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专利名称：一种检测3，4，5-三甲氧基苯酚产品的方法
技术领域：
本发明涉及分析化学领域，更具体的说是涉及一种检测3，4，5_三甲氧基苯酚产品的方法。
背景技术：
灯盏花又名灯盏细辛，系菊科短葶飞蓬的干燥全草，具有活血化瘀、散寒解表、舒筋活络、祛风除湿之功效，主治因风邪、风痰阻于经络、气滞血瘀所致的中风，在临床上已广泛用心脑血管疾病的治疗。灯盏花乙素是其主要活性成分，对高血压、脑溢血、脑血栓形成、 脑栓塞多发性神经炎、慢性蛛网膜炎及其后遗症具有较好疗效，并对风湿、冠心病也有一定疗效，但在体内消除迅速，不适于静脉注射给药，并且口服制剂的生物利用度极低，几乎不吸收。灯盏花乙素在体内会被肠道菌群水解为中间产物灯盏花乙素苷元，灯盏花乙素苷元，又叫野黄芩苷元，分子式为C15HltlO6，相对分子质量为286，化学结构是5，6，7，4'-四羟基黄酮，与灯盏花乙素的区别在于7位是游离的羟基。灯盏花乙素苷元是灯盏花乙素吸收的主要形式，口服容易吸收，与灯盏花乙素相比，其相对生物利用度为301. 18%，然而这种转化率比较低，仍然限制了灯盏花乙素总体利用率。目前，人们多采用化学合成的方法来合成灯盏花乙素苷元及其衍生物。其中，3，4， 5-三甲氧基苯酚是合成灯盏花乙素苷元及其衍生物的关键中间体，其产品含量、结构组成和有关物质含量直接影响到灯盏花乙素苷元的合成效率，然而现在尚未有针对3，4，5_三甲氧基苯酚产品的检测方法，建立该医药中间体的检测方法，能够对3，4，5-三甲氧基苯酚的质量进行准确的评价，从而保障以3，4，5_三甲氧基苯酚产品为起始原料合成灯盏花乙素苷元的质量。

发明内容
有鉴于此，本发明提供一种检测3，4，5-三甲氧基苯酚产品的方法，用以检测3，4， 5-三甲氧基苯酚产品的含量、有关物质含量及其结构组成。为实现上述目的，本发明提供如下技术方案一种检测3，4，5_三甲氧基苯酚产品的方法，包括以下步骤以十八烷基硅烷或八烷基硅烷键合硅胶为填充剂、以有机溶剂和酸性水溶液的混合溶液为流动相，理论板数按3，4，5_三甲氧基苯酚峰计算不低于5000，对供试品溶液进行 HPLC检测，检测波长为250nm-280nm，测定结果用外标法分析；所述混合溶液中有机溶剂和酸性水溶液体积比为10-50 90-50，所述酸性水溶液为百分含量0.05-0. 4%的磷酸或乙酸水溶液，所述有机溶剂为甲醇或乙腈，所述供试品溶液浓度为0. 05mg/ml-0. 3mg/ml。优选地，所述混合溶液中有机溶剂和酸性水溶液体积比为20-50 80-50。优选地，所述混合溶液中有机溶剂和酸性水溶液体积比为35 65。优选地，其特征在于，所述供试品溶液浓度为0. lmg/ml 0. 2mg/ml。
优选地，所述理论板数按3，4，5-三甲氧基苯酚峰计算不低于8000。优选地，所述检测波长为277nm。本发明所述检测方法还包括3，4，5_三甲氧基苯酚有关物质的测定，具体步骤为 取供试品溶液和对照溶液进行HPLC检测，检测时间为3，4，5_三甲氧基苯酚主成分峰保留时间的1.5倍以上，使所述供试品溶液的有关物质峰全部显示；所述对照溶液由测试溶液稀释获得，对照溶液主成分峰高约为记录仪满量程的10%，对比供试品溶液有关物质峰面积和对照溶液主峰面积，得到3，4，5-三甲氧基苯酚有关物质含量。3，4，5-三甲氧基苯酚产品有关物质定义为在3，4，5-三甲氧基苯酚产品中与3，4， 5-三甲氧基苯酚结构相近、并能在HPLC检测中显示杂质峰的物质，包括合成3，4，5_三甲氧基苯酚产品的原料、中间体和副产物。所述取对照溶液和供试品溶液进行HPLC检测的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇和酸性水溶液或乙腈和酸性水溶液的混合溶液。优选地，所述供试品溶液浓度为lmg/ml-;3mg/ml，所述对照溶液浓度为Iyg/ ml-30μ g/ml0优选地，所述供试品溶液浓度为ang/ml，对照溶液浓度为1. 5μ g/ml-20y g/ml。本发明所述检测方法还包括对3，4，5_三甲氧基苯酚产品的红外光谱检测，具体包括取3，4，5_三甲氧基苯酚产品测试溶液进行红外检测，确定红外光谱图具有3270士2、 2962士2、2838士2、1614士2、1486士2、1429士2、1230士2、1219士2、1126士2、1000士2、 991 士2、811 士2、777士2、638士2、521 士2 和 420士2CHT1 波数。经由上述的技术方案可知，本发明所述检测3，4，5-三甲氧基苯酚的方法能够检测产品中3，4，5_三甲氧基苯酚的含量、相关物质含量及其结构组成，该方法的建立能够对 3，4，5_三甲氧基苯酚的质量进行准确的评价，从而保障以3，4，5_三甲氧基苯酚产品为起始原料合成灯盏花乙素苷元的质量。


图1所示为本发明实施例1中3，4，5_三甲氧基苯酚含量检测的色谱图；图2所示为本发明实施例2中3，4，5_三甲氧基苯酚相关物质含量检测的供试溶液色谱图；图3所示为本发明实施例2中3，4，5_三甲氧基苯酚相关物质含量检测的对照溶液色谱图；图4所示为本发明实施例3中3，4，5_三甲氧基苯酚产品的红外光谱图。
具体实施例方式本发明公开了一种检测3，4，5_三甲氧基苯酚产品的方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。依照本发明，所述一种检测3，4，5_三甲氧基苯酚产品的方法，包括以下步骤
以十八烷基硅烷或八烷基硅烷键合硅胶为填充剂、以有机溶剂和酸性水溶液的混合溶液为流动相，理论板数按3，4，5_三甲氧基苯酚峰计算不低于5000，对供试品溶液进行 HPLC检测，检测波长为250nm-280nm，测定结果用外标法分析；所述混合溶液中有机溶剂和酸性水溶液体积比为10-50 90-50，所述酸性水溶液为百分含量0.05-0. 4%的磷酸或乙酸水溶液，所述有机溶剂为甲醇或乙腈，所述供试品溶液浓度为0. 05mg/ml-0. 3mg/ml。优选地，所述混合溶液中有机溶剂和酸性水溶液体积比为20-50 80-50。优选地，所述混合溶液中有机溶剂和酸性水溶液体积比为35 65。优选地，其特征在于，所述供试品溶液浓度为0. lmg/ml 0. 2mg/ml。优选地，所述理论板数按3，4，5-三甲氧基苯酚峰计算不低于8000。优选地，所述检测波长为277nm。本发明所述检测方法还包括3，4，5_三甲氧基苯酚有关物质的测定，具体步骤为 取供试品溶液和对照溶液进行HPLC检测，检测时间为3，4，5_三甲氧基苯酚主成分峰保留时间的1.5倍以上，使所述供试品溶液的有关物质峰全部显示；所述对照溶液由测试溶液稀释获得，对照溶液主成分峰高约为记录仪满量程的10%，对比供试品溶液有关物质峰面积和对照溶液主峰面积，得到3，4，5-三甲氧基苯酚有关物质含量。3，4，5-三甲氧基苯酚产品有关物质定义为在3，4，5-三甲氧基苯酚产品中与3，4， 5-三甲氧基苯酚结构相近、并能在HPLC检测中显示杂质峰的物质，包括合成3，4，5_三甲氧基苯酚产品的原料、中间体和副产物。所述取对照溶液和供试品溶液进行HPLC检测的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇和酸性水溶液或乙腈和酸性水溶液的混合溶液。优选地，所述供试品溶液浓度为lmg/ml-3mg/ml，所述对照溶液浓度为Iyg/ ml-30μ g/ml0优选地，所述供试品溶液浓度为2mg/ml，对照溶液浓度为1. 5 μ g/ml_20 μ g/ml。为避免与3，4，5_三甲氧基苯酚结构相似物质对色谱检测的干扰，本发明所述方法还包括对3，4，5-三甲氧基苯酚产品的红外光谱检测，具体包括取3，4，5-三甲氧基苯酚产品测试溶液进行红外检测，确定红外光谱图具有3270士2、2962士2、2838士2、1614士2、 1486 士 2、1429士2、1230士2、1219士2、1126士2、1000士2、991士2、811士2、777士2、638士2、 521 士 2 禾口 420 士 2CHT1 波数。下面结合实施例，进一步阐述本发明。以下实施例中所用3，4，5_三甲氧基苯酚产品均为市售产品。实施例1 :3，4，5-三甲氧基苯酚的含量检测使用仪器为AgilentllOO高效液相色谱仪，包括G1331A四元梯度泵，G1322A真空脱气机，G1329A自动进样器，G1314紫外检测器，G1329A柱温箱，AgilentllOO化学工作站， 色谱柱为 Apollo C18 250X4. 6mm。用十八硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0. 磷酸水混合溶液为流动相，所述混合液中，按体积比乙腈-0. 磷酸水为35 65，检测波长为277nm，理论板数按3，4，5-三甲氧基苯酚峰计算为8000。取3，4，5_三甲氧基苯酚产品的测试样品，加入甲醇溶解并稀释得到浓度为 0. 2mg/ml的溶液作为供试品溶液，量取所述供试品溶液5 μ 1注入液相色谱仪，记录色谱图，如图1所示，色谱分析结果如表1 :表13，4，5_三甲氧基苯酚测试溶液的色谱分析结果
权利要求
1.一种检测3，4，5_三甲氧基苯酚产品的方法，包括以下步骤以十八烷基硅烷或八烷基硅烷键合硅胶为填充剂、以有机溶剂和酸性水溶液的混合溶液为流动相，理论板数按3，4，5-三甲氧基苯酚峰计算不低于5000，对供试品溶液进行HPLC 检测，检测波长为250nm-280nm，测定结果用外标法分析；所述混合溶液中有机溶剂和酸性水溶液体积比为10-50 90-50，所述酸性水溶液为百分含量0.05-0. 4%的磷酸或乙酸水溶液，所述有机溶剂为甲醇或乙腈，所述供试品溶液浓度为0. 05mg/ml-0. 3mg/ml ；
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述混合溶液中有机溶剂和酸性水溶液体积比为 20-50 80-50。
3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述混合溶液中有机溶剂和酸性水溶液体积比为35 65。
4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述供试品溶液浓度为0.lmg/ml 0. 2mg/ml ο
5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述理论板数按3，4，5_三甲氧基苯酚峰计算不低于8000。
6.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述检测波长为277nm。
7.根据权利要求1所述方法，其特征在于，还包括3，4，5_三甲氧基苯酚有关物质的检测，具体步骤为取供试品溶液和对照溶液进行HPLC检测，检测时间为3，4，5_三甲氧基苯酚主成分峰保留时间的1.5倍以上，使所述供试品溶液的有关物质峰全部显示；所述对照溶液由测试溶液稀释获得，对照溶液主成分峰高约为记录仪满量程的10% ；对比供试品溶液有关物质峰面积和对照溶液主峰面积，得到3，4，5_三甲氧基苯酚有关物质含量。
8.根据权利要求7所述的质量检验方法，其特征在于，所述取对照溶液和供试品溶液进行HPLC检测的固定相为十八烷基硅烷键合硅胶或八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇和酸性水溶液或乙腈和酸性水溶液的混合溶液。
9.根据权利要求7所述方法，其特征在于，所述供试品溶液浓度为lmg/ml-;3mg/ml，所述对照溶液浓度为1 μ g/ml-30 μ g/ml。
10.根据权利要求7所述方法，其特征在于，所述供试品溶液浓度为2mg/ml，对照溶液浓度为 1. 5 μ g/ml-20 μ g/ml。
11.根据权利要求1所述方法，其特征在于，还包括对3，4，5-三甲氧基苯酚产品的红外光谱检测，具体包括取3，4，5-三甲氧基苯酚产品测试溶液进行红外检测，确定红外光谱图具有 3270士2、2962士2、2838士2、1614士2、1486士2、1429士2、1230士2、1219士2、1126士2、 1000士2、991 士2、811 士2、777士2、638士2、521 士2 和 420士2CHT1 波数。
全文摘要
本发明涉及分析化学领域，公开了一种检测3，4，5-三甲氧基苯酚产品的方法，具体包括取3，4，5-三甲氧基苯酚产品测试溶液进行HPLC检测，测定结果用外标法分析得到3，4，5-三甲氧基苯酚的含量。本发明所述方法还包括3，4，5-三甲氧基苯酚有关物质的检测和3，4，5-三甲氧基苯酚产品的红外检测。通过所述检测方法，可以在制备3，4，5-三甲氧基苯酚过程中，对3，4，5-三甲氧基苯酚的质量进行准确的评价，以保证最终得到质量稳定的3，4，5-三甲氧基苯酚。
文档编号G01N30/04GK102346176SQ20101024652
公开日2012年2月8日 申请日期2010年8月3日 优先权日2010年8月3日
发明者张伟, 荣娜娜 申请人:昆明制药集团股份有限公司