专利名称：一种蛋白质芯片，其制备方法及用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种蛋白质芯片，特别是涉及一种能检测农药及罂粟碱残留物的蛋白质芯片，还涉及其制备方法及用途。
背景技术：
农药因其抵抗病虫害、提高农作物产量的重要作用而得到广泛使用，随着农药的大量施用，其残留物及降解物已对水源、土壤等造成了污染，由此引发的环境问题也引起了人们的普遍关注，此外，通过生物蓄积作用，它们还会残留于农产品中，对人类健康造成威胁。
水、土壤等环境及食品中农药残留量，以及其它有毒有害物质的检测对于我们较好的评估及控制污染，保持人类健康及生态平衡有着重要作用。随着现代社会的迅猛发展，农药不但从施用量上，而且在施用种类上都有了很大的增长，加之其它人为的或客观上造成的水源、土壤或食品污染，使得当今污染物的种类更加繁多。这种变化带来了新的检测需求，为了适应这一需求，无论是基于实验室还是基于现场的很多实验方法都必须加以改进、优化。但是目前的检测手段大多仅仅是对某种特定物质在检测限、灵敏度方面有所提高，随之带来的检测费用也大幅度增加。此外，在大多数情况下，我们对要进行检测的一定范围内的水源、土壤或一定批次的食品中污染物种类及污染程度的信息掌握有限。因此，在进行检测分析的时候，所用的检测手段在保证能够对检测范围内预期的污染物正确识别外，还需能够对该环境或介质中其它非预料之中的有害物质加以正确判别。这就要求研制开发新的检测方法及仪器，它们不但要灵敏度高、准确度好，而且要适应当前污染的这种新特点，能够适应新形势，实现快速、高通量、多元化检测。
传统的检测方法有气相、液相色谱等仪器分析法及酶联免疫法(ELISA)，但上述方法除需昂贵的仪器设备及专门的技术人员操作外，样品的提取、净化、衍生化等前处理步骤相当繁琐，而且尚不能实现高通量、多元化的检测。目前，食品、水源等环境污染的突出问题是多污染物残留，因此，一次只能检测一种物质，且费时费力的方法越来越不适应新形势的要求。
随着生物技术的发展而诞生了蛋白质芯片技术，它与基因芯片技术相似，即在载体上以设计好的微阵列方式固定多种配体(抗体或抗原)，用标记物(荧光物质、酶或化学发光物质等)标记抗原或抗体，利用配体间特异的相互作用方式进行反应、结合，然后通过特定的扫描装置进行检测，由计算机对结果进行数据的分析处理，从而达到对待测物进行检测的目的。
阿特拉津属于三嗪类农药，是一种化学除草剂，主要应用于旱田作物。由于使用不当，阿特拉津通过渗滤而进入江河湖泊或地下水污染饮用水而被人体直接摄入，对人体造成急性或慢性�：Γ⑻乩虮蝗隙ㄎ星痹诘闹掳┳饔茫⒖捎跋烊颂宓哪诜置谙低臣吧诚低常分抟恍┕乙丫故褂冒⑻乩�。
目前，阿特拉津检测方法较多，有气相色谱法、液相色谱法、ELISA法以及传感器检测。邓安平等用阿特拉津半抗原衍生物共价交联于载体蛋白分子上，经条件优�。⒌牟舛ò⑻乩虻腅LISA竞争法，最低检出限为0.018-0.022μg/L；Killard等则建立了以电化学传感器实时检测抗原抗体反应的方法，并将其应用于阿特拉津的检测，该法克服了以往需经多次洗涤及分离步骤，检测限可达ppb级。
对硫磷属于有机磷类，是一种杀虫剂，主要用于蔬菜、水果等农作物病虫害的防治，在我国使用广泛。由于使用不当及过量喷洒，常常造成蔬菜水果的高残留，对硫磷对人体的�：χ饕撬梢砸种迫颂迥诘铛ッ傅幕钚裕佣鹨幌盗屑毙曰蚵远拘裕浼觳夥椒ㄒ话阌闷嗌�、液相色谱法，检测下限可达到0.002～2mg/kg。
罂粟碱是一种生物碱，主要是由一些不法餐饮业主为了谋求一时的利益在食品中添加罂素壳，而该物质含有罂粟碱成分较多，严重损害了消费者的利益。目前对罂粟碱的检测一般采用气相、液相色谱法，检测下限一般为6～100ng/mL。
到目前为止，尚无将蛋白质芯片用于检测如阿特拉津、对硫磷等小分子农药及罂粟碱残留物的报道。
发明内容
本发明的目的是提供一种蛋白质芯片，该芯片能检测小分子农药以及罂粟碱等物质的残留物，并提供其制备方法。
本发明的蛋白质芯片，由表面经过醛基化试剂处理的载体以及小分子蛋白偶联物组成，所说的载体表面固定有能与所说的小分子蛋白偶联物结合的抗体分子。载体为固相载体，可以是玻璃片、金属片、各种有机高分子制作的薄膜等，优选玻璃片，它具有价格便宜及来源方便等优点，而且大多数芯片检测均采用发光检测的方法，玻璃片作固定载体无论是透射光还是反射光均适合。
玻璃片表面的羟基经硅烷处理使其氨基化，然后再用双功能试剂戊二醛处理，这样就得到了所谓的醛基化玻片，蛋白质、酶、各种抗体或抗原的氨基即可与玻璃片表面的醛基发生共价交联，从而达到固定配体的目的。除共价结合法外，还有物理吸附法，其优点是简便易行，但固定的配体分子数少，容易脱落，影响结果的判读。
本发明的蛋白质芯片其载体表面经过醛基化处理，小分子物质如小分子农药或罂粟碱的抗体分子是通过双功能交联剂以共价键稳定地固定于载体表面，可以进行各种生化反应，其中的小分子农药为阿特拉津或对硫磷等。
本发明的蛋白质芯片采用竞争法进行样品检测，制备蛋白质芯片首先要获得能够特异性结合的抗体及抗原，后者在采用竞争法时为必须具备的条件，用作竞争性标记分子。小分子蛋白偶联物为小分子农药或罂粟碱分子与卵清蛋白的偶联物，它可以用荧光染料Cy3或Cy5进行标记，是竞争性报告分子。
本发明的蛋白质芯片的制备方法包括选择载体、处理表面、固定抗体、封闭和标记抗原等步骤组成。具体的工艺流程如图1所示。
本发明所述的蛋白质芯片的制备方法包括如下步骤。
1、制备小分子物质-卵清蛋白(OVA)小分子蛋白偶联物(Hp-Pr)并进行标记；
2、选择载体载体可以是生物载玻片或普通玻璃。
3、处理表面用硅烷作为表面活性剂，使玻璃片表面氨基化，氨基可以和双功能试剂戊二醛结合，戊二醛与抗体偶合，从而实现识别分子(抗体)的固定。具体过程如图2所示。
4、固定抗体将小分子物质如阿特拉津、对硫磷等小分子农药或罂粟碱等的抗体点加于醛基化玻片的表面，于适宜温度和湿度下放置一段时间，然后用洗液和蒸馏水冲洗，晾干。
5、封闭在固定小分子物质抗体的格中滴加卵清蛋白封闭液，封闭没有反应的醛基，于适宜温度和湿度下放置一段时间后用蒸馏水冲洗，晾干。
其中制备小分子物质-卵清蛋白(OVA)小分子蛋白偶联物(Hp-Pr)包括如下步骤一、小分子抗原偶联物的制备1、羧化阿特拉津抗原的合成(1)将阿特拉津溶于无水乙醇中，在氮气条件下，加入3-巯基丙酸及KOH乙醇溶液，加热回流，有KCl沉淀析出；将该反应液蒸干，收集白色固体，并将其溶于碳酸氢钠溶液中，震荡摇匀、过滤收集滤液，以CHCl3洗涤；(2)收集洗液，并将其酸化，有白色沉淀析出，用去离子水将白色沉淀洗涤、过滤、干燥，进行质谱鉴定。
(3)羧化阿特拉津与卵清蛋白的偶连羧化阿特拉津溶于无水DMF中，加入NHS及DCC，离心收集上清；将OVA溶于纯水中，缓慢加入DMF并搅拌使其充分溶解，再加入上述离心上清液后透析，将OVA溶于透析液内作为参比，紫外测定该蛋白质与羧化阿特拉津结合。
2、对硫磷抗原的合成(1)对硫磷硝基的还原将对硫磷溶于乙醚，用冷Na2CO3液萃取去除酚类杂质，加入乙酸-浓盐酸液，并分次加入锌粉；冷却后过滤，以乙醚洗脱残渣；减压蒸馏；将蒸馏剩余物溶于水中，洗脱后用乙酸乙酯萃�。辉谏鲜鲆宜嵋阴ハ嘀屑尤胱愎涣康奈匏甆a2SO4，干燥过夜；减压蒸馏，除去其中的乙酸乙酯。
(2)氨基对硫磷与卵清蛋白的偶连取氨基乙基对硫磷，溶于含HCl的蒸馏水中，冷却，加入NaNO2溶液及适量的尿素；将OVA加入上述溶液中，冰浴中搅拌；后透析；将OVA溶于透析液内作为参比，紫外测定该蛋白质已与氨基对硫磷结合。
3、罂粟碱抗原的合成将罂粟碱氨基衍生物加入无水乙醇，再滴加双蒸水，最后加入EDC；在上述溶液中加入OVA，搅拌；加入EDC，搅拌过夜；将上述反应液装入透析袋，用PBS透析；将OVA溶于透析液内作为参比，紫外测定该蛋白质已与罂粟碱氨基衍生物结合。
二、小分子抗原的标记及鉴定1、将待标记的抗原溶于碳酸盐缓冲液中，加入到装有染料的小瓶中，密封，室温下充分混合；将标记好的抗原溶液加到凝胶过滤柱中进行过滤，可以看到加入的标记抗原逐渐分离为两条带，其中前面一条带就是待收集的与染料已结合的抗原；将标记好的抗原分装，并在4℃避光保存。
2、染料蛋白比率的测定稀释部分标记的蛋白质溶液，以使最大吸收率为0.5-1.5埃单位；染料和蛋白质的摩尔比经计算得出，两个值的比值也就是每个蛋白质分子上平均有几个染料分子。
分别取阿特拉津-OVA-Cy5、对硫磷-OVA-Cy3、罂粟碱-OVA-Cy3，紫外测定其各自的染料及蛋白的吸光度值，计算标记效率。
3、人工合成抗原的鉴定3.1抗体和抗原的固定未经稀释的小分子物质如阿特拉津、对硫磷或罂粟碱的抗体原液于醛基化玻片上疏水隔栅内点样，置于37℃水浴箱中温�。笥肞BST液和双蒸水冲洗，凉干待用。
3.2封闭以卵清蛋白液封闭，37℃水浴箱中温浴，用蒸馏水冲洗，凉干待用。
3.3加样以微量加样器加入Cy3或Cy5标记好的竞争性抗原，放入37℃水浴箱中温�。陨鲜龇椒ǘ孕酒谐逑矗垢纱�。
3.4扫描检测结果，采用激光共聚焦扫描仪GenePixTM4000B进行。
蛋白质芯片结果的判读要依据标记的报告分子的种类来设计判读装置，目前国际上广泛采用的蛋白质芯片的检测手段有原子力显微镜(AFM)、荧光标记、等离子体共振、化学发光、同位素标记等方法。最早用于胶膜芯片的是同位素标记法，该方法具有特异性强、敏感性高的优点，但由于该方法有放射性污染和需要专门的检测设备等问题，其应用受到了一定的限制。原子力显微镜仪器设备昂贵且检测时间长，这些都限制了它的普及应用。荧光标记是芯片信息采集中使用最多也是最成功的一种报告标志，它克服了使用同位素标记的诸多缺点，具有标记简便、快速，检测灵敏度高等特点，应用激光作为激发光源的共聚焦扫描装置，具有极高的分辨能力。本发明采用蛋白芯片中最常用的两种荧光物质Cy3、Cy5对抗体、抗原进行标记，结果由激光共聚焦扫描仪进行扫描，并使用其自带图象、数据分析软件对结果进行分析。
本发明蛋白质芯片可以种简便、高效地检测水、食品等样品中农药残留物及罂粟碱残留物。利用本发明的蛋白质芯片可以简化检测反应程序，改善现有检测技术的前处理过程繁琐且不能进行高通量检测的不足，可以对食品、水源等环境中有毒有害物质进行大规模、高通量、多元化、快速检测，具有重要意义。
图1为蛋白质芯片的制备流程图，其中Hp为半抗原，Pr为蛋白质，S为固相支持物，Hp-Pr*为Cy3或Cy5标记的抗原。
图2为蛋白质芯片载体表面处理流程图。
具体实施例方式
实施例一 小分子蛋白偶联物的制备材料阿特拉津(纯度≥99.7％)，山东农药厂生产；兔抗阿特拉津Biodesign；N-羟基琥珀酰亚胺(N-Hydroxysuccinimide，NHS)，Aldrich Chemical，Co.；二环己基碳二亚胺(Dicyclohexylcarbodiimide，DCC)Aldrich Chemical，Co.；3-巯基丙酸(3-Mercaptopropionic acid)Fluka Chemie；卵清蛋白(OVA)，Sephadex G-25华美生物工程公司；乙基对硫磷原油(80％)天津市农药股份有限公司；兔抗对硫磷Biodes ign；罂粟碱氨基衍生物，兔抗罂粟碱江苏微生物研究所；EDC(1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimidehydrochloride)Aldrich Chemical，Co.；Sephadex G-50Sigma；Cy3monofunctional dyeAmersham Pharmacia Biotech；Cy5 bisfunctional dyeAmersham Pharmacia Biotech；其它化学试剂购自试剂公司，均为分析纯。
1、阿特拉津-卵清蛋白(OVA)偶联物的制备(1)将1.01g、纯度为99.7％的阿特拉津固体粉末溶于100mL的无水乙醇中，搅拌使其充分溶解，在氮气条件下，向此搅拌的混合物中加入0.574g的3-巯基丙酸及预先配制好的KOH乙醇溶液(1.428g 85％的KOH溶于20mL的无水乙醇中)；(2)将此混合物加热回流5h，反应过程中发现有白色的KCl沉淀析出；(3)将该反应液在旋转蒸发器上蒸干，收集白色固体，并将此白色固体溶于25mL 5％碳酸氢钠溶液中，充分震荡、摇匀、过滤，收集滤液，再将此滤液以10mL CHCl3洗涤3次；(4)收集洗液，并将此洗液以6mol/L的HCl酸化至pH值约为2，此时有白色沉淀析出，再用去离子水将此白色沉淀充分洗涤、过滤、干燥得产物0.107g；(5)0.057g羧化阿特拉津溶于1mL的无水DMF中，向此溶液中加入0.023g的NHS及0.0453g的DCC，将此混合物在室温搅拌3.5h，然后离心8min(4000rpm)，去除沉淀，收集上清液；(6)称取0.2g OVA溶于20mL纯水中，缓慢加入4.2mL DMF并强烈搅拌至其充分溶解，再向此蛋白溶液中加入约1/4的上述离心上清液，冰浴中缓慢搅拌24h；(7)将上述反应混合物置于透析袋内在0.01mol/L pH7.2的PBS中充分透析5d，其间可有沉淀析出，可用0.1mol/L的NaOH碱化透析液，待沉淀逐步溶解后再将透析液pH值调到9.0左右，可以溶解析出的蛋白结合物；(8)冷冻干燥透析物。
2、对硫磷-卵清蛋白(OVA)偶联物的制备(1)配制1％的Na2CO3溶液，在4℃冷藏，待用；(2)取对硫磷8mL(约10g 34.4mmol)，溶于100mL乙醚中，再用上述冷Na2CO3液萃取4次(40mL/次)去除酚类杂质，弃去黄色水洗液；(3)配制9∶1(v/v)的乙醚-浓盐酸液；(4)萃取好的对硫磷乙醚液中加入100mL乙酸-浓盐酸液，分次加入20g锌粉，将此黄色混合物回流搅拌45min；(5)冷却反应液，过滤，以乙醚洗脱残渣；(6)减压蒸馏；(7)将蒸馏残余物溶于水中，洗脱2次，再用乙酸乙酯萃取数次；(8)在上述乙酸乙酯相中加入足够量的无水Na2SO4，干燥过夜；(9)减压蒸馏，除去其中的乙酸乙酯，得棕色产物约500μL；(10)称取氨基乙基对硫磷100mg，溶于50mL含2mmoL HCl的蒸馏水中，搅拌；(11)将上述溶液在冰浴中冷却(一定注意温度要低)逐滴加入冷的0.1mol/L的NaNO2溶液直至使无色淀粉KI试纸变蓝；(12)继续搅拌30min后，加入适量的尿素除去过量的HNO2；(13)称取OVA 400mg，溶入0.01mol/L pH8.0的PBS中，加入上述溶液，冰浴中搅拌2h，此时反应液呈橙黄色透明状；(14)透析膜煮沸50min，将上述反应液装入透析袋，透析5d，换液2次/d；(15)冷冻干燥透析物。
3、罂粟碱抗原制备(1)取0.15mL罂粟碱氨基衍生物(10mg/mL乙醇溶液)，加入2.85mL无水乙醇，再滴加9mL双蒸水，最后加入150mg EDC；(2)在上述溶液中加入7mg OVA(溶于2mL 25％的乙醇中)，搅拌30min；
(3)加入150mg EDC，4℃搅拌反应，过夜；(4)将上述反应液装入透析袋，用pH7.2、0.01mol/L的PBS透析4d，每天换液2次，产物约0.2mg/mL；(5)将OVA溶于透析液内作为参比，经紫外测定证明该蛋白质已与罂粟碱氨基衍生物结合。
实施例二、阿特拉津、对硫磷抗原和罂粟碱抗原的标记及鉴定1、部分溶液的配置磷酸盐缓冲液A液(0.2mol/L NaH2PO4)称取NaH2PO4··2H2O 31.2g加双蒸水充分溶解定容至1000mL；B液(0.2mol/L Na2HPO4)称取Na2HPO4·12H2O71.632g加双蒸水充分溶解定容至1000mL；实验中所需的各摩尔浓度及pH值的磷酸盐缓冲液是由上述A、B液以不同比例混合配制而成。
碳酸盐缓冲液准确称取无水碳酸钠(Na2CO3)21.2g、碳酸氢钠(NaHCO3)16.8g，各加入纯水1000mL使之成0.2mol/L溶液，然后用0.2mol/L Na2CO3及0.2mol/L NaHCO3以不同比例混配为所需pH值的缓冲液。
2％蛋白封闭液的配制称取1g封闭蛋白及2.5g蔗糖，以上述配制好的缓冲液稀释，再加入25μL Tween20(ρ≈1)，最后定容至50mL；芯片冲洗液的配制取上述磷酸盐缓冲液500mL，再加入250μL Tween20(ρ≈1)；2、抗原的标记(1)将待标记的抗原溶于0.1mol/L pH为9.2的碳酸盐缓冲液中，浓度约为1mg/mL；取上述抗原溶液1mL加入到装有染料的小瓶中，密封，通过轻轻摇晃或将带盖的试管翻转十次以达到充分混合。在混匀的过程中要防止溶液产生泡沫，将小瓶在室温下放置30分钟，每10分钟摇匀一次；准备好Sephadex G-50凝胶过滤柱，用0.01mol/L pH7.2的PBS液进行柱的预平衡；将标记好的抗原溶液加到凝胶过滤柱中进行过滤，可以看到加入的标记抗原逐渐分离为两条带，其中前面一条带就是待收集的与染料已结合的抗原；将标记好的抗原分装，并在4℃避光保存。
(2)染料蛋白比率的测定稀释部分标记的蛋白质溶液，以使最大吸收率为0.5-1.5埃单位；染料和蛋白质的摩尔比经计算得出，两个值的比值就是每个蛋白质分子上平均有几个染料分子；Cy3染料在550nm的摩尔消光系数为150000L·mol-1·cm-1，蛋白质在280nm的摩尔消光系数为170000L·mol-1·cm-1。染料在280nm的吸收率是经校正计算得出的(大约是550nm吸收率的8％)[Cy3dye]＝(A552)/150000[Protein]＝[A280-(0.08A552)]/170000(D/P)final＝[Dye]/[Protein]＝[1.13×(A552)]/[A280-(0.08×A552)]Cy3染料的特性Formula weight 765.95最大吸收率550nm最大消光值150000L.mol-1.cm-1最大发射值570nmCy5染料在650nm的摩尔消光系数为250000L.mol-1·cm-1，蛋白质在280nm的摩尔消光系数为170000L.mol-1.cm-1。在这个例子中，对不同的蛋白质而言，消光系数是会发生变化的。染料在280nm的吸收率是经校正计算得出的(大约是650nm吸收率的5％)[Cy5dye]＝(A650)/250000[Protein]＝[A280-(0.05A650)]/170000(D/P)final＝[Dye]/[Protein]＝
/[A280-(0.05×A650)]Cy5染料的特性Formula weight 975.15最大吸收率649nm最大消光值250000L·mol-1.cm-1最大发射值670nm分别取阿特拉津-OVA-Cy5、对硫磷-OVA-Cy3、罂粟碱-OVA-Cy3100μL，紫外测定其各自的染料及蛋白的吸光度值，代入上式计算标记效率。
(3)人工合成抗原的鉴定抗原的固定未经稀释的阿特拉津(1.37mg/mL)、对硫磷(1.0mg/mL)抗体原液，罂粟碱(0.5mg/mL)抗原原液由微量加样器于醛基化玻片上疏水隔栅内手工点样，每格1点或2点(前两者每格点样1点，后者每格点样2点)，手工点样每点0.5μL(罂粟碱抗原、兔抗-对硫磷)、0.2μL(鼠抗-阿特拉津)，然后置于37℃水浴箱中温浴2h，之后用PBST液(0.01mol/L、含0.05％Tween 20)轻轻冲洗5次，然后用双蒸水冲洗3次，凉干待用。
封闭以卵清蛋白液(2％OVA、含蔗糖约5％)每格20μL封闭，放入37℃水浴箱中温浴2h，取出玻片，用蒸馏水轻轻冲洗3次，凉干待用；加样以微量加样器小心加入Cy3或Cy5标记好的竞争性抗原，放入37℃水浴箱中温浴2.5h，以上述方法对芯片进行冲洗，凉干待用；扫描检测结果采用激光共聚焦扫描仪GenePixTM4000B进行扫描检测，荧光信号定量分析软件分别采用扫描仪配套定量分析软件GenePix Pro3.0。
实施例三 蛋白质芯片检测小分子农药及罂粟碱残留物一、取上面实施例制备好的蛋白质芯片，将待测物和一定量Cy3标记的竞争性报告分子等量混匀，取20μl的混合液滴加于反应格中，于37℃饱和湿度下放置2小时，然后用洗液冲洗5次，每次10s，再用蒸馏水冲洗3次，晾干后，用扫描仪进行荧光测定。
二、信号的荧光检测及数据处理抗原抗体反应或抗原竞争反应完毕后，用激光共聚焦扫描仪GenePixTM4000B检测，扫描分辨率为10μm。激发光波长为530nm，检测波长为585nm。荧光信号定量采用GenePix Pro3.0软件进行分析。
三、结果阿特拉津的最低检测限可达到0.001μg/mL，罂粟碱的最低检测限可达到0.01μg/mL
权利要求
1.一种蛋白质芯片，其特征在于由表面经过醛基化试剂处理的载体以及小分子蛋白偶联物组成，所说的载体表面固定有能与所说的小分子蛋白偶联物结合的抗体分子。
2.根据权利要求1所述的蛋白质芯片，其特征在于载体为金属片或有机高分子制作的薄膜或玻璃片，优选玻璃片。
3.根据权利要求1所述的蛋白质芯片，其特征在于小分子蛋白偶联物为小分子农药或罂粟碱分子与卵清蛋白的偶联物。
4.根据权利要求3所述的蛋白质芯片，其中所述的农药为阿特拉津或对硫磷。
5.根据权利要求1所述的蛋白质芯片，其特征在于醛基化试剂为硅烷。
6.制备权利要求1所述蛋白质芯片的方法，包括以下步骤(1)制备小分子蛋白偶联物并进行标记；(2)将载体进行氨基化；(3)将(2)中的载体进行双功能试剂的交联；(4)固定抗体；(5)封闭。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于小分子蛋白偶联物采用荧光染料Cy3或Cy5进行标记。
8.权利要求1所述的蛋白质芯片在检测农药及罂粟碱残留物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种蛋白质芯片，其制备方法及用途。该芯片由经过处理的载体以及小分子蛋白偶联物组成，其中载体表面经过醛基化试剂处理，农药及罂粟碱抗体分子通过双功能交联剂以共价键固定于载体表面。本发明的蛋白质芯片经过小分子蛋白偶联物的制备，作为载体的载玻片氨基化，双功能试剂的交联，抗体固定和封闭等步骤制备。该蛋白质芯片可用于检测农药及罂粟碱的残留物。
文档编号G01N21/64GK1627072SQ20031011735
公开日2005年6月15日 申请日期2003年12月11日 优先权日2003年12月11日
发明者高志贤, 王艳, 王升启, 戴树桂 申请人:中国人民解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所
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