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专利名称：用来加速检测HBs抗原的高敏感性的抗-HB的制作方法
技术领域：
本发明涉及生产用来检测HBs抗原的抗-HBs-致敏的动物红血球的方法，特别是涉及生长用来加速检测HBs抗原的高敏感性的抗-HBs-致敏的禽类的红血球的方法。
在许多国家里已开发出抗-HBs-致感的红血球用于能简便检测HBsAg的反向被动血细胞凝聚作用(RPHA)。但是，无一例外，它们都通过结合的人体的O型红血球或带有高纯度抗-HBs蛋白的诸如火鸡、绵羊等动物的红血球而制得。因此，它们不仅需要特殊试剂、仪器及超级实验室用以高免疫抗-HBs血清的高度纯化，而且也有很低的敏感性(3-40ng/ml)以及判断时间长(60-120分钟)。
通过采用本发明的抗-HBs-致敏的禽类红血球的新的生产方法来解决该问题。
在检查使具有高免疫抗-HBs的种种吸着剂敏感的最佳条件期间，业已发现，若禽类的红血球与从山羊得到的高敏感抗-HBs结合，不仅敏感性和特异性可显著地上升，而且判断时间也可缩短至10-20分钟。本发明采用该发现来大量生产抗-HBs-致敏的禽类红血球。
将通过已知方法所得的免疫扩散(ID)的沉淀滴度为14096-116384的来自山羊的高免疫抗-HBs在盐水中稀释以得到免疫扩散沉淀滴度为132-1128。使这样所得的含有抗-HBs的蛋白质溶液在63-65℃的水浴中加热处理30-40分钟，然后用作致敏作用的抗-HBs。将用作致感的含有抗-HBs蛋白质溶液以3∶1比例加至2.5%戊二醛固定的50%禽类红血球中，并马上以3∶1∶1的比例向内加入0.5-1%氯化铬溶液。然后在室温下使其致敏达8-15分钟，接着用盐水洗涤两次，一次在1%正常的含山羊血清的盐水中，接着悬浮在1%正常的含山羊血清的盐水中得到含0.8-1%的致敏的红血球，这样得到抗-HBs-致敏的禽类的红血球。
实施例1ID滴度为14096的高免疫的含抗-HBs的山羊血清在盐水中稀释以得到滴度132-164，然后在63℃下加热处理40分钟。向150ml热变性的高免疫抗-HBs溶液中加入用盐水中的30ml 50%固定的禽类的红血球和30ml 0.5%氯化铬溶液，然后在室温下致敏8分钟，然后用盐水洗涤两次。最后，将其悬浮在1.5升1%正常的含山羊血清的盐水，这样所得的抗-HBs-致敏的禽类红血球能进行60，000例筛选试验。
实施例2ID滴度为1∶8192的高免疫的含抗-HBs的山羊血在盐水中稀释至滴度为1∶64-1∶128，然后在64℃的水浴中加热处理35分钟。向450ml该高免疫的抗-HBs溶液中加入150ml 50%固定的禽类红血球和150ml氯化铬溶液，然后在室温下使其致敏10分钟，用实施例1所示的相同方法洗涤和悬浮后从而得到7.5升致敏的红血球，能进行300，000例筛选试验。
用本发明方法大量生产的抗-HBs-致敏的禽类红血球的敏感性、特异性、稳定性和大量生产性如下所示(1)敏感性对抗-HBs-致敏的禽类红血球和抗-HBs-致敏的绵羊红血球进行HBsAg阳性样品的HBsAg定量试验(Anti-bebscell-Neo，日本，lot 114-AN，1990)如表1所示，抗-HBs-致敏的禽类红血球为敏感性高达2-4倍。
表 1 HBsAg阳性样品的HBsAg定量试验
。
通过微滴定法来测量最后的凝集滴度作为最大的稀释度，其中多于2度的凝集在微板(U)上出现。
(2)特异性根据600例HBsAg-阴性的成年人血清样本来分析高免疫抗-HBs-致敏的绵羊红血球和禽类血球的非特异性聚集的频率。结果如表2所示。
如表2所示，就抗-HBs-致敏的禽类红血球而言以最低血清稀释比例为1∶8以达到不发生超过2度的聚集作用。
(3)稳定性如表3所示，根据本发明制得的保持在悬浮状态的抗-HBs-致敏的禽类红血球在室温下保存1年或37℃下保存3个月，它能保持其有效的敏感性。
(4)大量的生产性如表4所示，与采用高纯度、高免疫的抗-HBs相比，采用本发明方法生产抗-HBs-敏感化的红血球的可生产性要高10倍。
权利要求
1.用于加速检测HBsAg的高敏感性及特异的抗-HBs-致敏的禽类红血球的生产方法，其特征在于它通过用简单的方法，在氯化铬存在下，用热变性高免疫的抗-HBs血清(取自山羊的)涂覆固定禽类的红血球的戊二醛而取得，而不需要高纯化，以及它具有高敏感性1-3ng/ml，能在10-20分钟内判断出结果。
2.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于，用来致敏的含有抗-HBs蛋白溶液是通过使来自山羊的高免疫的抗-HBs血清(免疫扩散沉淀滴度14096-116384)在盐水中稀释至132-1128倍，然后在63-65℃下热处理30-40分钟而制得。
3.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于固定50%禽类红血球戊二醛、热处理的抗-HBs溶液和氯化铬溶液的加入比例是1∶3∶1。
4.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于固定的禽类红血球在氯化铬存在下专门用抗-HBs包覆，测得其含量为0.5-1%。
全文摘要
用于加速检测HBsAg(检测时间10-20分钟)的高敏感的(1-3ng/ml)抗-HBs-致敏的禽类红血球可通过使固定禽类红血球与热变性高免疫的抗-HBs血清(山羊派生出来)进行结合而制得，不要高度纯化。
文档编号G01N33/531GK1059600SQ9110880
公开日1992年3月18日 申请日期1991年8月28日 优先权日1990年9月1日
发明者高镇南, 朴彦顺 申请人:高镇南, 朴彦顺