果酸，它们当中，从提高使用了蛋白质指示剂的蛋白质浓度评价的精度的观点考虑，优选苹果酸。作为所述缓冲剂的使用量，相对于评价对象试样ImL设为O. Olmg Img是一般的方式,从提高使用了蛋白质指示剂的蛋白质浓度评价的精度及经济性的观点考虑，优选相对于评价对象试样ImL为O. 02mg O. 5mg。而且，如后所述，从提高使用了蛋白质指示剂的蛋白质浓度评价的精度的观点考虑，评价对象试样的PH测定优选在和所述蛋白指示剂与评价对象试样的接触时的缓冲条件相同的缓冲条件下进行。[pH 测定]本公开的评价方法包括测定评价对象试样的pH。评价对象试样的pH的测定方法没有特别限制，可以采用公知的方法。例如，可以是使用了 PH指示剂的方法，或者也可以是使用了 PH计的方法。从提高使用了蛋白质指示剂的蛋白质浓度评价的精度的观点考虑，所述PH测定优选在和所述蛋白质指示剂与评价对象试样的接触时的缓冲条件相同的缓冲条件下进行。例如，在所述蛋白质指示剂与评价对象试样的接触时添加缓冲剂的情况下，优选在PH测定时添加与评价对象试样中相同的缓冲剂达到相同浓度地。而且，只要没有特别提及，本说明书中的PH就是指25°C的pH。[pH 指示剂]`在使用pH指示剂进行评价对象试样的pH测定的情况下，从提高使用了蛋白质指示剂的蛋白质浓度评价的精度的观点考虑，所述PH指示剂优选为难以受到溶液中的蛋白质浓度影响的PH指示剂。作为此种pH指示剂，虽然不限于此，但优选乙基橙(ethylorange)。使用了 pH指示剂的评价对象试样的pH测定与以往相同，例如可以通过对使评价对象试样与蛋白质指示剂接触后的显色进行光学分析来进行。作为具体的方式，可以与上述的蛋白质指示剂的光学分析相同地进行。作为与评价对象试样接触的所述PH指示剂，相对于评价对象试样ImL设为O. Olmg Img是一般的方式,从提高使用了蛋白质指示剂的蛋白质浓度评价的精度以及经济性的观念考虑，优选相对于评价对象试样ImL为O. 02mg O. 5mg。[蛋白质浓度评价]本说明书中，“蛋白质浓度的评价”，是评价对象试样的蛋白质浓度的评价，例如包括具体地确定评价对象试样的蛋白质浓度(例如评价为，评价对象试样的蛋白质浓度为XX μ g/mL)、确定评价对象试样的蛋白质浓度在某个范围内(例如评价为，评价对象试样的蛋白质浓度为XX yy μ g/mL)、确定评价对象试样的蛋白质浓度是否超过给定的阈值(例如评价为，评价对象试样的蛋白质浓度为阈值χχμ g/mL以上(小于阈值χχμ g/mL))、或者确定评价对象试样的蛋白质浓度与基于给定的基准值设定的阳性和阴性的哪一方相当(例如评价为，评价对象试样为阳性(阴性))，并不限定于这些。对于本公开的评价方法中的“蛋白质浓度的评价”，在一个实施方式中，可以举出基于评价对象试样的PH测定结果根据需要来修正对使评价对象试样与蛋白质指示剂接触后的显色进行光学分析的结果。对所述光学分析的结果的基于所述测定出的PH值的修正可以依照预先使用所述蛋白质指示剂及测试试样制成的蛋白质浓度评价用数据来进行。[蛋白质浓度评价用数据]本说明书中所说的“蛋白质浓度评价用数据”，是包含表示与试样的pH对应的、蛋白质浓度的评价的方式的信息的数据。在评价的方式中，包括评价方法、评价基准。评价方法例如可以用将测定值转换为光学分析的评价值或浓度值的式子或表示其系数的数据来表示。评价基准例如可以利用成为评价的基准的、测定值或表示浓度值的范围或阈值的数据来表示。在蛋白质浓度评价用数据中，包括用于将蛋白质指示剂的光学分析结果、或由该光学分析结果得到的蛋白质浓度的评价基于测定对象溶液的PH加以修正的数据。即，在对因测定对象试样的PH而形成与实际的蛋白质浓度存在误差的显色的蛋白质指示剂的分析结果基于PH加以修正时，可以使用蛋白质浓度评价用数据。作为蛋白质浓度评价用数据的一个实施方式，可以举出对于每个给定的PH范围设定了利用蛋白质指示剂得到的光学分析的结果的校正方法、评价基准等的数据。例如，可以将如下的值包含于蛋白质浓度评价用数据中，即，所述值是将作为光学分析的结果得到的值(例如与试样接触的蛋白质指示剂的吸光度等)转换为所述试样的蛋白质浓度或其评价值时所用的值(例如转换系数等)，并且是针对每个给定的PH范围设定的值。此种蛋白质浓度评价用数据可以预先做好。作为蛋白质浓度评价用数据的实施方式，可以举出如下的数据，S卩，是根据所述光学分析结果算出所述试样的蛋白质浓度时所用的数据，并且与所述试样的PH对应地设定的数据。更具体来说，可以将定义至少使用由所述测定出的PH值及所述光学分析结果构成的2个参数来算出所述试样的蛋白质浓度的方法的数据作为蛋白质浓度评价用数据。作为本实施方式的具体例，可以举出针对每个给定的PH范围来设定对利用蛋白质指示剂得到的蛋白质浓度加以校正的方法(例如校正式)的数据(下述表I)。本实施方式中，可以将校正后的评价对象试样的蛋白质浓度作为评价来输出。而且，下述表I的数值是一个例子，对本公开没有任何的限定。[表 I]
权利要求
1.一种蛋白质浓度评价方法，是评价试样的蛋白质浓度的方法，包括对使所述试样与蛋白质指示剂接触后的显色进行光学分析、测定所述试样的pH、以及基于所述光学分析的结果及所述测定出的PH和蛋白质浓度评价用数据来评价所述试样的蛋白质浓度，所述蛋白质指示剂是发色随着PH及蛋白质浓度而变化的蛋白质指示剂，所述蛋白质浓度评价用数据包含表示与所述测定出的PH对应的所述光学分析结果的评价的方式的信息。
2.如权利要求1所述的蛋白质浓度评价方法，所述试样的pH测定在和所述蛋白质指示剂与试样接触时的缓冲条件相同的缓冲条件下进行。
3.如权利要求1或2所述的蛋白质浓度评价方法，所述蛋白质指示剂是八卤素磺酞型色素、八卤素酚酞型色素、或者它们的组合。
4.如权利要求1至3中任一项所述的蛋白质浓度评价方法，所述蛋白质指示剂选自由四溴酚蓝、四氯酚蓝、3'，3"，5，5" —四碘一3，4，5，6 —四溴酚磺酞、3，3" —二碘一5， 5 "，3，4，5，6—六溴酚磺酞、以及它们的组合构成的组。
5.如权利要求4所述的蛋白质浓度评价方法，所述pH指示剂是乙基橙。
6.如权利要求1至5中任一项所述的蛋白质浓度评价方法，所述蛋白质浓度评价用数据包含如下的数据，所述数据是在根据所述光学分析结果算出所述试样的蛋白质浓度时所用的数据，并且是与所述试样的PH对应地设定的数据。
7.如权利要求1至6中任一项所述的蛋白质浓度评价方法，所述蛋白质浓度评价用数据包含如下的数据，所述数据是在基于所述光学分析结果算出评价值时成为基准的数据， 并且是与所述试样的PH对应地设定的数据。
8.如权利要求1至7中任一项所述的蛋白质浓度评价方法，所述蛋白质浓度评价用数据包含定义所述测定出的PH的正常范围的数据。
9.如权利要求1至8中任一项所述的蛋白质浓度评价方法，试样为尿。
10.一种分析用具，是在基板上形成有多个试剂层的分析用具，具备含有发色随着PH及蛋白质浓度而变化的蛋白质指示剂的试剂层A、以及含有pH指示剂的试剂层B，所述试剂层A及所述试剂层B含有缓冲剂以形成相同的缓冲条件。
11.如权利要求10所述的分析用具，用于进行权利要求1至9中任一项所述的蛋白质浓度评价方法。
12.—种分析装置，具备对使试样与蛋白质指示剂接触后的显色进行光学分析的测定部、测定所述试样的pH的测定部、基于所述光学分析的结果及所述测定出的PH和蛋白质浓度评价用数据来评价所述试样的蛋白质浓度的评价部、以及输出评价后的数据的输出部，所述蛋白质指示剂是发色随着PH及蛋白质浓度而变化的蛋白质指示剂，所述蛋白质浓度评价用数据包含表示与所述测定出的PH对应的所述光学分析结果的评价的方式的信息。
13.如权利要求12所述的分析装置，用于进行权利要求1至9中任一项所述的蛋白质浓度评价方法。
14.如权利要求12或13所述的分析装置，用于使用权利要求10或11所述的分析用具进行分析。
全文摘要
本发明涉及蛋白质浓度评价方法、分析用具、以及分析装置。提供一种使用蛋白质指示剂、可以进行精度高的评价的蛋白质浓度评价方法。本发明的蛋白质浓度评价方法包括对使测定对象试样与蛋白质指示剂接触后的显色进行光学分析、测定测定对象试样的pH、以及基于所述光学分析的结果及所述测定出的pH和蛋白质浓度评价用数据来评价所述试样的蛋白质浓度，所述蛋白质指示剂是发色随着pH及蛋白质浓度而变化的蛋白质指示剂，所述蛋白质浓度评价用数据包含表示与所述测定出的pH对应的所述光学分析结果的评价的方式的信息。
文档编号G01N21/78GK103048315SQ201210406969
公开日2013年4月17日 申请日期2012年10月17日 优先权日2011年10月17日
发明者间岛智史, 中岛真也 申请人:爱科来株式会社
专业数控铣床产品供应商
20年生产经验，实力工厂，精工品质，质量有保障
