专利名称：用于表征关节炎疾患的组合物和方法
用于表征关节炎疾患的组合物和方法领域本文描述了针对14-3-3的自身抗体和利用所述物质来评价关节炎疾患的方法。背景关节炎，或关节痛，一般是指人体关节的炎症性疾�。ǔ０橛刑弁�、肿胀和僵硬。 关节炎可由多种原因的任何原因造成，包括感染、创伤、退行性疾病、代谢紊乱或干扰或其它未知病因。骨关节炎(OA)是一种非炎症性关节炎的常见形式，可能在关节创伤后发生， 在关节感染后发生，或仅仅是衰老的结果。骨关节炎也称为退行性关节病。类风湿性关节炎(RA)传统上被认为是一种导致免疫系统攻击关节的慢性、炎症性自身免疫性疾病。它是一种使人伤残和痛苦的炎症状态，由于疼痛和关节破坏，可导致基本丧失活动性。强直性脊柱炎(AS)是一种慢性、痛苦的、退行性炎症性关节炎，主要影响脊椎及骶髂关节，从而引起脊柱的最终融合。人体以关节连接的关节称为滑膜关节，每个滑膜关节通常包括两个相邻骨的相对末端。骨骼的两端包裹在软骨组织中，而整个关节区域被包裹在称为滑膜的保护性软组织中，其包括滑液膜。滑液膜产生并释放入关节腔内的润滑滑液。在正常关节中，滑液的体积相当小。除了润滑功能以外，滑液还充当溶质和几种驻留单核细胞和滑膜细胞的储库。滑液可响应于认为促进关节炎的许多刺激而变得被刺激和增厚，所述刺激包括关节创伤和/或人体免疫系统故障。这种刺激的结果包括过量产生和释放滑液入关节， 从而导致关节区域内和周围肿胀。体积增加通常伴随着滑液中以下物质的浓度增加成纤维细胞样滑膜细胞(FLS细胞)、促炎性细胞因子诸如白介素-I(IL-I)和肿瘤坏死因子 (TNF-α)、组胺蛋白和肽、以及降解性酶诸如基质金属蛋白酶(MMP)。FLS细胞构成正常滑液中滑膜细胞的约三分之二，具有明确定义的分泌系统，在创伤或炎症条件下通常分泌大量MMP入滑液，特别是MMP_1、3、8、9、10、11和13。认为MMP-I和MMP-3在软骨和包含关节的其下的骨组织的进行性结构损伤中具有显著的作用。活化FLS细胞产生MMP-I和MMP-3 的已知因子包括IL-I和TNF-α。RA、AS和OA的引发因素目前是未明确定义的。然而，已知与疾病进展相关的生理事件，从关节中过量滑液积累引起的长期肿胀和炎症，到经由降解性酶活性对软骨和其下的骨组织的降解和劣化，以及伴随的FLS细胞增殖到骨中(这导致永久性结构损伤)。如果足够早地检测，可以适当的物理和医学治疗逆转或至少最小化疾病的潜在长期有害作用。 因此，相当多的努力放在对用于早期鉴定关节炎的适当的生物标志物的鉴定。为此目的， Kilani 等 Q007，J. Rheum. 34 :1650-1657 ；WO 2007/128132)已经报道，14-3-3 蛋白家族的两个成员，尤其是14-3-311和14-3-3Y，存在于关节炎患者的滑液和血清中，且这些同种型与滑液和血清中MMP-I和MMP-3的水平直接相关。概述本发明涉及以下发现生物样品中针对14-3-3蛋白的自身抗体的存在与关节炎疾患的诊断和/或预后有关联。这种自身抗体与关节炎疾患之间强的关联允许通过测定来自受治疗者的生物样品中针对至少一种14-3-3蛋白或其片段的自身抗体或与至少一种14-3-3蛋白或其片段的免疫复合体来诊断和/或预后关节炎疾患。在优选实施方案中， 14-3-3蛋白包含η和/或Y同种型。因此，本文描述了用于评价和/或表征哺乳动物受治疗者的关节炎疾患的方法，包括将来自受治疗者的生物样品与至少一种14-3-3蛋白或其片段接触，并检测针对 14-3-3蛋白或其片段的自身抗体，其中针对所述至少一种14-3-3蛋白或其片段的自身抗体的存在/量指示受治疗者中关节炎疾患的存在和/或状态。本文还提供了用于评价和/ 或表征哺乳动物受治疗者的关节炎疾患的方法，包括检测来自受治疗者的生物样品中自身抗体与至少一种14-3-3蛋白的循环免疫复合体，其中样品中现存免疫复合体的存在/量指示受治疗者中关节炎疾患的存在和/或状态。14-3-3蛋白或其片段可包含多个14-3-3蛋白同种型共有的表位，或可包含一个或一组14-3-3蛋白同种型特有的表位。在优选实施方案中，14-3-3蛋白或其片段包含 14-3-3 n和/或Y表位。在一个实施方案中，14-3-3蛋白或其片段包含至少一种其它 14-3-3同种型如14-3-3 γ共有的14_3_3 n表位。在另一个实施方案中，14_3_3 n表位是 14-3-3 n特有的。在一个实施方案中，检测步骤包括定量/测量生物样品中针对14-3-3蛋白或其片段的自身抗体或与14-3-3蛋白或其片段的免疫复合体的水平以与对照样品比较。因此，本文要求保护的用于评价受治疗者的关节炎疾患的方法可提供预后性判断以及诊断性判断。一方面，对照样品是正常对照，所述比较指示关节炎诊断。在一个实施方案中，与正常对照样品(如，来自未患有关节炎疾患的另一受治疗者)相比，所述生物样品中针对至少一种14-3-3蛋白或其片段的自身抗体或与至少一种14-3-3蛋白或其片段的免疫复合体的水平增加是所述受治疗者中关节炎疾患的诊断性指示物。因此，在一些实施方案中，来自受治疗者的生物样品中针对14-3-3蛋白的自身抗体或其免疫复合体的存在和/或相对于正常(即，无关节炎)对照样品中所述自身抗体或免疫复合体的水平，来自受治疗者的生物样品中所述自身抗体或免疫复合体的增加水平的存在提供受治疗者患有关节炎疾患的诊断。一方面，对照样品是来自哺乳动物受治疗者的先前生物样品，所述比较指示疾病发展和/或治疗方案的效力。在一个实施方案中，与先前样品(如，来自所述受治疗者的基线生物样品)相比，所述样品中针对14-3-3的自身抗体或其循环免疫复合体的水平降低指示正在进行的治疗方案的效力。因此，在一些实施方案中，与来自同一受治疗者的基线生物样品中存在的针对 14-3-3或其片段的自身抗体或与14-3-3或其片段的免疫复合体的水平相比，来自受治疗者的生物样品中检测的这种自身抗体或复合体的相对水平提供关节炎疾患的预后，或指示治疗方案的效力。一方面，对照样品是关节炎对照，所述比较指示疾病预后。在一个实施方案中，相对于关节炎对照样品(如，来自患有明确定义的关节炎疾患的另一受治疗者)，针对14-3-3 的自身抗体或其免疫复合体的相对水平是关节炎的预后性指示物。因此，在一些实施方案中，具有不同关节炎状态的受治疗者在针对至少一种 14-3-3蛋白或其片段的自身抗体、和/或至少一种14-3-3蛋白或其片段的循环免疫复合体的水平方面具有可检测的差异，这些差异具有预后相关性。在一个示例中，本文公开的方法可用于基于受治疗者中检测的自身抗体与在另一患者等等中先前确定在关节炎疾患过程如，治疗前、治疗中、治疗后中存在的水平相比的相对水平，确定关节炎疾患的特定疾病阶段或组织病理学表型。在另一示例中，本文公开的方法可用于基于生物样品中检测的自身抗体相比于可能如，存储在数据库中的对照样品的相对水平，将生物样品分类为来自处于表现关节炎疾患的高风险的受治疗者。另一方面，本文公开的方法可用于基于来自受治疗者的生物样品中检测的自身抗体与对照样品，如，来自用该治疗方案成功治疗的第二受治疗者的第二生物样品相比的相对水平，预测该受治疗者对治疗方案的响应性。因此，在一些实施方案中，将来自第一受治疗者的生物样品中针对至少一种 14-3-3蛋白或其片段的自身抗体、或与至少一种14-3-3蛋白或其片段的免疫复合体的相对水平与来自已知其响应于治疗的能力的受治疗者的生物样品中针对14-3-3的自身抗体、或与14-3-3的免疫复合体的水平比较，其中所述比较确定第一受治疗者对该治疗的响应潜力。受治疗者对治疗方案的敏感性的确定随后可用于报告治疗患有关节炎疾患的受治疗者的方法。例如，本文描述了治疗患有关节炎疾患的受治疗者的方法，包括测量来自受治疗者的生物样品中针对14-3-3的自身抗体的水平(如，通过测量自身抗体/14-3-3免疫复合体形成的水平)，将针对14-3-3的自身抗体或与14-3-3的免疫复合体的水平与受治疗者对治疗方案的敏感性关联，和对受治疗者提供治疗方案。一方面，本发明提供监测关节炎疾患治疗的方法，包括确定患者样品中针对至少一种14-3-3蛋白或其片段的自身抗体、 或与至少一种14-3-3蛋白或其片段的免疫复合体的水平，和监测经历治疗的患者中关于 14-3-3的自身抗体/免疫复合体的水平。另一方面，本文提供了用于确定和/或区分患者中关节炎亚型的方法。在这方面， 将来自第一受治疗者的生物样品中针对至少一种14-3-3蛋白或其片段的自身抗体、或与至少一种14-3-3蛋白或其片段的免疫复合体的相对水平与来自其关节炎亚型已知和/或先前确立的一个或多个其它受治疗者的生物样品中针对14-3-3的自身抗体、或与14-3-3 的免疫复合体的水平比较，其中所述比较确定第一受治疗者的关节炎亚型。来自第一受治疗者的生物样品中针对至少一种14-3-3蛋白或其片段的自身抗体、或与至少一种14-3-3蛋白或其片段的免疫复合体的水平与来自其关节炎亚型已知和 /或先前确立的其它受治疗者的生物样品中针对至少一种14-3-3蛋白或其片段的自身抗体、或与至少一种14-3-3蛋白或其片段的免疫复合体的水平相似的确定，可指示第一受治疗者具有与其它受治疗者相同的关节炎亚型。例如，来自第一受治疗者的生物样品与已知患有炎症性关节炎如，类风湿性关节炎的另一受治疗者的生物样品中针对至少一种14-3-3 蛋白或其片段的自身抗体、或与至少一种14-3-3蛋白或其片段的免疫复合体的相似水平可确定第一受治疗者也具有炎症性关节炎如，类风湿性关节炎。另外，来自第一受治疗者的生物样品中针对至少一种14-3-3蛋白或其片段的自身抗体、或与至少一种14-3-3蛋白或其片段的免疫复合体的水平与来自其关节炎亚型已知和/或先前确立的其它受治疗者的生物样品中针对至少一种14-3-3蛋白或其片段的自身抗体、或与至少一种14-3-3蛋白或其片段的免疫复合体的水平不同的确定，可指示第一受治疗者具有与其它受治疗者不同的关节炎亚型。例如，来自第一受治疗者的生物样品与已知患有非炎症性关节炎如，骨关节炎的其它受治疗者的生物样品中针对至少一种14-3-3蛋白或其片段的自身抗体、或与至少一种14-3-3蛋白或其片段的免疫复合体的不同水平可确定第一受治疗者具有炎症性关节炎如，类风湿性关节炎。在一个实施方案中，检测步骤包括基于免疫学的技术，如，免疫沉淀、ELISA、 Western印迹分析、免疫组织化学、免疫荧光、“三明治”免疫测定、免疫放射测定、凝胶扩散沉淀反应、免疫扩散测定、原位免疫测定、沉淀反应、凝集测定、补体固定测定、蛋白A测定、 免疫电泳测定、荧光激活细胞分选(FACQ分析、放射免疫测定、等等。因此，根据本文描述的方法检测和/或测量针对14-3-3蛋白或其片段的自身抗体可如下进行通过观察样品中自身抗体与14-3-3或其片段的免疫复合体的形成，或替代地通过确定样品中现存自身抗体/14-3-3复合体的存在。在一个实施方案中，形成可借助于可检测地标记的14-3-3蛋白或其片段来检测。在另一个实施方案中，复合体可通过自身抗体/14-3-3复合体与可检测地标记的结合免疫球蛋白的第二抗体之间形成第二免疫复合体来检测，所述免疫球蛋白如，自身抗体的免疫球蛋白主链。在一个实施方案中，方法包括检测患者的血液、滑液、血浆、血清或组织(如，滑膜关节、受损关节组织、等等)中针对14-3-3的自身抗体或其循环免疫复合体。在一个实施方案中，检测通过利用14-3-3蛋白或其片段从血液、滑液、血浆、血清或组织免疫沉淀针对 14-3-3的自身抗体来进行。在一个实施方案中，检测包括使用ELISA。在一个实施方案中， 检测包括Western印迹分析包括来自患者的滑液、血浆或血清的样品。在一个实施方案中， 检测包括使用放射免疫测定。在一个实施方案中，检测包括使用条带测试。在一个实施方案中，检测包括使用即时测试。在一个实施方案中，针对14-3-3的自身抗体或其免疫复合体的检测联合关节炎另一标志物(如，MMP、抗CCP、抗RF和/或CRP)的检测。本文还描述了包含用于评价受治疗者关节炎疾患的试剂的试剂盒，其中所述试剂特异性地识别针对14-3-3蛋白或其片段的自身抗体。在一个实施方案中，所述试剂可包括可检测地标记的14-3-3蛋白或其片段，其还可固定在固体支撑物上。14-3-3蛋白或其片段可包含多个14-3-3蛋白同种型共有的表位，或可包含表位一种或一组14-3-3蛋白同种型特有的表位。在优选实施方案中，14-3-3蛋白或其片段包含14-3-3 η和/或Y表位。在一个实施方案中，14-3-3蛋白或其片段包含至少一种其它14-3-3同种型如14_3_3 γ共有的14-3-3 η表位。在另一个实施方案中，14-3-3 η表位是14-3-3 η特有的。附图简述
图1显示利用来自诊断为类风湿性关节炎的患者的血清(样品3323)的连续稀释,重组14-3-3 η的western印迹。图2显示利用来自诊断为类风湿性关节炎的患者的血清(样品3365)的连续稀释,重组14-3-3 η的western印迹。图3显示利用来自未诊断为类风湿性关节炎的患者的血清(样品40)的连续稀释，重组14-3-3 η的western印迹。图4显示利用来自未诊断为类风湿性关节炎的患者的血清(样品39)的连续稀释，重组14-3-3 η的western印迹。发明详述“受治疗者”和“患者”可互换使用，除了指明之处以外，是指哺乳动物诸如人和非人灵长类、以及兔、大鼠、小鼠、山羊、猪和其它哺乳动物物种。
“关节炎疾患”、“关节炎”和“关节痛”可互换使用，除了指明之处以外，通常是指人体关节的炎症性疾患。疼痛、肿胀、僵硬和难以移动通常与关节炎疾患有关。关节炎由多于 100种不同情况组成。这些情况可以是任何情况，从相对轻微的形式到严重损害的系统形式，参见如，www. arthritis. ca/types% 20of % 20arthritis/default. asp ？ s = 1。关节炎疾患可由多种原因的任何原因造成，包括感染、创伤、退行性疾病、代谢紊乱或干扰或其它未知病因。关节炎疾患可按照亚型更具体地描述，例如，类风湿性关节炎、混合性结缔组织病(MCTD)、晶体性关节炎、反应性关节炎、脊椎关节病、骨关节炎、类肉瘤病、复发性风湿病、创伤后关节炎、恶性肿瘤相关的关节炎、脓毒性关节炎、莱姆关节炎、骨关节炎、细菌传染性关节炎、等等。关节炎还可伴有其它鉴定的疾�。ㄍ捶纭⑶恐毙约怪�、系统性红斑狼疮、炎症性肠病、银屑病、等等。明确定义的关节炎疾患是指知晓关于关节炎的类型和其阶段，如，发作、缓解、复发、等等。“自身抗体”是特异性结合自身抗原即，正常组织成分的内源抗体。自身抗体响应于产生自身抗体的同一身体的天然存在的抗原而产生。“免疫结合，，和“免疫复合体形成，，可互换使用，在本上下文中使用，通常是指抗体如，自身抗体与抗体对其特异性的抗原之间发生的类型的非共价相互作用。免疫结合相互作用的强度或亲和性可以相互作用的解离常数(Kd)来表示，其中较小Kd代表较大亲和性。 免疫结合性质可利用本领域公知方法来定量。例如，参见Davies等(1990)Annual Rev. Biochem. 59 :439_473。抗体或其抗原结合片段如果在可检测的水平(例如，在ELISA测定中)与配体反应，并且在相似条件下不与不相关配体可检测地反应，则称为“特异性结合”、 “免疫结合”和/或“免疫反应性”。“抗体”是指构成特异性结合相应抗原的蛋白的组成，并具有免疫球蛋白的共同的、一般结构。术语抗体具体地涵盖多克隆抗体、单克隆抗体、二聚体、多聚体、多特异性抗体(如，二特异性抗体)和抗体片段，只要其表现期望的生物活性。抗体可以是鼠、人、人源化、嵌合的，或源自其它物种。通常，抗体包含由二硫键互连的至少两条重链和两条轻链，它们联合时形成与抗原相互作用的结合结构域。每条重链包括重链可变区(VH)和重链恒定区(CH)。重链恒定区包括三个结构域CH1、CH2和CH3，可以是μ、δ、γ、α或ε同种型。 相似地，轻链包括一个轻链可变区(VL)和一个轻链恒定区(CL)。轻链恒定区包括一个结构域CL，可以是κ或λ同种型。VH区和VL区可进一步细分为称为互补决定区(CDR)的高变区，散布在称为构架区(FR)的更保守的区域之间。每个VH和VL包括三个CDR和四个 FR,从氨基端向羧基端以如下顺序排列FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区包含与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子(包括免疫系统的各种细胞(如，效应细胞)和经典补体系统的第一补体(Clq))的结合。重链恒定区介导免疫球蛋白与宿主组织或宿主因子的结合，尤其是通过细胞受体诸如Fc受体(如，FcyRI、FCYRII、？0^1 111、等等)。本文所用的抗体还包括免疫球蛋白保持结合抗原能力的抗原结合部分。作为示例，这些包括VL CL抗体结构域和VH CH抗体结构域的单价片段F(ab)；和包含由在铰链区的二硫键桥连接的两个Fab片段的二价片段 F(ab’)2片段。术语抗体还指重组单链Fv片段(scFv)和双特异性分子诸如如，双抗体、三抗体和四抗体(参见如，美国专利No. 5，844，094)。“抗原”将宽泛地解释，是指可特异性结合抗体的任何分子、组合物或颗粒。抗原可具有与抗体相互作用的一个或多个表位，尽管其不必诱导抗体产生。 因此，术语“针对14-3-3的自身抗体”和“对14-3-3的自身抗体”可互换使用，是
指由哺乳动物受治疗者产生的、特异性结合来自所述宿主的14-3-3蛋白或其片段的内源抗体。 “ 14-3-3，，和“ 14-3-3蛋白，，可互换使用，是指在真核细胞中普遍表达的保守胞内调节分子的14-3-3家族的至少一个成员。14-3-3蛋白具有结合许多功能各异的信号转导蛋白，包括激酶、磷酸酶和跨膜受体的能力。实际上，多于100种信号转导蛋白已被报道为 14-3-3的配体。14-3-3蛋白可被认为是Tetratrico肽重复片段超家族的演化成员。它们通常具有9或10个α螺旋，通常沿着其氨基末端螺旋形成同二聚体和/或异二聚体相互作用。这些蛋白包含多个已知结构域，所述结构域包括用于二价阳离子相互作用、磷酸化& 乙酰化和蛋白水解裂解的区域及其它。已知在哺乳动物中表达七种不同遗传编码的14-3-3 蛋白同种型，每种同种型包含242-255个氨基酸。七种14-3-3蛋白同种型命名为14_3_3 α / β (alpha/beta)、14-3-3 δ/ξ (delta/zeta)、14-3-3 ε (epsilon)、14-3-3 γ (gamma)、 14-3-3 η (eta)、14-3-3 τ/θ (tau/theta)和 14—3—3σ (sigma/stratifin) 14-3-3 蛋白具有高程度的序列相似性，已知经历翻译后处理如，磷酸化、瓜氨酸化、等等。参见如， Megidish 等(1998) J. Biol. Chem. 273 :21834_45。因此，抗 14-3-3 自身抗体可特异性结合和/或识别多于一种14-3-3蛋白同种型，或可特异性结合和/或识别仅一种同种型(如， 14-3-3 11)。另外，抗14-3-3抗体可结合和/或识别已被如，天然(如，翻译后)或化学方法修饰的14-3-3-蛋白。术语“特异结合”或“特异性结合”当关于抗体与蛋白或肽相互作用使用时，是指该相互作用依赖于蛋白上特定结构(即，表位)的存在；换言之，抗体识别和结合特定蛋白结构而不是总体上的蛋白。表位是通常存在于分子表面并对与抗体相互作用可接近的化学特征。典型化学特征是氨基酸和糖基团，具有三维结构特征以及化学特性(包括电荷、亲水性和亲脂性)。构象表位区别于非构象表位在于，在分子空间要素改变而其下化学结构无任何改变后，失去与抗体的反应性。因此，术语“表位”当关于14-3-3蛋白或特定异构体使用时，通常是指能够结合抗体如，自身抗体的蛋白(包括修饰的14-3-3蛋白)的决定簇。本文描述了被诊断为关节炎尤其是类风湿性关节炎的患者的自身抗体识别的14-3-3表位，利用这种表位评价和/或表征受治疗者的关节炎疾患的方法，和包含这种表位的试剂盒。14-3-3蛋白或其片段可包含多个14-3-3蛋白同种型共有的表位，或可包含一个或一组14-3-3蛋白同种型特有的表位。本文所用的“共有”是指两个或多个14-3-3蛋白同种型之间共同的片段或表位。在优选实施方案中，14-3-3蛋白或其片段包含14-3-3 n和 /或Y表位。在一个实施方案中，14-3-3蛋白或其片段包含至少一种其它14-3-3同种型如，14-3-3 γ共有的14-3-3 n表位。在另一个实施方案中，14_3_3 n表位是14_3_3 n特有的。14-3-3 11的共同识别的表位包括在下表1中。
权利要求
1.一种用于评价受治疗者的关节炎疾患的方法，所述方法包括a)提供来自怀疑患有关节炎疾患的受治疗者的样品；b)检测所述样品中针对至少一种14-3-3蛋白或其片段的自身抗体、或与至少一种14-3-3蛋白或其片段的免疫复合体的存在；其中所述自身抗体或免疫复合体的存在指示受治疗者的关节炎疾患。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述检测步骤还包括测量所述自身抗体或免疫复合体的量，将其与正常对照样品、关节炎对照样品、或来自同一受治疗者的先前样品中所述自身抗体或免疫复合体的量比较。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述检测步骤包括将所述生物样品与至少一种 14-3-3蛋白或其片段接触。
4.如权利要求3所述的方法，其中所述14-3-3蛋白是14-3-3η或14_3_3γ、或其片段。
5.如权利要求1所述的方法，其中所述14-3-3蛋白包含至少一个14-3-3n表位。
6.如权利要求5所述的方法，其中所述至少一种14-3-3η表位是与至少一种其它 14-3-3蛋白同种型共有的。
7.如权利要求5所述的方法，其中所述其它14-3-3蛋白同种型是14-3-3γ。
8.如权利要求5所述的方法，其中所述14-3-3n表位是14-3-3 n特有的。
9.如前述任一项权利要求任一项所述的方法，其中所述生物样品选自以下组成的组 血液、滑液、血浆、血清或组织。
10.如前述任一项权利要求任一项所述的方法，其中所述14-3-3蛋白或其片段被选自以下组成的组的标记可检测地标记放射性标记、发光标记、荧光标记和酶。
11.如前述任一项权利要求任一项所述的方法，其中所述14-3-3蛋白或其片段结合于固体支撑物。
12.如前述任一项权利要求任一项所述的方法，其中所述自身抗体由ELISA测定检测。
13.如前述任一项权利要求任一项所述的方法，其中所述检测通过化学发光进行。
14.如权利要求2所述的方法，其中与正常对照样品相比，所述样品中针对至少一种 14-3-3蛋白或其片段的自身抗体或与至少一种14-3-3蛋白或其片段的免疫复合体的水平增加是所述受治疗者中关节炎的诊断性指示物。
15.如权利要求2所述的方法，其中与关节炎对照样品相比，所述样品中针对至少一种 14-3-3蛋白或其片段的自身抗体或与至少一种14-3-3蛋白或其片段的免疫复合体的相对水平是所述受治疗者中关 节炎的预后性指示物。
16.如权利要求2所述的方法，其中与来自同一受治疗者的先前样品相比，所述样品中针对至少一种14-3-3蛋白或其片段的自身抗体或与至少一种14-3-3蛋白或其片段的免疫复合体的相对水平指示治疗方案的效力。
17.一种用于检测样品中针对至少一种14-3-3蛋白或其片段的自身抗体的存在的试剂盒，所述试剂盒包含至少一种14-3-3蛋白或其片段、和第二试剂。
18.如权利要求17所述的试剂盒，其中所述至少一种14-3-3蛋白或其片段结合于固体支撑物。
19.如权利要求17所述的试剂盒，其中所述至少一种14-3-3蛋白是14-3-3Y或 14-3-3 η、或其片段。
20.如权利要求17所述的试剂盒，其中所述14-3-3蛋白或其片段包含至少一个 14-3-3 η 表位。
21.如权利要求20所述的试剂盒，其中所述至少一个14-3-3η表位是与至少一种其它 14-3-3蛋白同种型共有的。
22.如权利要求21所述的试剂盒，其中所述其它14-3-3蛋白同种型是14_3_3γ。
23.如权利要求21所述的试剂盒，其中所述14-3-3η表位是14_3_3 η特有的。
24.一种用于确定患者的关节炎亚型的方法，所述方法包括a)提供来自怀疑患有关节炎疾患的受治疗者的第一样品；b)检测所述样品中是否存在针对至少一种14-3-3蛋白或其片段的自身抗体或与至少一种14-3-3蛋白或其片段的免疫复合体；c)测量该自身抗体或免疫复合体的量，并将其与第二生物样品中针对14-3-3的自身抗体或与14-3-3蛋白的免疫复合体的量比较，该第二生物样品来自其关节炎亚型已知和/或事先确定的第二受治疗者，其中该比较确定第一受治疗者的关节炎亚型。
25.如权利要求M所述的方法，其中第一和第二样品含有相近量的所述自身抗体或免疫复合体，表明该第一受治疗者具有与该第二受治疗者相同的关节炎亚型。
26.如权利要求M所述的方法，其中第一和第二样品含有不同量的所述自身抗体或免疫复合体，表明该第一受治疗者具有与该第二受治疗者不同的关节炎亚型。
全文摘要
本发明涉及针对14-3-3蛋白的自身抗体或其循环免疫复合体、和所述物质用于诊断和预后关节炎疾患的检测。
文档编号G01N33/543GK102414563SQ201080017586
公开日2012年4月11日 申请日期2010年3月11日 优先权日2009年3月11日
发明者A·马罗塔 申请人:奥古雷克斯生命科学公司
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