专利名称：CoxB IgG/IgM酶联免疫法检测试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及CoxB IgG/IgM酶联免疫法检测试剂盒。
背景技术：
柯萨奇病毒是肠道病毒的一种，柯萨奇病毒感染后，可出现无菌性脑膜炎、肌麻庳、疱疹性咽峡炎、心肌炎和心包炎、急性出血性结膜炎等。该病毒又分成A、B 二组，B组有6个血清型。CoxB IgG/IgM的测定能够及早检测出患者是否新近遭受感染，特别对急性期的心肌炎进行CoxB IgG/IgM的普查，将对心肌疾病提供诊断依据，特别是CoxB IgM的阳性，将提示患者有可能心肌早期受到感染，同时可配合临床诊断和观察的有利指标，对患者的治疗和康复有着重要的意义。柯萨奇病毒感染的诊断方法主要有三种，病毒分离鉴定、血清学检查及分子生物学技术。病毒分离培养和分子生物学法繁复费事，传统的RT-PCR技术耗时长，存在交叉污染的风险，无法满足病毒流行期间同时处理大量样本的需要。血清学的进展(快速法)开拓了该病毒的快速诊断技术，其具有高灵敏度及高特异性的优势，在病毒感染的诊断中发挥了越来越重要的作用。
实用新型内容本实用新型的目的是克服现有技术中的缺陷，提供一种CoxB IgG/IgM酶联免疫法检测试剂盒。本实用新型采用了下述技术方案来解决上述技术问题一种CoxB IgG/IgM酶联免疫法检测试剂盒，包括盒体，盒体内置有8个下凹瓶位、 8瓶设有密封盖的试剂瓶、一块多孔酶联板及一张封板膜，其中，所述8个下凹瓶位内分别对应放置装有样品稀释液、阳性对照、阴性对照、IgG酶标抗体、底物A、底物B、浓缩洗涤液和终止液的试剂瓶各一瓶，所述多孔酶联板包括数个底面封闭且顶面敞口的微反应孔，微反应孔的内壁包被有CoxB IgG/IgM抗原层。CoxB IgG/IgM酶联免疫法检测试剂盒即为CoxB IgG或CoxB IgM酶联免疫法检测
试齐U盒。CoxB IgG/IgM抗原层即为CoxB IgG抗原层或CoxB IgM抗原层。所述下凹瓶位可由泡沫塑料或纸板制成。所述多孔酶联板垫于试剂瓶之下或者放置于试剂瓶之上，所述封板膜与所述多孔酶联板相邻放置。所述封板膜的大小与多孔酶联板的顶面大小一致。进一步的，所述多孔酶联板包括支撑架(1)，及放置在支撑架之上的数条可拆的微孔反应板条(2)，每条微孔反应板条设有数个可拆的微反应孔(3)。
进一步的，所述多孔酶联板上共设有48个或96个微反应孔。进一步的，所述多孔酶联板外设有封套。试剂盒中的样品稀释液也可采用常规的ELISA样品稀释液，如含有磷酸盐缓冲液的样品稀释液，或者也可以为含有0. OlM磷酸缓冲液(PBS，pH7. 2-7. 5)和< 0. 1% NaN3的 10%小牛血清。试剂盒中的阳性对照为含有CoxB IgG抗体或CoxB IgM抗体的阳性血清。试剂盒中的阴性对照为阴性血清。试剂盒中的IgG酶标抗体为辣根过氧化物酶(HRP)标记的IgG抗体，IgG抗体可以是各种类型的IgG抗体，如鼠抗人IgG、羊抗人IgG或兔抗人IgG。试剂盒中的底物A、底物B均为常规ELISA底物A和底物B。试剂盒中的浓缩洗涤液可采用常规的浓缩的ELISA洗涤液，如含有吐温的磷酸盐缓冲液，或者也可以为20X浓缩的0. 01MPBS。试剂盒中的终止液可采用常规的ELISA终止液。多孔酶联板上包被的CoxB IgG/IgM抗原为经纯化的CoxB IgG/IgM抗原(即CoxB IgG抗原或CoxB IgM抗原)。其中，包被有CoxB IgG/IgM抗原层的多孔酶联板可采用常规的抗原包被酶联板后用封闭液封闭的方式制备。试剂盒中除包括上述物质外，还可包括常规ELISA测试时所需要的试剂、工具或容器，如蒸馏水或去离子水、洗液滴瓶、试管以及说明书等。本实用新型的CoxB IgG/IgM酶联免疫法检测试剂盒特异性与灵敏度高，操作时间短，可用于多人份定性检测CoxB IgG/IgM。
图1 试剂盒内部分解结构示意图图2 48孔酶联板结构示意图图3 96孔酶联板结构示意图
具体实施方式
实施例1CoxB IgG/IgM酶联免疫法检测试剂盒，包括盒体，盒体内如图1所示置有8个相邻的下凹瓶位(11-18)、8瓶设有密封盖的试剂瓶、一块多孔酶联板3及一张封板膜4，其中，所述8个下凹瓶位内分别对应放置装有样品稀释液的试剂瓶21、装有阳性对照的试剂瓶22、 装有阴性对照的试剂瓶23、装有IgG酶标抗体的试剂瓶M、装有底物A的试剂瓶25、装有底物B的试剂瓶沈、装有浓缩洗涤液的试剂瓶27和装有终止液的试剂瓶观各一瓶，所述多孔酶联板3包括数个底面封闭且顶面敞口的微反应孔，微反应孔的内壁包被有CoxBIgG/ IgM抗原层。所述多孔酶联板3垫于各试剂瓶之下，所述封板膜4与所述多孔酶联板3上下相邻放置，所述封板膜4的大小与多孔酶联板3的顶面大小一致。所述多孔酶联板3外设有封套5。所述多孔酶联板3如图2和图3所示包括支撑架31，及放置在支撑架之上的数条可拆的微孔反应板条32，每条微孔反应板条设有数个可拆的微反应孔33。对48人份试剂盒，所述多孔酶联板上共设有48个微反应孔，所述样品稀释液为5ml,阳性对照和阴性对照均为0. 5ml, IgG酶标抗体为5ml，底物A和底物B均为2. 5ml，浓缩洗涤液为20ml，终止液为2. 5ml。对96人份的试剂盒，所述多孔酶联板上共设有96个微反应孔，所述样品稀释液为 IOml,阳性对照和阴性对照均为1ml，IgG酶标抗体为10ml，底物A和底物B均为5ml，浓缩洗涤液为30ml，终止液为5ml。试剂盒中多孔酶联板及各种试剂配制 1.样品稀释液0. OlM 磷酸缓冲液(PBS, ρΗ7· 2-7. 5)，< 0. 1% NaN3,10%小牛血清。2.阳性对照含有< 0. l%NaN3的阳性人血清。已灭活人血清溶于含蛋白的磷酸盐缓冲液；并已经过乙肝病毒表面抗原、人类免疫缺陷病毒(1，2型)抗体，丙肝病毒抗体， 梅毒螺旋体抗体均为阴性。3.阴性对照含有< 0. l%NaN3的阴性人血清。已灭活人血清溶于含蛋白的磷酸盐缓冲液；并已经过乙肝病毒表面抗原、人类免疫缺陷病毒(1，2型)抗体，丙肝病毒抗体， 梅毒螺旋体抗体均为阴性。4. IgG酶标抗体溶于PBS (pH7. 2-7. 5)，含有(HRP)羊抗人Ig和含有防腐剂的载体蛋白。5.底物A 含有0. IM枸橼酸钠，0. 01%过氧化氢。6.底物B:含四甲基联苯胺，二甲亚砜，醋酸钠溶液。7.浓缩洗涤液(20X)浓缩的0. 0IMPBS。8.终止液2mol/L H2S04。9.包被有CoxB IgG/IgM抗原层的多孔酶联板采用常规的抗原包被酶联板后用封闭液封闭的方式制备。本实用新型试剂盒的储存条件2 8°C保存。试剂盒的使用方法试剂盒可对血清样本进行检测，按标准方法收集血清，待测。如不立即测定，放置在-20°C以下冻存，且避免反复冻融.1.试剂配制1. 1溶液的配制取试剂盒中的浓缩洗涤液1瓶，以1 20稀释混勻、溶解后装入洗瓶(自备)内待用。1. 2实验准备将待测标本从冰箱中取出，置室温解冻后，按实验要求将待测标本编号。1.3将待测标本编号后仔细核对无误后，将待测血清用样品稀释液(1 100稀释)即10 μ 1血清加到Iml标本稀释液中，混勻。2.必须满足的实验条件2. 1将试剂盒从2 8°C冰箱内取出，置室温放置30分钟，将试剂充分混勻即可使用。2. 2使用酶标仪测定的波长为450nm。2. 3调整水浴箱的温度为37°C。3.试剂盒中的阴阳性对照品直接使用，无需再稀释，每孔加100μ 1。[0056]4.操作步骤加样量(μ1)
权利要求1.一种CoxB IgG/IgM酶联免疫法检测试剂盒，包括盒体，其特征在于，盒体内置有8 个下凹瓶位、8瓶设有密封盖的试剂瓶、一块多孔酶联板及一张封板膜，所述8个下凹瓶位内分别对应放置装有样品稀释液、阳性对照、阴性对照、IgG酶标抗体、底物A、底物B、浓缩洗涤液和终止液的试剂瓶各一瓶，所述多孔酶联板包括数个底面封闭且顶面敞口的微反应孔，微反应孔的内壁包被有CoxB IgG/IgM抗原层。
2.如权利要求1所述CoxBIgG/IgM酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于，所述多孔酶联板垫于试剂瓶之下或者置于试剂瓶之上。
3.如权利要求1所述CoxBIgG/IgM酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于，所述封板膜与所述多孔酶联板相邻放置。
4.如权利要求1所述CoxBIgG/IgM酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于，所述封板膜的大小与多孔酶联板的顶面大小一致。
5.如权利要求1所述CoxBIgG/IgM酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于，所述多孔酶联板包括支撑架，及放置在支撑架之上的数条可拆的微孔反应板条，每条微孔反应板条设有数个可拆的微反应孔。
6.如权利要求1所述CoxBIgG/IgM酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于，所述多孔酶联板上共设有48个或96个微反应孔。
7.如权利要求1所述CoxBIgG/IgM酶联免疫法检测试剂盒，其特征在于，所述多孔酶联板外设有封套。
专利摘要本实用新型公开了一种CoxB IgG/IgM酶联免疫法检测试剂盒，包括盒体，盒体内置有8个下凹瓶位、8瓶设有密封盖的试剂瓶、一块多孔酶联板及一张封板膜，所述8个下凹瓶位内分别对应放置装有样品稀释液、阳性对照、阴性对照、IgG酶标抗体、底物A、底物B、浓缩洗涤液和终止液的试剂瓶各一瓶，所述多孔酶联板包括数个底面封闭且顶面敞口的微反应孔，微反应孔的内壁包被有CoxB IgG/IgM抗原层。本实用新型的CoxB IgG/IgM酶联免疫法检测试剂盒可用于检测CoxB IgG/IgM。
文档编号G01N33/569GK202049160SQ20112013736
公开日2011年11月23日 申请日期2011年5月3日 优先权日2011年5月3日
发明者崔贻芬 申请人:上海尧浩生物技术有限公司
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