专利名称：氢自由基的检测方法和定量分析方法
技术领域：
本发明涉及水、特别是电解还原水或水溶液中氢自由基的检测方法、和氢自由基浓度地定量分析方法。
背景技术：
由氢氧化钠等电解质溶液电解、在阴极室得到的所谓电解还原水一直被认为在人体内具有消除活性氧的活性和抑制DNA链切断的活性。据认为这是由于电解还原水中所含的活性氢的还原性引起的。
由于电解还原水中所含的氢自由基浓度对人体内消除活性氧的活性有影响，因此需要确立氢自由基的检测方法和定量分析方法。
这里的“活性氢”是指容易由紫外线照射或放电等方法发生化学反应形成的氢自由基，在酸作用于金属或电解时从阴极侧产生的氢也是反应性高的氢自由基。活性氢使金属从碱金属盐中游离出来，并且容易使各种金属元素的氧化物、硫化物等还原为金属。还与砷、磷、氧、卤素、锑、锡等形成氢化物；与一氧化碳和二氧化碳形成甲醛。还与各种有机化合物发生加成、置换、氢原子消去反应，向不饱和有机化合物加氢。氢自由基虽然本身较为稳定，但是一旦接触金属表面就会非常容易放出很多的热，变回通常的分子。
它的检测方法有利用高浓度时的压力差或微量时氧化钨的变色等。但是，在气体中产生时的检测方法不能用于测定水中的氢自由基。如果能用水溶性的自由基俘获剂捕获氢自由基来将其检测和定量，就能证明电解还原水中存在氢自由基，从而发展旨在确立检测法和定量法的研究。
用电子自旋共振装置(ESR)仅测定水试样、或使水溶性自由基俘获剂5，5-二甲基-1-吡咯啉-N-氧化物(DMPO)与水溶液试样反应后测定ESR光谱，看不到氢自由基的光谱。
而用芬顿(Fenton)试剂产生氢氧根从而由ESR光谱确定因水溶液试样的还原性而引起的氢氧根减少，则看不到明显的差异。据认为这是由于电解还原水中氢自由基的浓度低，所以难以用检测灵敏度低的方法检测。
发明内容
本发明提供了高精度地检测存在于水或水溶液中的氢自由基的方法和对其定量分析的方法。发明人尝试将大量水试样中和，使其与自由基俘获剂3，5-二溴-4-亚硝基苯磺酸钠盐(DBNBS)反应，然后用旋转蒸发器进行浓缩。结果发现，显示出消除活性氧的活性的电解还原水试样中呈现出橙色的着色。而超纯水(Milli Q水)或其它矿泉水或工业用水却未看到着色。据认为这是由于DBNBS与电解还原水中的活性氢新反应产生着色物质的缘故。认为利用这种现象就能高精度地检测水溶液中的氢自由基，并开发了氢自由基检测法和定量分析法。本发明基于上述认识，提供了在电解还原水中使用自由基俘获剂3，5-二溴-4-亚硝基苯磺酸钠盐(DBNBS)来检测氢自由基的方法和对其定量分析的方法。
本发明是水或水溶液中氢自由基的检测方法，它包括在试样中加入3，5-二溴-4-亚硝基苯磺酸钠盐(以下称为DBNBS)，使其与氢自由基反应生成DBNBS偶氮化合物，通过由该化合物的吸收特性所产生的着色来检测氢自由基。
所述的水或水溶液适合使用电解还原水。
所述的着色利用的是3，5-二溴-4-亚硝基苯磺酸钠盐(DBNBS)与氢自由基反应生成DBNBS偶氮化合物的着色反应。因此，着色是由于波长426～450纳米处的吸收峰而产生的。
本发明还是包括以下(1)～(4)步骤的水或水溶液中定量分析氢自由基的方法。
(1)于铂黑的存在下，以恒定(constant)的速度向517纳米附近有吸收峰的1，1-二苯基-2-苦基偕腙肼(DPPH)溶液和3，5-二溴-4-亚硝基苯磺酸钠盐(DBNBS)的溶液中吹入氢气，绘出517纳米附近的吸光度减少与氢气吹入时间的相关曲线(绘制标定曲线A)。
(2)使半胱氨酸与DPPH反应，绘出517纳米附近DPPH的吸光度减少与半胱氨酸浓度的相关曲线(绘制标定曲线B)。这里除了半胱氨酸以外也可用抗坏血酸等还原剂。
(3)在和前述(1)相同的条件下，于铂黑的存在下，以恒定的速度向3，5-二溴-4-亚硝基苯磺酸钠盐(DBNBS)溶液中吹入氢气一定时间后，测定450纳米附近的吸光度，绘出该吸光度值与由标定曲线A和标定曲线B算出的每单位氢气吹入时间内氢自由基产生浓度的相关曲线(绘制标定曲线C)。
(4)在试样中加入3，5-二溴-4-亚硝基苯磺酸钠盐(DBNBS)，测定450纳米附近的吸光度，由该吸光度值从前述标定曲线C读取氢自由基的浓度。
这里的水或水溶液最好浓缩至10～500倍的氢自由基浓度。
下面，基于本发明的实施方式进行说明。
本发明中的氢自由基检测方法利用的是基于以下所示的反应的吸光特性。即，3，5-二溴-4-亚硝基苯磺酸钠盐(DBNBS)与氢自由基反应生成DBNBS偶氮化合物。DBNBS偶氮化合物在波长425～450纳米处有吸收峰，因此能通过它的着色来检测氢自由基。
如反应式所示，DBNBS(式A)与水或水溶液中的氢自由基反应生成DBNBS-H·(式B)，它的两个分子反应成二聚体(式C)。然后在加热下脱水生成DBNBS氧化偶氮化合物(式D)。再脱去一个氧而生成稳定的DBNBS偶氮化合物。通过检测由该DBNBS偶氮化合物产生的425～450纳米处的吸收，就能对氢自由基进行定性分析。上述式A～式E的一系列反应虽然是由本发明人首次发现的新反应，但由硝基苯和亚硝基苯的还原反应来生成氧化偶氮苯和偶氮苯的类似反应是已知的。(A.Streitwieser，Jr.&C.H.HeathcockIntroduction to Organic Chemistry，第960～965页，Macmillan Publishing co.，Inc.，纽约(1976))。氧化偶氮苯与偶氮苯可由氧化还原反应而相互转化。
下面用以下方法对水或水溶液中的氢自由基进行定量分析。
DPPH是在517纳米附近的波长处具有特殊吸收的稳定自由基。DDPH与氢自由基定量地反应，517纳米附近的吸收消失。另一方面，粒状铂黑具有大的表面积，使气体状的氢分子转化为氢自由基(原子状氢)并保持该状态。因此，通过在铂黑的存在下将氢气吹入溶液中，能容易地产生氢自由基。通过在铂黑的存在下于一定条件下将氢气吹入给定浓度的DPPH水溶液中，就可绘出表明该吹入时间与517纳米附近DPPH的吸光度减少之间关系的标定曲线(A)。
然后，为了算出每单位氢气吹入时间内的氢自由基产生浓度，使已知的定量反应的还原性物质(例如半胱氨酸)和DPPH反应，绘出表明半胱氨酸浓度与517纳米附近DPPH的吸光度减少之间关系的标定曲线(B)。假定1摩尔的半胱氨酸与1摩尔的氢自由基相当，由标定曲线(A)算出每单位氢气吹入时间内所产生的氢自由基浓度。
另一方面，如前所述的DBNBS(式A)与氢自由基反应，经式B的二羟基中间体(DBNBS-H·)及其二聚体(式C)生成DBNBS偶氮化合物(式D)。于是就可将该DBNBS偶氮化合物的450纳米附近的特殊吸收用于定量分析中。如前所述，在铂黑的存在下吹入氢气时产生氢自由基，因此通过求出450纳米附近的吸光度与氢气吹入时间之间的关系，利用标定曲线(A)和标定曲线(B)，就能绘出表明450纳米附近吸光度与氢自由基浓度之间关系的标定曲线(C)。
为求出试样中的氢自由基浓度，在试样溶液中加入给定浓度的DBNBS，使DBNBS与氢自由基反应生成DBNBS偶氮化合物，然后测定其在450纳米附近的吸光度，由前述标定曲线(C)测定氢自由基浓度。
在用电解还原水作为试样时，最好将其浓缩至10～500倍后再使用。例如，在125毫升电解还原水中，加入200微升的DBNBS保存液，搅拌后，在60℃的恒温槽中用旋转蒸发器进行浓缩干燥。将浓缩干燥物溶解于1毫升超纯水(Milli Q水)中并回收。然后在60℃的恒温槽中保温约1小时，于冰上静置5分钟，以例如12000转/分进行离心分离，获得上层清液。
附图简述
图1是BNBS偶氮化合物的吸收特性曲线图。
图2是表明450纳米处吸光度与氢气吹入时间之间关系的曲线图。
图3是表明电解还原水与氢自由基反应值之间关系的曲线图。
图4是表明氯化钠浓度与氢自由基反应值之间关系的曲线图。
图5是DBNBS非加热处理反应物的HPLC(高效液相色谱)测定结果图。
图6是DBNBS非加热处理反应物的紫外可见吸收光谱图。
图7是DBNBS加热处理反应物的HPLC测定结果图。
图8是DBNBS加热处理反应物的紫外可见吸收光谱图。
图9是DBNBS非加热处理反应物的质谱测定图。
图10是DBNBS加热处理反应物的质谱测定图。
图11是DBNBS非加热处理反应物的NMR光谱测定图。
图12是DBNBS加热处理反应物的NMR光谱测定图。
图13是显示标定曲线A的曲线图。
图14是显示标定曲线B的曲线图。
图15是小时标定曲线C的曲线图。
实施发明的最佳方式
实施例1用DBNBS检测由铂黑-氢所产生的氢自由基
1-1试剂
DBNBS由Labo Tech株式会社制造，铂黑由石福金属矿业(株)制造，氢气由大洋Sanso株式会社制造。将DBNBS以2.5毫克/毫升的浓度溶解于超纯水(Milli Q水)中，在4℃下保存，在2周内用完。
1-2由铂黑-氢产生氢自由基
氢气在铂表面上成为原子状氢。然后，向20毫升含有0.01毫克/毫升铂黑的2.5毫克/毫升DBNBS溶液以45毫升/分钟吹入氢气。在5分钟、10分钟、15分钟、30分钟、45分钟、60分钟后各回收200微升，以12000转/分离心分离5分钟后，将上层清液于60℃恒温槽中保温1小时。用未吹入氢气的物质作为参照物，于60℃下保温处理1小时。
1-3氢自由基的检测
将反应后的参照物的DBNBS水溶液标定为DBNBS本身的吸光度为0，扫描各DBNBS试样的350～600纳米的波长得到示差谱。该示差谱的测定用于检测出DBNBS由铂黑-氢处理而转变成新的物质。为调查由铂黑-氢处理而生成的氢自由基与DBNBS是否发生特殊反应，还仅用铂黑、仅用氢气、仅用氮气、以及用铂黑-氮气处理试样。
由铂黑-氢反应得到的DBNBS偶氮化合物试样的吸收光谱如图1(Pt-H2)所示，显示出从425纳米到450纳米有峰的光滑可见吸收光谱。该试样着色为橙色。这说明DBNBS由铂黑-氢处理成为新的橙色物质、即DBNBS偶氮化合物。它的峰高如图2所示，随着吹入的氢气量而增加，在45分钟吹入时达到最大，然后减少。
为调查铂黑-氢反应的特殊性而仅用铂黑、仅用氢气、仅用氮气、以及用铂黑-氮气处理的试样全部没有显示出颜色，紫外部吸收中也没有看到波形变化。与氢自由基反应而得的物质的吸收光谱中450纳米处的吸光值即为氢自由基反应值(AH值)。
实施例2用DBNBS检测电解还原水中的氢自由基
2-1试剂
使用和实施例1相同的物质。
2-2电解还原水
用日本Trim公司制造的电解还原水装置TI-8000，以4级(5A)电解还原0.01％NaCl水，在阴极侧得到电解还原水。
2-3氢自由基的检测
在125毫升电解还原水中，加入200微升DBNBS保存液，搅拌后，在60℃恒温槽中用旋转蒸发器浓缩干燥。将浓缩干燥物溶解于1毫升的超纯水(Milli Q水)中并回收。然后在60℃恒温槽中保温1小时，于冰上静置5分钟，以12000转/分离心分离，得到上层清液。把同样用上述超纯水处理的DBNBS试样作为参照物进行标定，扫描DBNBS试样在350～600纳米的波长，得到示差谱。
确定电解还原水的光谱和实施例1求得的吸收光谱相同(图1电解还原水)，由此确定电解还原水中存在氢自由基。
实施例3电解还原水的浓度与氢自由基反应值之间的关系、以及电解强度与氢自由基反应值之间的关系
对电解还原水的浓度与氢自由基量是否具有相关关系进行试验。用超纯水(Milli Q水)稀释电解还原水，以测定各试样的氢自由基反应值。为调查电解强度与氢自由基反应值之间的关系，准备NaCl浓度从0.0001％到0.01％的水，分别测定各试样在电解还原后的水的活性氢反应。电解还原水是用日本Trim公司制造的电解还原水装置TI-8000以4级(5A)电解还原而成的在阴极侧得到的还原水。
在通过稀释制成电解还原水的体积百分数为25、50、75、100％的水以测定氢自由基反应值时，如图3所示，氢自由基反应值随电解还原水的浓度而上升，由此可知该测定体系即使在电解还原水试样中也有定量性。为了通过在由电解得到电解还原水时改变电解强度而制成的水溶液，通过改变水溶液的盐浓度(NaCl浓度)而得的电解还原水如图4所示，其氢自由基反应值也随电解强度(NaCl浓度)而上升。这意味着电解强度越强，氢自由基产生得也越多。
实施例4氢自由基与DBNBS的反应过程分析
4-1试剂
DBNBS由Labo Tech株式会社制造，铂黑由石福金属矿业(株)制造，氢气由大洋Sanso株式会社制造。
4-2 DBNBS的反应
在20毫升含有0.01毫克/毫升铂黑的2.5毫克/毫升DBNBS溶液中，以45毫升/分钟的吹入速度吹入氢气1小时，将不经加热处理、以及在60℃下经加热处理1小时的所得物质用冰冷却，使反应停止，用由此所得的物质作为分析试样。
4-3分析试样的调整
(1)高效液相色谱(HPLC)分析试样
将分析试样分别用0.45微米的过滤器过滤，取2000微升使用。
(2)NMR(核磁共振)、TOF-MASS(飞行时间质谱)分析中的分析试样
用乙酸酐(和光纯药株式会社制)将由HPLC分离的非加热处理的反应中间体乙酰化，从而使之稳定，并将通过加热处理而分离的偶氮化合物再次HPLC分离，使分离度完全。
(3)微量元素分析中的分析试样
非加热处理的反应中间体用经HPLC分离的试样，加热处理分离的偶氮化合物用和NMR、TOF-MASS分析相同的试样。
4-4仪器测定条件
(1)HPLC使用Waters公司的Waters 600E，流动相使用Milli-Q水，流速为5毫升/分钟，注入量是用Waters 717自动采样机采取2000微升，柱使用Waters公司制造的Nova-Pak C18 19*300毫米。检测器使用Waters公司的Waters 996光二极管阵列检测器在20-600纳米的波长领域内以1.2纳米的间隔采集数据。用Compaq V7000个人计算机，通过Millennium 32(Waters公司)制作的程序，进行光谱色谱图的分析。
(2)TOF-MASS分析仪使用Voyager(Perceptive，Biosystems公司制造)。Voyager是装有氮激光(337纳米)、加速电压为20千伏的激光电离化飞行时间质谱仪。加速电压使用20千伏，从而在飞行模式为线型模式下进行分析。基质使用1.3毫克2-(4-羟基-苯基偶氮)-苯甲酸(HABA)(Aldrich Chemical公司制)溶解于1毫升50∶50水·乙腈中形成的溶液。在试样载片上涂布0.5微升的试样，经自然干燥后，加入等量的基质溶液，再次自然干燥，将其导入离子源。
(3)NMR使用400兆赫NMR(JEOL JNM-GSX400 NMR系统分光计)进行1H-NMR测定。溶剂使用二甲亚砜(DMSO)(和光纯药株式会社制)和重水(D2O)(AldrichChemical公司制)。
4-5分析结果
(A)高效液相色谱(HPLC)测定结果
(i)分析试样(1)
在20毫升含有0.01毫克/毫升铂的2.5毫克/毫升DBNBS溶液中，以45毫升/分钟的吹入速度吹入氢气，用0.45微米的过滤器过滤，由装有光二极管阵列检测器的HPLC测定该非加热处理试样的2000微升。其测定结果示于图5。由图5可知非加热处理DBNBS反应物的保持时间约为9.0分钟，它的峰如图6的紫外可见吸收峰所示，在220纳米处显示出吸收峰，在450纳米处不显示出吸收峰，这可推定为相当于式C所示的二聚体。
(ii)分析试样(2)
在20毫升含有0.01毫克/毫升铂的2.5毫克/毫升DBNBS溶液中，以45毫升/分钟的通气速度吹入氢气，于60℃下加热处理1小时，用冰冷却使反应停止，将所得物质用0.45微米的过滤器过滤，由装有光二极管阵列检测器的HPLC测定该加热处理试样的2000微升。其测定结果示于图7。由图7可知加热处理DBNBS反应物的保持时间约为8.5分钟，它的峰如图8的紫外可见吸收峰所示，在320纳米和450纳米处都可看到吸收峰，显示出类似于已知的偶氮苯的紫外吸收峰。这相当于式E所示的DBNBS偶氮化合物。
(B)质谱(基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱，MALDI-TOF-MS)的测定结果
(i)分析试样(1)
用质谱(MALDI-TOF-MS)测定上述HPLC测定中得到的、在280纳米处有吸收峰的非加热处理的DBNBS反应物。
乙酰化的于280纳米处有吸收峰的非加热处理DBNBS反应物的质谱图如图9所示，在675.449处显示出离子峰，这与中间体(式C)上脱去Br和Na各一个、式C的中间体的一个羟基经乙酰化而得的物质相一致。
(ii)分析试样(2)
用质谱(MALDI-TOF-MS)测定上述HPLC测定中得到的、在450纳米处有吸收峰的加热处理的DBNBS反应物。
于450纳米处有吸收峰的加热处理的DBNBS反应物的质谱图如图10所示，在656.329处显示出离子峰，与脱去2个Na的DBNBS偶氮化合物(式E)相一致。
(C)NMR测定结果
(i)分析试样(1)
用1H-NMR测定上述HPLC测定中得到的、在280纳米处有吸收峰的非加热处理DBNBS反应物，其测定结果示于图11。由图11可知乙酰化的于280纳米处有吸收峰的非加热处理的DBNBS反应物的光谱图。同样地由HPLC分离来采集作为参照物的乙酰化中所用的乙酸酐，对其进行测定。参照物乙酸酐的甲基在2.5ppm显示出信号，与之相比，在化学位移2.0ppm显示出存在甲基，由此说明非加热处理的DBNBS反应物的羟基与乙酸酐直接发生反应。
(ii)分析试样(2)
用1H-NMR测定上述HPLC测定中得到的、在450纳米处有吸收峰的加热处理DBNBS反应物，其测定结果示于图12。与DBNBS在8.0ppm处显示出一条峰相比，在450纳米处有吸收峰的加热处理DBNBS反应物的质子和化学位移在6.6～6.8ppm，6.7575ppm和6.634ppm处的信号都再分裂成左右各一条的对称信号。这说明形成偶氮基时，间位的质子是不对称的，而且质子间产生偶联。
(D)微量元素分析结果
(i)分析试样(1)
对上述HPLC测定中得到的、在220纳米处有吸收峰的非加热处理DBNBS反应物进行微量元素分析，测得碳含量为19.93％(计算值为19.35％)、氢含量为1.61％(计算值为1.61％)、氮含量为3.76％(计算值为3.76％)。这和中间体的三水合物上脱去2个Na所得的物质相一致。
(ii)分析试样(2)
对上述HPLC测定中得到的、在450纳米处有吸收峰的加热处理DBNBS反应物进行微量元素分析，测得碳含量为21.53％(计算值为21.43％)、氢含量为1.73％(计算值为1.79％)、氮含量为3.84％(计算值为4.17％)。这和中间体的四水合物上脱去Br和Na各一个所得的物质相一致。
实施例5氢自由基的定量分析
5-1绘制标定曲线A(1，1-二苯基-2-苦基偕腙肼(DPPH)与氢气吹入时间之间的关系)
在1.96毫升0.1M乙酸缓冲液(pH5.5)中，加入乙醇和0.5mM DPPH的DPPH·乙醇溶液1毫升，和1.0毫克/毫升的铂黑·乙酸缓冲液0.05毫升使总量达5毫升，以45毫升/分钟的速度吹入氢气，每隔固定的时间采集200微升试样，测定DPPH的特异吸收、即517纳米处的吸光度，得到表明吸光度减少与吹入时间之间关系的曲线(标定曲线A)——图13。
5-2绘制标定曲线B
使0～100μM的半胱氨酸与DPPH反应，求出517纳米附近DPPH的吸光度减少与半胱氨酸浓度之间的相关曲线。绘出标定曲线B的曲线图——图14。
5-3绘制标定曲线C(3，5-二溴-4-亚硝基苯磺酸钠盐偶氮化合物(DBNBS偶氮化合物)的吸光度与氢自由基浓度之间的关系)
在5毫升含有0.01毫克/毫升铂的2.5毫克/毫升DBNBS溶液中，以45毫升/分钟的速度吹入氢气，在DBNBS与氢自由基起反应的同时，每隔一定时间采集200微升试样，于60℃下加热1小时后，测定DBNBS与氢自由基的反应产物DBNBS偶氮化合物的特异吸收、即450纳米处的吸光度，绘出图15所示的标定曲线C。
5-4试样中氢自由基浓度的测定
(1)试样配制
将电解还原水调制成pH为7.0，按照该制造条件调制成1级～4级的试样。这里的电解还原水，是向隔着隔膜的阴极室和阳极室分别导入含有NaOH的水溶液，在阴极和阳极之间通电，使前述NaOH水溶液电解，在前述阴极室得到的物质。这些试样的氧化还原电位(0RP)和pH示于表1。用超纯水(Milli Q水)作为参照例。
在125毫升的Milli Q水和1～4级的电解还原水中分别加入200微升DBNBS保存溶液(12.5毫克/毫升)，减压浓缩至125倍。用1毫升Milli Q水洗涤基氏烧瓶的内壁，回收静置了一会儿的溶液。将回收后的溶液于60℃的热水浴(遮光)中加热，然后在冰中冷却以使反应停止。以12000转/分的转速离心分离5分钟，采集上层清液。
(2)吸光度的测定
测定上述试样在频率450纳米处的吸光度。测定方式是对同一试样分别取3个试样测定，取其平均值。吸光度的测定结果示于表1。用HPLC分进行分析，结果判明电解还原水与DBNBS的反应结果产生的着色物质，是和铂黑的存在下于氢气吹入时产生的DBNBS偶氮化合物相同的物质，其洗脱位置和紫外可见吸收光谱相同。
(3)氢自由基浓度的测定
从各级别试样的吸光度中扣除用作参照物的DBNBS的Mili Q水溶液在450纳米处的平均吸光度0.0358，由该差值的吸光度值，用标定曲线(C)求出氢自由基浓度。浓缩至125倍的电解还原水的氢自由基浓度在1～4级时在7～34μM(微摩尔/升)的范围内。
表1
这次披露的实施方式和实施例从所有观点上都不应视作是限制。本发明的范围不仅示于如上述说明中，还示于专利的权利要求范围中，旨在包括和专利的权利要求范围相等的意思和范围内的所有改变。
工业上的利用领域
如果采用上述氢自由基的检测方法和定量分析方法，不仅能检测出水或水溶液中是否存在微量的氢自由基，连浓度也能正确地测定。特别是采用这种分析方法时，能容易地将电解还原水中氢自由基浓度正确定量。因此，这种分析方法可适用于医疗领域、食品领域、饮料领域等各种制品的用途中，根据这些用途来调节氢自由基(活性氢)浓度制成电解还原水。而且在氢包藏合金的性能评价中也能利用。
权利要求
1.检测水或水溶液中的氢自由基的方法，其特征在于它包括在试样中加入3，5-二溴-4-亚硝基苯磺酸钠盐即DBNBS，由试样着色来检测氢自由基。
2.如权利要求1所述的氢自由基的检测方法，其特征在于，所述的水或水溶液是电解还原水。
3.如权利要求1所述的氢自由基的检测方法，其特征在于，所述的着色由3，5-二溴-4-亚硝基苯磺酸钠盐即DBNBS与氢自由基反应生成的DBNBS偶氮化合物的吸收峰产生。
4.如权利要求1所述的氢自由基的检测方法，其特征在于，在波长425～450纳米处检测吸收峰。
5.水或水溶液中氢自由基的定量分析方法，它由以下(1)～(4)步骤组成
(1)于铂黑的存在下，以恒定的速度向517纳米附近有吸收峰的1，1-二苯基-2-苦基偕腙肼即DPPH溶液和3，5-二溴-4-亚硝基苯磺酸钠盐即DBNBS的溶液中吹入氢气，绘出517纳米附近的吸光度减少与氢气吹入时间的相关曲线——绘制标定曲线A，
(2)使半胱氨酸与DPPH反应，绘出517纳米附近DPPH的吸光度减少与半胱氨酸浓度的相关曲线——绘制标定曲线B，
(3)在和前述(1)相同的条件下，于铂黑的存在下，以恒定的速度向3，5-二溴-4-亚硝基苯磺酸钠盐即DBNBS溶液中吹入氢气一定时间后，测定450纳米附近的吸光度，绘出该吸光度值与由标定曲线A和标定曲线B算出的每单位氢气吹入时间内氢自由基产生浓度的相关曲线——绘制标定曲线c，
(4)在试样中加入3，5-二溴-4-亚硝基苯磺酸钠盐即DBNBS，测定450纳米附近的吸光度，由该吸光度值从前述标定曲线C读取氢自由基的浓度。
6.如权利要求5所述的定量分析方法，其特征在于，所述的水或水溶液浓缩至10～500倍。
全文摘要
本发明是检测水或水溶液中氢自由基(hydrogenradical)的方法，其特征在于，该方法包括在试样中加入3，5－二溴－4－亚硝基苯磺酸钠盐(DBNBS)，通过由所得溶液的吸收特性所产生的颜色来检测氢自由基；还有氢自由基的定量分析方法，该方法包括于铂黑的存在下，以恒定的速度向517纳米附近有吸收峰的1，1－二苯基－2－苦基偕腙肼(DPPH)溶液和3，5－二溴－4－亚硝基苯磺酸钠盐(DBNBS)的溶液中吹入氢气，并用表明DBNBS偶氮化合物在450纳米附近的吸光度与氢自由基产生浓度之间关系的标定曲线C，来确定氢自由基的浓度。
文档编号G01N21/80GK1463363SQ0280187
公开日2003年12月24日 申请日期2002年5月27日 优先权日2001年5月29日
发明者白畑实隆, 大坪一道 申请人:日本多宁股份有限公司, 白畑实隆
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