专利名称：一种dpph-hplc法检测黑果枸杞果汁中抗氧化成分的方法
技术领域：
本发明涉及一种果汁抗氧化成分的检测方法，尤其涉及一种DPPH-HPLC法检测黑果枸杞果汁中抗氧化成分的方法。
背景技术：
黑果枸杞是以爺科枸杞属植物黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.)的果实,呈紫红色，无毒，具有健胃补脾、滋阴润肺、活血消食等功效。现代科学研究证明黑果枸杞果实具有抗氧化、抗疲劳、抗缺氧、降血脂、防治动脉硬化等作用，广泛应用于医药、食品及化妆品O黑果枸杞果汁中主要含有花色苷类物质、总多酚等抗氧化成分。但是，目前抗氧化
实验操作步骤繁琐、精密度差，并不能对抗氧化的成分进行归属。黑果枸杞果汁抗氧化成分还没有完整的检测方法，不利于保证黑果枸杞果汁的品质。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种简单、快速、准确的DPPH-HPLC法检测黑果枸杞果汁中抗氧化成分的方法。为解决上述问题，本发明所述的一种DPPH-HPLC法检测黑果枸杞果汁中抗氧化成分的方法，其特征在于该方法首先将质量浓度为O. 0Γ5%的抗氧化剂1，I-二苯基-2三硝基苯肼(DPPH)与黑果枸杞果汁按100: f250:1的体积比在温度为25 30°C的条件下避光反应15mirT30min，得到反应后黑果枸杞果汁；然后分别将未反应黑果枸杞果汁与所述反应后黑果枸杞果汁注入高效液相色谱(HPLC)中检测，分别得到未反应黑果枸杞果汁的色谱图与反应后黑果枸杞果汁的色谱图；最后，比较所述未反应黑果枸杞果汁的色谱图与所述反应后黑果枸杞果汁的色谱图中相应的各个峰的峰面积；若峰面积减少的峰，即说明黑果枸杞果汁中具有抗氧化成分。所述黑果枸杞果汁为原果汁或5000道尔顿有机膜过滤后的果汁。所述高效液相色谱(HPLC)检测方法是指流动相A为甲醇，流动相B为纯净水；流速为O. 8 I. 5mL/min，检测波长为210 nm 390 nm ;流动相条件为0 min 15min，5%A 5%A，95%B"95%B ；15 min 25 min,5 %A 15 %A，95%B 85%B ;25 mirT40 min,15% A 25% A,85%B 75%B。本发明与现有技术相比具有以下优点
I、由于本发明采用DPPH-HPLC法测定黑果枸杞果汁中抗氧化成分，而该法具有所用试剂量少、操作简单方便、灵敏度高、精密度高稳定性好等特点，因此，适宜测定黑果枸杞果汁抗氧化成分，从而实现对黑果枸杞果汁进行保健功能的有效性评价。2、由于本发明采用DPPH-HPLC法测定黑果枸杞果汁中抗氧化成分，而该法只需比较对应峰的峰面积即可判断抗氧化成分。如图I为黑果枸杞果汁的色谱图，即未加入DPPH溶液的黑果枸杞果汁色谱图。图2为加入DPPH后的黑果枸杞果汁的色谱图。比较色谱图中各个色谱峰，其中色谱图中色谱峰A、B、C、D、E、F的峰面积减少，说明化合物A、B、C、D、E、F为抗氧化成分。3、本发明简单、快速，易于推广。
下面结合附图对本发明的具体实施方式
作进一步详细的说明。图I为未加入抗氧化剂DPPH色谱图。图2为加入抗氧化剂DPPH色谱图。
具体实施方式
·实施例I 一种DPPH-HPLC法检测黑果枸杞果汁中抗氧化成分的方法，该方法首先将质量浓度为O. 01%的抗氧化剂1，I- 二苯基-2三硝基苯肼(DPPH)与黑果枸杞原果汁按100:1的体积比(mL/mL)在温度为30°C的条件下避光反应15min，得到反应后黑果枸杞果汁；然后分别将未反应黑果枸杞果汁与反应后黑果枸杞果汁注入高效液相色谱(HPLC)中检测，分别得到未反应黑果枸杞果汁的色谱图与反应后黑果枸杞果汁的色谱图；最后，比较未反应黑果枸杞果汁的色谱图与反应后黑果枸杞果汁的色谱图中相应的各个峰的峰面积；若峰面积减少的峰，即说明黑果枸杞果汁中具有抗氧化成分。其中高效液相色谱(HPLC)检测方法是指流动相A为甲醇，流动相B为纯净水；流速为O. 8mL/min,检测波长为210 nm nm ;流动相条件为0 min 15min, 5%A 5%A,95%B"95%B ；15 min 25 min,5 %A"l5 %A,95%B^85%B ；25 mirT40 min,15% A 25% A,85%B 75%B。实施例2 —种DPPH-HPLC法检测黑果枸杞果汁中抗氧化成分的方法，该方法首先将质量浓度为5%的抗氧化剂1，I-二苯基-2三硝基苯肼(DPPH)与5000道尔顿有机膜过滤后的黑果枸杞果汁按250 1的体积比(mL/mL)在温度为25°C的条件下避光反应30min，得到反应后黑果枸杞果汁；然后分别将未反应黑果枸杞果汁与反应后黑果枸杞果汁注入高效液相色谱(HPLC)中检测，分别得到未反应黑果枸杞果汁的色谱图与反应后黑果枸杞果汁的色谱图；最后，比较未反应黑果枸杞果汁的色谱图与反应后黑果枸杞果汁的色谱图中相应的各个峰的峰面积；若峰面积减少的峰，即说明黑果枸杞果汁中具有抗氧化成分。其中高效液相色谱(HPLC)检测方法是指流动相A为甲醇，流动相B为纯净水；流速为O. 8mL/min，检测波长为360 nm ;流动相条件为0 min 15min，5%A 5%A，95%B 95%B ；15 min 25 min,5 %A"l5 %A,95%B^85%B ；25 mirT40 min,15% A 25% A，85%B 75%B。实施例3 —种DPPH-HPLC法检测黑果枸杞果汁中抗氧化成分的方法，该方法首先将质量浓度为O. 1%的抗氧化剂1，I-二苯基-2三硝基苯肼(DPPH)与黑果枸杞原果汁按150 1的体积比(mL/mL)在温度为25°C的条件下避光反应20min，得到反应后黑果枸杞果汁；然后分别将未反应黑果枸杞果汁与反应后黑果枸杞果汁注入高效液相色谱(HPLC)中检测，分别得到未反应黑果枸杞果汁的色谱图与反应后黑果枸杞果汁的色谱图；最后，比较未反应黑果枸杞果汁的色谱图与反应后黑果枸杞果汁的色谱图中相应的各个峰的峰面积；若峰面积减少的峰，即说明黑果枸杞果汁中具有抗氧化成分。其中高效液相色谱(HPLC)检测方法是指流动相A为甲醇，流动相B为纯净水；流速为I. 2mL/min，检测波长为254 nm ;流动相条件为0 min 15min，5%A 5%A，95%B 95%B ；15 min 25 min,5 %A"l5 %A,95%B^85%B ；25 mirT40 min,15% A 25% A，85%B 75%B。实施例4 一种DPPH-HPLC法检测黑果枸杞果汁中抗氧化成分的方法，该方法首先将质量浓度为1%的抗氧化剂1，I-二苯基-2三硝基苯肼(DPPH)与5000道尔顿有机膜过滤后的黑果枸杞果汁按180:1的体积比(mL/mL)在温度为32°C的条件下避光反应25min，得到反应后黑果枸杞果汁；然后分别将未反应黑果枸杞果汁与反应后黑果枸杞果汁注入高效液相色谱(HPLC)中检测，分别得到未反应黑果枸杞果汁的色谱图与反应后黑果枸杞果汁的色谱图；最后，比较未反应黑果枸杞果汁的色谱图与反应后黑果枸杞果汁的色谱图中相应的各个峰的峰面积；若峰面积减少的峰，即说明黑果枸杞果汁中具有抗氧化成分。 其中高效液相色谱(HPLC)检测方法是指流动相A为甲醇，流动相B为纯净水；流速为lmL/min，检测波长为390 nm ;流动相条件为0 min 15min，5%A 5%A，95%B 95%B ; 15min 25 min,5 %A"l5 %A,95%B^85%B ；25 mirT40 min,15% A 25% A，85%B 75%B。
实施例5 —种DPPH-HPLC法检测黑果枸杞果汁中抗氧化成分的方法，该方法首先将质量浓度为2%的抗氧化剂1，I-二苯基-2三硝基苯肼(DPPH)与5000道尔顿有机膜过滤后的黑果枸杞果汁按200:1的体积比(mL/mL)在温度为35°C的条件下避光反应24min，得到反应后黑果枸杞果汁；然后分别将未反应黑果枸杞果汁与反应后黑果枸杞果汁注入高效液相色谱(HPLC)中检测，分别得到未反应黑果枸杞果汁的色谱图与反应后黑果枸杞果汁的色谱图；最后，比较未反应黑果枸杞果汁的色谱图与反应后黑果枸杞果汁的色谱图中相应的各个峰的峰面积；若峰面积减少的峰，即说明黑果枸杞果汁中具有抗氧化成分。其中高效液相色谱(HPLC)检测方法是指流动相A为甲醇，流动相B为纯净水；流速为I. 5mL/min，检测波长为290 nm ;流动相条件为0 min 15min，5%A 5%A，95%B 95%B ；15 min 25 min,5 %A"l5 %A,95%B^85%B ；25 mirT40 min,15% A 25% A，85%B 75%B。
权利要求
1.一种DPPH-HPLC法检测黑果枸杞果汁中抗氧化成分的方法，其特征在于该方法首先将质量浓度为O. 0Γ5%的抗氧化剂1，I- 二苯基-2三硝基苯肼与黑果枸杞果汁按100: f250:1的体积比在温度为25 30°C的条件下避光反应15mirT30min，得到反应后黑果枸杞果汁；然后分别将未反应黑果枸杞果汁与所述反应后黑果枸杞果汁注入高效液相色谱中检测，分别得到未反应黑果枸杞果汁的色谱图与反应后黑果枸杞果汁的色谱图；最后，比较所述未反应黑果枸杞果汁的色谱图与所述反应后黑果枸杞果汁的色谱图中相应的各个峰的峰面积；若峰面积减少的峰，即说明黑果枸杞果汁中具有抗氧化成分。
2.如权利要求I所述的一种DPPH-HPLC法检测黑果枸杞果汁中抗氧化成分的方法，其特征在于所述黑果枸杞果汁为原果汁或5000道尔顿有机膜过滤后的果汁。
3.如权利要求I所述的一种DPPH-HPLC法检测黑果枸杞果汁中抗氧化成分的方法，其特征在于所述高效液相色谱检测方法是指流动相A为甲醇，流动相B为纯净水；流速为O. 8 I. 5mL/min，检测波长为210 nm 390 nm ;流动相条件为0 min 15min，5%A 5%A，95%B"95%B ；15 min 25 min,5 %A"l5 %A,95%B^85%B ；25 mirT40 min,15% A "25% A,85%B 75%B。
全文摘要
本发明涉及一种DPPH-HPLC法检测黑果枸杞果汁中抗氧化成分的方法，该方法首先将抗氧化剂1,1-二苯基-2三硝基苯肼与黑果枸杞果汁避光反应，得到反应后黑果枸杞果汁；然后分别将未反应黑果枸杞果汁与所述反应后黑果枸杞果汁注入高效液相色谱中检测，分别得到未反应黑果枸杞果汁的色谱图与反应后黑果枸杞果汁的色谱图；最后，比较所述未反应黑果枸杞果汁的色谱图与所述反应后黑果枸杞果汁的色谱图中相应的各个峰的峰面积；若峰面积减少的峰，即说明黑果枸杞果汁中具有抗氧化成分。本发明具有所用试剂量少、操作简单方便、灵敏度高、精密度高稳定性好等特点，可以实现对黑果枸杞果汁中抗氧化成分进行有效性的评价。
文档编号G01N30/02GK102879500SQ20121038184
公开日2013年1月16日 申请日期2012年10月11日 优先权日2012年10月11日
发明者陈晨, 邵赟, 陶燕铎, 李玉林, 赵晓辉, 梅丽娟, 岳会兰, 陈涛 申请人:中国科学院西北高原生物研究所
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