专利名称：用于检测微生物的方法和组合物的制作方法
用于检测微生物的方法和组合物相关专利申请的交叉引用本申请要求2008年2月14日提交的美国临时申请序列号61/028，898的权利，该 临时申请以引用方式并入本文。
背景技术：
真菌微生物(例如酵母和霉菌)在自然界中普遍存在。虽然真菌微生物(例如酵 母和霉菌)在一些领域如抗生素或酶的生产中是有用的，但已知它们会造成食物腐败，某 些种类还已知会产生毒素或者引起人类或动物感染。真菌微生物包括非常庞大和多样化的一群化能异养微生物。有大约1500种酵母 菌。大多数酵母菌以单细胞生物体形式存在，通过出芽生殖繁殖。一些种类以多细胞形式 存在，还有其他种类通过二分分裂方式繁殖。霉菌包括可形成长长的多细胞菌丝的丝状真 菌。霉菌通过形成小孢子来繁殖，这些孢子通常能抵抗多种恶劣环境条件，如极端温度。真菌微生物的存在通常是通过标准的培养技术来检测。将样品放入营养培养基中 温育一段时间，以让微生物增殖。温育后，菌落可以肉眼看见，或者可用显微镜检查样品以 观察和鉴定微生物。基于生长的培养试验法仍是真菌微生物检测和计数的最通用方法。真菌微生物的生长速度各不相同。某些酵母种类可每隔大约30-40分钟进行细胞 分裂。这些酵母生物体能在约1-2天后检测和计数。相比之下，某些霉菌每次细胞分裂需 要几个小时。这些霉菌能在约4-5天后检测和计数。尽管目前有多种方法供真菌微生物检测和计数，但仍需要更快更灵敏的方法来进 行真菌微生物检测和计数。
发明内容
本发明涉及检测样品中的酵母和/或霉菌微生物并任选对其进行计数。尽管真菌 微生物存在遗传和生化多样性，但本发明方法和组合物能提供对样品中多种酵母和霉菌微 生物的简便且同时进行的检测。在一个方面，本发明提供用于检测靶标微生物或其成分的方法。该方法包括提供 识别元件和怀疑含有靶标微生物的样品，其中该识别元件选择性结合酵母聚糖。该方法还 包括使该样品与该识别元件之间接触并检测该靶标微生物。任选地，该方法还可包括在培 养装置中提供营养培养基的步骤和将该样品在容许至少一次细胞分裂的条件下进行温育 的步骤。在另一个方面，本发明提供用于检测靶标微生物或其成分的方法。该方法可包括 提供选择性结合酵母聚糖的识别元件、产生能被检测到的信号的信号元件和怀疑含有靶标 微生物的样品。信号元件可包含连接部分。该方法还包括使该样品与该识别元件和该信号 元件之间接触并检测该能被检测到的信号。任选地，该方法还可包括在培养装置中提供营 养培养基的步骤和将该样品在容许至少一次细胞分裂的条件下进行温育的步骤。在另一个方面，本发明提供用于检测靶标微生物或其成分的方法。该方法可包括
5提供识别元件、产生能被检测到的信号的信号元件和怀疑含有靶标微生物的样品。该识别 元件可与该信号元件连接且可选择性结合酵母聚糖。该方法还包括使该样品与该识别元件 之间接触并检测该能被检测到的信号。任选地，该方法还可包括在培养装置中提供营养培 养基的步骤和将该样品在容许至少一次细胞分裂的条件下进行温育的步骤。在另一个方面，本发明提供用于检测靶标微生物或其成分的方法。该方法可包括 提供包含脂质双层和产生能被检测到的信号的信号元件的脂质囊泡、选择性结合细胞壁成 分的识别元件和怀疑含有该靶标微生物的样品。该方法还可包括使该样品、该识别元件和 该脂质囊泡之间在能有效引起该脂质囊泡与如果存在的该靶标微生物的结合的条件下接 触，并检测该能被检测到的信号。任选地，该方法还可包括在培养装置中提供营养培养基的 步骤和将该样品在容许至少一次细胞分裂的条件下进行温育的步骤。在另一个方面，本发明提供用于检测靶标微生物的组合物。该组合物可包含选择 性结合酵母聚糖的捕获剂和产生能被检测到的信号的信号元件。术语“被分析物”和“抗原”可互用，指所关注的微生物特征性的各种分子(如酵母 聚糖)或分子表位(如酵母聚糖的不同结合位点)或微生物全细胞。它们包括细胞壁成分 (如细胞壁蛋白质)、细胞壁外成分(如甘露聚糖、几丁质或酵母聚糖)、细胞内成分(如细 胞质膜蛋白质)等。词语“优选的”和“优选地”是指在某些情况下可提供某些有益效果的本发明实施 例。然而，在相同的或其他的情况下，其他实施例也可以是优选的。此外，述及一个或多个 优选的实施例并非暗示其他实施例不可用，也并非旨在将其他实施例排除在本发明的范围 之外。术语“包含”和其变型形式在说明书和权利要求书中出现时不具有限制性意义。本文所用的“ 一种”、“至少一种”和“ 一种或多种”可互换使用。因此，例如，怀疑 含有“一种”靶标微生物的样品可解释为意指该样品可包含“一种或多种”靶标微生物。术语“和/或”意指所列要素的一个或全部，或所列要素的任何两个或更多个的组
口 o另外，在本文中，由端点界定的数值范围包括该范围内所含的所有数值(如，1至5 包括 1、1. 5,2,2. 75,3,3. 80、4、5 等)。上述的“发明内容”并非意图描述本发明的每个公开的实施例或每种实施方式。下 面的描述更为具体地举例说明了示例性的实施例。在本专利申请中的几个地方，通过实例 的列表来提供指导，这些实例可以以各种组合来使用。在每种情况中，所述及的列表只是用 作代表性的群组，不应被解释为是排他性的列表。
本发明将结合下面所列的附图进行进一步的阐述，其中在几个视图中相同的结构 由相同的数字指代。图1是根据本发明一个实施例，信号元件和靶标微生物之间的结合相互作用的示 意图。图2a是根据本发明一个实施例，靶标微生物、识别元件和带标记的第二识别元件 之间的结合相互作用的示意图。
图2b是根据本发明一个实施例，靶标微生物、带生物素标记的识别元件和带链霉 抗生物素蛋白标记的信号元件之间的结合相互作用的示意图。图3是根据本发明一个实施例，连接到载体材料的捕获剂、细胞壁成分、带生物素 标记的识别元件和带链霉抗生物素蛋白标记的信号元件之间的结合相互作用的示意图。图4a是根据本发明一个实施例，靶标微生物、带生物素标记的识别元件和含有潜 在信号元件的带生物素标记的脂质囊泡的结合相互作用的示意图。图4b是图4a的潜在信号元件的活化的示意图。图5a是根据本发明一个实施例，靶标微生物、带生物素标记的识别元件、链霉抗 生物素蛋白和含有潜在信号元件的带生物素标记的脂质囊泡的结合相互作用的示意图。图5b是图5a的潜在信号元件的活化的示意图。图6a是根据本发明一个实施例，连接到载体材料的捕获剂、细胞壁成分、带生物 素标记的识别元件、链霉抗生物素蛋白和含有潜在信号元件的带生物素标记的脂质囊泡的 结合相互作用的示意图。图6b是图6a的潜在信号元件的活化的示意图。图7a是使用捕获剂检测样品中的靶标微生物的方法的框图。图7b是检测样品中的靶标微生物的方法的框图。图7c是采用生长步骤检测样品中的靶标微生物的方法的框图。
具体实施例方式当试图开发用于检测酵母和霉菌微生物当中的大多数或全部种类的快速方法时， 这两类微生物的多样性提出了一个挑战。多样性可由各真菌微生物的基因组和蛋白质组的 差异看出。多样性还由这些微生物在传统的生长培养基上的生长速度在相对较宽的范围得 到反映。本发明涉及用于快速检测多种多样的酵母和霉菌微生物的方法和组合物。这些方 法包括使用选择性结合在大量不同的真菌微生物中存在的被分析物(例如细胞壁成分)的 识别元件，来传递用于检测这些微生物的信号元件。酵母聚糖作为多种真菌微生物的细胞 壁中存在的葡聚糖，是检测酵母和霉菌微生物的优选被分析物。真菌细胞壁基质的主要多糖由非纤维素葡聚糖例如酵母聚糖和糖原样化合物、甘 露聚糖(甘露糖的聚合物)、壳聚糖(葡糖胺的聚合物)和半乳聚糖(半乳糖的聚合物)组 成。可能存在少量的岩藻糖、鼠李糖、木糖和糖醛酸。许多真菌尤其是酵母具有处于a-和葡聚糖的基质中的可溶性肽甘露聚糖 (peptidomannan)作为它们外细胞壁的成分。甘露聚糖、半乳甘露聚糖和鼠李甘露聚糖造成 对许多医学上重要的酵母和霉菌的免疫应答(鼠李甘露聚糖的情况较少)。甘露聚糖是甘 露糖的聚合物或具有a-D-甘露聚糖主链的杂聚糖。在结构上，甘露聚糖由内芯、外链和碱 敏感的寡甘露糖苷组成。用来检测微生物的信号元件主要分成两类明显信号元件和潜在信号元件。明显 信号元件是能容易被多种手段(如荧光)中的至少一种检测到的分子或组合物。明显信号 元件的非限制性例子包括染料(例如荧光染料)、颗粒(例如磁性颗粒、聚合物颗粒或金颗 粒，其可任选用染料标记)、多肽(例如酶或荧光蛋白如GFP或YFP)以及其他可用可检测部分(例如荧光素)进行标记并连接到识别元件(例如抗体)的化学基团(例如聚氧化烯)。 信号元件与识别元件的连接优选不干扰识别元件与其相应的结合伴侣的相互作用。潜在信号元件是被隔离或保护而不能容易检测到的分子或组合物，直到隔离或保 护被降低到该信号元件变得可检测的这么一个程度才能被检测到。潜在信号元件的非限制 性例子包括被隔离在脂质囊泡当中的酶、酶底物、染料和/或荧光分子。将酶与其相应的底 物隔离开来能防止发色反应或发荧光反应。可将荧光分子以足够高的浓度包装在脂质囊泡 中，以促进荧光猝灭。或者，可将荧光分子与相应的猝灭试剂一起包装在脂质囊泡中。当脂 质囊泡破开时，荧光分子和/或猝灭试剂的浓度可变得足够稀释以克服猝灭作用，从而变 得可检测地发荧光。图1显示使用直接连接到识别元件的明显信号元件检测靶标微生物的方法的一 个实施例。在这个实施例中，将含有包含被分析物122(例如酵母聚糖)的靶标微生物120 的样品与选择性结合被分析物122的识别元件130(例如抗体)混合。识别元件130还 包含直接连接到识别元件130的信号元件140(例如荧光染料)。有多种将小分子(例 如生物素或荧光染料)或多肽(例如酶)连接到抗体的方法是本领域公知的(参见例如 "Antibodies, A Laboratory Manual ”;E，Harlow 禾口 D. Lane (编辑)；1988 ；冷泉港实验室出 版社；美国纽约州冷泉港)。异硫氰酸荧光素(FITC)是可直接连接到识别元件的荧光信号 元件一个例子。图1中还显示了任选的载体材料115。在本发明方法中，靶标微生物120可自由悬 浮于液体相中，或者可附接到载体材料115。载体材料115的非限制性例子包括塑料薄膜、 颗粒或基材(例如微量滴定板)；玻璃薄膜、颗粒或基材(例如玻璃小珠或载玻片)；金属 薄膜、颗粒或基材；膜和/或过滤器(例如玻璃纤维过滤器、尼龙或硝酸纤维素)；陶瓷颗粒 或基材；水凝胶(例如琼脂糖或聚丙烯酰胺)，或者任何两种或更多种前述材料的组合。有 多种将靶标微生物120固定于载体材料115的方法是本领域公知的。固定靶标微生物120 的非限制性例子包括热固定、化学交联(例如使用戊二醛)、抗体捕获等。固定靶标微生物 120的方法应加以选择，使得它不会掩盖、改变或破坏全部的被分析物122而妨碍识别元件 130选择性结合被分析物122。图2a显示使用间接连接到识别元件的明显信号元件检测靶标微生物的方法的一 个实施例。在这个实施例中，将含有包含被分析物222 (例如酵母聚糖)的靶标微生物220 的样品与选择性结合被分析物222的识别元件230 (例如抗体)混合。标记有信号元件240 的第二识别元件235 (例如第二抗体)选择性结合识别元件230。在这个实施例中，信号元 件240包含将酶底物254转化成可检测酶产物256的酶活性。酶反应可通过本领域公知的 多种手段检测，例如通过颜色变化(例如光吸收或反射)、通过荧光、通过阻抗或电导率或 通过发光来检测。如上所述，靶标微生物220可自由悬浮于液体相中，或者可附接到载体材 料(未显示)。图2b显示使用间接连接到识别元件的明显信号元件检测靶标微生物的方法的另 一个实施例。在这个实施例中，将含有包含被分析物222(例如酵母聚糖)的靶标微生物 220的样品与选择性结合被分析物222且包含生物素基团236的识别元件230 (例如抗体) 混合。标记有信号元件240的生物素结合分子238 (例如抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋 白)选择性结合生物素基团236。在这个实施例中，信号元件240包含将酶底物254转化成
8可检测酶产物256的酶活性。信号元件240通过接头237连接到生物素结合分子238。用 来连接不同的分子如两个多肽的接头237是本领域公知的，在下文有更详细的描述。酶反 应可通过多种上述的手段检测。如上所述，靶标微生物220可自由悬浮于液体相中，或者可 附接到载体材料(未显示)。图3显示在夹心型测定中使用明显信号元件检测靶标微生物的方法的一个实施 例。在这个实施例中，捕获剂330a(例如选择性结合酵母聚糖的抗体或受体)连接到载体 材料315。将含有被分析物322 (例如酵母聚糖)的样品与标记有生物素336的识别元件 330b (例如选择性结合酵母聚糖的抗体或受体)、标记有信号元件352的生物素结合分子 338(例如抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白)和捕获剂330a(连接到载体材料315)接触， 以形成图3中所示的复合物。在这个实施例中，信号元件352包含将酶底物354转化成可 检测酶产物356的酶活性。在这个和其他的实施例中，信号元件352可通过任选的接头337 连接到生物素结合分子338，只要接头337不会妨碍生物素结合分子338结合生物素336和 不会阻断信号元件352的酶活性。接头337的例子在下文描述。载体材料315可以多种形 式(例如薄膜、膜、颗粒)构造和用多种不同的材料构造。载体材料115的非限制性例子在 上文描述过。图4a显示使用潜在信号元件检测靶标微生物的方法的一个实施例。在这个实施 例中，将含有包含被分析物422(例如酵母聚糖)的靶标微生物420的样品与选择性结合被 分析物422的识别元件430(例如包含来自Dectin-1的碳水化合物识别结构域的抗体或组 合物)和脂质体450混合。在这个实施例中，脂质体450充当潜在信号元件，因为脂质体 450、识别元件430和靶标微生物420本身的相互作用并不一定导致产生能被检测到的信 号。更确切地，在这个实施例中，一个另外的步骤(在图4b中显示)可产生能被检测到的 信号。在这个实施例中，识别元件430还包含通过任选的接头437连接到识别元件的生物 素结合分子438 (例如抗生物素蛋白或链霉抗生物素蛋白)。或者，生物素结合元件438可 直接连接到识别元件430。脂质体450包含酶452和能被生物素结合元件438选择性结合的生物素436。脂质 体450可从包含生物素436的磷脂构造而成。例如，双层膜458可如实例3中所述从N-生 物素酰-1，2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(Avanti Polar Lipids，美国亚拉巴马 州Alabaster市)合成，和/或从非生物素酰化的磷脂合成。酶452可(例如以含水悬浮 液的形式)存在于脂质体450当中(如图4a中所示)。或者，酶452可以与脂质体450的 双层膜458物理缔合。本文所用的“物理缔合”意指该酶可跨越双层膜458的两个脂质层 (例如该酶的至少一部分在双层膜458的两侧面上)，或者酶452可分配到双层膜458的内 脂质层或外脂质层中。在一些实施例中，酶452可用化学加合物(例如烷基加合物)修饰 以促进与双层膜458的物理缔合。图4b显示图4a的潜在信号元件(酶452)如何可被活化以产生能被检测到的信 号。在这个实施例中，脂质体450的双层膜458被破坏，从而让酶452接触酶底物454并将 其转化成产物456。酶底物454向产物456的转化可导致产生能被检测到的信号。能被检 测到的信号可通过光学法检测。光学检测的非限制性例子包括比色测定法检测、荧光测定 法检测或发光测定法(例如生物发光或化学发光)检测。能被检测到的信号可以目测观察， 或者可用诸如分光光度计、荧光计或发光计之类的仪器来检测。或者，该信号可通过混合物中阻抗或电导率的变化来检测，或者通过混合物PH的变化来检测。双层膜458的渗透性可通过多种可导致形成脂质体碎片451的手段来破坏。破坏 手段的非限制性例子包括声振动、冷冻-解冻过程、加热、化学(例如表面活性剂)破坏、渗 透破坏(例如渗透溶解(osmolysis))，或用成孔剂如溶细胞肽(下文描述)进行的透化处 理。破坏双层膜458的渗透性可让酶452移出脂质体450、酶底物454移入脂质体450或 者同时进行这两方面。图4b中还显示接头437，其将识别元件430连接到生物素结合分子 438。图5a显示使用潜在信号元件检测靶标微生物的方法的另一个实施例。在这个实 施例中，将含有包含被分析物522(例如酵母聚糖)的靶标微生物520的样品与标记有生物 素536的选择性结合被分析物522的识别元件530 (例如包含来自Dectin-1的碳水化合物 识别结构域的抗体或组合物)、生物素结合分子538和包含生物素536的脂质体550混合。 生物素结合分子538可在识别元件530和脂质体550之间形成桥。在这个实施例中，脂质 体550充当潜在信号元件，因为脂质体550、识别元件530和靶标微生物520本身之间的相 互作用不一定导致产生能被检测到的信号。更确切地，在这个实施例中，一个另外的步骤 (在图5b中显示)可产生能被检测到的信号。在这个实施例中，识别元件530还包含生物 素536。图5a中还显示了酶底物554。 脂质体550包含酶552和能被生物素结合分子538选择性结合的生物素536。脂质 体550可从包含生物素536的磷脂构造而成。例如，双层膜558可如实例3中所述从N-生 物素酰-1，2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(Avanti Polar Lipids，美国亚拉巴马州 Alabaster市)构造而成，和/或从非生物素酰化的磷脂合成。酶552可(例如以含水悬浮 液的形式)存在于脂质体550当中(如图5a中所示)。或者，酶552可以与脂质体550的 双层膜558物理缔合。在一些实施例中，酶552可用化学加合物(例如烷基加合物)修饰 以促进与双层膜558的物理缔合。图5b显示图5a的潜在信号元件(酶552)如何可被活化以产生能被检测到的信 号。在这个实施例中，脂质体550的双层膜558被破坏，从而让酶552得以接触酶底物554 并将其转化成产物556。酶底物554向产物556的转化可导致产生能被检测到的信号。能 被检测到的信号可如上所述通过光学法检测，或者该信号可通过混合物中阻抗或电导的变 化或通过混合物PH的变化来检测。如上所述，双层膜558的渗透性可通过多种可导致形成 脂质体碎片551的手段来破坏。破坏双层膜558的渗透性可让酶552移出脂质体550、酶底 物554移入脂质体550或者同时进行这两方面。图6a显示在夹心型测定中使用潜在信号元件检测靶标微生物的方法的一个实施 例。在这个实施例中，捕获剂630a (例如选择性结合酵母聚糖的抗体)连接到载体材料615。 将含有被分析物622 (例如酵母聚糖)的样品与标记有生物素636的识别元件630b (例如 选择性结合酵母聚糖的抗体或受体)、生物素结合分子638 (例如抗生物素蛋白或链霉抗生 物素蛋白)、包含生物素636的脂质体和捕获剂630a(连接到载体材料615)接触，以形成图 6a中所示的复合物。或者，被分析物622可连接到靶标微生物或其片段(未显示)。脂质 体650还包含酶652。在这个实施例中，脂质体650充当潜在信号元件，因为脂质体650、识 别元件630a和630b和被分析物622本身之间的相互作用不一定导致产生能被检测到的信 号。更确切地，在这个实施例中，一个另外的步骤(在图6b中显示)可让酶652接触酶底物654，从而产生能被检测到的信号。脂质体658包含酶652和能被生物素结合分子638选择性结合的生物素636。脂质 体658可从包含生物素636的磷脂构造而成。例如，双层膜658可如实例3中所述从N-生 物素酰-1，2-二棕榈酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺(Avanti Polar Lipids，美国亚拉巴马州 Alabaster市)构造而成。酶652可(例如以含水悬浮液的形式)存在于脂质体650当中 (如图5a中所示)。或者，酶652可以与脂质体650的双层膜658物理缔合。在一些实施 例中，酶652可用化学加合物(例如烷基加合物)修饰以促进与双层膜658的物理缔合。图6b显示图6a的潜在信号元件(酶652)如何可被活化以产生能被检测到的信 号。在这个实施例中，脂质体650的双层膜658被信号产生元件如成孔多肽(未显示)破 坏，从而让酶底物654通过孔657进入脂质体而接触酶652。或者，脂质体650可通过上述 的其他化学和/或机械手段破坏。表1中显示可使脂质体透化的示例性多肽的列表。多肽对脂质体颗粒的裂解在 标题为“颗粒” (“PARTICLES”)的国际专利申请号PCT/GB98/03071和标题为“受保护 肽”(“ARMED PEPTIDES”)的国际专利申请号PCT/GB02/00033中有公开，这两个专利申请 以引用方式全文并入本文。双层膜658被透化后，酶652将酶底物654转化成产物656。如 上所述，酶底物654向产物656的转化可导致产生能被检测到的信号。破坏双层膜658的 渗透性可让酶652移出脂质体650、酶底物654移入脂质体650或者同时进行这两方面。载 体材料615可如上所述进行构造。表1.可破坏脂质体渗透性的肽
权利要求
一种检测靶标微生物或其成分的方法，包括提供选择性结合酵母聚糖的识别元件；使所述识别元件与怀疑含有所述靶标微生物的样品接触；以及检测所述靶标微生物。
2.一种检测靶标微生物或其成分的方法，包括 提供选择性结合酵母聚糖的识别元件；提供产生能被检测到的信号的信号元件，其中所述信号元件包含连接部分； 使所述识别元件和所述信号元件与怀疑含有所述靶标微生物的样品接触；以及 检测所述能被检测到的信号。
3.—种检测靶标微生物或其成分的方法，包括 提供选择性结合酵母聚糖的识别元件；提供产生能被检测到的信号的信号元件，其中所述识别元件连接到所述信号元件； 使所述识别元件和所述信号元件与怀疑含有所述靶标微生物的样品接触；以及 检测所述能被检测到的信号。
4.一种检测靶标微生物或其成分的方法，包括提供包含脂质双层和产生能被检测到的信号的信号元件的脂质囊泡； 提供选择性结合细胞壁成分的识别元件；使所述脂质囊泡和所述识别元件与怀疑含有所述靶标微生物的样品在有效引起所述 脂质囊泡与如果存在的所述靶标微生物的结合的条件下接触；以及 检测所述能被检测到的信号。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述脂质双层包含至少一种生物素分子。
6.根据权利要求4或权利要求5所述的方法，其中所述识别元件包含至少一种生物素 分子。
7.根据权利要求4-6中任一项所述的方法，还包括提供生物素结合分子。
8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，还包括以下步骤i)在培养装置中提供营 养培养基和ii)将所述样品在容许至少一次细胞分裂的条件下进行温育。
9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，还包括从培养装置移出活微生物的步骤。
10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，还包括裂解所述样品中的微生物的步骤。
11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，还包括i)提供捕获剂和ii)捕获所述靶 标微生物或其成分。
12.根据权利要求2-11中任一项所述的方法，其中所述信号元件包含脂质囊泡、磁性 颗粒、聚合物颗粒或金颗粒。
13.根据权利要求2-11中任一项所述的方法，其中所述信号元件包含多肽。
14.根据权利要求2-11中任一项所述的方法，其中所述信号元件包含多核苷酸。
15.根据权利要求2-12中任一项所述的方法，其中所述信号元件包含转化成能被检测 到的信号的潜在信号成分。
16.根据权利要求15所述的方法，还包括以下步骤i)提供信号产生元件和ii)使所 述信号产生元件与所述信号元件接触以将所述潜在信号成分转化成能被检测到的信号。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述信号产生元件是能活化的信号产生元件，且还包括活化所述能活化的信号产生元件的步骤。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述能活化的信号产生元件包含多肽。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述多肽包含能活化的结构，所述能活化的结 构当被活化时能增强所述多肽调节膜的渗透性的能力。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述能活化的结构包含能水解的键。
21.根据权利要求18或权利要求19所述的方法，其中所述多肽通过pH变化来活化。
22.根据前述权利要求中任一项所述的方法，还包括对所述样品中的所述靶标微生物 进行计数的步骤。
23.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述能被检测到的信号能通过光学 法检测。
24.根据权利要求23所述的方法，其中光学法检测包括比色测定法检测、荧光测定法 检测或发光测定法检测。
25.根据权利要求23或权利要求24所述的方法，其中光学法检测包括用仪器进行检测。
26.一种用于检测靶标微生物的组合物，包含 选择性结合酵母聚糖的识别元件；和包含产生能被检测到的信号的颗粒的信号元件。
27.根据权利要求26所述的信号元件，其中所述颗粒包含脂质囊泡。
28.根据权利要求26所述的信号元件，其中所述颗粒包含荧光分子。
29.根据权利要求26所述的信号元件，其中所述颗粒包含磁性颗粒。
30.根据权利要求26所述的信号元件，其中所述颗粒包含聚合物颗粒。
31.根据权利要求26所述的信号元件，其中所述颗粒包含金颗粒。
32.根据权利要求26所述的信号元件，其中所述颗粒包含多肽。
33.根据权利要求26所述的组合物，还包含连接部分。
34.根据权利要求33所述的组合物，其中所述识别元件与所述信号元件连接。
35.根据权利要求26-34中任一项所述的组合物，其中所述信号元件包含转化为能被 检测到的信号的潜在信号元件。
36.根据权利要求35所述的信号元件，其中所述潜在信号元件包含酶底物。
37.根据权利要求35所述的信号元件，其中所述信号元件包含多肽。
38.根据权利要求37所述的多肽，其中所述多肽含有酶活性。
39.根据权利要求35所述的组合物，其还包含信号产生元件，其中所述信号产生元件 将潜在信号元件转化为能被检测到的信号。
40.根据权利要求39所述的组合物，其中所述信号产生元件是能活化的。
41.根据权利要求40所述的组合物，其中所述能活化的信号产生元件包含多肽。
42.根据权利要求41所述的多肽，其中所述多肽包含能活化的结构，所述能活化的结 构当被活化时能增强所述多肽调节膜的渗透性的能力。
43.根据权利要求41或权利要求42所述的组合物，其中所述能活化的结构包含能水解 的键。
44.根据权利要求43所述的组合物，其中所述能水解的键是酯键或酰胺键。
45.根据权利要求41-44中任一项所述的组合物，其中所述信号产生元件通过pH变化 来活化。
46.根据权利要求26-45中任一项所述的组合物，还包含捕获剂。
47.根据权利要求46所述的组合物，其中所述捕获剂连接到固相支撑物。
48.根据权利要求47所述的组合物，其中所述固相支撑物选自塑料薄膜、塑料颗粒、金 属薄膜、颗粒、膜、水凝胶、纤维素组合物、无纺织物、纤维、微通道。
49.根据权利要求46-48中任一项所述的组合物，其中所述捕获剂或所述识别元件选 择性结合酵母聚糖。
50.根据权利要求46-48中任一项所述的组合物，其中所述捕获剂和所述识别元件选择性结合酵母聚糖。
51.根据权利要求26-50中任一项所述的组合物，其中所述识别元件或所述捕获剂包 含包括有酵母聚糖结合结构域的多肽。
52.根据权利要求51所述的组合物，其中所述多肽包含选择性结合酵母聚糖的抗体或 其衍生的抗原结合片段。
53.根据权利要求52所述的其抗原结合片段，其中所述其抗原结合片段选自Fab片段、 Fab'片段、F(ab)2片段、单链Fv和Fv片段。
54.根据权利要求51所述的多肽，其中所述多肽包含受体。
55.根据权利要求54所述的受体，其中所述受体包含来自Dectin-1的碳水化合物识别 结构域。
56.根据权利要求51所述的多肽，其中所述多肽结合酵母聚糖的能被Dectin-1的碳水 化合物识别结构域识别的同一表位。
全文摘要
本发明描述了分析样品中所关注的靶标微生物的方法。具体地讲，这些方法可用于基于普遍性细胞壁成分如酵母聚糖的存在来检测多种酵母和霉菌微生物。本发明还描述了用脂质体和/或培养基分析样品中的真菌微生物的方法。
文档编号G01N33/53GK101981447SQ200980111736
公开日2011年2月23日 申请日期2009年2月12日 优先权日2008年2月14日
发明者史蒂芬·B·罗斯科, 斯特凡妮·J·莫勒, 曼基里·T·克希尔萨加尔 申请人:3M创新有限公司
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