专利名称：生化分析装置的制作方法
技术领域：
本发明涉及利用标记物质检出受体或配体的生化分析装置。
背景技术：
已经开发了以下系统(特开2002-355036号公报)在微阵列解析系统或宏阵列解析系统中，在膜过滤器等的生化分析装置的表面的不同位置上，滴上可与激素类，肿瘤标记物，酶，抗体，抗原，抗体催化剂，其它的蛋白质，核酸，cDNA，DNA，RNA等以及来自生体的物质进行特异结合且含有碱基序列或碱基的长度、组成、特性等已知的配体或受体的溶液，形成多个吸附性区域，由于和放射性标记物质、荧光物质、化学发光基质接触产生化学发光的标记物质标记的受体或配体(根据激素类，肿瘤标记物，酶，抗体，抗原，抗体催化剂，其它的蛋白质，核酸，DNA，mRNA等从生物中提取、分离等得到的，或者取样后进行了化学处理的物质)，与吸附性区域中所含的配体或受体杂交而特异性的与配体或受体结合，根据在多个吸附性区域选择性含有的放射性标记物质，将蓄积性荧光体片材的辉光性荧光体层曝光，激发曝光的辉光性荧光体层(PSL photositmulatedluminescence)，进行扫描，激发含有在辉光性荧光体层中的辉光性荧光体，将从辉光性荧光体层中放出的辉光进行光电检出，生成化学解析用数据，或者对多个吸附性区域的激发光进行扫描，激发选择性包含在多个吸附性区域中的荧光物质，将从荧光物质放出的荧光进行光电检出，生成生物化学解析用数据；或者将选择性包含在多个吸附性区域的标记物质和化学发光物质接触，光电检出从标记物质放出的化学发光，生成生物化学解析数据的系统。
这种系统中，在生化分析装置上形成多个结合了配体或受体的高密度吸附性区域，与由标记物质标记的受体或配体杂交，具有在短时间内可以解析受体或配体的优点。
目前利用生化分析装置的解析系统都是通过所谓振荡方式进行操作，杂交时将上述的生化分析装置装入杂交袋，向其中加入含有标记受体和标记配体的反应液，对杂交袋施以振动，使标记受体或标记配体通过对流或扩散的方式移动，使标记受体或配体与配体或受体特异结合。
但是上述的振荡方式很难使含标记受体或配体的反应液与含配体或受体的多个吸附性区域均匀地接触，存在配体或受体不能与标记受体或配体有效结合的问题。为解决这一问题本发明人提出了使标记受体或配体在吸附性区域强制流动，使标记受体或配体在生化分析装置的吸附性区域内充分浸透的方案(特愿2002-26816)。
在上述的使反应液在吸附性区域强制流动的方案中，由于在吸附性区域内部充分地使标记受体或配体得以渗透，所以在能够提高标记受体或配体检出程度的同时还具有下述的优势，即，即使是微量的标记受体或标记配体可以进行大S/N检测。
但是，使反应液强制流动时，根据反应液中所含的标记配体或标记受体的种类和状态，存在发生凝集和在吸附性区域的表面吸附的情况。此外，在利用酶标抗体检测配体或受体的化学发光法中，酶标抗体堵在多孔性吸附领域中引起吸附性区域的发光量背景大大升高的问题。这种凝集的标记配体或标记受体和堵塞的酶标抗体等原本是不应当被检出的，其对生成正确的生化解析数据形成干扰。
此外，在基板的一面连续有形成吸附性区域的吸附材料的情况下，由某孔发出的信号经过吸附性材料向邻近的孔传播、不能在所述的孔检出仅由应当检出的受体或配体发出的信号，这种情况下，也对生成正确的生化解析数据形成干扰。
发明内容
本发明是鉴于上述情况做出的，目的在于提供一种利用标记物质检出受体或配体时，能正确地检出由标记物质发出的信号(signal)的生化分析装置。
本发明的生化分析装置由有多个孔的基板和在其上的多个孔内填充形成吸附性区域的多孔性吸附性材料构成，其特征在于，所述吸附性区域具有吸收该吸附性区域中检出噪声信号的信号吸收层。
此外，本发明的生化分析装置，由有多个孔的基板和在其上的多个孔内填充形成吸附性区域的多孔性吸附性材料构成，在上述基板的一面连续有形成上述吸附性区域的上述吸附性材料，其特征在于，设置信号吸收层，该信号吸收层吸收从通过在上述基板的一面连续有吸附性材料的某孔传向该孔邻近的孔的信号。
对于吸收从通过在上述基板的一面连续有上述吸附性材料的某孔传向该孔邻近孔的信号的信号吸收层，其可仅设置在形成吸附性区域的吸附性材料连续部分之中的基板的正下方，也可以只设置在填充在上述基板孔内的吸附性区域的正下方，也可以设置在形成上述吸附性区域的吸附性材料连续的部分的整个面上。
本发明的生化分析装置，由有多个孔的基板和在其上的多个孔内填充形成吸附性区域的多孔性吸附性材料构成，由于吸附性区域具有吸收由该吸附性区域检出噪音信号的信号吸收层，可以吸收从凝集的标记配体或标记受体或阻塞酶标抗体等发出的、原本不应检出的信号所形成的噪音信号，因此可以得到正确的生化解析数据。
此外，本发明的生化分析装置，由有多个孔的基板和在其上的多个孔内填充形成吸附性区域的多孔性吸附性材料构成，由于在上述基板的一面连续有形成上述吸附性区域的上述吸附性材料的生化分析装置中，设置信号吸收层，该信号吸收层吸收从通过在上述基板的一面连续有吸附性材料的某孔传向该孔邻近的孔的信号，可以有效地抑制本应从某个孔检出的信号通过在基板的一面连续有吸附性材料传向该孔邻近的孔，可以只检出本应从所检测的受体或配体发出的信号，可以正确地检出由各个孔发出的信号。
图1是表示实施方式1的生化分析装置的示意立体图；图2是表示实施方式1的生化分析装置的局部示意剖面图；图3是表示实施方式2的生化分析装置的局部示意剖面图；图4是表示实施方式2的生化分析装置一实施方式的示意图；图5是表示制造本发明生化分析装置的另一实施方式的示意图。
图6是表示使反应液强制流动的反应器的实施方式示意剖面图。
图中1生化分析装置；2基板；3孔；
4吸附性区域；5信号吸收层具体实施方式
以下参照
本发明的实施方式，图1是本发明生化分析装置的实施方式1的示意立体图，图1所示的生化分析装置1由设置多个孔3的基板2和孔3内填充的构成在基板2上连续的形成吸附性区域4的多孔性材料构成。
图2是本发明生化分析装置的断面略图，如图2所示形成吸附性区域4的吸附性材料，在基板2的一面连续，在形成吸附性区域4的吸附性材料的连续部分5中，设计吸收由孔3a传向邻近的孔3b传播的信号吸收层5，基板2的下侧部6是基于基板2压缩吸附性材料和信号吸收层5的部分。
与生化分析装置的吸附性区域结合的配体或受体，由于从吸附性区域的一侧滴下，虽然在滴下一侧固定较多的配体或受体，但在基于含配体或受体的溶液浸润的吸附性区域的中央部分的下部也被固定。因此，利用标记物质检出与固定在吸附性区域的配体或受体结合的受体或配体时，在全部吸附性区域均可发现从标记物质发出的信号。为此，在基板2的下侧部6连续有形成吸附性区域的吸附性材料的生化分析装置1中，从穿过该部分的孔3a向其邻近的孔3b传播信号。本发明的生化分析装置，由于设置吸收由穿过上述部分的孔3a向其邻近的孔3b传播信号的信号吸收层5，能够使邻近孔彼此相互传播的信号影响最小。
此外，在图2中表示出在基板的一面全部设置了信号吸收层，在信号吸收层吸收从孔3a向孔3b传播信号的方式中，为了堵住孔3a可以仅设计在吸附性区域4的正下方，也可以仅设计在基板2的下部形成吸附性区域的吸附性材料的连续部分。
但是，在基板一面全部设置信号吸收层5时，或为了塞住孔3a将信号吸收层5仅设置在吸附性区域4的正下方时，由于其可以吸收由附着于吸附性区域的正下方的信号吸收层的、凝集的标记配体或标记受体，或堵塞的酶标抗体等发出的、本不应检出的噪音信号，所以可以得到更为正确的生化解析数据。
图3是本发明生化分析装置的实施方式2的示意立体图。实施方式2中的生化分析装置，在基板的一面没有连续形成吸附性区域的吸附性材料，它是由有多个孔13的基板12和在多个孔13中填充多孔性吸附材料形成的吸附性区域14构成的，在吸附性区域14中具有吸收在该吸附性区域14中检出的噪声信号的信号吸收层15。
为使标记受体或标记配体和与生化分析装置的吸附性区域结合的配给或受体特异结合而使反应液强制流动，反应液中所含的标记配体或标记受体凝集并容易附着在位于流动方向的上游侧的吸附性区域的表面。此外，在酶标抗体利用分解化学发光基质的反应检出配体或受体的化学发光法中，酶标抗体堵塞位于其流动方向上游一侧的吸附性区域，产生使吸附区域的发光量背景大大升高的问题。
对于实施方式2中的生化分析装置，由于在吸附性区域14的一侧具有信号吸收层15，将所述的生化分析装置安装在强制反应液流动的反应器中时，通过在反应液流动方向的上游侧向着信号吸收层15安装，上述凝集的标记配体或标记受体或者酶标抗体可附着于信号吸收层15。因此，检出信号时，从没有设置信号吸收层15的吸收区域14的一侧进行，从凝集的标记配体或标记受体或者酶标抗体发出的噪声信号由于被信号吸收层15吸收而不能被检出，可以生成去除了噪声信号的生化解析数据。
此外，图3中虽然显示出在孔13的一侧设置信号吸收层15、其他侧设置吸附性区域14的生化分析装置，但是也可以设置成在附性区域14中夹有信号吸收层15。
作为生化分析装置的基板的材质，为了防止在生化分析装置内部的光散射，以及防止放射线或光透过，优选使用衰减材料，可以使用金属，陶瓷等。另外在使用开孔容易的塑料作为基板时，为了进一步衰减放射线或光，优选在塑料内部分散一些颗粒。
作为金属优选举出铜，银，金，锌，铅，铝，钛，锡，铬，铁，镍，钴，钽，或者不锈钢或黄铜等的合金；作为陶瓷，可以举出氧化铝，氧化锆，氧化镁，石英等；作为塑料优选可以举出聚乙烯或聚丙烯等的聚烯烃类，聚苯乙烯，聚甲基丙烯酸酯等的丙烯酸树脂，聚氯乙烯，聚偏氯乙烯，聚氟亚乙烯，聚四氟乙烯，聚氯三氟乙烯，聚碳酸酯，聚萘二甲酸乙二酯或聚对苯二甲酸乙二酯等的聚酯，尼龙6或尼龙6，6等的脂肪族聚酰胺，聚酰亚胺，聚砜，聚亚苯基亚磺酸酯，聚二苯基硅氧烷等的硅树脂，线性酚醛树脂等的酚醛树脂，环氧树脂，聚氨酯，醋酸纤维素，或硝化纤维素等的纤维素类，丁二烯-苯乙烯共聚物等的共聚物，以及塑料混合物等等。
而且向在吸附性区域结合的配体或受体特异地结合受体或配体，利用标记物质检出受体或配体时，为了能够抑制从标记物质发出的放射线或光，从基板的孔透过基板壁，为了使放射线或光等衰减，优选在塑料中填充金属氧化物颗粒或玻璃纤维等。作为金属氧化物颗�？梢跃俪龆趸瑁趸粒趸眩趸趸龋敲挥斜匾薅�。
作为放射线或光衰减的状态，从标记物质发出的放射线或光从基板的孔透过基板壁，达到邻近的孔时的强度优选变为1/5以下，更优选变为1/10以下。
为了有效地遮蔽来自放射性标记物质的电子线等的放射线，基板的平均密度一般为0.6g/cm3以上，优选1-20g/cm3，更优选2-10g/cm3的范围。因为电子线的透过距离和密度成反比，若放射性物质是32P，33P，35S，14C等的一般放射性同位素(RI)，通过使基板的平均密度在上述范围内，来自固定在各孔中的样品的RI的电子线能够被基板的隔壁遮蔽，因此能够防止基于电子线的透过、散射使放射线图像分解能的降低。
基板的厚度通常优选为50-1000μm范围，更优选100-500μm范围。
对于基板上孔的开口部的面积(大小)，为了提高孔的密度，一般低于5mm2，优选低于1mm2，更优选低于0.3mm2，最优选低于0.01mm2，而且优选在0.001mm2以上。
孔的间距(邻近两孔中心之间的距离)优选0.05-3mm范围，孔的间隔(邻近两孔从端部到端部之间的最短距离)优选0.01-1.5mm范围，孔的数量(密度)一般为10个/cm2，优选100个/cm2，更优选500个/cm2，最优选1000个/cm2以上，而且优选在100000个/cm2以下，最好在10000个/cm2以下。另外，孔没有必要如图1那样全部是等间隔的，划分为几个区间(单位)每个区间分别有不同数量的多个孔也是可以的。
作为在基板上开多个孔的方法，可以举出用销打孔的冲孔法，在电极上脉冲状外加高电压而使基板挥发的放电加工法，蚀刻法，激光照射方法等。当基板的材料是金属材料或塑料时，在基板表面进行电晕放电或实施等离子体放电，涂覆黏合剂后，将用于形成吸附性区域的吸附性材料用压延的方法贴合来制造生化分析装置。作为黏合剂，优选使用苯乙烯-丁二烯橡胶，丙烯腈-丁二烯橡胶。作为涂覆黏合剂的方法，优选举出辊涂，金属线涂覆，浸渍涂覆，叶片涂覆等的方法。在基板上压延用于形成吸附性区域的吸附性材料时，可以将基板和形成吸附性区域的材料事先分割成片以后，间歇压延。可以将基板和形成吸附性区域的材料各自以长尺寸的带状在两个辊筒之间连续传送。
作为形成吸附性区域的多孔材料，优选使用多孔质材料或纤维材料，而且可以将多孔质材料或纤维材料一起使用形成吸附性区域。本发明中为形成吸附性区域使用的多孔性材料，优选使用任何有机材料或无机材料，也可以使用有机/无机材料的复合材料。
对于为形成吸附性区域使用的有机多孔质材料，没有特别的限制，优选使用活性炭等的碳多孔质材料或能够形成膜过滤器的多孔质材料。作为能够形成膜过滤器的多孔质材料，优选使用在溶剂中可以溶解的聚合物。作为可以在溶剂中溶解的聚合物，可以使用纤维素衍生物(例如硝化纤维素，再生纤维素，纤维素乙酸酯，醋酸纤维素，酪酸醋酸纤维素等)，脂肪族聚酰胺类(例如尼龙6，尼龙66，尼龙410等)，聚烯烃类(例如聚乙烯，聚丙烯等)，含氯聚合物类(例如聚氯乙烯，聚偏氯乙烯等)，含氟树脂类(例如聚氟亚乙烯，聚四氟化物等)，聚碳酸酯，聚砜，藻酸及其衍生物(例如藻酸，藻酸钙，藻酸/聚赖氨酸多离子配合物等)及骨胶原等，也可以使用上述聚合物的共聚物或复合体。
作为形成吸附性区域的纤维材料，没有特别的限制，优选可以举出上述的纤维素衍生物，脂肪族聚酰胺类等。
作为形成吸附性区域的无机多孔质材料，没有特别的限制，优选可以举出金属(例如铂，金，铁，银，镍，铝等)，金属氧化物(例如氧化铝，二氧化硅，氧化钛，沸石)，金属盐(例如磷灰石，硫酸钙等)及其复合体。
信号吸收层可以由上述多孔性材料中的吸收光或放射线等的信号的物质混合形成，对于信号是化学发光或荧光的场合，可以混合吸收这些光波长的色素等，对于信号是放射线的场合，可以混合作为放射线遮蔽物质的铅或钨等的重金属的颗粒来形成。
为形成吸附性区域和信号吸收层，将含有吸附性区域和信号吸收层的吸附性材料的溶液(以下称为原液)顺次流延或涂布在支持体上后，在多孔性膜的聚合物的不良溶剂，或良溶剂和不良溶剂的化合物中浸渍以后，水洗干燥；或者将不同种类的原液分别流延或涂布在支持体上，通过慢慢干燥用另外的方法制造。
如实施方式1所示，例如通过下述的方法制造在基板的一面形成吸附性区域的吸附性材料连续的生化分析装置。图4是制造实施方式1的生化分析装置的一个实施方式的略图，实施方式1的生化分析装置，可以将形成吸附性区域4的多孔性膜24和形成信号吸收层5的多孔性膜25和基板2重合压延，通过将多孔性膜24压入基板2的孔3的方法制造。虽然压延，孔3中压入的部分的多孔性膜的孔的孔径在压入孔中时几乎没有变化。
如图4(a)所示，形成孔3的基板2和多孔性膜24和25重合，在压延辊22和支持辊23之间传送压延；如图4(b)所示，将多孔性膜24压入到基板2的孔3中。此时通过加热压延辊22和支持辊23的方法可以将多孔性膜24和25软化。
如实施方式2所示，例如通过下述的方法制造在基板的一面上形成吸附性区域的吸附性材料不连续的生化分析装置。图5是制造实施方式2的生化分析装置的略图。在连续或间歇地传送的基板12的上方，配置将原液31和33注入基板12的孔13中的分配器30和32。另外为了明确图5中原液和层的形成的关系，绘制了相应的形成原液内容物的层。分配器32向各孔间歇地注入原液33，分配器30继续将原液33注入以后向各孔间歇注入原液31。注入原液31和33以后，提供一定风速的风控制基板12的温度和湿度，慢慢挥发溶剂，能够形成一起在孔13中形成吸附性区域14和信号吸收层15的生化分析装置。
本发明的生化分析装置，能够广泛用于利用标记物质检出受体或配体的鉴定方法，该方法中，在具有结合了配体或受体的多个多孔性吸附性区域的生化分析装置中的配体或受体上，与添加了受体或配体的反应液中的受体或配体进行特异结合。
作为一个实施方式，本发明生化分析装置，能够广泛用于检出标记受体或标记配体的鉴定方法，在该方法中，在具有结合了配体或受体的多个多孔性吸附性区域的生化分析装置中的配体或受体上，与添加了由标记物质标记的标记受体或标记配体的反应液中的受体或配体进行特异结合。
标记受体或标记配体是和在多孔性吸附性区域中结合的配体或受体特异结合的激素类、肿瘤标记物、酶、抗体、抗原、抗体催化剂、其它蛋白质、核酸、DNA、mRNA等的从生物中采集提取、分离的物质，或者是采集后经过化学处理的、由标记物质标记的物质。
作为标记物质可以举出放射线标记物质，荧光标记物质，通过使与化学发光基质接触而产生化学发光的标记物质等，标记物质自身可以是利用放射线，发光，发色或光照射会放出荧光的物质，也可以是使标记物质与任何化学物质接触，标记物质使化学物质分解或反应等而发光，发色或放出荧光的物质。作为前者的标记物质，可以使用放射线同位素，发光物质中的吖啶鎓酯等，发色物质中的金胶体粒子等，荧光物质中的荧光素等；作为后者的标记物质可以使用酶，例如优选使用碱性磷酸酯酶，过氧化物酶，荧光素酶，β-半乳糖苷酶，在这些酶中，通过和化学发光物质或色素基质或荧光物质接触，能够各自放出化学发光，发色或荧光。
作为化学发光基质在是碱性磷酸酯酶，过氧化物酶，荧光素酶的场合，没有特别的限制，可以使用双环氧乙烷(dioxetane)，鲁米诺，虫荧光素；作为色素基质，在酶是碱性磷酸酯酶的场合，可以使用对硝基苯酚磷酸，在酶是过氧化物酶的场合，可以使用4-氨基安替比林和陶粒达(トリンダ-)试剂的组合，二氨基联苯胺，四甲基联苯胺；在酶是β-半乳糖苷酶的场合，可以使用对硝基苯酚β-D-半乳糖苷等。作为荧光物质，在酶是碱性磷酸酯酶的场合使用4-甲基umbelli(ウンベリ)苯基磷酸，在酶是过氧化物镁的场合，可以使用3(4-羟基苯基)丙酸，在酶是β-半乳糖苷酶的场合，可以使用4-甲基umbelli(ウンベリ)苯基β-D-半乳糖苷。
作为其它实施方式，本发明生化分析装置也能够应用于检出受体或配体的鉴定方法，该方法中，在具有结合了配体或受体的多个多孔性吸附性区域的生化分析装置中的配体或受体上，与添加了受体或配体的反应液进行特异结合、受体或配体与由标记物质标记的标记体特异结合。
这也适合用于将检出的受体或配体夹入到吸附性区域的配体或受体和标记体之间，即所谓称为夹层法的方法。此处所述的受体或配体是与多孔性吸附性区域中结合的配体或受体特异结合的激素，肿瘤标记物，酶，抗体，抗原，抗体催化剂，其它蛋白质，核酸，DNA，mRNA等的从生物中采集提取、分离的物质，或者是采集后经过化学处理的物质。
所谓标记物质标记的标记体是上述标记物质标记的、能与受体或配体的反应部位特异结合的抗原，抗体，激素，肿瘤标记物，抗体催化剂，其它的蛋白质，核酸、cDNA，DNA，RNA等，其特性，组成，结构或碱基序列或碱基的长度等是公知的。
另一种形式的本发明生化分析装置，能够用于检出辅助物质结合受体或辅助物质结合配体的鉴定方法，该方法中，在具有结合了配体或受体的多个多孔性吸附性区域的生化分析装置中的配体或受体上，与添加了结合辅助物质的辅助物质结合受体或辅助物质结合配体的反应液中的辅助物质结合受体或辅助物质结合配体进行特异结合，使可与辅助物质特异结合的可结合标记物质与辅助物质结合受体或辅助物质结合配体进行特异结合。
辅助物质是可能结合标记物质的结合物质，可以优选举出异羟基异羟基异羟基毛地黄毒苷元，生物素，卵白素，荧光素等的抗原及其所述抗原的抗体。也可以是相对于生物素的卵白素那样的生物学结合配体(partner)。可能结合的标记物质是可能特异结合辅助物质的上述标记物质标记的物质。
其次举例说明利用本发明化学解析用装置的生物化学解析的化学发光法。
对于利用本发明化学解析用装置的化学发光法，首先是在有吸附性区域的生化分析装置中的吸附性区域中结合配体或受体。此时，将配体或受体从没有设置信号吸收层的一侧滴下。将配体或受体滴加到吸附性区域后，通过紫外线照射等固定在吸附性区域。
其次使在吸附性区域中结合的配体或受体特异结合标记受体或标记配体。在这种特异结合时，可以使用以横切吸附性区域的方式使反应液强制流动的反应器，图6是能够使反应液强制流动的反应器的实施方式的断面略图。
所述反应器由反应容器41、和溶液循环管42及泵43组成。反应器41内放置生化分析装置40，同时有防止液漏的具有封闭功能的生化分析装置保持部44，反应器本体45由反应器上半部46和反应器下半部47组成，反应器上半部46可以从反应器本体45拆卸下来，生化分析装置40可以通过拆卸反应器上半部46而安装，反应器下半部47的底壁设置可以流通溶液的溶液流入口48，在反应器46的上部顶壁同样设置可以流通溶液的溶液流出口49，流入口48和流出口49及溶液循环管42可以分别拆卸和安装。在反应器中通过泵43将溶液从流入口48泵入反应器本体45，通过生化分析装置40以后，从流出口49流出，通过溶液循环管线构成循环。
在该反应器中安装吸附性区域中结合配体或受体的生化分析装置40，在反应器41内加入添加了标记受体或标记配体的反应液，泵驱动反应液强制横切吸附性区域流动，使标记受体或标记配体与在吸附性区域中结合的配体或受体能够特异结合。在生化分析装置40中，相对于强制流动的反应液在其上游一侧安装信号吸收层50。通过这样的安装，即使反应液中所含的标记受体或标记配体凝集，吸着于所述的信号吸收层，但来自下述吸附性区域的信号是从没有设置信号吸收层的一侧检出，由于将凝集的标记受体或标记配体的信号在信号吸收层吸收而不被检出，所以可以只检出来自与吸附性区域结合的配体或受体特异结合的标记受体或标记配体的信号。
虽然以使用能够使反应液横切吸附性区域强制流动的反应器进行特异结合作为示例进行了说明，但是本发明生化分析装置的使用不受限制，将生化分析装置和反应液加入到杂交袋中，使杂交袋振动，同时使标记受体或标记配体对流或扩散移动进行特异结合，即所谓的以振荡方式进行。
对于安装在反应容器中的生化分析装置，为了除去与在多孔性吸附性区域被结合的配体或受体未特异结合的标记受体或标记配体，优选将所谓的清洗液强制流过吸附性区域进行清洗。因为清洗液强制流过吸附性区域，能够将与在多孔性吸附性区域被结合的配体或受体未特异结合的标记受体或标记配体有效地洗脱除去，能够大大提高清洗效率。
对于上述清洗过程，也优选以横切吸附性区域的方式使下述的酶标记抗体强制流动并与标记受体或标记配体特异结合后，除去未特异结合的酶标记抗体。因此将未能与标记受体或标记配体特异结合的酶标记抗体有效地剥离除去，能够大大提高清洗效率。
在吸附性区域所结合的配体或受体上特异结合的标记受体或标记配体与酶标记抗体结合之前，优选以横切吸附性区域的方式使针对酶标记抗体的封闭缓冲剂强制流动，封闭吸附性区域。通过封闭可以防止酶标记抗体不和标记受体或标记配体的抗原结合而直接结合在吸附性区域。
然后，以横切吸附性区域的方式使酶标记抗体强制流动，与标记受体或标记配体特异结合。酶标记抗体是用酶标记针对标记受体或标记配体的抗体的标记物质(在标记受体或标记配体是抗体时为抗原)。
酶标抗体与标记受体或标记配体特异结合后，从反应器中取出生化分析装置，将与标记受体或标记配体特异结合的酶标抗体和来自未设置信号吸收层一侧的化学发光基质接触。
通过化学发光基质和酶的接触，从各吸附性区域发生可见光波长区的化学发光，从未设置信号吸收层一侧对此进行光电检出并生成生化学解析用图象数据。由于酶标抗体广泛地粘附，虽然通过上述的清洗有残留的情况，但通过反应液的流动，酶标抗体主要粘着于生化分析装置的信号吸收层侧，如果从没有设置信号吸收层的一侧检测化学发光，通过没有与标记受体或标记配体特异结合并且附着于信号吸收层的酶标记抗体的酶，化学发光基质的结合被切断而使发出的化学发光吸收在信号吸收层，从而不检出噪音信号而能够生成生化学解析用图像数据。
以下使用实施例具体说明本发明。
实施例(尼龙溶液1的制备)在71.3g甲酸中溶解13.7g尼龙66，放置一夜，加入15g水用匀浆器分散(1000rpm×60分)得到尼龙溶液1。
(尼龙溶液2的制备)在71.3g甲酸中溶解13.7g尼龙66，放置一夜，加入15g化合物1的2％水，用匀浆器分散(1000rpm×60分)得到尼龙溶液2。
化合物1(尼龙溶液3的制备)在71.3g甲酸中溶解13.7g尼龙66，放置一夜，加入15g化合物2的2％水，用匀浆器分散(1000rpm×60分)得到尼龙溶液3。
化合物2
(尼龙微过滤器的制备)用敷料器按表1所示条件将上述尼龙溶液涂布到不锈钢基板上(2层时，在1层上重叠涂第2层)。涂布物在45％的甲酸溶液中浸渍10分钟。浸渍后的涂布物用流水洗10分钟后，从不锈钢基板上剥离，在铝棒上摊开干燥，制成尼龙微过滤器。
表1
(生化分析装置的制备)在尺寸90mm×70mm，厚100μm的SUS304片材(基板材料片材)上，开孔径0.3mm的圆形微孔，通过蚀刻形成间距0.4mm、孔间隔0.1mm的1600个孔。
然后在基板材料片材的一面涂布粘着剂，然后除去进入到在基板材料片材上形成的孔中的粘着剂后，干燥。一边在基板材料片材的粘着剂涂布面上对述尼龙微过滤器(尼龙微过滤器有2层时，使第2层和基板材料片材接触)于150℃下加热，以300kg/cm2的压力将尼龙微过滤器压入到基板材料片材的孔内，制成由基板和多个孔的吸附性区域构成的生化分析装置。制成的生化分析装置用波长253.7nm的紫外线以1mJ/cm以上照射灭菌。
上述尼龙溶液2中所用的化合物1是可以吸收CDP-star发光(约475nm)的色素，尼龙溶液3中所用的化合物2是可以吸收荧光色素Cy3发的荧光(约570nm)的色素。与未添加上述色素的标准1和2的尼龙微过滤器制造的生化分析装置相比，在用添加了这些色素的如表1所示的标准3-8的尼龙微过滤器制造的生化分析装置中，噪声信号减弱了。这是因为，利用上述色素吸收了本来不应检出的噪声信号，以及从穿过基板单面的连续的吸附性材料的孔传向该孔邻近的孔的信号。
如上所述，利用本发明的生化分析装置，由于通过信号吸收层吸收了从凝集的标记配体或标记受体或酶标抗体等发出的本来不应检出的噪声信号，以及从穿过在基板一面连续的吸附性材料的孔传向该孔邻近的孔的信号，可以检出由标记物质发出的正确信号，可以制备正确的生化解析数据。
权利要求
1.一种生化分析装置，由有多个孔的基板和在所述多个孔内填充形成吸附性区域的多孔性吸附性材料构成，其特征在于，所述附性区域具有吸收能够在吸收附生区域中检出的噪声信号的信号吸收层。
2.一种生化分析装置，由有多个孔的基板和在所述多个孔内填充形成吸附性区域的多孔性吸附性材料构成，在所述基板的单面上连续有形成所述吸附性区域的所述吸附性材料，其特征在于，设置有信号吸收层，该信号吸收层吸收从通过在上述基板的一面连续的吸附性材料的某孔传向该孔邻近的孔的信号。
全文摘要
本发明提供一种能正确检出由受体或配体发出的信号的生化分析装置。该生化分析装置由具有多个孔(3)的基板(2)以及在多个孔(3)内填充形成吸附性区域(4)的多孔性吸附性材料构成，在基板(2)的一面连续有形成吸附性区域(4)的吸附性材料，设置了吸收从通过在基板(2)的一面连续的吸附性材料的孔(3a)传向孔(3b)信号的信号吸收层(5)。
文档编号G01N33/543GK1696697SQ20041005955
公开日2005年11月16日 申请日期2004年5月11日 优先权日2004年5月11日
发明者来马浩二, 中岛贤二 申请人:富士胶片株式会社
专业数控铣床产品供应商
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