结合细胞缔合的ca1250772p的抗体及其使用方法-山东亚星游戏官网机床有限公司

专利名称：结合细胞缔合的ca125/0772p的抗体及其使用方法
本申请根据35U.S.C.119(e)要求对2002年10月16日提交的美国临时专利申请60/418,828和2003年7月10日提交的60/485,986的优先权，这些临时专利申请都被完整并入作为参考。
1.发明领域本发明提供了相对于脱落CA 125/0772P多肽优选结合细胞缔合CA 125/0772P多肽的抗体和抗体的抗原结合片段，还提供了鉴定这些抗体和抗原结合片段的方法，和制备这些抗体和结合抗原的抗体片段的方法。本发明还提供了预防、处理、治疗或改善与CA 125/0772P相关的失调有关的一种或多种症状的方法。具体地，本发明提供了预防、处理、治疗或改善与细胞增殖性失调有关的一种或多种症状的方法。例如，本发明提供了预防、处理、治疗或改善与癌症有关的一种或多种症状的方法。在优选实施方案中，本发明提供了预防、处理、治疗或改善与卵巢癌有关的一种或多种症状的方法。本发明还提供了用于预防、处理、治疗或改善与CA 125/0772P相关的失调，例如，癌症，例如，卵巢癌有关的一种或多种症状的组合物和产品。本发明还提供了诊断CA 125/0772P相关的失调或对这种失调的易患性的方法。
2.发明背景在约80％的卵巢癌患者中可以检测到被称为CA 125的高分子量多肽(见Kabawat等人，Am.J.Clin.Pathol.7998-104(1983)；和Gadducci等人，Gynecol.Oncol.44147-154(1992))。CA125存在于肿瘤细胞表面上，并且CA125的升高分泌的，或者“脱落”形式存在于约80-90％卵巢癌患者中。
已经产生了针对CA125的抗体并且它们被用于确定CA125浓度和从细胞培养基纯化CS125。见，例如，Bast等人，J.Clin.Invest.6851331-1337(1981)；Krantz等人，J.Cell.Biochem.(Suppl.)12EU139(1988)；美国专利号4,921,790、5,059,680，和5,976,818；和JP11014626。
除了监视CA125存在的抗体，美国专利号5,858,361和6,241,985描述了作为治疗剂的抗独特型抗-CA 125抗体。
尽管取得了上面的成果，但是CA125-相关失调如卵巢癌仍然是一个主要问题并且，同样，非常需要治疗这些失调的方法和组合物。
本申请的这部分或任何其他部分中对任何参考文献的引用或标识不应被理解为承认这些参考文献可以作为本发明的已有技术。
3.发明概述本发明部分基于如下认识产生脱落CA 125/0772P的事件也留下以细胞缔合形式的CA 125/0772P氨基酸序列的胞外区域的一部分，即，也产生细胞缔合的CA 125/0772P。本发明还部分基于如下认识可以产生抗体和结合抗原的抗体片段，它们相对于脱落CA 125/0772P优选结合细胞缔合的CA 125/0772P，并且这些抗体，或者结合抗原的抗体片段，可用于例如，预防、处理、治疗或改善与CA 125/0772P相关的失调或者CA 125/0772P相关的失调的一种或多种症状，如细胞增殖失调，例如，癌症，例如，卵巢癌。
第一方面，本发明提供了分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，它们它们相对于脱落CA 125/0772P优选结合细胞缔合的CA 125/0772P多肽。还提供了结合

图1的肽的分离的抗体或者结合抗原的抗体片段。本发明的这些抗体和结合抗原的抗体片段可用于如此处描述的各种治疗、预防、诊断和纯化目的。
在另一实施方案中，本发明的抗体或者结合抗原的抗体片段是结合SEQ ID NO1或SEQ ID NO2的肽并优选结合细胞缔合的CA125/0772P的抗体或者结合抗原的抗体片段。在一个特定的这种实施方案中，本发明的抗体或者结合抗原的抗体片段结合SEQ ID NO1或SEQ ID NO2中描绘的非重复区域。在另一个这种实施方案中，本发明的抗体或者结合抗原的抗体片段结合SEQ ID NO1或SEQ ID NO2中描绘的重复区域。
在第一个实施方案中，在ELISA竞争测定中，在对图1的肽(SEQ IDNO1)的25倍(重量/重量)过量脱落CA 125/0772P的存在下，本发明的抗体或者结合抗原的抗体片段对图1的肽(SEQ ID NO1)的结合的抑制小于约25％，小于约20％，小于约15％，小于约10％，或小于约5％。在另一实施方案中，在流式细胞术竞争测定中，本发明的抗体或者结合抗原的抗体片段表现出IC50(通过阳性细胞百分数测量)为至少约0.05mg/ml，至少约0.25mg/ml，至少约0.5mg/ml，至少约0.75mg/ml，或至少约1.0mg/ml脱落CA 125/0772P。在第三个实施方案中，本发明的抗体或者结合抗原的抗体片段结合图1的肽，但是检测不到结合脱落CA 125/0772P多肽。
满足这三个实施方案的任一个的抗体或结合抗原的抗体片段组成了相对于脱落CA 125/0772P多肽“优选结合”细胞缔合的CA 125/0772P多肽的抗体或结合抗原的抗体片段。
本发明的抗体和结合抗原的抗体片段包括结合图1的肽(SEQ IDNO1)的Kd小于约100nM，小于约10nM，小于约1nM，小于约100pM，或小于约10pM的抗体或结合抗原的抗体片段，Kd为通过BIAcore亲和测定法测量，该测定法在下文的章节6.4中描述。
本发明的抗体或结合抗原的抗体片段的优选实施方案包括在依赖抗体的细胞的细胞毒性(ADCC)测定法中介导CA 125/0772P阳性肿瘤细胞裂解的抗体或结合抗原的抗体片段。这些抗体或结合抗原的抗体片段包括，例如，在ADCC测定中以50∶1效应物∶靶标比例在5μg/ml抗体或结合抗原的抗体片段的浓度下介导CA 125/0772P阳性肿瘤细胞至少约10％裂解；在ADCC测定中以50∶1效应物∶靶标比例在5μg/ml抗体或结合抗原的抗体片段的浓度下介导CA 125/0772P阳性肿瘤细胞至少约20％裂解；在ADCC测定中以50∶1效应物∶靶标比例在5.0μg/ml抗体或结合抗原的抗体片段的浓度下介导CA 125/0772P阳性肿瘤细胞至少约10％裂解；在ADCC测定中以25∶1效应物∶靶标比例在5μg/ml抗体或结合抗原的抗体片段的浓度下介导CA 125/0772P阳性肿瘤细胞至少约10％裂解；在ADCC测定中以12.5∶1效应物∶靶标比例在5μg/ml抗体或结合抗原的抗体片段的浓度下介导CA 125/0772P阳性肿瘤细胞至少约10％裂解；在ADCC测定中以12.5∶1效应物∶靶标比例在0.5μg/ml抗体或结合抗原的抗体片段的浓度下介导CA 125/0772P阳性肿瘤细胞至少约10％裂解；在ADCC测定中以12.5∶1效应物∶靶标比例在50ng/ml抗体或结合抗原的抗体片段的浓度下介导CA 125/0772P阳性肿瘤细胞至少约10％裂解的抗体或结合抗原的抗体片段。
本发明的优选实施方案还包括在依赖补体的细胞毒性(CDC)测定中介导CA 125/0772P阳性肿瘤细胞裂解的抗体或结合抗原的抗体片段。这些抗体或结合抗原的抗体片段包括，例如，介导裂解的范围为5μg/ml抗体或结合抗原的抗体片段浓度约15％裂解到约0.1μg/ml抗体或结合抗原的抗体片段浓度约95％裂解的抗体或结合抗原的抗体片段。
本发明的抗体或结合抗原的抗体片段的优选实施方案还包括抑制CA 125/0772P阳性肿瘤生长的抗体和结合抗原的抗体片段。
在具体实施方案中，本发明的抗体是单克隆抗体，其由杂交瘤4E7(ATCC记录号PTA-5109)、或由杂交瘤7A11(ATCC记录号PTA-5110)、或由杂交瘤7C6(ATCC记录号PTA-5111)、或由杂交瘤7F10(ATCC记录号PTA-5112)、或由杂交瘤7G10(ATCC记录号PTA-5245)、或由杂交瘤7H1(ATCC记录号PTA-5114)、或由杂交瘤8A1(ATCC记录号PTA-5115)、或由杂交瘤8B5(ATCC记录号PTA-5116)、或由杂交瘤8C3(ATCC记录号PTA-5246)、或由杂交瘤8E3(ATCC记录号PTA-5118)、或由杂交瘤8G9(ATCC记录号PTA-5119)、或由杂交瘤15C9(ATCC记录号PTA-5106)、或由杂交瘤16C7(ATCC记录号PTA-5107)、或由杂交瘤16H9(ATCC记录号PTA-5108)、或由杂交瘤117.1(ATCC记录号PTA-4567)、或由杂交瘤325.1(ATCC记录号PTA-5120)、或由杂交瘤368.1(ATCC记录号PTA-4568)、或由杂交瘤446.1(ATCC记录号PTA-5549)、或由杂交瘤501.1(ATCC记录号PTA-4569)、或由杂交瘤621.1(ATCC记录号PTA-5121)、或由杂交瘤633.1(ATCC记录号PTA-5122)、或由杂交瘤654.1(ATCC记录号PTA-5247)、或由杂交瘤725.1(ATCC记录号PTA-5124)、或由杂交瘤776.1(ATCC记录号PTA-4570)产生。
在另一具体实施方案中，本发明的抗体或结合抗原的抗体片段是与由杂交瘤4E7(ATCC记录号PTA-5109)、或由杂交瘤7A11(ATCC记录号PTA-5110)、或由杂交瘤7C6(ATCC记录号PTA-5111)、或由杂交瘤7F10(ATCC记录号PTA-5112)、或由杂交瘤7G10(ATCC记录号PTA-5245)、或由杂交瘤7H1(ATCC记录号PTA-5114)、或由杂交瘤8A1(ATCC记录号PTA-5115)、或由杂交瘤8B5(ATCC记录号PTA-5116)、或由杂交瘤8C3(ATCC记录号PTA-5246)、或由杂交瘤8E3(ATCC记录号PTA-5118)、或由杂交瘤8G9(ATCC记录号PTA-5119)、或由杂交瘤15C9(ATCC记录号PTA-5106)、或由杂交瘤16C7(ATCC记录号PTA-5107)、或由杂交瘤16H9(ATCC记录号PTA-5108)、或由杂交瘤117.1(ATCC记录号PTA-4567)、或由杂交瘤325.1(ATCC记录号PTA-5120)、或由杂交瘤368.1(ATCC记录号PTA-4568)、或由杂交瘤446.1(ATCC记录号PTA-5549)、或由杂交瘤501.1(ATCC记录号PTA-4569)、或由杂交瘤621.1(ATCC记录号PTA-5121)、或由杂交瘤633.1(ATCC记录号PTA-5122)、或由杂交瘤654.1(ATCC记录号PTA-5247)、或由杂交瘤725.1(ATCC记录号PTA-5124)、或由杂交瘤776.1(ATCC记录号PTA-4570)产生的单克隆抗体竞争结合细胞缔合的CA 125/0772P的抗体或结合抗原的抗体片段。如果本发明的抗体或结合抗原的抗体片段在ELISA交叉竞争测定和/或FACS交叉竞争测定中竞争结合，那么认为它们竞争结合。如果竞争者抗体或者抗原结合片段的IC50为高于抗体或结合抗原的抗体片段的浓度的不超过约100倍的浓度，那么认为该抗体或结合抗原的抗体片段在ELISA交叉竞争测定或FACS交叉竞争测定中竞争结合。在优选实施方案中，竞争者抗体或者抗原结合片段的IC50为高于抗体或抗原结合片段的浓度的不超过约10倍的浓度。在更优选的实施方案中，竞争者抗体或者结合抗原的抗体片段的IC50为抗体或结合抗原的抗体片段的浓度不超过约等摩尔的浓度。
在另一具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有117.1轻链多肽可变区(“117.1L”)，该可变区含有SEQ ID No27(117.1L)中描述的氨基酸序列。在再一个具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有117.1重链多肽可变区(“117.1H”)，该可变区含有SEQ ID No28(117.1H)中描述的氨基酸序列。在再一个具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有包含SEQ ID No27(117.1L)中描述的氨基酸序列的轻链多肽可变区和包含SEQ ID No28(117.1H)中描述的氨基酸序列的重链多肽可变区。
在另一具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有368.1轻链多肽可变区(“368.1L”)，该可变区含有SEQ ID No29(368.1L)中描述的氨基酸序列。在再一个具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有368.1重链多肽可变区(“368.1H”)，该可变区含有SEQ ID No30(368.1H)中描述的氨基酸序列。在再一个具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有包含SEQ ID No29(368.1L)中描述的氨基酸序列的轻链多肽可变区和包含S EQ ID No30(368.1H)中描述的氨基酸序列的重链多肽可变区。
在另一具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有501.1轻链多肽可变区(“501.1L”)，该可变区含有SEQ ID No31(501.1L)中描述的氨基酸序列。在再一个具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有501.1重链多肽可变区(“501.1H”)，该可变区含有SEQ ID No32(501.1H)中描述的氨基酸序列。在再一个具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有包含SEQ ID No31(501.1L)中描述的氨基酸序列的轻链多肽可变区和包含SEQ ID No32(501.1H)中描述的氨基酸序列的重链多肽可变区。
在另一具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有776.1轻链多肽可变区(“776.1L”)，该可变区含有SEQ ID No33(776.1L)中描述的氨基酸序列。在再一个具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有776.1重链多肽可变区(“776.1H”)，该可变区含有SEQ ID No34(776.1H)中描述的氨基酸序列。在再一个具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有包含SEQ ID No33(776.1L)中描述的氨基酸序列的轻链多肽可变区和包含SEQ ID No34(776.1H)中描述的氨基酸序列的重链多肽可变区。
在另一具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有725.1轻链多肽可变区(“725.1L”)，该可变区含有SEQ ID No54中描述的氨基酸序列。在再一个具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有725.1重链可变区(“725.1H”)，该可变区含有SEQ ID No53中描述的氨基酸序列。在再一个具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有包含SEQ ID No54中描述的氨基酸序列的轻链多肽可变区和包含SEQ ID No53中描述的氨基酸序列的重链多肽可变区。
在另一具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有16H9轻链多肽可变区(“16H9L”)，该可变区含有SEQ ID No56中描述的氨基酸序列。在再一个具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有16H9重链多肽可变区(“16H9H”)，该可变区含有SEQ ID No55中描述的氨基酸序列。在再一个具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有包含SEQ ID No56中描述的氨基酸序列的轻链多肽可变区和包含SEQ ID No55中描述的氨基酸序列的重链多肽可变区。
在另一具体实施方案中，本发明的抗体或结合抗原的抗体片段含有轻链多肽可变区和重链多肽可变区，轻链多肽可变区含有SEQ IDNO27(117.1L)中描述的氨基酸序列，重链可变区含有SEQ IDNO30(368.1H)、SEQ ID NO32(501.1H)、SEQ ID NO34(776.1H)、SEQ ID NO53(725.1H)或SEQ ID NO55(16H 9H)中描述的氨基酸序列。
在另一具体实施方案中，本发明的抗体或结合抗原的抗体片段含有轻链多肽可变区和重链多肽可变区，轻链多肽可变区含有SEQ IDNO29(368.1L)中描述的氨基酸序列，重链可变区含有SEQ IDNO30(368.1H)、SEQ ID NO32(501.1H)、SEQ ID NO34(776.1H)、SEQ ID NO53(725.1H)或SEQ ID NO55(16H9H)中描述的氨基酸序列。
在另一具体实施方案中，本发明的抗体或结合抗原的抗体片段含有轻链多肽可变区和重链多肽可变区，轻链多肽可变区含有SEQ IDNO31(501.1L)中描述的氨基酸序列，重链可变区含有SEQ IDNO30(368.1H)、SEQ ID NO32(501.1H)、SEQ ID NO34(776.1H)、SEQ ID NO53(725.1H)或SEQ ID NO55(16H9H)中描述的氨基酸序列。
在另一具体实施方案中，本发明的抗体或结合抗原的抗体片段含有轻链多肽可变区和重链多肽可变区，轻链多肽可变区含有SEQ IDNO33(776.1L)中描述的氨基酸序列，重链可变区含有SEQ IDNO30(368.1H)、SEQ ID NO32(501.1H)、SEQ ID NO34(776.1H)、SEQ ID NO53(725.1H)或SEQ ID NO55(16H9H)中描述的氨基酸序列。
在另一具体实施方案中，本发明的抗体或结合抗原的抗体片段含有轻链多肽可变区和重链多肽可变区，轻链多肽可变区含有SEQ IDNO54(725.1L)中描述的氨基酸序列，重链可变区含有SEQ IDNO30(368.1H)、SEQ ID NO32(501.1H)、SEQ ID NO34(776.1H)、SEQ ID NO53(725.1H)或SEQ ID NO55(16H9H)中描述的氨基酸序列。
在另一具体实施方案中，本发明的抗体或结合抗原的抗体片段含有轻链多肽可变区和重链多肽可变区，轻链多肽可变区含有SEQ IDNO33(16H9L)中描述的氨基酸序列，重链可变区含有SEQ IDNO30(368.1H)、SEQ ID NO32(501.1H)、SEQ ID NO34(776.1H)、SEQ ID NO53(725.1H)或SEQ ID NO55(16H9H)中描述的氨基酸序列。
本发明的抗体可以包括，但不限于，多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、双特异抗体、三特异抗体、多特异抗体、二体(biabody)、三体(tribody)、单链抗体或抗独特型抗体。在优选实施方案中，本发明的抗体是单克隆抗体，其相对于脱落CA125/0772P多肽，优选结合细胞缔合的CA 125/0772P多肽。
本发明的结合抗原的抗体片段可以包括，但不限于，Fab片段、F(ab’)2片段、二硫键连接的FvS、单链Fvs、含有可变轻链多肽(VL)的片段、含有可变重链多肽(VH)的片段，或含有互补决定区(CDR)的片段，和上面列出的本发明抗体任一种的片段。
此外，本发明的抗体和结合抗原的抗体片段可以是任何免疫球蛋白类别。例如，本发明的抗体可以是IgG、IgM、IgE、IgD、IgA或IgY类抗体。本发明的抗体可以是任何同种型。例如，本发明的抗体可以是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1或IgA2重链同种型。
此外，本发明的抗体可以，例如，含有插入框架区内的可变轻链区，例如，κ或λ轻链可变区，可变重链区，或者其CDR。例如，本发明的抗体可以含有Cγ1恒定区或Cγ4恒定区。
另一方面，本发明提供了杂交瘤细胞，其产生本发明的单克隆抗体。在一个实施方案中，本发明的杂交瘤是杂交瘤4E7(ATCC记录号PTA-5109)、杂交瘤7A11(ATCC记录号PTA-5110)、杂交瘤7C6(ATCC记录号PTA-5111)、杂交瘤7F10(ATCC记录号PTA-5112)、杂交瘤7G10(ATCC记录号PTA-5245)、杂交瘤7H1(ATCC记录号PTA-5114)、杂交瘤8A1(ATCC记录号PTA-5115)、杂交瘤8B5(ATCC记录号PTA-5116)、杂交瘤8C3(ATCC记录号PTA-5246)、杂交瘤8E3(ATCC记录号PTA-5118)、杂交瘤8G9(ATCC记录号PTA-5119)、杂交瘤15C9(ATCC记录号PTA-5106)、杂交瘤16C7(ATCC记录号PTA-5107)、杂交瘤16H9(ATCC记录号PTA-5108)、杂交瘤117.1(ATCC记录号PTA-4567)、杂交瘤325.1(ATCC记录号PTA-5120)、杂交瘤368.1(ATCC记录号PTA-4568)、杂交瘤446.1(ATCC记录号PTA-5549)、杂交瘤501.1(ATCC记录号PTA-4569)、杂交瘤621.1(ATCC记录号PTA-5121)、杂交瘤633.1(ATCC记录号PTA-5122)、杂交瘤654.1(ATCC记录号PTA-5247)、杂交瘤725.1(ATCC记录号PTA-5124)、或杂交瘤776.1(ATCC记录号PTA-4570)。
在另一实施方案中，本发明的杂交瘤是产生单克隆抗体的杂交瘤，所产生的单克隆抗体与杂交瘤4E7(ATCC记录号PTA-5109)、杂交瘤7A11(ATCC记录号PTA-5110)、杂交瘤7C6(ATCC记录号PTA-5111)、杂交瘤7F10(ATCC记录号PTA-5112)、杂交瘤7G10(ATCC记录号PTA-5245)、杂交瘤7H1(ATCC记录号PTA-5114)、杂交瘤8A1(ATCC记录号PTA-5115)、杂交瘤8B5(ATCC记录号PTA-5116)、杂交瘤8C3(ATCC记录号PTA-5246)、杂交瘤8E3(ATCC记录号PTA-5118)、杂交瘤8G9(ATCC记录号PTA-5119)、杂交瘤15C9(ATCC记录号PTA-5106)、杂交瘤16C7(ATCC记录号PTA-5107)、杂交瘤16H9(ATCC记录号PTA-5108)、杂交瘤117.1(ATCC记录号PTA-4567)、杂交瘤325.1(ATCC记录号PTA-5120)、杂交瘤368.1(ATCC记录号PTA-4568)、杂交瘤446.1(ATCC记录号PTA-5549)、杂交瘤501.1(ATCC记录号PTA-4569)、杂交瘤621.1(ATCC记录号PTA-5121)、杂交瘤633.1(ATCC记录号PTA-5122)、杂交瘤654.1(ATCC记录号PTA-5247)、杂交瘤725.1(ATCC记录号PTA-5124)、或杂交瘤776.1(ATCC记录号PTA-4570)产生的单克隆抗体竞争结合细胞缔合的CA 125/0772P。如果本发明的抗体或结合抗原的抗体片段在ELISA交叉竞争测定和/或FACS交叉竞争测定中竞争结合，那么认为它们竞争结合。如果竞争者抗体或者抗原结合片段的IC50为高于抗体或结合抗原的抗体片段的浓度不超过约100倍的浓度，那么认为该抗体或结合抗原的抗体片段在ELISA交叉竞争测定和/或FACS交叉竞争测定中竞争结合。在优选实施方案中，竞争者抗体或者抗原结合片段的IC50为高于抗体或抗原结合片段的浓度不超过约10倍的浓度。在更优选的实施方案中，竞争者抗体或者结合抗原的抗体片段的IC50为抗体或结合抗原的抗体片段的浓度不超过约等摩尔的浓度。
在再一方面，本发明提供了分离的核酸分子，其含有编码本发明的抗体或结合抗原的抗体片段的核苷酸序列。
在另一方面，本发明提供了融合多肽，其含有可操作地连接异源剂的本发明的抗体或结合抗原的抗体片段，即相对于脱落CA125/0772P多肽优选结合细胞缔合CA 125/0772P多肽的抗体或结合抗原的抗体片段。在本发明融合多肽的一个实施方案中，抗体，或者结合抗原的抗体片段，和异源剂通过共价键，如肽键或二硫键可操作地连接。在本发明融合多肽的另一个实施方案中，抗体，或者结合抗原的抗体片段，和异源剂通过非共价键可操作地连接。在本发明融合多肽的另一个实施方案中，异源剂含有氨基酸序列或放射性同位素。在各种非限制性实施方案中，本发明融合多肽的异源剂含有细胞毒性剂或可检测的试剂，例如，成像剂。
作为本发明的部分还包括的是相对于脱落CA 125/0772P优选结合细胞缔合CA 125/0772P的本发明抗体、结合抗原的抗体片段和融合多肽的类似物。在一个实施方案中，相对于修饰前的抗体、结合抗原的抗体片段和融合多肽的亲和性，这种类似物表现出对细胞缔合CA125/0772P的增强的亲和性。在另一实施方案中，与修饰前的抗体、结合抗原的抗体片段和融合多肽相比这种类似物表现出增加的血清半寿期。例如，本发明的类似物包括杂交瘤4E7(ATCC记录号PTA-5109)、杂交瘤7A11(ATCC记录号PTA-5110)、杂交瘤7C6(ATCC记录号PTA-5111)、杂交瘤7F10(ATCC记录号PTA-5112)、杂交瘤7G10(ATCC记录号PTA-5245)、杂交瘤7H1(ATCC记录号PTA-5114)、杂交瘤8A1(ATCC记录号PTA-5115)、杂交瘤8B5(ATCC记录号PTA-5116)、杂交瘤8C3(ATCC记录号PTA-5246)、杂交瘤8E3(ATCC记录号PTA-5118)、杂交瘤8G9(ATCC记录号PTA-5119)、杂交瘤15C9(ATCC记录号PTA-5106)、杂交瘤16C7(ATCC记录号PTA-5107)、杂交瘤16H9(ATCC记录号PTA-5108)、杂交瘤117.1(ATCC记录号PTA-4567)、杂交瘤325.1(ATCC记录号PTA-5120)、杂交瘤368.1(ATCC记录号PTA-4568)、杂交瘤446.1(ATCC记录号PTA-5549)、杂交瘤501.1(ATCC记录号PTA-4569)、杂交瘤621.1(ATCC记录号PTA-5121)、杂交瘤633.1(ATCC记录号PTA-5122)、杂交瘤654.1(ATCC记录号PTA-5247)、杂交瘤725.1(ATCC记录号PTA-5124)、或杂交瘤776.1(ATCC记录号PTA-4570)产生的单克隆抗体的类似物。
另一方面，本发明提供了药物组合物，其含有本发明的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽，或类似物，即相对于脱落CA 125/0772P多肽优选结合细胞缔合的CA 125/0772P多肽的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽，或类似物，还含有药学上可接受的载体。在另一方面，本发明提供了制备药物组合物的方法，该方法包括将本发明的抗体或结合抗原的抗体片段与药学上可接受的载体混合。
在另一方面，本发明提供了含有包装材料和包含在该包装材料内的本发明的药物组合物的产品，所述药物组合物为适于施用于受试者，优选人的形式。在一个实施方案中，产品还含有关于药物组合物的使用或施用的印刷的使用说明和/或标签。该使用说明和/或标签可以，例如，提出预防或治疗与CA 125/0772P失调相关的失调，如细胞增殖失调，例如，癌症，例如，乳腺、子宫、乳腺或肺癌的一种或多种症状的给药方案。
另一方面，本发明提供了预防、治疗、处理或改善CA 125/0772P-相关失调的症状的方法，这些方法包括对需要这种预防、治疗、处理或改善的受试者施用抗体或抗体的抗原结合片段，所施用的量足够预防、治疗、处理或改善细胞增殖性失调的症状，其中所述抗体或结合抗原的抗体片段相对于脱落CA 125/0772P优选结合细胞缔合的CA125/0772P。
在一个实施方案中，本发明的这些方法涉及预防、治疗、处理或改善细胞增殖性失调的症状。在另一个实施方案中，本发明的这些方法涉及预防、治疗、处理或改善癌症的症状。在再一个实施方案中，本发明的这些方法涉及预防、治疗、处理或改善宫颈癌、子宫癌、乳腺癌或肺癌的症状。在本发明的这些方法的优选实施方案中，这些方法涉及预防、治疗、处理或改善卵巢癌的症状。
在本发明的这些方法的一个实施方案中，所施用的抗体或抗原结合片段是单克隆抗体或结合抗原的单克隆抗体片段。在本发明的方法的另一个实施方案中，以约5μg/kg到约10mg/kg，优选约20μg/kg到约5mg/kg，更优选约100μg/kg到约5mg/kg的剂量浓度施用抗体或结合抗原的抗体片段。
在本发明的这些方法的再一个实施方案中，这些方法作为联合癌症疗法的部分实施。这种联合癌症疗法可包括，例如，施用化疗剂，例如，紫杉醇或顺铂。这种联合癌症疗法可备选地包括，但不限于，放射疗法。
在另一方面，本发明提供了有助于鉴定相对于脱落CA 125/0772P优选结合细胞缔合的CA 125/0772P的抗体或结合抗原的抗体片段的方法。在一个实施方案中，有助于鉴定优选结合细胞缔合的CA 125/0772P的抗体或结合抗原的抗体片段的方法包括在脱落CA 125/0772P(优选过量(重量/重量)脱落)的存在下将抗体或结合抗原的抗体片段与含有细胞缔合的CA 125/0772P的肽(例如，细胞缔合的CA 125/0772P多肽或甚至全长CA 125/0772P多肽)在允许抗体或结合抗原的抗体片段结合所述含有细胞缔合的CA 125/0772P的肽或脱落CA 125/0772P的条件下接触。孵育后，除去脱落CA 125/0772P(有或没有抗体或结合抗原的抗体片段结合)和未结合的抗体或结合抗原的抗体片段，并测量与含有细胞缔合的CA 125/0772P的肽结合的抗体或结合抗原的抗体片段的量。如果该方法的抗体或结合抗原的抗体片段满足上面为“优选结合”提出的三个实施方案之一，那么所述抗体或者结合抗原的抗体片段相对于脱落CA 125/0772P多肽优选结合细胞缔合的CA 125/0772P多肽。在优选实施方案中，反应混合物中脱落CA 125/0772P与细胞缔合的CA 125/0772P的比例为约25∶1(wt/wt)。作为该方法的部分，细胞缔合的CA 125/0772P可以被固定在固体表面上。例如，可以以ELISA形式实施该方法。
在再一个实施方案中，本发明提供了有助于鉴定相对于脱落CA125/0772P优选结合细胞缔合的CA 125/0772P的抗体或结合抗原的抗体片段的方法，该方法包括在允许含有细胞缔合的CA 125/0772P的肽与抗体或结合抗原的抗体片段结合的条件下，将抗体或结合抗原的抗体片段与含有细胞缔合的CA 125/0772P的肽和脱落CA 125/0772P(优选脱落CA 125/0772P过量(重量/重量)，例如约25倍过量(wt/wt))接触，除去未结合的含有细胞缔合的CA 125/0772P的肽，测量被抗体或抗原结合片段结合的含有细胞缔合的CA 125/0772P的肽的量，并将所测量的量与缺乏脱落CA 125/0772P的这种量(即，更少的量)时抗体或结合抗原的抗体片段可以结合的含有细胞缔合的CA 125/0772P的肽的量相比较。如果该方法的抗体或结合抗原的抗体片段满足上面为“优选结合”提出的三个实施方案之一，那么所述抗体或者结合抗原的抗体片段相对于脱落CA 125/0772P多肽优选结合细胞缔合的CA125/0772P多肽。作为该方法的部分，抗体或结合抗原的抗体片段可以被固定在固体表面上，例如，可以以ELISA形式实施该方法。
在再一实施方案中，本发明提供了辅助鉴定优选结合细胞缔合的CA 125/0772P的抗体或结合抗原的抗体片段的方法，该方法包括在允许CA 125/0772P与抗体或结合抗原的抗体片段结合的条件下，将抗体或结合抗原的抗体片段与表达CA 125/0772P的细胞和一定量，例如至少约0.05mg/ml脱落CA 125/0772P(优选脱落CA 125/0772P过量(wt/wt))接触，除去未结合的细胞，测量被抗体或结合抗原的抗体片段结合的表达CA125/0772P的细胞量，并将所测量与不存在这些量的脱落CA 125/0772P(即，更少量)时表达结合抗体或结合抗原的抗体片段的CA 125/0772P的细胞的量相比较。如果该方法的抗体或结合抗原的抗体片段满足上面为“优选结合”提出的三个实施方案之一，那么所述抗体或者结合抗原的抗体片段相对于脱落CA 125/0772P多肽优选结合细胞缔合的CA 125/0772P多肽。可以例如实施这种方法，其中通过流式细胞术技术，包括例如，荧光激活细胞分类术(FACS)实施测量。
另一方面，本发明还提供了诊断CA 125/0772P相关的失调或者CA 125/0772P-相关失调的易患性的方法。
3.1.术语如此处所用的，本发明的抗体或结合抗原的抗体片段或融合多肽语境中的术语“类似物”指抗体、结合抗原的抗体片段或融合多肽，其相对于在类似物中存在的修饰之前本发明的相应抗体、结合抗原的抗体片段或融合多肽(在该语境中称为本发明的“修饰前”的抗体、结合抗原的抗体片段或融合多肽)被修饰了，但是仍然相对于脱落CA125/0772P优选结合细胞缔合的CA 125/0772P。
通过下面的章节6.4中描述的亲和力测定法确定本发明的抗体或结合抗原的抗体片段的“亲和力”(Kd)。
如此处所用的，术语“本发明的抗体”指相对于脱落CA 125/0772P多肽优选结合细胞缔合的CA 125/0772P多肽的抗体。同样，如此处所用的术语“本发明的结合抗原的抗体片段”指相对于脱落CA 125/0772P多肽优选结合细胞缔合的CA 125/0772P多肽的结合抗原的抗体片段。即使抗体或结合抗原的抗体片段结合CA 125/0772P多肽，即脱落前的CA 125/0772P多肽，只要这种抗体或结合抗原的抗体片段相对于脱落CA 125/0772P多肽仍然优选结合细胞缔合的CA 125/0772P多肽，那么认为该抗体或结合抗原的抗体片段时本发明的抗体或抗原结合片段。由于如下讨论的事实CA 125/0772P脱落之前细胞缔合的CA125/0772P多肽作为脱落前CA 125/0772P的部分存在，注意到优选结合细胞缔合的CA 125/0772P的抗体也可以结合脱落前CA 125/0772P。从而，独立于抗体或抗原结合片段是否结合CA 125/0772P，只要该抗体或结合抗原的抗体片段满足此处为“相对于脱落CA 125/0772P多肽结合细胞缔合的CA 125/0772P”提出的标准，那么就认为该抗体或结合抗原的抗体片段是本发明的抗体或结合抗原的抗体片段。还提出，除非另外说明，术语“抗体”和“免疫球蛋白”可互换使用。
如此处所用的术语“依赖抗体的细胞毒性测定”(ADCC测定)指下面的章节6.5中描述的ADCC测定。同样，当在下面的章节6.5中描述的ADCC测定中试验时，认为在ADCC测定中介导CA 125/0772P-阳性肿瘤细胞的裂解的抗体或结合抗原的抗体片段是阳性的。
除非另外指出，如此处所用的术语“约”指被该术语修饰的值的不高于或低于10％。如果核酸或氨基酸序列长度是被修饰的值，那么所得修饰值将是不高于或低于初始长度的10％的整数。此外，被该术语修饰的长度的10％导致肯定小于1的值，那么可以理解，如此处所用的，所修饰的长度比初始值多或少1个核苷酸或氨基酸残基。
在抗体-抗原结合背景，例如，优选结合细胞-缔合的CA 125/0772P的抗体或结合抗原的抗体片段的背景中的术语“结合”指特异结合特定抗原(例如，细胞缔合的CA 125/0772P)并且不特异结合其他抗原的抗体或结合抗原的抗体片段。优选地，抗体或结合抗原的抗体片段是如通过ELISA特异性测定确定的结合CA 125/0772P特异性为至少50D/微克抗体，或者在流式细胞术特异性测定中被认为是阳性的抗体或结合抗原的抗体片段。结合抗原的肽或多肽可以更低亲和性结合其他肽或多肽，这可以通过例如，免疫测定法、BIAcore、斯卡查德分析或本领域中公知的其他测定法确定。与抗原特异结合的抗体或片段可以与相关抗原交叉反应。优选地，与抗原结合的抗体或片段不与其他抗原交叉反应。关于抗体特异性的讨论，见，例如，FundamentalImmunology第二版，Paul，编著，Raven Press(1989)332-336页。优选地，本发明的抗体或结合抗原的抗体片段结合图1的肽的Kd小于约100nM，更优选结合图1的肽的Kd小于约5nM的抗体或结合抗原的抗体片段，所有都通过BIAcore亲和测定法测量，该测定法在章节6.4中描述。还注意到优选结合细胞缔合的CA 125/0772P的抗体还可以代表相对于其他非CA 125/0772P抗原特异结合CA 125/0772P(包括脱落CA 125/0772P)的抗体。最后，注意到除非另外说明，如此处所用的术语“特异地”和“免疫特异地”可互换使用。
ELISA特异性测定法如此处所用的，该测定法指下面的章节6.2中描述的ELISA测定法。如果抗体表现出的吸光度至少5到大于30OD/微克抗体，那么认为该抗体(或者结合抗原的抗体片段)是阳性的(即对CA 125/0772P特异)。
流式细胞术特异性测定法如此处所用的，该测定法指下面的章节6.2中描述的流式细胞术测定法。如果抗体(或者结合抗原的抗体片段)表现出下面阳性细胞范围内的流式细胞术特异性测定结果少于5％阳性NIH/3T3细胞，和至少60％阳性NIH/3T3细胞产生SEQ ID NO2多肽；和/或少于25％阳性SK-OV3细胞和至少80％阳性OVCAR-3细胞，那么认为该抗体(或者结合抗原的抗体片段)是阳性的(即，对CA125/0772P特异)。
在两种抗体种类或者结合抗原的抗体片段种类(或者它们的组合)语境中所用的术语“竞争结合”和“与…竞争”可互换使用。认为如果在ELISA交叉竞争测定和/或FACS交叉竞争测定中第一种抗体或结合抗原的抗体片段与第二种竞争，那么认为第一种抗体或结合抗原的抗体片段与第二种抗体或结合抗原的抗体片段竞争。
ELISA交叉竞争测定法如此处所用的，该测定法指下面的章节7.0中描述的ELISA测定法。如果竞争者抗体或者抗原结合片段的IC50为高于该抗体或结合抗原的抗体片段的浓度不超过约100倍的浓度，那么认为该抗体或结合抗原的抗体片段在该测定中竞争结合。
FACS交叉竞争测定法如此处所用的，该测定法指下面的章节7.0中描述的FACS测定法。如果竞争者抗体或者抗原结合片段的IC50为高于该抗体或结合抗原的抗体片段的浓度不超过约100倍的浓度，那么认为该抗体或结合抗原的抗体片段在该测定中竞争结合。
如此处所用的术语“CA 125/0772P”或“CA 125/0772P多肽”指脱落前的CA 125/0772P跨膜多肽，其一旦脱落就产生脱落CA125/0772P多肽和细胞缔合的CA 125/0772P多肽。最近已经证明文献中报导的作为CA 125/0772P多肽的全长序列的氨基酸序列实际上不代表全长CA 125/0772P序列。具体见，例如，WO02/06317(PCT/US01/22635)和US 2003/0124140，它们公开了称为“0772P”的多肽。0772P的氨基酸序列包括对以前认为是全长CA 125的延长。因为该多肽在文献中被称为CA 125或0772P，所以其在此处被称为CA 125/0772P。
如此处所用的术语“CA 125/0772P相关的失调”指涉及或特征是存在相对于相应正常状态的细胞缔合的CA 125/0772P的差别水平和/或相对于相应正常状态的脱落CA 125/0772P的过量。例如，对于卵巢癌，相对于在正常(例如，非癌性)状态中观察的水平，观察到更高水平的细胞缔合的或脱落CA 125/0772P。细胞缔合的和/或脱落CA125/0772P的差别水平可以是该失调的原因或指征。
如此处所用的术语“细胞缔合的CA 125/0772P”指一种CA125/0772P细胞外多肽种类，在脱落前CA 125/0772P多肽的一部分作为脱落CA 125/0772P释放后，该CA 125/0772P细胞外多肽种类暂时(例如在转换之前)保持细胞缔合的形式。例如，细胞缔合的CA125/0772P是一种CA 125/0772P细胞外多肽种类，其在CA 125/0772P多肽的一部分作为脱落CA 125/0772P释放后以细胞缔合的形式保持在OVCAR-3细胞系细胞(HTB-161；ATCC)表面上。CA 125/0772P细胞缔合的多肽种类存在于SEQ ID NO1的氨基酸残基1到708内和SEQ IDNO2的氨基酸残基1到711内。此外，CA 125/0772P可以在位于SEQID NO2的氨基酸残基659-665处的蛋白酶切割位点上被切割。见O′Brien等人，Tumour Biol.23(3)154-169(2002)。同样，细胞缔合的CA 125/0772P多肽可以包括SEQ ID NO2的氨基酸残基659-711。
如此处所用的术语“依赖补体的细胞毒性测定法”(CDC测定法)指下面的章节6.5中描述的CDC测定法。同样地，当在下面的章节6.5中描述的CDC测定中试验时，在CDC测定中介导肿瘤细胞裂解的抗体或结合抗原的抗体片段被认为是阳性的。
如此处所用的术语“失调”和“疾病”可互换使用，指受试者中的病症。
如此处所用的，短语“结合抗原的抗体片段”中的术语“片段”指肽或多肽，其含有另一多肽(例如优选结合细胞缔合的CA 125/0772P的抗体)的氨基酸序列的至少约5个相邻氨基酸残基，至少约10个相邻氨基酸残基，至少约15个相邻氨基酸残基，至少约20个相邻氨基酸残基，至少约25个相邻氨基酸残基，至少约40个相邻氨基酸残基，至少约50个相邻氨基酸残基，至少约60个相邻氨基酸残基，至少约70个相邻氨基酸残基，至少约80个相邻氨基酸残基，至少约90个相邻氨基酸残基，至少约100个相邻氨基酸残基，至少约110个相邻氨基酸残基，或至少约120个相邻氨基酸残基。
如此处所用的术语“宿主细胞”指特定细胞，其包括哺乳动物细胞或其他真核细胞，或者原核细胞，所述细胞例如，被核酸分子转化或者转染或者被病毒、噬菌粒、或噬菌体感染，还包括这种细胞的后代或潜在后代。由于随后世代中可能发生突变或环境影响或者额外的重组操作或者该核酸分子向宿主细胞基因组的整合，所以这种细胞的后代可以与用该核酸分子转染的亲本细胞不同。
如此处所用的术语“在严格条件下杂交”描述了杂交和洗涤条件，在这些条件下相互具有至少75％同一性的核苷酸序列通常与相互的互补物杂交。这些严格条件是本领域中技术人员公知的并且可以在Current Protocols in Molecular Biology，Ausubel等人，编者，John Wiley & Sons(1989-2002)的装界6.3.1-6.3.6中发现。在一个非限制性实例中，严格杂交条件是在6×氯化钠/柠檬酸钠(SSC)约45℃下杂交，然后在0.1×SSC，0.2％SDS与68℃下洗涤一次或多次。在优选的非限制性实例中，严格杂交条件是在6×SSC约45℃下杂交，然后在0.2×SSC，0.1％SDS与50-65℃下洗涤一次或多次(即在50℃、55℃、60℃或65℃下洗涤一次或多次)。可以理解，在一些实施方案中，本发明的核酸不包括在这些条件下仅与只由A或T核苷酸组成的核苷酸序列杂交的核酸分子。
如此处所用的，肽、多肽、融合蛋白、抗体或结合抗原的抗体片段语境中的术语指肽、多肽、融合蛋白、抗体或结合抗原的抗体片段，其基本上没有来自细胞或组织来源的细胞物质或污染性蛋白，其中该肽、多肽、融合蛋白、抗体或结合抗原的抗体片段来自该细胞或组织来源或者从该细胞或组织来源得到；或者当化学合成时基本上没有化学前体或其他化学物质。术语“基本上没有细胞物质或污染性蛋白”包括肽、多肽、融合蛋白、抗体或结合抗原的抗体片段的制剂，其中肽、多肽、融合蛋白、抗体或结合抗原的抗体片段与细胞的细胞组分分离，其中肽、多肽、融合蛋白、抗体或结合抗原的抗体片段从这些细胞分离或重组产生。从而，基本上没有细胞物质或污染性蛋白的肽、多肽、融合蛋白、抗体或结合抗原的抗体片段包括肽、多肽、融合蛋白、抗体或结合抗原的抗体片段制剂，该制剂含有少于约30％、约20％、约10％，或约5％(按干重计)的其他蛋白质。当肽、多肽、融合蛋白、抗体或结合抗原的抗体片段为重组产生时，其还优选无培养基，即培养基占蛋白质制剂体积的约20％、约10％、或约5％以下。当化学合成产生肽、多肽、融合蛋白、抗体或结合抗原的抗体片段时，其优选没有化学前体或其他化学物质，该化学前体或其他化学物质与肽、多肽、融合蛋白、抗体或结合抗原的抗体片段合成有关。优选地，除了目标肽、多肽、融合蛋白、抗体或结合抗原的抗体片段，肽、多肽、融合蛋白、抗体或结合抗原的抗体片段的这些制剂含有的化学前体或其他化学物质少于约30％、约20％、约10％、约5％(按干重计)。
如此处所用的术语“分离的”在核酸分子语境中指与其他核酸分子分开的核酸分子，该其他核酸分子存在于该核酸分子的天然细胞来源。备选地，“分离的”核酸分子，如cDNA分子，当通过重组技术产生时可以基本上不含其他细胞物质，或者培养基，或者当化学合成时基本上无化学前体或其他化学物质。
如此处所用的术语“处理”指受试者从试剂，例如，本发明的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物得到的有益效果，该有益效果不导致疾病的治愈。在一些实施方案中，受试者被施用一种或多种这些试剂以“处理”失调以便预防或延缓该失调的发展或恶化。
如此处所用的，术语“单克隆抗体”指从单一细胞克隆(包括任一真核、原核或噬菌体克隆)得到的抗体，并且该抗体不依赖于其所产生的方法。因此，“单克隆抗体”可以指含有一群抗体的组合物，每种抗体都结合单一表位，其中所述组合物没有结合与该群抗体所结合的单一表位不同的表位的抗体。当然，注意到在一些情况中，单一表位存在于多肽中的多个位置。在这些情况下，尽管单克隆抗体可以结合多个位置，但是仍然认为该抗体结合单一表位。
如此处所用的，术语“核酸”和“核苷酸序列”包括DNA分子(例如，cDNA或基因组DNA)、RNA分子(例如，mRNA)、DNA和RNA分子的组合或杂交DNA/RNA分子，和DNA或RNA分子的类似物。可以使用例如，核苷酸类似物产生这些类似物，核苷酸类似物包括，但不限于，次黄苷或三苯甲基化碱基。这些类似物可以还包括含有修饰主链的DNA或RNA分子，该修饰主链可以赋予分子有益性质，如，例如，核酸酶抗性或者穿越细胞膜的能力增加。核酸或核苷酸序列可以是单链的、双链的，可以含有单链和双链部分，并且可以含有三链部分，但是优选为双链DNA。
在融合多肽语境中如此处所用的术语“可操作地连接”指将抗体或结合抗原的抗体片段与异源剂连接的抗体或结合抗原的抗体片段。可操作连接可以是直接或间接的。例如，抗体(或结合抗原的抗体片段)和异源剂之间可以存在氨基酸序列。
如此处所用的，术语“优选结合细胞缔合的CA 125/0772P”、“优选结合细胞缔合的CA 125/0772P多肽”、“相对于脱落CA 125/0772P优选结合细胞缔合的CA 125/0772P”或“相对于脱落CA 125/0772P多肽优选结合细胞缔合的CA 125/0772P多肽”的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物指当在如此处描述的ELISA竞争测定或流式细胞术竞争测定中试验时为阳性的抗体或结合抗原的抗体片段。优选地，抗体或结合抗原的抗体片段在如此处描述的ELISA竞争测定和流式细胞术竞争测定的试验中都是阳性。
ELISA竞争测定如此处所用的该测定指下面的章节6.3中描述的ELISA测定。如果在脱落CA 125/0772P比图1的肽(SEQ ID N01)过量25倍(w/w)时，抗体(或结合抗原的抗体片段)表现出小于约25％的抑制，那么认为该抗体(或结合抗原的抗体片段)是阳性的。
流式细胞术竞争测定如此处所用的该测定指下面的章节6.3中描述的流式细胞术测定。如果抗体(或结合抗原的抗体片段)显示出IC50(通过阳性细胞百分数测量)为至少0.05mg/ml脱落CA125/0772P，即，需要至少0.05mg/ml脱落CA 125/0772P以将流式细胞术竞争测定中阳性细胞百分数减少一半，那么认为抗体(或结合抗原的抗体片段)是阳性的(即，被认为优选结合细胞缔合的CA125/0772P)。
如此处所用的，术语“防止”和“预防”指阻止受试者中CA125/0772P-相关的失调或CA 125/0772P-相关的失调的一种或多种症状的复发或发作。
如此处所用的，“方案”包括给药时间表和给药方案。此处的方案是使用方法并包括预防和治疗方案。
如此处所用的，术语“脱落CA 125/0772P多肽”指CA 125/0772P细胞外多肽序列，其与表达CA 125/0772P的细胞表面上表达的CA125/0772P多肽分离并释放，剩下细胞缔合的CA 125/0772P种类保持在细胞表面上，然后该保持是暂时的。如此处所用的该术语指在人血清和/或OVCAR-3(HTB-161；ATCC)细胞系培养上清液中发现的脱落CA 125/0772P的种类。通过delos Frailes等人Tumour Biol.14(1)18-29(1993)的方法，使用人腹水或OVCAR-3上清液可以得到这些脱落CA 125/0772P多肽。备选地，通过商业来源，如FitzgeraldIndustries International(Concord，MA)、Scripps Laboratories(La Jolla，CA)或United States Biochemical Corp(Cleveland，OH)可以得到这些脱落CA 125/0772P多肽。
如此处所用的，术语“受试者”和“患者”可以互换使用。如此处所用的，术语“受试者”指动物，优选包括非灵长类(例如，奶牛、猪、马、驴、山羊、骆驼、猫、狗、豚鼠、大鼠、小鼠、绵羊)和灵长类(例如，猴，如猕猴、大猩猩、黑猩猩，和人)的哺乳动物，优选人。在一个实施方案中，受试者是患有癌症，例如，卵巢癌的受试者。
如此处所用的，术语“治疗”指施用一种或多种抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物导致CA 125/0772P-相关失调的改善。
如此处所用的术语“药学上可接受的”指组合物，例如，载体、赋形剂，或盐，该组合物被联邦政府或州政府的管理机构批准或者在美国药典或者其他公知的药典中列出，该组合物用于动物，更具体地，用于人。
4.附图简述图1描绘了CA 125/0772P 3-重复(SEQ ID NO1)的氨基酸序列。从氨基酸14到氨基酸452的斜体残基代表重复区。14-452重复区内的三个重复的每一个都通过如所示的垂直线和箭头描绘。带下划线的残基代表跨膜近端非重复区。带下划线残基后的序列不是CA125/0772P的部分并且包括羧基-Myc-His标记。
图2描绘了CA 125/0772P 3-重复TM(SEQ ID NO2)的氨基酸序列。斜体、下划线化残基(即从氨基酸14到452)代表重复区。14-452重复区内的三个重复的每一个都通过如所示的垂直线和箭头描绘。带下划线未斜体化的残基(即从氨基酸453到氨基酸711)代表跨膜近端非重复区。无下划线的斜体化残基(即从氨基酸712到氨基酸738)代表跨膜结构域。粗体残基(即，从氨基酸739到氨基酸769)代表细胞质区域。粗体残基后的序列不是CA 125/0772P的部分并且包括羧基-Myc-His标记。
图3显示了FACS竞争性测定中脱落CA 125/0772P浓度对阳性细胞百分数(在这种情况下，117.1抗体和M11抗体对照(正方形))的示意图。如所示，即使在低浓度脱落CA 125/0772P(IC50＝0.003mg/ml)下M11也可以竞争结合OVCAR-3细胞，而即使在高浓度脱落CA125/0772P(IC50大于1mg/ml)下，117.1也不能竞争结合。
图4显示了ADCC测定中裂解百分数对117.1抗体(4个单独供体的平均)的抗体浓度的示意图。如图中所示，抗体117.1以依赖剂量的方式介导OVCAR-3细胞的特异裂解。
图5A描绘了编码单克隆抗体117.1的可变轻链区的核苷酸序列(SEQ ID NO35)。编码引导序列的核苷酸序列被双下划线标出，编码CDR序列的核苷酸序列被单下划线标出。
图5B描绘了编码单克隆抗体117.1的可变重链区的核苷酸序列(SEQ ID NO36)。编码引导序列的核苷酸序列被双下划线标出，编码CDR序列的核苷酸序列被单下划线标出。
图5C描绘了编码单克隆抗体117.1的可变轻链区的氨基酸序列(SEQ ID NO27)。引导序列被双下划线标出，CDR序列被单下划线标出。
图5D描绘了编码单克隆抗体117.1的可变重链区的氨基酸序列(SEQ ID NO28)。引导序列被双下划线标出，CDR序列被单下划线标出。
图6A描绘了编码单克隆抗体368.1的可变轻链区的核苷酸序列(SEQ ID NO37)。编码引导序列的核苷酸序列被双下划线标出，编码CDR序列的核苷酸序列被单下划线标出。
图6B描绘了编码单克隆抗体368.1的可变重链区的核苷酸序列(SEQ ID NO38)。编码引导序列的核苷酸序列被双下划线标出，编码CDR序列的核苷酸序列被单下划线标出。
图6C描绘了编码单克隆抗体368.1的可变轻链区的氨基酸序列(SEQ ID NO29)。引导序列被双下划线标出，CDR序列被单下划线标出。
图6D描绘了编码单克隆抗体368.1的可变重链区的氨基酸序列(SEQ ID NO30)。引导序列被双下划线标出，CDR序列被单下划线标出。
图7A描绘了编码单克隆抗体501.1的可变轻链区的核苷酸序列(SEQ ID NO39)。编码引导序列的核苷酸序列被双下划线标出，编码CDR序列的核苷酸序列被单下划线标出。
图7B描绘了编码单克隆抗体501.1的可变重链区的核苷酸序列(SEQ ID NO40)。编码引导序列的核苷酸序列被双下划线标出，编码CDR序列的核苷酸序列被单下划线标出。
图7C描绘了编码单克隆抗体501.1的可变轻链区的氨基酸序列(SEQ ID NO31)。引导序列被双下划线标出，CDR序列被单下划线标出。
图7D描绘了编码单克隆抗体501.1的可变重链区的氨基酸序列(SEQ ID NO32)。引导序列被双下划线标出，CDR序列被单下划线标出。
图8A描绘了编码单克隆抗体776.1的可变轻链区的核苷酸序列(SEQ ID NO41)。编码引导序列的核苷酸序列被双下划线标出，编码CDR序列的核苷酸序列被单下划线标出。
图8B描绘了编码单克隆抗体776.1的可变重链区的核苷酸序列(SEQ ID NO42)。编码引导序列的核苷酸序列被双下划线标出，编码CDR序列的核苷酸序列被单下划线标出。
图8C描绘了编码单克隆抗体776.1的可变轻链区的氨基酸序列(SEQ ID NO33)。引导序列被双下划线标出，CDR序列被单下划线标出。
图8D描绘了编码单克隆抗体776.1的可变重链区的氨基酸序列(SEQ ID NO34)。引导序列被双下划线标出，CDR序列被单下划线标出。
图9A描绘了编码单克隆抗体725.1的可变轻链区的核苷酸序列(SEQ ID NO52)。编码引导序列的核苷酸序列被双下划线标出，编码CDR序列的核苷酸序列被单下划线标出。
图9B描绘了编码单克隆抗体725.1的可变重链区的核苷酸序列(SEQ ID NO57)。编码引导序列的核苷酸序列被双下划线标出，编码CDR序列的核苷酸序列被单下划线标出。
图9C描绘了编码单克隆抗体725.1的可变轻链区的氨基酸序列(SEQ ID NO54)。引导序列被双下划线标出，CDR序列被单下划线标出。
图9D描绘了编码单克隆抗体725.1的可变重链区的氨基酸序列(SEQ ID NO53)。引导序列被双下划线标出，CDR序列被单下划线标出。
图10A描绘了编码单克隆抗体16H9的可变轻链区的核苷酸序列(SEQ ID NO59)。编码引导序列的核苷酸序列被双下划线标出，编码CDR序列的核苷酸序列被单下划线标出。
图10B描绘了编码单克隆抗体16H9的可变重链区的核苷酸序列(SEQ ID NO58)。编码引导序列的核苷酸序列被双下划线标出，编码CDR序列的核苷酸序列被单下划线标出。
图10C描绘了编码单克隆抗体16H9的可变轻链区的氨基酸序列(SEQ ID NO56)。引导序列被双下划线标出，CDR序列被单下划线标出。
图10D描绘了编码单克隆抗体16H9的可变重链区的氨基酸序列(SEQ ID NO55)。引导序列被双下划线标出，CDR序列被单下划线标出。
图11描绘了OVCAR-3上清液的蛋白质印迹分析的结果。抗体浓度和检测在下面章节6.7的工作实施例中给出。每个印迹中“3 RptPtn”指含有0772P 3-重复重组多肽的泳道；每个印迹中剩余泳道含有0VCAR-3条件培养基或对照培养基。试验的具体抗体在每个印迹的底部表示(即，M11、0C125、776.1和368.1抗体)。分子量标记在图的左边指示。
图12131I-标记的776.1的体内评价。用盐水、100μCi[131I]776.1IgG1、300μCi[131I]776.1 IgG1、或17μg未标记的776.1 IgG1(和300μCi[131I]776.1 IgG1组中相同的蛋白质剂量)处理具有OVCAR-3肿瘤的NCR nu/nu小鼠。处理为在第0天静脉内施用的单剂量。[131I]776.1的特异活性为15mCi/mg，具有51％标记后的免疫反应性。结果以每组共10只小鼠的平均肿瘤体积+/-SD显示。处理开始时的对于所有组的平均肿瘤大小为199mm3。
5.发明详述本发明部分基于如下认识产生脱落CA 125/0772P的事件也留下细胞缔合形式的CA 125/0772P氨基酸序列的胞外区域的一部分，即，也产生细胞缔合的CA 125/0772P。此处详细描述的本发明还部分基于如下认识可以产生抗体和结合抗原的抗体片段、融合多肽和类似物，它们相对于脱落CA 125/0772P优选结合细胞缔合的CA 125/0772P，并且这些抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽和类似物可用于例如，预防、处理、治疗或改善与CA 125/0772P相关的失调或者CA 125/0772P相关的失调的一种或多种症状，如细胞增殖失调，例如，癌症，例如，卵巢癌。
如通篇讨论的，本发明的抗体和结合抗原的抗体片段优选结合细胞缔合的CA 125/0772P。同样，本发明的融合多肽和类似物也优选结合细胞缔合的CA 125/0772P。此处还注意到，由于在CA 125/0772P脱落之前，细胞缔合的CA 125/0772P作为脱落前CA 125/0772P的部分存在，注意到本发明的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽和类似物也可以结合脱落前CA 125/0772P。从而，尽管不希望被任何特定机理或者其理论所束缚，注意到通过所施用的本发明的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物可以至少部分实现该章节中描述的方法，这些抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物除了与脱落后细胞缔合的CA 125/0772P结合，还与脱落前CA 125/0772P结合，或者不与脱落后细胞缔合的CA 125/0772P结合而只与脱落前CA125/0772P结合。
5.1本发明的抗体和结合抗原的抗体片段第一方面，本发明提供了分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其相对于脱落CA 125/0772P多肽优选结合细胞缔合的CA 125/0772P多肽。本发明的这些抗体和结合抗原的抗体片段可用于如此处描述的各种治疗、预防、诊断和纯化目的。
在一个实施方案中，本发明的抗体或结合抗原的抗体片段是结合SEQ ID NO1或SEQ ID NO2并且优选结合细胞缔合的CA 125/0772P的抗体或结合抗原的抗体片段。在一个具体的实施方案中，本发明的抗体或结合抗原的抗体片段是结合SEQ ID NO1或SEQ ID NO2中描述的非重复区。在另一个实施方案中，本发明的抗体或结合抗原的抗体片段结合SEQ ID NO1或SEQ ID NO2中描述的重复区。
在第一个实施方案中，ELISA竞争测定中，在比图1的肽(SEQ IDNO1)过量25倍(重量/重量)的脱落CA 125/0772P存在下，本发明的抗体或者结合抗原的抗体片段对图1的肽的结合被抑制小于约25％，小于约20％，小于约15％，小于约10％，或小于约5％。在另一实施方案中，流式细胞术竞争测定中，本发明的抗体或者结合抗原的抗体片段表现出IC50(通过阳性细胞百分数测量)为至少约0.05mg/ml，至少约0.1mg/ml，至少约0.25mg/ml，至少约0.5mg/ml，至少约0.75mg/ml，或至少约1.0mg/ml脱落CA 125/0772P。在第三个实施方案中，本发明的抗体或者结合抗原的抗体片段结合图1的肽，但是检测不到结合脱落CA 125/0772P多肽。满足这三个实施方案的任一个的抗体或结合抗原的抗体片段组成了相对于脱落CA 125/0772P多肽优选结合细胞缔合的CA 125/0772P多肽的抗体或结合抗原的抗体片段。
本发明的抗体和结合抗原的抗体片段包括结合图1的肽(SEQ IDNO1)的Kd小于约100nM，小于约10nM，小于约1nM，小于约100pM，或小于约10pM的抗体或结合抗原的抗体片段，Kd为通过BIAcore亲和测定法测量，该测定法在下文的章节6.4中描述。
本发明的抗体或结合抗原的抗体片段的优选实施方案包括在ADCC测定法中介导CA 125/0772P阳性肿瘤细胞裂解的抗体或结合抗原的抗体片段。这些抗体或结合抗原的抗体片段包括，例如，在ADCC测定中以50∶1效应物∶靶标比例在5μg/ml抗体或结合抗原的抗体片段的浓度下介导CA 125/0772P阳性肿瘤细胞至少约10％，至少约20％，至少约30％，至少约40％或至少约50％裂解；在ADCC测定中以25∶1效应物∶靶标比例在5μg/ml抗体或结合抗原的抗体片段的浓度下介导CA125/0772P阳性肿瘤细胞至少约10％，至少约20％，至少约30％，至少约40％或至少约50％裂解；在ADCC测定中以12.5∶1效应物∶靶标比例在5μg/ml抗体或结合抗原的抗体片段的浓度下介导CA 125/0772P阳性肿瘤细胞至少约10％，至少约20％，至少约30％，至少约40％或至少约50％裂解；在ADCC测定中以12.5∶1效应物∶靶标比例在0.5μg/ml抗体或结合抗原的抗体片段的浓度下介导CA 125/0772P阳性肿瘤细胞至少约10％，至少约20％，至少约30％，至少约40％或至少约50％裂解；或在ADCC测定中以12.5∶1效应物∶靶标比例在50ng/ml抗体或结合抗原的抗体片段的浓度下介导CA 125/0772P阳性肿瘤细胞至少约10％，至少约20％，至少约30％，至少约40％或至少约50％裂解抗体或结合抗原的抗体片段。
本发明的优选实施方案还包括在依赖补体的细胞毒性(CDC)测定中介导CA 125/0772P阳性肿瘤细胞裂解的抗体或结合抗原的抗体片段。这些抗体或结合抗原的抗体片段包括，例如，介导裂解的范围为5μg/ml下约15％裂解到0.1μg/ml下约95％裂解。
本发明的抗体或结合抗原的抗体片段的优选实施方案还包括抑制CA 125/0772P阳性肿瘤生长的抗体和结合抗原的抗体片段。例如，这些抗体或结合抗原的抗体片段为在如Treskes等人，Eur.J.Cancer.30A(2)183-187(1994)；Ahmad等人，Oncol.Res.11(6)273-280(1999)；和Kievit等人，Int.J.Radiat.Oncol.Biol.Phys.38(2)419-428(1997)中描述的动物模型和下面的章节6.8中描述的OVCAR-3异种移植肿瘤动物模型中抑制CA 125/0772P阳性肿瘤生长的抗体或结合抗原的抗体片段。
在一个具体实施方案中，本发明的抗体是单克隆抗体，其由杂交瘤4E7(ATCC记录号PTA-5109)、或由杂交瘤7A11(ATCC记录号PTA-5110)、或由杂交瘤7C6(ATCC记录号PTA-5111)、或由杂交瘤7F10(ATCC记录号PTA-5112)、或由杂交瘤7G10(ATCC记录号PTA-5245)、或由杂交瘤7H1(ATCC记录号PTA-5114)、或由杂交瘤8A1(ATCC记录号PTA-5115)、或由杂交瘤8B5(ATCC记录号PTA-5116)、或由杂交瘤8C3(ATCC记录号PTA-5246)、或由杂交瘤8E3(ATCC记录号PTA-5118)、或由杂交瘤8G9(ATCC记录号PTA-5119)、或由杂交瘤15C9(ATCC记录号PTA-5106)、或由杂交瘤16C7(ATCC记录号PTA-5107)、或由杂交瘤16H9(ATCC记录号PTA-5108)、或由杂交瘤117.1(ATCC记录号PTA-4567)、或由杂交瘤325.1(ATCC记录号PTA-5120)、或由杂交瘤368.1(ATCC记录号PTA-4568)、或由杂交瘤446.1(ATCC记录号PTA-5549)、或由杂交瘤501.1(ATCC记录号PTA-4569)、或由杂交瘤621.1(ATCC记录号PTA-5121)、或由杂交瘤633.1(ATCC记录号PTA-5122)、或由杂交瘤654.1(ATCC记录号PTA-5247)、或由杂交瘤725.1(ATCC记录号PTA-5124)、或由杂交瘤776.1(ATCC记录号PTA-4570)产生。
在另一具体实施方案中，本发明的抗体或结合抗原的抗体片段是与由杂交瘤4E7(ATCC记录号PTA-5109)、或由杂交瘤7A11(ATCC记录号PTA-5110)、或由杂交瘤7C6(ATCC记录号PTA-5111)、或由杂交瘤7F10(ATCC记录号PTA-5112)、或由杂交瘤7G10(ATCC记录号PTA-5245)、或由杂交瘤7H1(ATCC记录号PTA-5114)、或由杂交瘤8A1(ATCC记录号PTA-5115)、或由杂交瘤8B5(ATCC记录号PTA-5116)、或由杂交瘤8C3(ATCC记录号PTA-5246)、或由杂交瘤8E3(ATCC记录号PTA-5118)、或由杂交瘤8G9(ATCC记录号PTA-5119)、或由杂交瘤15C9(ATCC记录号PTA-5106)、或由杂交瘤16C7(ATCC记录号PTA-5107)、或由杂交瘤16H9(ATCC记录号PTA-5108)、或由杂交瘤117.1(ATCC记录号PTA-4567)、或由杂交瘤325.1(ATCC记录号PTA-5120)、或由杂交瘤368.1(ATCC记录号PTA-4568)、或由杂交瘤446.1(ATCC记录号PTA-5549)、或由杂交瘤501.1(ATCC记录号PTA-4569)、或由杂交瘤621.1(ATCC记录号PTA-5121)、或由杂交瘤633.1(ATCC记录号PTA-5122)、或由杂交瘤654.1(ATCC记录号PTA-5247)、或由杂交瘤725.1(ATCC记录号PTA-5124)、或由杂交瘤776.1(ATCC记录号PTA-4570)产生的单克隆抗体竞争结合细胞缔合的CA 125/0772P的抗体或结合抗原的抗体片段。如果本发明的抗体或结合抗原的抗体片段在ELISA交叉竞争测定和/或FACS交叉竞争测定中竞争结合，那么认为它们竞争结合。如果竞争者抗体或者抗原结合片段的IC50为高于抗体或结合抗原的抗体片段的浓度不超过约100倍的浓度，那么认为该抗体或结合抗原的抗体片段在ELISA交叉竞争测定和/或FACS交叉竞争测定中竞争结合。在优选实施方案中，竞争者抗体或者抗原结合片段的IC50为高于抗体或抗原结合片段的浓度的不超过约10倍的浓度。在更优选的实施方案中，竞争者抗体或者结合抗原的抗体片段的IC50为抗体或结合抗原的抗体片段的浓度不超过约等摩尔的浓度。
在另一具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有117.1轻链多肽可变区(“117.1L”)，该可变区含有SEQ ID No27(117.1L)中描述的氨基酸序列。在再一个具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有117.1重链多肽可变区(“117.1H”)，该可变区含有SEQ ID No28(117.1H)中描述的氨基酸序列。在再一个具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有包含SEQ ID No27(117.1L)中描述的氨基酸序列的轻链多肽可变区和包含SEQ ID No28(117.1H)中描述的氨基酸序列的重链多肽可变区。
在另一具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有368.1轻链多肽可变区(“368.1L”)，该可变区含有SEQ ID No29(368.1L)中描述的氨基酸序列。在再一个具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有368.1重链多肽可变区(“368.1H”)，该可变区含有SEQ ID No30(368.1H)中描述的氨基酸序列。在再一个具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有包含SEQ ID No29(368.1L)中描述的氨基酸序列的轻链多肽可变区和包含SEQ ID No30(368.1H)中描述的氨基酸序列的重链多肽可变区。
在另一具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有501.1轻链多肽可变区(“501.1L”)，该可变区含有SEQ ID No31(501.1L)中描述的氨基酸序列。在再一个具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有501.1重链多肽可变区(“501.1H”)，该可变区含有SEQ ID No32(501.1H)中描述的氨基酸序列。在再一个具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有包含SEQ ID No31(501.1L)中描述的氨基酸序列的轻链多肽可变区和包含SEQ ID No32(501.1H)中描述的氨基酸序列的重链多肽可变区。
在另一具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有776.1轻链多肽可变区(“776.1L”)，该可变区含有SEQ ID No33(776.1L)中描述的氨基酸序列。在再一个具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有776.1重链多肽可变区(“776.1H”)，该可变区含有SEQ ID No34(776.1H)中描述的氨基酸序列。在再一个具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有包含SEQ ID No33(776.1L)中描述的氨基酸序列的轻链多肽可变区和包含SEQ ID No34(776.1H)中描述的氨基酸序列的重链多肽可变区。
在另一具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有725.1轻链多肽可变区(“725.1L”)，该可变区含有SEQ ID No54中描述的氨基酸序列。在再一个具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有725.1重链多肽可变区(“725.1H”)，该可变区含有SEQ IDNo53中描述的氨基酸序列。在再一个具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有包含SEQ ID No54中描述的氨基酸序列的轻链多肽可变区和包含SEQ ID No53中描述的氨基酸序列的重链多肽可变区。
在另一具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有16H9轻链多肽可变区(“16H9L”)，该可变区含有SEQ ID No56中描述的氨基酸序列。在再一个具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有16H9重链多肽可变区(“16H9H”)，该可变区含有SEQ ID No55中描述的氨基酸序列。在再一个具体实施方案中，本发明的抗体或抗原结合片段含有包含SEQ ID No56中描述的氨基酸序列的轻链多肽可变区和包含SEQ ID No55中描述的氨基酸序列的重链多肽可变区。
在另一具体实施方案中，本发明的抗体或结合抗原的抗体片段含有轻链多肽可变区和重链多肽可变区，轻链多肽可变区含有SEQ IDNO27(117.1L)中描述的氨基酸序列，重链可变区含有SEQ IDNO30(368.1H)、SEQ ID NO32(501.1H)、SEQ ID NO34(776.1H)、SEQ ID NO53(725.1H)或SEQ ID NO55(16H9H)中描述的氨基酸序列。
在另一具体实施方案中，本发明的抗体或结合抗原的抗体片段含有轻链多肽可变区和重链多肽可变区，轻链多肽可变区含有SEQ IDNO29(368.1L)中描述的氨基酸序列，重链可变区含有SEQ IDNO28(117.1H)、SEQ ID NO32(501.1H)、SEQ ID NO34(776.1H)、SEQ ID NO53(725.1H)或SEQ ID NO55(16H9H)中描述的氨基酸序列。
在另一具体实施方案中，本发明的抗体或结合抗原的抗体片段含有轻链多肽可变区和重链多肽可变区，轻链多肽可变区含有SEQ IDNO31(501.1L)中描述的氨基酸序列，重链可变区含有SEQ IDNO28(117.1H)、SEQ ID NO30(368.1H)、SEQ ID NO34(776.1H)、SEQ ID NO53(725.1H)或SEQ ID NO55(16H9H)中描述的氨基酸序列。
在另一具体实施方案中，本发明的抗体或结合抗原的抗体片段含有轻链多肽可变区和重链多肽可变区，轻链多肽可变区含有SEQ IDNO33(776.1L)中描述的氨基酸序列，重链可变区含有SEQ IDNO28(117.1H)、SEQ ID NO30(368.1H)、SEQ ID NO32(501.1H)、SEQ ID NO53(725.1H)或SEQ ID NO55(16H9H)中描述的氨基酸序列。
在另一具体实施方案中，本发明的抗体或结合抗原的抗体片段含有轻链多肽可变区和重链多肽可变区，轻链多肽可变区含有SEQ IDNO54(725.1L)中描述的氨基酸序列，重链可变区含有SEQ ID NO30(368.1H)、SEQ ID NO32(501.1H)、SEQ ID NO34(776.1H)、SEQ ID NO53(725.1H)或SEQ ID NO55(16H9H)中描述的氨基酸序列。
在另一具体实施方案中，本发明的抗体或结合抗原的抗体片段含有轻链多肽可变区和重链多肽可变区，轻链多肽可变区含有SEQ IDNO33(16H9L)中描述的氨基酸序列，重链可变区含有SEQ ID NO30(368.1H)、SEQ ID NO32(501.1H)、SEQ ID NO34(776.1H)、SEQ ID NO53(725.1H)或SEQ ID NO55(16H9H)中描述的氨基酸序列。
在一个具体实施方案中，本发明的抗体或结合抗原的抗体片段含有可变轻链区，其含有表1、表2、表3、表4、表5和表6中描绘的任何一个、两个或三个VL CDRs。在另一个具体实施方案中，本发明的抗体或结合抗原的抗体片段含有可变重链区，其含有表1、表2、表3、表4、表5和表6中描绘的任何一个、两个或三个VH CDRs。在另一具体实施方案中，本发明的抗体或结合抗原的抗体片段含有可变轻链区和可变重链区，可变轻链区含有表1、表2、表3、表4、表5和表6中描绘的任何一个、两个或三个VL CDRs，可变重链区含有表1、表2、表3、表4、表5和表6中描绘的任何一个、两个或三个VH CDRs。
在优选实施方案中，本发明的抗体或结合抗原的抗体片段含有可变轻链区，该可变轻链区含有表1中描绘的任何两个或三个VL CDRs；或者表2中描绘的任何两个或三个VL CDRs；或者表3中描绘的任何两个或三个VL CDRs；或者表4中描绘的任何两个或三个VL CDRs；或者表5中描绘的任何两个或三个VL CDRs；或者表6中描绘的任何两个或三个VL CDRs。在另一优选实施方案中，本发明的抗体或结合抗原的抗体片段含有可变重链区，该可变重链区含有表1中描绘的任何两个或三个VH CDRs；或者表2中描绘的任何两个或三个VH CDRs；或者表3中描绘的任何两个或三个VH CDRs；或者表4中描绘的任何两个或三个VH CDRs；或者表5中描绘的任何两个或三个VH CDRs；或者表6中描绘的任何两个或三个VH CDRs。
在另一优选实施方案中，本发明的抗体或结合抗原的抗体片段含有可变轻链区和可变重链区，所述可变轻链区含有表1中描绘的任何两个或三个VL CDRs并且所述可变重链区含有表1中描绘的任何两个或三个VH CDRs；或者所述可变轻链区含有表2中描绘的任何两个或三个VL CDRs并且所述可变重链区含有表2中描绘的任何两个或三个VH CDRs；或者所述可变轻链区含有表3中描绘的任何两个或三个VLCDRs并且所述可变重链区含有表3中描绘的任何两个或三个VHCDRs；或者所述可变轻链区含有表4中描绘的任何两个或三个VL CDRs并且所述可变重链区含有表4中描绘的任何两个或三个VH CDRs；或者所述可变轻链区含有表5中描绘的任何两个或三个VL CDRs并且所述可变重链区含有表5中描绘的任何两个或三个VH CDRs；或者所述可变轻链区含有表6中描绘的任何两个或三个VL CDRs并且所述可变重链区含有表6中描绘的任何两个或三个VH CDRs。
例如，本发明的抗体或结合抗原的抗体片段可以含有包含表1、表2、表3、表4、表5和表6中描绘的任何一个VL1 CDRs的VL1结构域；本发明的抗体或结合抗原的抗体片段可以含有包含表1、表2、表3、表4、表5和表6中描绘的任何一个VL2 CDRs的VL2结构域；或者本发明的抗体或结合抗原的抗体片段可以含有包含表1、表2、表3、表4、表5和表6中描绘的任何一个VL3 CDRs的VL3结构域；本发明的抗体或结合抗原的抗体片段可以含有包含表1、表2、表3、表4、表5和表6中描绘的任何一个VL1 CDRs和VL2 CDRs的VL1结构域和VL2结构域；本发明的抗体或结合抗原的抗体片段可以含有包含表1、表2、表3、表4、表5和表6中描绘的任何一个VL1 CDRs和VL3CDRs的VL1结构域和VL3结构域；本发明的抗体或结合抗原的抗体片段可以含有包含表1、表2、表3、表4、表5和表6中描绘的任何一个VL2 CDRs和VL3 CDRs的VL2结构域和VL3结构域；本发明的抗体或结合抗原的抗体片段可以含有包含表1、表2、表3、表4、表5和表6中描绘的任何一个VL1 CDRs和VL2 CDRs的VL1结构域和VL2结构域；本发明的抗体或结合抗原的抗体片段可以含有包含表1、表2、表3、表4、表5和表6中描绘的任何一个VL1 CDRs和VL2 CDRs和VL3 CDRs的VL1结构域、VL2结构域和VL3结构域。
表1117.1的CDR序列CDR 序列SEQ ID NOVH1 GFSLSTPGMGVG3VH2 HIWWDDFKRDNPALKS4VH3 VDGNFLSWYFDV5VL1 RSSQSLVHSNGNTYLH6VL2 KVSNRFS 7VL3 SQTTHGPPT 8
表2368.1的CDR序列CDR 序列 SEQ ID NOVH1 GYSFTGFYMH 9VH2 YVSCYTGATTYTQKFKG10VH3 EGDYYSMDF11VL1 RSSQSLERTNGNTYLH 12VL2 KVSSRFS 13VL3 SQTTHGPPT14表3501.1的CDR序列CDR 序列 SEQ ID NOVH1 GYIFTDYGMN 15VH2 CINTYTGETIYSDDFRG16VH3 GNYRDAIDY17VL1 KASQDIKSYLS 18VL2 YATTLAD 19VL3 LHHDESPFT20表4776.1的CDR序列CDR 序列 SEQ ID NOVH1 GYTFTDYNIH 21VH2 YIYPYNGVSDYNQNF 22VH3 RWDFGSGYYFDY 23VL1 RASSSVIYMC 24VL2 GTSTLAS 25VL3 QQWSSNPFT26
表5725.1的CDR序列CDR 序列SEQ ID NOVH1 GYSFTNYGMN 60VH2 WINAYIGEPTYADDFKG 61VH3 GGNSLDF 62VL1 RASSSVSSIH 63VL2 ATSNLAS 64VL3 QQWSSNPFT 65表616H9的CDR序列CDR 序列SEQ ID NOVH1 GFNIKDTYMH 66VH2 RIDPANGNTKYDPKFQG 67VH3 SDIYYGNPGGFAY 68VL1 TASSSVSSSYLH69VL2 STSNLAS 70VL3 HQYHRSPFT 71本发明的抗体和结合抗原的抗体片段不是如Nustad等人TumorBiol.17196219(1996)中定义的类似OC125的抗体、类似M11的抗体或者OV197抗体，并且通常不与这些抗体竞争。在一个实施方案中，本发明的抗体和结合抗原的抗体片段不是如WO 03/076465中描述的OC125-衍生的或VK-8-衍生的单链抗体，并且通常不与这些抗体竞争。
本发明的抗体可以包括，但不限于多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、双特异抗体、三特异抗体、多特异抗体、单链抗体、二硫键连接的Fvs、单链Fvs或抗独特型抗体。在优选实施方案中，本发明的抗体是单克隆抗体，其相对于脱落CA 125/0772P多肽优选结合细胞缔合的CA 125/0772P多肽。多特异抗体可以对细胞缔合的CA 125/0772P的不同表位特异或者可以对细胞缔合的CA125/0772P表位和异源表位，如异源多肽或固体支持体材料都特异。见，例如，Tutt等人，J.Immunol.147(1)60-69(1991)；Kostelny等人，J.Immunol.148(5)1547-1553(1992)；和美国专利号4,474,893、4,714,681、4,925,648、5,573,920、5,601,819、5,798,229、5,855,866、5,869,620、5,897,861、5,959,084、6,106,833、6,248,332、6,258,358、6,303,755和6,420,140。
本发明的结合抗原的抗体片段可以包括，但不限于，Fab片段、F(ab’)2片段、含有可变轻链多肽(VL)的片段、含有可变重链多肽(VH)的片段，或含有互补决定区(CDR)的片段。
此外，本发明的抗体和结合抗原的抗体片段可以是任一免疫球蛋白类别。例如，本发明的抗体可以是IgG、IgM、IgE、IgD、IgA或IgY类抗体。本发明的抗体可以是任何同种型。例如，本发明的抗体可以是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1或IgA2重链同种型。本发明的抗体优选为IgG1同种型。
此外，本发明的抗体或抗原结合抗体片段可以，例如，含有插入天然发生的或者共有框架区，优选人框架区的一个或多个CDRs，例如，如此处描述的CDR序列。此外，本发明的抗体或抗原结合抗体片段可以，例如，含有插入天然发生的或者共有框架区，优选人框架区的内的可变轻链，例如，κ或λ轻链可变区，和/或如此处描述的可变重链。这些框架区是本领域中技术人员熟知的，例如，可以含有Cγ1恒定区或Cγ4恒定区。
优选结合细胞缔合的CA 125/0772P的抗体或结合抗原的抗体片段可以来自任一动物来源，包括鸟类，例如，鸡，和哺乳动物，包括非灵长类(例如，奶牛、猪、马、驴、山羊、骆驼、猫、狗、豚鼠、大鼠、小鼠、绵羊)和灵长类(例如，猴，如猕猴、大猩猩、黑猩猩，和人)。优选地，优选结合细胞缔合的CA 125/0772P的抗体或结合抗原的抗体片段是嵌合的、人或人源化抗体(包括单克隆抗体)或结合抗原的抗体片段。如此处所用的，“人”抗体或结合抗原的抗体片段包括具有人免疫球蛋白的氨基酸序列的抗体或结合抗原的抗体片段，并包括，例如，从人免疫球蛋白文库或者从表达人基因的小鼠分离的抗体或结合抗原的抗体片段。
另一方面，本发明提供了产生本发明的单克隆抗体的杂交瘤细胞。在一个实施方案中，本发明的杂交瘤是杂交瘤4E7(ATCC记录号PTA-5109)、杂交瘤7A11(ATCC记录号PTA-5110)、杂交瘤7C6(ATCC记录号PTA-5111)、杂交瘤7F10(ATCC记录号PTA-5112)、杂交瘤7G10(ATCC记录号PTA-5245)、杂交瘤7H1(ATCC记录号PTA-5114)、杂交瘤8A1(ATCC记录号PTA-5115)、杂交瘤8B5(ATCC记录号PTA-5116)、杂交瘤8C3(ATCC记录号PTA-5246)、杂交瘤8E3(ATCC记录号PTA-5118)、杂交瘤8G9(ATCC记录号PTA-5119)、杂交瘤15C9(ATCC记录号PTA-5106)、杂交瘤16C7(ATCC记录号PTA-5107)、杂交瘤16H9(ATCC记录号PTA-5108)、杂交瘤117.1(ATCC记录号PTA-4567)、杂交瘤325.1(ATCC记录号PTA-5120)、杂交瘤368.1(ATCC记录号PTA-4568)、杂交瘤446.1(ATCC记录号PTA-5549)、杂交瘤501.1(ATCC记录号PTA-4569)、杂交瘤621.1(ATCC记录号PTA-5121)、杂交瘤633.1(ATCC记录号PTA-5122)、杂交瘤654.1(ATCC记录号PTA-5247)、杂交瘤725.1(ATCC记录号PTA-5124)、或杂交瘤776.1(ATCC记录号PTA-4570)。
在另一实施方案中，本发明的杂交瘤是产生单克隆抗体的杂交瘤，所产生的单克隆抗体与杂交瘤4E7(ATCC记录号PTA-5109)、杂交瘤7A11(ATCC记录号PTA-5110)、杂交瘤7C6(ATCC记录号PTA-5111)、杂交瘤7F10(ATCC记录号PTA-5112)、杂交瘤7G10(ATCC记录号PTA-5245)、杂交瘤7H1(ATCC记录号PTA-5114)、杂交瘤8A1(ATCC记录号PTA-5115)、杂交瘤8B5(ATCC记录号PTA-5116)、杂交瘤8C3(ATCC记录号PTA-5246)、杂交瘤8E3(ATCC记录号PTA-5118)、杂交瘤8G9(ATCC记录号PTA-5119)、杂交瘤15C9(ATCC记录号PTA-5106)、杂交瘤16C7(ATCC记录号PTA-5107)、杂交瘤16H9(ATCC记录号PTA-5108)、杂交瘤117.1(ATCC记录号PTA-4567)、杂交瘤325.1(ATCC记录号PTA-5120)、杂交瘤368.1(ATCC记录号PTA-4568)、杂交瘤446.1(ATCC记录号PTA-5549)、杂交瘤501.1(ATCC记录号PTA-4569)、杂交瘤621.1(ATCC记录号PTA-5121)、杂交瘤633.1(ATCC记录号PTA-5122)、杂交瘤654.1(ATCC记录号PTA-5247)、杂交瘤725.1(ATCC记录号PTA-5124)、或杂交瘤776.1(ATCC记录号PTA-4570)产生的单克隆抗体竞争结合细胞缔合的CA 125/0772P。
5.2本发明的融合多肽在一个方面，本发明提供了融合多肽，该融合多肽含有与异源剂可操作地连接的本发明的抗体或结合抗原的抗体片段，即相对于脱落CA 125/0772P多肽优选结合细胞缔合CA 125/0772P多肽的抗体或结合抗原的抗体片段。本发明的融合多肽也优选结合细胞缔合CA125/0772P。在本发明融合多肽的一个实施方案中，抗体，或者结合抗原的抗体片段，和异源剂通过共价键，如肽键或二硫键可操作地连接。在本发明融合多肽的另一个实施方案中，抗体，或者结合抗原的抗体片段，和异源剂通过非共价键可操作地连接。异源剂可以连接到沿着抗体或结合抗原的抗体片段的相邻序列的氨基酸末端、羧基末端或者任一点。可操作的连接不必直接在抗体或结合抗原的抗体片段和异源剂之间，而是可以例如，通过连接体或间隔臂试剂或序列发生。
在本发明融合多肽的另一个实施方案中，异源剂含有氨基酸序列或放射性同位素。本发明融合多肽的异源剂含有细胞毒性剂或可检测的试剂。
本发明融合多肽可例如，用于产生本发明的抗体或结合抗原的抗体片段。备选地，融合多肽可用作此处描述的预防或治疗方法的部分。另外，本发明融合多肽可用作使用本领域中公知的方法的体内和体外免疫测定和纯化方法的部分。见，例如，PCT出版号WO 93/21232；美国专利号5,314,995、5,474,981、5,514,558、6,362,317和6,403,769；Nakamura等人，Immunol.Lett.39(1)91-99(1993)；Gillies等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.89(4)1428-1432(1992)；和Fell等人，J.Immunol.146(7)2446-2452(1991)，这些文献在此处被完整并入作为参考。
在异源剂是多肽的情况下，该异源多肽通常为至少约5个、至少约10个、至少约20个、至少约30个、至少约40个、至少约50个、至少约60个、至少约70个、至少约80个、至少约90个、或至少约100个氨基酸。
在一个实施方案中，本发明的融合多肽含有与异源剂可操作地连接的优选结合细胞缔合的CA 125/0772P的抗体或结合抗原的抗体片段，该异源剂提供了潜在治疗益处。例如，优选结合细胞缔合的CA125/0772P的抗体或结合抗原的抗体片段可以与治疗部分可操作地连接，该治疗部分为诸如细胞毒素，例如，细胞抑制剂或杀细胞剂、试剂，或放射性离子，例如，α-发射体。见，例如，美国专利号5,624,827、5,643,573、5,789,554、5,824,782、5,994,151、6,042,829、6,074,644、6,099,842、6,132,722、6,187,287、6,197,299和6,207,805。细胞毒素或细胞毒性剂包括对细胞生长或细胞存活力有害的任一试剂。细胞毒素或细胞毒性剂的实例包括，但不限于，紫杉醇、细胞松弛素B、短杆菌肽D、溴化乙锭、依米丁、丝裂霉素、依托泊苷、tenoposide、长春新碱、长春花碱、秋水仙碱、阿霉素、柔红霉素、二羟基炭疽菌素二酮、米托蒽醌、光神霉素、放线菌素D、去氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛尔、嘌呤霉素和它们的类似物或同系物。具有潜在治疗益处的其他试剂包括，但不限于，抗代谢物(例如，氨甲蝶呤、6-巯基嘌呤、6-硫代鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶decarbazine)、烷基化剂(例如，氮芥、thioepa苯丁酸氮芥、苯丙氨酸氮芥、亚硝脲氮芥(BSNU)和环己亚硝脲(CCNU)、cyclothosphamide、白消安、二溴甘露醇、链脲佐菌素、丝裂霉素C、和顺二氯二胺铂(II)(DDP)顺铂)、安慈那霉素(例如，柔红霉素(从前柔毛霉素)和阿霉素)，抗生素(例如，放线菌素D(从前放线菌素)、博来霉素、光神霉素、和氨茴霉素(AMC))，maytansinoids和抗有丝分裂剂(例如，长春新碱和长春花碱)和放射性物质，其包括但不限于，铋(213Bi)、碳(14C)、铬(51Cr)、钴(57Co)、氟(18F)、钆(153Gd，159Gd)、镓(68Ga、67Ga)、锗(68Ge)、钬(166Ho)、铟(115In、113In、112In、111In)、碘(131I、135I、123I、121I)、镧(140La)、镥(177Lu)、锰(54Mn)、钼(99Mo)、钯(103Pd)、磷(32P)、镨(142Pr)、钷(149Pm)、铼(186Re、188Re)、铑(105Rh)、钌(97Ru)、钐(153Sm)、钪(47Sc)、硒(75Se)、锶(85Sr)、硫(35S)、锝(99Tc)、铊(201Ti)、锡(113Sn、117Sn)、氚(3H)、氙(133Xe)、镱(169Yb、175Yb)、钇(90Y)、和锌(65Zn)。
此外，抗体或结合抗原的抗体片段可以缀合到治疗剂或药物部分。治疗剂或药物部分不被理解为限制为典型的化学治疗剂。例如，药物部分可以是具有所希望的生物学活性的蛋白质或多肽。这些蛋白质可以包括，例如，毒素，如红豆毒素、蓖麻毒蛋白A、假单胞菌外毒素(即，PE-40)、或白喉毒素、蓖麻毒蛋白、gelonin，和美洲商陆抗病毒蛋白；蛋白质，诸如肿瘤坏死因子，干扰素，其包括，但不限于α-干扰素(IFN-α)、β-干扰素(IFN-β)、神经生长因子(NGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、组织纤溶酶原激活物(TPA)、凋亡剂，例如，TNF-α、TNF-β、AIMI(国际公开号WO 97/33899中公开)、AIMII(见，国际公开号WO 97/34911)、Fas配体(Takahashi等人，J.Immunol.，61567-1574，1994)，和VEGF(PCT公开号WO 99/23105)、血栓形成剂或抗-血管生成剂(例如，血管抑素或内皮抑素)，或者生物学应答修饰物如，例如，淋巴因子(例如，白介素-1(“IL-1”)、白介素-2(“IL-2”)、白介素-6(“IL-6”)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(“GM-CSF”)、粒细胞集落刺激因子(“G-CSF”)，巨噬细胞集落刺激因子(“M-CSF”)、或者生长因子(例如，生长激素(“GH”))；蛋白酶或核酸酶。
本发明的融合多肽可备选地用于诊断，例如监视癌或肿瘤的发育或发展，作为临床试验方法的一部分，例如，用以确定给定治疗方案(诸如其中抗体偶联到可检测试剂)的效能。可检测试剂的实例包括各种酶、辅基、荧光物质、发光物质、生物发光物质、放射性物质、发射正电子的金属，和非-放射性顺磁金属离子。使用本领域中公知的技术可以将可检测的试剂直接地或者间接通过中间物(如，例如，本领域中公知的接头)偶联或缀合到抗体。见例如，美国专利号4,741,900、5,693,764、5,776,095、6,008,002、6,013,531、6,110,750、6,124,105、6,197,523和6,225,050。
可以缀合到本发明的抗体或结合抗原的抗体片段的适宜酶的非限制性实例包括β-内酰胺酶、β-半乳糖苷酶、磷酸酶，过氧化物酶，还原酶，酯酶，水解酶，异构酶和蛋白酶，比如辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶，β-半乳糖苷酶，或乙酰胆碱酯酶；适宜的辅基络合物的非限制性实例包括链霉抗生物素蛋白/生物素和抗生物素蛋白/生物素。适宜的荧光物质的非限制性实例包括伞形酮，荧光素，异硫氰酸荧光素，罗丹明，二氯三嗪胺荧光素，绿色荧光蛋白，红色荧光蛋白，丹磺酰氯或藻红蛋白；发光物质的非限制性实例包括鲁米诺。生物发光物质的非限制性实例包括荧光素酶，萤光素，和水母发光蛋白。适宜的放射性物质的实例包括125I、131I、111In、99mTc，或90Y。
本发明还包括优选结合细胞缔合的CA 125/0772P的抗体或其抗原结合片段，该抗体或其抗原结合片段与标记序列，如肽融合以方便纯化。例如，标记氨基酸序列可以是六-组氨酸肽，如pQE载体(QIAGEN，Inc.，9259Eton Avenue，Chatsworth，CA，91311)中提供的标记，许多标记可通过商业途径得到。如在Gentz等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.86(3)821-824(1989)中描述的，例如，组氨酸，例如，六-组氨酸，为融合蛋白的纯化提供了方便。用于纯化的其他肽标记包括，但不限于，血凝素“HA”标记，其相应于来自流感血凝素蛋白(Wilson等人，Cell.373767-778(1984))的一个表位，和“flag”标记(Brizzard等人，Biotechniques.16(4)730-735(1994))。优选地，在使用前，例如，用作治疗方法的部分之前，从融合多肽切除这些标记或标记序列。
优选结合细胞缔合的CA 125/0772P的抗体或其抗原结合片段可以还，例如，可操作地连接第二抗体以形成如美国专利号4,676,980中描述的抗体异缀合物(heteroconjugate)，该专利在此处被完整并入作为参考。
将部分与抗体可操作地连接的技术是熟知的，见，例如，Arnon等人，″癌症治疗中用于药物的免疫靶定的单克隆抗体″，MonoclonalAntibodies And Cancer Therapy，Reisfeld等人，编者，Alan R.Liss，Inc.(1985)243-256页；Hellstrom等人，″用于药物递送的抗体″，Controlled Drug Deli very(2nd Ed.)，Robinson等人，编者，Marcel Dekker，Inc.(1987)623-653页；Thorpe，″癌症治疗中细胞毒性剂的抗体载体综述″，Monoclonal Antibodies′84Biological And Clinical Applications，Pinchera等人，编者，EditriceKurtis(1985)475-506页；Order等人，″癌症治疗中放射性标记的抗体的分析、结果和治疗用途的将来前景″，MonoclonalAntibodies For Cancer Detection And Therapy，Baldwin等人，编者，Academic Press(1985)303-316页；Thorpe等人，Immunol.Rev.62119-158(1982)；和美国专利号5,639,879、5,744,119、5,773,001，和6,441,163。
将多肽融合或缀合到抗体的恒定区的方法是本领域中公知的。见，例如，美国专利号5,336,603、5,622,929、5,359,046、5,349,053、5,447,851、5,648,218、5,723,125、5,783,181、5,908,626、5,844,095、5,112,946、6,030,613、6,086,875、6,194,177、6,238,667、6,262,026、和6,277,375；EP 307,434；EP367,166；EP 394,827；PCT公开WO 91/06570；Ashkenazi等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.88(23)10535-10539(1991)；Traunecker等人，Nature.331(6151)84-86(1988)；Zheng等人，J.Immunol.154(10)5590-5600(1995)和Vie等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.89(23)11337-11341(1992)，这些文献被完整并入作为参考。
5.3本发明的类似物本发明的抗体、结合抗原的抗体片段，和融合多肽包括相对于脱落CA 125/0772P优选结合细胞缔合的CA 125/0772P的抗体、结合抗原的抗体片段，和融合多肽类似物。例如，本发明的类似物是由杂交瘤4E7(ATCC记录号PTA-5109)、杂交瘤7A11(ATCC记录号PTA-5110)、杂交瘤7C6(ATCC记录号PTA-5111)、杂交瘤7F10(ATCC记录号PTA-5112)、杂交瘤7G10(ATCC记录号PTA-5245)、杂交瘤7H1(ATCC记录号PTA-5114)、杂交瘤8A1(ATCC记录号PTA-5115)、杂交瘤8B5(ATCC记录号PTA-5116)、杂交瘤8C3(ATCC记录号PTA-5246)、杂交瘤8E3(ATCC记录号PTA-5118)、杂交瘤8G9(ATCC记录号PTA-5119)、杂交瘤15C9(ATCC记录号PTA-5106)、杂交瘤16C7(ATCC记录号PTA-5107)、杂交瘤16H9(ATCC记录号PTA-5108)、杂交瘤117.1(ATCC记录号PTA-4567)、杂交瘤325.1(ATCC记录号PTA-5120)、杂交瘤368.1(ATCC记录号PTA-4568)、杂交瘤446.1(ATCC记录号PTA-5549)、杂交瘤501.1(ATCC记录号PTA-4569)、杂交瘤621.1(ATCC记录号PTA-5121)、杂交瘤633.1(ATCC记录号PTA-5122)、杂交瘤654.1(ATCC记录号PTA-5247)、杂交瘤725.1(ATCC记录号PTA-5124)、或杂交瘤776.1(ATCC记录号PTA-4570)产生的单克隆抗体的类似物，或者该单克隆抗体的结合抗原的抗体片段的类似物。
这种类似物具有至少一种下面的结构特征(a)氨基酸序列，其优选至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、或至少约99％相同于修饰前抗体、结合抗原的抗体片段，或融合多肽；(b)被核苷酸序列编码，该核苷酸序列在严格条件下与编码修饰前抗体、结合抗原的抗体片段、或融合多肽的氨基酸序列的至少5个相邻氨基酸残基、至少约10个相邻氨基酸残基、至少约15个相邻氨基酸残基、至少约20个相邻氨基酸残基、至少约25个相邻氨基酸残基、至少约40个相邻氨基酸残基、至少约50个相邻氨基酸残基、至少约60个相邻氨基酸残基、至少约70个相邻氨基酸残基、至少约80个相邻氨基酸残基、至少约90个相邻氨基酸残基、至少约100个相邻氨基酸残基、至少约110个相邻氨基酸残基、或至少约120个相邻氨基酸残基的核苷酸序列的互补序列杂交；或(c)被核苷酸序列编码，该核苷酸序列至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、或至少约99％相同于编码修饰前抗体、结合抗原的抗体片段或融合多肽的核苷酸序列。
在特定实施方案中，优选结合细胞缔合的CA 125/0772P的抗体、结合抗原的抗体片段或融合多肽的类似物优选至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、或至少约99％相同于杂交瘤4E 7(ATCC记录号PTA-5109)、杂交瘤7A11(ATCC记录号PTA-5110)、杂交瘤7C6(ATCC记录号PTA-5111)、杂交瘤7F10(ATCC记录号PTA-5112)、杂交瘤7G10(ATCC记录号PTA-5245)、杂交瘤7H1(ATCC记录号PTA-5114)、杂交瘤8A1(ATCC记录号PTA-5115)、杂交瘤8B5(ATCC记录号PTA-5116)、杂交瘤8C3(ATCC记录号PTA-5246)、杂交瘤8E3(ATCC记录号PTA-5118)、杂交瘤8G9(ATCC记录号PTA-5119)、杂交瘤15C9(ATCC记录号PTA-5106)、杂交瘤16C7(ATCC记录号PTA-5107)、杂交瘤16H9(ATCC记录号PTA-5108)、杂交瘤117.1(ATCC记录号PTA-4567)、杂交瘤325.1(ATCC记录号PTA-5120)、杂交瘤368.1(ATCC记录号PTA-4568)、杂交瘤446.1(ATCC记录号PTA-5549)、杂交瘤501.1(ATCC记录号PTA-4569)、杂交瘤621.1(ATCC记录号PTA-5121)、杂交瘤633.1(ATCC记录号PTA-5122)、杂交瘤654.1(ATCC记录号PTA-5247)、杂交瘤725.1(ATCC记录号PTA-5124)、或杂交瘤776.1(ATCC记录号PTA-4570)产生的单克隆抗体的氨基酸序列。
优选地，相对于初始分子，类似物包括小于约25个、小于约20个、小于约15个、小于约10个、小于约5个、小于约4个、小于约3个、或小于约2个氨基酸置换、加入或缺失，或者它们的组合。在优选实施方案中，这些类似物具有在被预测为非必需的一个或多个氨基酸残基(即，对于抗体特异和优选结合细胞缔合的CA 125/0772P不关键的氨基酸残基)处的保守氨基酸置换。“保守氨基酸置换”是一种置换，其中氨基酸被一种氨基酸残基、模拟物或类似物代替，该氨基酸残基、模拟物或类似物的侧链具有与被代替的氨基酸残基的侧链相似的电荷或极性。本领域中已经定义了具有类似电荷的侧链的氨基酸残基家族。这些家族包括具有碱性侧链的氨基酸(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、具有酸性侧链的氨基酸(例如，天冬氨酸、谷氨酸)、具有不带电的极性侧链的氨基酸(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、具有非极性侧链的氨基酸(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、具有β分枝侧链的氨基酸(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和具有芳香侧链的氨基酸(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。
此外，本发明的类似物可以包括插入和/或者至少部分从相对于初始分子的缺失产生。插入和/或缺失可以具有任一身份或组合，只要上面提出的本发明类似物的结构标准被满足。
为了确定两个氨基酸序列或两个核酸序列的同一性百分数，为了最佳比较的目的(例如，可以在第一个氨基酸序列或核酸序列中导入缺口以与第二个氨基酸或核酸序列最佳比对)，将序列比对。然后比较相应氨基酸位置或核苷酸位置上的氨基酸残基或核苷酸。当第一个序列中的一个位置被占据的氨基酸残基或核苷酸与第二个序列中相应位置上的相同，那么这两个分子在该位置上是同一的。两个序列之间的百分数同一性是两个序列所共有的相同位置数的函数(即，％同一性＝相同重叠位置数/总位置数×100％)。在一个实施方案中，两个序列长度相同。
使用数学算法也可以确定两个序列之间的百分数同一性。用于两个序列比较的数学算法的一个优选的非限制性实例是Karlin等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.87(6)2264-2268(1990)的算法，其在Karlin等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.90(12)5873-5877(1993)中被改进。这种算法被并入到Altschul等人，J.Mol.Biol.215(3)403-410(1990)的BLASTN和BLASTX程序中。可以用BLASTN核苷酸程序参数设置，例如得分＝100，字长＝12实施BLAST核苷酸搜索，以得到与本发明的核酸分子同源的核酸序列。可以用BLASTX程序参数设置，例如得分＝50，字长＝3实施BLAST蛋白质搜索，以得到与本发明的蛋白质分子同源的氨基酸序列。为了得到用于比较目的的缺口比对，可以如Altschul等人，Nucleic Acids Res.25(17)3389-3402(1997)中描述的利用缺口BLAST。备选地，可以用PSI-BLAST实施迭代搜索，其检测分子(Id.)之间的远关系。当利用BLAST、缺口BLAST和PSI-BLAST程序时，可以使用各自程序(例如BLASTX和BLASTX的)的默认参数。用于序列比较的数学算法的另一优选的、非限制性实例是Myers和Miller(Myers等人，Comput.Appl.Biosci.4(1)11-17(1988))的算法。这种算法被并入到ALIGN程序(2.0版本)中，该程序是GCG序列比对软件包的一部分。当使用ALIGN程序比较氨基酸序列时，可以使用PAM120权重残基表、缺口长度罚分为12，缺口罚分为4。
可以用类似于上述的技术，允许或不允许缺口，确定两个序列之间的百分数同一性。在计算百分数同一性时，通常仅计算精确的匹配。
类似物还可以指已经被修饰并且仍然保持优选结合细胞缔合的CA125/0772P的本发明的抗体、结合抗原的抗体片段、或融合蛋白，其中通过将任一类型的分子粘附，例如共价粘附到相应的修饰前的抗体或结合抗原的抗体片段实现修饰。例如，并且不作为限制，可以通过糖基化、乙酰化、烷基化、酯化、脂质化、甲酰化、PEG化、磷酸化、酰胺化、通过保护/封闭基团衍生、蛋白水解切割、连接到细胞配体或其他蛋白质等修饰抗体、结合抗原的抗体片段、或融合多肽。此外，类似物可以含有一个或多个非典型氨基酸。非典型氨基酸包括但不限于常见氨基酸的D-异构体、α-氨基异丁酸、4-氨基丁酸(4-Abu)、2-氨基丁酸(2-Abu)、6-氨基己酸(Ahx)、2-氨基异丁酸(2-Aib)、3-氨基丙酸、鸟氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、羟脯氨酸、肌氨酸、瓜氨酸、磺丙氨酸、叔丁基甘氨酸、叔丁基丙氨酸、苯基甘氨酸、环己基丙氨酸、β-丙氨酸、氟-氨基酸、设计者(designer)氨基酸如β-甲基氨基酸、Cα-甲基氨基酸、Nα-甲基氨基酸，和一般的氨基酸类似物。
在一个实施方案中，本发明的类似物相对于相应修饰前的抗体、结合抗原的抗体片段或融合多肽表现出对细胞缔合的CA 125/0772P更强的亲和性。在另一特定实施方案中，优选结合细胞缔合的CA125/0772P的抗体、结合抗原的抗体片段或融合多肽相对于相应修饰前的抗体、结合抗原的抗体片段或融合多肽具有更长的血清半寿期。例如，类似物可以显示出在动物，优选哺乳动物，最优选人中的半寿期大于约1天、大于约2天、大于约3天、大于约7天、大于约10天、优选大于约15天、大于约25天、大于约30天、大于约35天、大于约40天、或大于约45天。
为了延长抗体、结合抗原的抗体片段或融合多肽在体内的血清循环，例如，可将惰性聚合物分子如高分子量聚乙二醇(PEG)附着到该抗体、结合抗原的抗体片段或融合多肽，该附着可以用或不用多功能连接体，通过PEG位点特异的缀合到抗体、结合抗原的抗体片段或融合多肽的氨基末端或羧基末端或者通过赖氨酸残基上存在的ε-氨基基团来实现。优选导致生物学活性最小损失的线性或分枝的聚合物衍生化。通过SDS-PAGE和质谱可以密切监视缀合程度以确保PEG分子与抗体的正确缀合。通过大小排阻或离子交换层析可以将未处理的PEG与抗体-、结合抗原的抗体片段-、和融合多肽-PEG缀合物分离。使用本领域中公知的方法，例如，通过此处描述的免疫测定法可以检验PEG-衍生的抗体、结合抗原的抗体片段和融合多肽的结合活性以及体内效能。
将一种或多种氨基酸修饰(即，置换、插入或缺失)导入IgG恒定结构域，或者其FcRn结合片段(优选Fc或铰链-Fc结构域片段)也可以产生体内半寿期增加的抗体或结合抗原的抗体片段。见，例如，PCT公布号WO 98/23289和美国专利号6,277,375，这些文献的每一篇都在此处被完整并入作为参考。
5.4.本发明的核酸分子在再一方面，本发明提供了分离的核酸分子，其含有编码本发明的抗体或结合抗原的抗体片段、融合多肽，或它们的类似物的核苷酸序列。
在一个实施方案中，本发明的核酸分子编码抗体或结合抗原的抗体片段、融合多肽，或它们的类似物，该抗体或结合抗原的抗体片段、融合多肽，或它们的类似物含有表1、表2、表3、表4、表5、或表6中所列的至少1个，优选2个或3个轻链CDRs。例如，本发明的核酸分子可以含有SEQ ID NO35、SEQ ID NO37、SEQ ID NO39、SEQ IDNO41、SEQ ID NO52、或SEQ ID NO59的核苷酸序列，该序列编码至少1个，优选2个或3个所述轻链CDRs。
在另一实施方案中，本发明的核酸分子编码含有表1、表2、表3、表4、表5、或表6中所列的至少1个，优选2个或3个重链CDRs的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽，或其类似物。例如，本发明的核酸分子可以含有SEQ ID NO36、SEQ ID NO38、SEQ ID NO40、SEQ ID NO42、SEQ ID NO57、或SEQ ID NO58的核苷酸序列，该序列编码至少1个，优选2个或3个所述重链CDRs。
在另一实施方案中，本发明的核酸分子编码含有图5C、图6C、图7C、图8C、图9C或图10C中所示的可变轻链多肽序列的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽，或其类似物。例如，本发明的核酸分子可以含有SEQ ID NO35(117.1)、SEQ ID NO37(368.1)、SEQ IDNO39(501.1)、SEQ ID NO41(776.1)、SEQ ID NO52(725.1)、或SEQ ID NO59(16H9)的核苷酸序列。
在另一实施方案中，本发明的核酸分子编码含有图5D、图6D、图7D、图8D、图9D或图10D中所示的可变重链多肽序列的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽，或其类似物。例如，本发明的核酸分子可以含有SEQ ID NO36(117.1)、SEQ ID NO38(368.1)、SEQ IDNO40(501.1)、SEQ ID NO42(776.1)、SEQ ID NO57(725.1)、或SEQ ID NO58(16H9)的核苷酸序列。
本发明的核酸分子包括为简并变体的核酸分子或者在严格条件下与具有编码本发明的抗体或结合抗原的抗体片段的核酸分子的互补序列杂交的核酸分子。例如，在一个实施方案中，本发明的核酸分子是在严格条件下与SEQ ID NO35、SEQ ID NO36、SEQ ID NO37、SEQID NO38、SEQ ID NO39、SEQ ID NO40、SEQ ID NO41、SEQ ID NO42、SEQ ID NO52、SEQ ID NO57、SEQ ID NO58、或SEQ ID NO59的互补序列杂交的核酸分子。优选地，本发明的这些杂交核酸分子编码本发明的抗体或结合抗原的抗体片段。
5.5本发明的药物组合物另一方面，本发明提供了含有本发明的抗体或结合抗原的抗体片段、融合多肽、类似物或核酸分子和药学上可接受的载体的药物组合物。
优选地，本发明的药物组合物包含本发明的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽、或类似物，显示出对于图1(SEQ ID NO1)的肽的Kd小于约100nM，小于约10nM，小于约1nM，小于约100pM，或小于约10pM，Kd为通过BIAcore亲和测定法测量，该测定法在下文的章节6.4中描述。备选地，本发明的药物组合物包含本发明的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽、或类似物或核酸分子，介导CA125/0772P-阳性肿瘤细胞的裂解。更优选地，本发明的药物组合物包含本发明的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽、或类似物或编码一种多肽的核酸分子，该多肽自身或者当缀合细胞毒性剂时抑制CA125/0772P-阳性肿瘤细胞的生长。
在一个实施方案中，本发明的抗体或结合抗原的抗体片段、或融合多肽或其类似物缀合到用于治疗细胞增殖性疾病的细胞毒性剂，如在上文章节5.2中引用的那些细胞毒性剂。在特定实施方案中，细胞毒性剂是放射性同位素。在另一特定实施方案中，放射性同位素选自125I、131I、111In、99mTc和90Y。
术语“载体”指稀释剂、佐剂(例如，弗氏佐剂(完全或不完全))、赋形剂、稳定剂、防腐剂、结合剂或用于本发明的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽、或类似物施用的载体。药用载体可以是无菌液体，如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的油，如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。当药物组合物被静脉内施用时，水是优选载体。盐溶液和水性右旋糖和甘油溶液也可以用作液体载体，尤其用于注射液。适宜的药物赋形剂包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、氯化钠、脱脂奶、甘油、丙二醇、水、乙醇等等。如果需要，该组合物还可以含有少量增湿剂或乳化剂，或者pH缓冲剂。这些组合物可以采取溶液剂、悬浮剂、乳剂、片剂、丸剂、胶囊剂、粉剂、缓释制剂等形式。口服制剂可以包括标准载体，如药用级甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁，等。适宜的药用载体的实例在RemingtonThe Science & Practiceof Pharmacy，第20版，Gennaro，编者，Lippincott(2000)中描述。
在优选实施方案中，药物组合物是无菌和适宜的形式以施用于受试者，优选动物受试者，更优选哺乳动物受试者，最优选人类受试者。
在特定实施方案中，可能希望将本发明的药物组合物局部施用于需要治疗的部位。这可以通过例如，并且不作为限制，通过注射灌输或通过植入物实现，所述植入物为有孔的、无孔的或明胶状物质，包括膜剂，如sialastic膜剂，或纤维。优选地，当施用药物组合物时，必须注意所用的材料不吸收一种或几种药物组合物中的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物。
在另一实施方案中，药物组合物可以以囊，尤其脂质体(见，例如，Langer，Science249(4976)1527-1533(1990)；Treat等人，Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer，Lopez-Berestein等人，编者，Liss(1989)353-365页；Lopez-Berestein等人，同前，317-327页；Lopez-Berestein等人，同前.，通常；和美国专利号RE35,338、5,662,931、5,759,519、5,879,713、6,027,726、6,099,857、6,132,764、6,245,427、6,284,375、6,350,466，和6,417,326)的形式存在和递送。
在再一个实施方案中，组合物可以以控释或缓释系统递送。在一个实施方案中，可以用泵实现控释或缓释(见，例如，Langer，Science249(4976)1527-1533(1990)；Sefton，Crit.Rev.Biomed.Eng.14(3)201-40(1987)；Buchwald等人，Surgery.884507-516(1980)；Saudek等人，N.Engl.J.Med.321(9)574-579(1989)；和美国专利号5,720,720和6,352,683)。在另一实施方案中，可以用聚合物材料实现本发明的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物或其片段的控释或缓释(见，例如，MedicalApplications of Controlled Release，Langer和Wise(编者)，CRCPres.，Boca Raton，Florida(1974)Medical Applications ofControlled Release，Langer等人，编者，CRC Press(1974)；Controlled DrugBioavailability，DrugProductDesignand Performance，Smolen等人，编者，Wiley(1984)；Ranger等人，J.Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.2361(1983)；Levy等人，Science.228(4696)190-192(1985)；During等人，Ann.Neurol.25(4)351-356(1989)；Howard等人，J.Neurosurg.711105-112(1989)；美国专利号5,128,326、5,679,377、5,863,985、5,912,015、5,916,597、5,989,463、5,994,492、6,011,011、6,020,004,、6,066,325、6,180,608、6,190,702、6,214,966、6,221,958、6,221,977、6,267,981、6,362,276、6,365,173、6,375,985、6,394,997、和6,399,103；和PCT公布号WO99/20253)。用于制剂缓释的聚合物的实例包括，但不限于，聚(2-羟乙基甲基丙烯酸酯)、聚(甲基甲基丙烯酸酯)、聚(丙烯酸)、聚(乙烯-共-乙酸乙烯)、聚(甲基丙烯酸)、聚乙交酯(PLG)、聚酸酐、聚(N-乙烯基吡咯烷酮)、聚(乙烯醇)、聚丙烯酰胺、聚(乙二醇)、聚丙交酯(PLA)、聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)、和聚原酸酯。
本发明的药物组合物被制备成与其计划的施用途径相容。施用途径的实例包括，但不限于，例如，肠胃外(例如，静脉内、皮内、肌内、皮下)、经口、鼻内、吸入、透皮(局部)、透粘膜，和直肠施用。在特定实施方案中，按照常规方法将组合物制备成适于静脉内、皮下、肌内、经口、鼻内或局部施用于人的药物组合物。在优选实施方案中，按照常规方法制备药物组合物以皮下施用于人。通常，用于静脉内施用的组合物是无菌等渗水性缓冲液中的溶液。必要时，该组合物还可以包括增溶剂和局部麻醉剂以减轻注射部位的疼痛。
如果本发明的药物组合物将局部施用，那么可以将组合物制备成例如，软膏剂、霜剂、透皮贴剂、洗剂、凝胶剂、洗发剂、喷雾剂、气溶胶、溶液剂、乳剂，或本领域中技术人员熟知的其他形式。见，例如，RemingtonThe Science & Practice of Pharmacy，第20版，Gennaro，编者，Lippincott(2000)。对于非喷雾的局部剂型，通常使用粘稠到半固体到固体形式，其含有与局部应用相容的载体或一种或多种赋形剂并且优选其动态粘滞度大于水。适宜的制剂包括，但不限于，溶液剂、悬浮剂、乳剂、霜剂、软膏剂、粉剂、擦剂、药膏，等等，如果希望，它们可以被消毒或与辅助剂(例如，防腐剂、稳定剂、增湿剂、缓冲剂，或盐)混合以影响各种性质，诸如，例如，渗透压。其他适宜的局部剂型包括可喷雾的气溶胶制剂，其中活性成分(优选与固态或液态惰性载体组合)与加压的挥发物(例如气态推进剂，如氟里昂)混合包装，或者包装在挤压瓶中。如果希望，也可以向药物组合物和剂型加入湿润剂或增湿剂。这些额外成分的实例是本领域中熟知的。
如果本发明的组合物将鼻内施用，那么该组合物可以配制成气溶胶形式、喷雾剂、合剂或者滴剂的形式。具体地，根据本发明使用的试剂可以以从受压的包装或雾化器得到的气溶胶喷雾的形式方便地递送，所用的适宜推进剂为例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他适宜的气体。对于受压的气溶胶，可通过提供阀门递送计量的量来确定剂量单位。用于吸入器或吹入器的例如胶囊或药筒可以被配制成含有该化合物和适宜的粉剂基质如乳糖或淀粉的粉剂混合物。
如果本发明的药物组合物将经口施用，那么可以将这些药物组合物配制成例如，片剂、胶囊剂、扁囊剂、gelcaps、溶液剂、悬浮剂等口服形式。通过常规方法用药学上可接受的赋形剂可以制备片剂或胶囊剂，这些赋形剂为比如结合剂(例如，预明胶化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或者羟丙基甲基纤维素)；填充剂(例如，乳糖、微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(例如，硬脂酸镁、滑石或硅石)；崩解剂(例如，马铃薯淀粉或淀粉乙醇酸钠)；或增湿剂(例如，十二烷基硫酸钠)。通过本领域中熟知的方法可以包衣片剂。液体制剂可以采取例如，溶液剂、糖浆剂或悬浮剂的形式，或者它们以干燥产品给出，在使用前用水或适宜的载体重构。通过常规方法用药学上可接受的添加剂可以制备这些液体制剂，这些添加剂为比如悬浮剂(例如，山梨醇糖浆剂、纤维素衍生物或氢化食用脂肪)；乳化剂(例如，卵磷脂或阿拉伯树胶)；非水性载体(例如，杏仁油、油酯、乙醇或分馏的植物油)；和防腐剂(例如，甲基或丙基-对-羟基苯甲酸盐或山梨酸)。适宜时，该制剂还可以含有缓冲盐、增味剂、着色剂和增甜剂。可适宜地配制用于经口施用的制剂以缓慢释放、控释或缓释预防或治疗剂。
可以配制本发明的药物组合物以用于通过注射，例如，通过弹丸注射或连续灌输肠胃外施用。用于注射的制剂可以以单位剂型给出，例如，以加入防腐剂的安瓿或多剂量容器给出。这些药物组合物可以采用如悬浮剂、溶液剂或油性或水性载体中的乳剂的形式，并且可以含有配制剂如悬浮、稳定和/或扩散剂。备选地，活性成分可以为粉剂形式，使用前将其用适宜的载体，例如，无菌无致热原的水重构。
本发明的药物组合物还可以配制成如栓剂或保留灌肠的直肠组合物，其例如含有常规栓剂基质如可可油或其他甘油酯。
除了前面描述的制剂，本发明的药物组合物还可以配制成长效制剂。可以通过植入(例如，皮下或肌内)或者通过肌内注射施用这种长效制剂。从而，例如，可以用适宜的聚合的或疏水物质(例如，作为可接受的油中的乳剂)或者离子交换树脂，或者作为难溶的衍生物，例如，作为难溶的盐配制这些药物组合物。
通常，本发明药物组合物的成分被单独提供或者混合在一起以单位剂型提供，例如，作为密封容器如安瓿或小袋中的冻干的粉剂或者无水浓缩物，该密封容器指出活性剂的量。当将通过灌输施用药物组合物时，可以将其用含有药物级水或盐的灌输瓶配制。当将通过注射施用药物组合物时，可以提供用于注射用无菌水或盐水的安瓿从而可以在施用前混合成分。
对于本发明的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽、和类似物，所施用的剂量通常为约5μg/kg到约10mg/kg，更优选地约20μg/kg到约5mg/kg受试者的体重，最优选地从约100μg/kg到约5mg/kg。在数周到数月内，所施用的剂量可以高达约6次治疗，这可由执行医生确定。通常，由于对外来多肽的免疫应答，在人体内人抗体具有比来自其他物种抗体更长的半寿期。从而，通�？梢愿图亮亢透偷钠德适┯萌丝固�。此外，通过修饰如，例如，脂质化增强抗体的吸收和组织渗透可以减小本发明的抗体或其片段的施用剂量和频率。
用于该制剂的精确剂量将取决于施用途径、病症的严重性，并且将根据开业医生的判断和每个患者的情况考虑所出版的临床研究来确定。可以从体外或动物模型试验系统的剂量-应答曲线外推有效剂量。
在一个实施方案中，本发明的药物组合物被包装在密闭容器如安瓿或sachette中，该容器指出抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽、或类似物的量。在另一个实施方案中，本发明的药物组合物作为密闭容器中的干燥无菌冻干粉剂或者无水浓缩物提供并且可以用例如，水或盐水重构到适宜浓度以施用于受试者。在再一个实施方案中，药物组合物以液体形式重悬在密闭容器中，该容器指出抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽、或类似物的量和浓度。
在再一个实施方案中，本发明的药物组合物以单位剂量在密闭容器中提供，单位剂量为至少约5mg，更优选至少约1mg，更优选至少约2mg、5mg、10mg、15mg、25mg、35mg、45mg、50mg、75mg、100mg、200mg、300mg、400mg、或500mg。当以液体形式提供时，药物组合物可以以至少约1mg/ml的浓度在这种密闭容器中提供。
本发明还提供了制备本发明的药物组合物的方法，该方法包括将本发明的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽、或类似物与药学上可接受的载体混合。
5.6本发明的产品在另一方面，本发明提供了包括包装材料和该包装材料中所含的本发明药物组合物的产品，所述药物组合物为适于施用于受试者，优选人的形式，或者为可以被稀释或重构后施用于受试者的形式。在一个实施方案中，该产品还含有印刷的使用说明和/或标签，其指导使用或施用药物组合物。该使用说明和/或标签可以，例如，提出预防或治疗CA 125/0772P相关的失调，如细胞增殖性失调，例如，癌症，例如，卵巢、子宫、乳腺或肺癌的一种或多种症状的给药方案。从而，使用说明和/或标签可以提供信息材料，其建议医生、技术人员或受试者怎样适当地防止、处理、治疗或改善CA 125/0772P相关的失调或所述失调的一种或多种症状，例如，细胞增殖性失调，诸如，癌症，例如，卵巢癌。
对于任一种药物产品，设计本发明产品的包装材料和容器以保护保存和运输期间产品的稳定性。更特别地，本发明提供了产品，其包含包装材料，如盒子、瓶子、管、小瓶、容器、喷雾器、吹入器、静脉内(i.v.)包、封包等；和所述包装材料含有的本发明药物组合物的至少一个单位剂型。
5.7鉴定优选结合细胞缔合的CA 125/0722P的抗体和结合抗原的抗体片段的方法本发明提供了有助于鉴定相对于脱落CA 125/0772P优选结合细胞缔合的CA 125/0772P的抗体或结合抗原的抗体片段的方法。在一个实施方案中，有助于鉴定优选结合细胞缔合的CA 125/0772P的抗体或结合抗原的抗体片段的方法包括在脱落CA 125/0772P存在下将抗体或结合抗原的抗体片段与含有细胞缔合的CA 125/0772P的肽在允许抗体或结合抗原的抗体片段结合所述含有细胞缔合的CA 125/0772P的肽或脱落CA 125/0772P的条件下接触。孵育后，除去脱落CA 125/0772P(有或没有抗体或结合抗原的抗体片段结合)和未结合的抗体或结合抗原的抗体片段，并测量与含有细胞缔合的CA 125/0772P的肽结合的抗体或结合抗原的抗体片段的量。如果该方法的抗体或结合抗原的抗体片段满足上面为“优选结合”提出的三个实施方案之一，那么所述抗体或者结合抗原的抗体片段相对于脱落CA 125/0772P多肽优选结合细胞缔合的CA 125/0772P多肽。在优选实施方案中，反应混合物中脱落CA 125/0772P与细胞缔合的CA 125/0772P的比例为约25∶1(wt/wt)。作为该方法的部分，细胞缔合的CA 125/0772P可以被固定在固体表面上。例如，可以以ELISA形式实施该方法。
在另一个实施方案中，本发明提供了有助于鉴定相对于脱落CA125/0772P优选结合细胞缔合的CA 125/0772P的抗体或结合抗原的抗体片段的方法，该方法包括在允许含有细胞缔合的CA 125/0772P与抗体或结合抗原的抗体片段结合的条件下，将抗体或结合抗原的抗体片段与含有细胞缔合的CA 125/0772P和脱落CA 125/0772P(例如约25倍过量(重量/重量))的肽接触，除去含有细胞缔合的CA 125/0772P的未结合的肽，测量被抗体或抗原结合片段结合的含有细胞缔合的CA125/0772P的肽的量，并将所测量的量与缺少脱落CA 125/0772P的这种量时抗体或结合抗原的抗体片段可以结合的含有细胞缔合的CA125/0772P的肽的量相比较。如果该方法的抗体或结合抗原的抗体片段满足上面为“优选结合”提出的三个实施方案之一，那么所述抗体或者结合抗原的抗体片段相对于脱落CA 125/0772P多肽优选结合细胞缔合的CA 125/0772P多肽。作为该方法的部分，抗体或结合抗原的抗体片段可以被固定在固体表面上，例如，可以以ELISA形式实施该方法。此处提供的教导联合本领域中技术人员熟知的标准技术可用于实施这些方法以鉴定本发明的抗体，或结合抗原的抗体片段。例如，可用于鉴定这些抗体或结合抗原的抗体片段的测定法包括下面章节6中和其小节中描述的ELISA竞争测定法。
在再一实施方案中，本发明提供了有助于鉴定优选结合细胞缔合的CA 125/0772P的抗体或结合抗原的抗体片段的方法，该方法包括在允许CA 125/0772P与抗体或结合抗原的抗体片段结合的条件下，将抗体或结合抗原的抗体片段与表达CA 125/0772P的细胞和一定量，例如至少约0.05mg/ml脱落CA 125/0772P接触，除去未结合的细胞，测量被抗体或结合抗原的抗体片段结合的表达CA125/0772P的细胞量，并将所测量与不存在这些量的脱落CA 125/0772P时表达结合抗体或结合抗原的抗体片段的CA 125/0772P的细胞的量相比较。如果该方法的抗体或结合抗原的抗体片段满足上面为“优选结合”提出的三个实施方案之一，那么所述抗体或者结合抗原的抗体片段相对于脱落CA125/0772P多肽优选结合细胞缔合的CA 125/0772P多肽。可以例如实施这种方法，如通过流式细胞术技术，包括例如，荧光激活细胞分类术(FACS)实施测量。此处提供的教导联合本领域中技术人员熟知的标准技术可用于实施这些方法以鉴定本发明的抗体，或结合抗原的抗体片段。例如，可用于鉴定这些抗体或结合抗原的抗体片段的测定法包括下面章节6中和其小节中描述的流式细胞术竞争测定法。
本发明的实施方案包括优选结合细胞缔合的CA 125/0772P并且对CA 125/0772P特异的抗体和结合抗原的抗体片段。利用例如，下面章节6中和其小节中描述的ELISA特异性测定法和流式细胞术竞争测定法可以常规地鉴定对CA 125/0772P特异的抗体。同样，本发明还提供了鉴定对CA 125/0772P特异并且还优选结合细胞缔合的CA 125/0772P的抗体和结合抗原的抗体片段。在一个该实施方案中，首先例如，通过ELISA特异性测定法和/或流式细胞术竞争测定法鉴定对CA125/0772P特异的抗体或结合抗原的抗体片段。然后例如，利用此处描述的方法之一检验该抗体或结合抗原的抗体片段优选结合细胞缔合的CA 125/0772P的能力。
本发明的实施方案还包括优选结合细胞缔合的CA 125/0772P并且结合图1的肽(SEQ ID NO1)的Kd小于约100nM，小于约10nM，小于约1nM，小于约100pM，或小于约10pM的抗体和结合抗原的抗体片段，Kd为通过BIAcore亲和测定法测量，该测定法在下文的章节6及其小节中描述。同样，本发明的实施方案还包括优选结合细胞缔合的CA 125/0772P并且以至少最小水平的亲和力结合细胞缔合的CA125/0772P的抗体和结合抗原的抗体片段。在一个该实施方案中，首先例如，通过此处描述的方法之一鉴定优选结合细胞缔合的CA125/0772P的抗体或结合抗原的抗体片段。然后利用，例如，此处描述的方法之一检验该抗体或结合抗原的抗体片段以Kd小于约100nM，小于约10nM，小于约1nM，小于约100pM，或小于约10pM结合细胞缔合的CA 125/0772P(或者含有细胞缔合的CA 125/0772P的肽)的能力。
本发明的实施方案还包括优选结合细胞缔合的CA 125/0772P并且表现出介导CA 125/0772P-阳性细胞，例如，肿瘤细胞裂解的能力的抗体和结合抗原的抗体片段。通过例如，实施下面的章节6和其小节中描述的ADCC和/或CDC测定法可以常规地鉴定这些抗体和结合抗原的抗体片段。同样，本发明提供了优选结合细胞缔合的CA 125/0772P并且表现出介导CA 125/0772P-阳性细胞裂解的能力的抗体或结合抗原的抗体片段的鉴定方法。利用，例如，此处描述的方法之一鉴定了优选结合细胞缔合的CA 125/0772P的抗体或结合抗原的抗体片段。然后，通过，例如，此处描述的方法ADCC和/或CDC测定检验该抗体或结合抗原的抗体片段介导CA 125/0772P-阳性细胞裂解的能力。
本发明的实施方案还包括优选结合CA 125/0772P并且表现出抑制或延缓CA 125/0772P-阳性肿瘤生长的能力的抗体和结合抗原的抗体片段。通过例如，以前描述的体内测定法，如Treskes等人，Eur.J.Cancer.30A(2)183-187(1994)；Ahmad等人，Oncol.Res.11(6)273-280(1999)；和Kievit等人，Int.J.Radiat.Onc.Biol.Phys.38(2)419-428(1997)中描述的测定法(这些文献都在此处被完整并入作为参考常规地鉴定这些抗体。同样，本发明提供了优选结合CA125/0772P并且表现出抑制CA 125/0772P-阳性细胞生长的能力的抗体或结合抗原的抗体片段的鉴定方法。在一个实施方案中，利用，例如，此处描述的方法之一鉴定了优选结合细胞缔合的CA 125/0772P的抗体或结合抗原的抗体片段。然后检验这些抗体或结合抗原的抗体片段抑制或延缓CA 125/0772P-阳性肿瘤细胞生长的能力，例如，在诸如上面引用中描述的体内系统之一的系统中检验抗体或结合抗原的抗体片段。
5.8防止、治疗、处理或改善CA 125/0772P相关失调的症状的方法本发明提供了预防、治疗或处理CA 125/0772P相关失调，或改善CA 125/0772P相关失调的症状的方法。例如，本发明提供了预防、治疗、处理或改善细胞增殖性失调的症状的方法，该包括对需要该预防、治疗、处理或改善的受试者施用一定量的抗体、结合抗原的抗体片段或类似物，所施用的量可有效实现受试者中所希望的结果。
如全文中所讨论的，本发明的抗体和结合抗原的抗体片段是优选结合细胞缔合的CA 125/0772P的抗体和结合抗原的抗体片段。同样，本发明的融合多肽和类似物也优选结合细胞缔合的CA 125/0772P。还在本文中提到的，由于CA 125/0772P脱落前细胞缔合的CA 125/0772P存在于CA 125/0772P或者是CA 125/0772P的一部分，注意本发明的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽和类似物也可以结合CA 125/0772P。从而，不希望被任何具体机理或其理论所束缚，注意到通过所施用的本发明的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物可以至少部分实现该章节中描述的方法，这些抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物除了与脱落后细胞缔合的CA 125/0772P的结合，还与脱落前CA 125/0772P的结合，或者不与脱落后细胞缔合的CA 125/0772P的结合而只与脱落前CA 125/0772P的结合。
在一个实施方案中，本发明的方法涉及癌症症状的预防、治疗、处理或改善。例如，本发明的这些方法涉及癌症或癌症相关失调的症状的预防、治疗、处理或改善，所述癌症包括但不限于癌、肉瘤、骨髓瘤、白血病、淋巴瘤和混合型癌症。在具体实施方案中，本发明的这些方法涉及预防、治疗、处理或改善卵巢癌、宫颈癌、子宫癌、乳腺癌或肺癌，或者其症状。在本发明的这些方法的优选实施方案中，这些方法涉及预防、治疗、处理或改善卵巢癌的症状。
在另一实施方案中，本发明提供了治疗CA 125/0772P相关失调，或者改善其症状的方法，该方法包括对需要该治疗或改善的受试者施用本发明的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物，所施用的量足够治疗细胞增殖性失调或改善其症状。CA 125/0772P相关失调可以是例如，细胞增殖性失调如癌症，并且可以包括，例如，卵巢、宫颈癌、子宫癌、乳腺癌或肺癌。优选实施这一方案，其中本发明的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物缀合到用于治疗细胞增殖性疾病的细胞毒性剂，如章节5.2中引用的那些细胞毒性剂。在具体实施方案中，细胞毒性剂是放射性同位素。在另一具体实施方案中，放射性同位素选自125I、131I、111In、99mTc和90Y。通过例如，还对受试者施用化学治疗剂，如紫杉醇或顺铂，或者放射治疗，这一实施方案抗原作为组合癌症疗法的一部分。
在再一实施方案中，本发明提供了预防CA 125/0772P相关失调或CA 125/0772P相关失调的症状的方法，该方法包括对需要该预防的受试者施用本发明的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物，所施用的量足够预防CA 125/0772P相关失调或者其症状。CA125/0772P相关失调可以是例如，细胞增殖性失调如癌症，并且可以包括，例如，卵巢、宫颈癌、子宫癌、乳腺癌或肺癌。
在额外实施方案中，CA 125/0772P相关失调可以是骨癌，例如，尤文氏肉瘤、骨肉瘤、横纹肌肉瘤，或其他软组织肉瘤。在另一实施方案中，CA 125/0772P相关失调是脑肿瘤，例如，少突胶质细胞瘤、室管膜细胞瘤、menengioma、淋巴瘤、施万细胞瘤，或成神经管细胞瘤。在另一实施方案中，CA 125/0772P相关失调是乳腺癌，例如，乳腺的原位导管癌。在另一实施方案中，CA 125/0772P相关失调是内分泌系统癌，例如，肾上腺癌、胰腺癌、甲状旁腺癌、垂体癌或甲状腺癌。在另一实施方案中，CA 125/0772P相关失调是胃肠癌，例如，肛门癌、直肠癌、食管癌、胆囊癌、胃癌、肝癌、胰腺癌或小肠癌。在另一实施方案中，CA 125/0772P相关失调是妇科癌，例如，宫颈癌、子宫内膜癌、子宫癌、输卵管癌、妊娠期滋养层疾病、绒膜瘤癌、卵巢癌、阴道癌或阴门癌。在另一实施方案中，CA 125/0772P相关失调是头和颈部癌，例如，喉、口咽、甲状旁腺或甲状腺癌。在另一实施方案中，CA 125/0772P相关失调是白血病癌，例如，急性淋巴细胞白血病、急性髓性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性粒性白血病、毛细胞白血�。蚬撬柙錾允У�。在另一实施方案中，CA 125/0772P相关失调是肺癌，例如，间皮瘤，非小细胞肺癌，或者小细胞肺癌。在另一实施方案中，CA 125/0772P相关失调是淋巴瘤，例如，AIDS-有关的淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、何杰金�。蚍呛谓芙鸩�。在另一实施方案中，CA 125/0772P相关失调是转移性癌症。在另一实施方案中，CA 125/0772P相关失调是骨髓瘤，例如，多发性骨髓瘤。在另一实施方案中，CA 125/0772P相关失调是儿科癌症，例如，脑瘤，尤文氏肉瘤、白血病(例如，急性淋巴细胞性白血病或急性髓性白血病)、肝癌、淋巴瘤(例如，何杰金氏淋巴瘤或非何杰金氏淋巴瘤)、成神经细胞瘤、成视网膜细胞瘤、肉瘤(例如，骨肉瘤、横纹肌肉瘤或其他的软组织肉瘤)，或维尔姆斯氏瘤。在另一实施方案中，CA 125/0772P相关失调是阴茎癌。在另一实施方案中，CA 125/0772P相关失调是前列腺癌。在另一实施方案中，CA 125/0772P相关失调是皮肤癌，例如，皮肤T细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿病、卡波西肉瘤，或黑素瘤。在另一实施方案中，CA 125/0772P相关失调是睾丸癌。在另一实施方案中，CA 125/0772P相关失调是甲状腺癌，例如，乳头状、卵泡状、髓性的和退行性的或未分化的甲状腺癌。在另一实施方案中，CA 125/0772P相关失调是尿道癌，例如，膀胱、肾，或尿道的癌。在另一实施方案中，CA 125/0772P相关失调是共济失调毛细血管扩张，起源未知的癌、Li-Fraumeni综合症，或胸腺瘤。
在本发明的这些方法的一个实施方案中，施用本发明的抗体或抗原结合片段。在另一实施方案中，施用单克隆抗体或结合抗原的单克隆抗体片段。通常，所施用的抗体或结合抗原的抗体片段的剂量浓度为约5μg/kg到约10mg/kg，更优选约20μg/kg到约5mg/kg，最优选约100μg/kg到约5mg/kg受试者的体重。
通常，通过施用本发明的药物组合物可以利用此处描述的方法。通过例如用于确定细胞培养物或实验动物中LD50(50％群体的致死剂量)和ED50(50％群体中治疗有效量)的标准药学方法可以确定作为本发明一部分实施的根据本发明特定方案施用的组合物的毒性和/或效能。毒性和治疗效果之间的剂量比是治疗指标并且其可表达为比值LD50/ED50。优选显示出大的治疗指标的组合物。尽管可以施用显示出毒副作用的组合物，但是优选所用的递送系统将这种组合物靶向受侵袭的组织，例如，卵巢组织，从而减小副作用。
从细胞培养测定法和动物研究得到的数据可用于配制用于人的组合物的一系列剂量。这些组合物的剂量优选位于循环浓度范围内，该浓度范围包括几乎没有或没有毒性的ED50。可以根据所用的剂型和所采用的施用途径在该范围内改变剂量。对于用于本发明方法的任一试剂，可最初从细胞培养测定估计治疗有效量。可以配制动物模型中的剂量以实现循环血浆浓度范围，其包括如在细胞培养物测定，例如，增殖测定中确定的IC50(即，实现一种或多种症状的半-最大抑制的化合物的浓度)。可以利用该信息更准确地确定在人中有用的剂量。通过例如，高效液相层析可以测量血浆中的水平。
各种递送系统是公知的并且可用于施用本发明的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物，例如，在脂质体中封装(见例如，Langer，Science 249(4976)1527-1533(1990)；Treat等人，Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer，Lopez-Berestein等人，编者，Liss(1989)353-365页)、微粒、微胶囊，或能够表达本发明的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物的重组细胞。
施用本发明的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物，或含有本发明的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物的药物组合物的方法包括，但不限于，肠胃外(例如，皮内、肌内、腹膜内、静脉内和皮下施用)、硬膜外、或粘膜(例如，鼻内或经口)施用途径。见，例如，美国专利号5,679,377、5,702,727、5,783,193、5,817,624、6,074,689、6,156,731、6,174,529、6,187,803、6,331,175和6,387,406。在特定实施方案中，肌内、静脉内或皮下施用本发明的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物或其药物组合物。通过任一方便的途径，例如，通过灌输或大丸剂注射，或通过上皮或粘膜皮肤衬(例如，口粘膜、直肠或肠粘膜等)可以施用这些组合物，或者这些组合物可以与其他生物活性剂一起施用。施用可以是全身的或局部的。此外，还可以利用肺部施用，例如通过使用吸入器或雾化器并与气溶胶剂配制来实现。见，例如，美国专利号RE37,525、5,290,540、5,855,913、5,874,064、5,934,272、5,985,309、5,985,320、6,019,968、6,165,463、6,358,530和6,402,733和PCT公布号WO 99/66903，这些文献的每一篇都被完整并入作为参考。在一个实施方案中，用Alkermes AIRTM肺部药物递送技术(Alkermes，Inc.，Cambridge，MA)可以施用抗体、融合蛋白、缀合分子，或药物组合物。
在优选实施方案中，按照常规方法配制药物组合物从而其适于静脉内施用于人。通常，用于静脉内施用的药物组合物是无菌等渗水性缓冲液中的溶液。必要时，该组合物还可以包括增溶剂和局部麻醉剂以减轻注射部位的疼痛。
在另一特定实施方案中，可能希望将本发明的药物组合物局部施用于需要治疗的部位。这可以通过局部灌输、注射或通过植入物实现，所述植入物为有孔的、无孔的或明胶状物质。
在再一个实施方案中，该方法作为联合疗法，例如，联合癌症疗法的一部分实施。这种联合癌症疗法可包括，例如，施用化学治疗剂，例如，顺铂、异环磷酰胺、紫杉醇、紫杉烷、拓扑异构酶I抑制剂(CPT-11、拓扑替康、9-AC，或GG-211)、吉西他滨、丝裂霉素、依米丁、依托泊苷、tenopside、长春新碱、长春花碱、秋水仙素、阿霉素、柔红霉素、二羟基炭疽菌素二酮、米托蒽醌、光神霉素、长春烯碱、奥沙利铂、5-氟尿嘧啶(5-fla)、甲酰四氢叶酸、长春烯碱、temodal，或红豆杉醇。这些联合癌症疗法可备选或额外地包括，但不限于，放射疗法。
术语“联合疗法”或“联合癌症疗法”的使用限制试剂或治疗施用于患有CA 125/0772P相关失调的受试者的顺序。例如，联合疗法的试剂可以同时、顺序地以任何顺序或循环地施用于受试者。在优选实施方案中，联合疗法的两种或多种组分同时施用于受试者。术语“同时”不限制于两种或多种试剂在精确地相同时间施用，而是指试剂以一定顺序和一定时间间隔内施用于受试者使得试剂可以一起作用以提供比它们按其他方式施用增加的益处。
作为联合疗法方法的部分施用的试剂可以，例如，在相同药物组合物中被施用于受试者。备选地，通过相同或不同施用途径可以将联合疗法的试剂以单独的药物组合物施用于受试者。
5.9诊断CA 125/0772P相关失调的方法另一方面，本发明还提供了诊断CA 125/0772P相关的失调或这种失调的诱因的方法。本发明的标记抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽和类似物可用于诊断目的以检测、诊断或监视CA 125/0772P相关的失调，如癌症。
使用如此处描述的典型免疫组织学方法或者本领域中技术人员公知的方法(见，例如，alkanen等人，J.Cell.Biol.101(3)976-984(1985)；Jalkanen等人，J.Cell.Biol.105(6 Pt 2)3087-3096(1987))，本发明的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽和类似物可以测定生物样品中CA 125/0772P相关的失调。用于检测蛋白质基因表达的其他基于抗体的方法包括免疫测定法，如酶联免疫吸附测定法(ELISA)和放射免疫测定法(RIA)。适宜的抗体测定标记是本领域中公知的并且包括，例如，酶标记，如碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、放射性同位素，如碘(125I、131I)、碳(14C)、硫(35S)、氚(3H)、铟(111In)，和锝(99mTc)；发光标记，如鲁米诺；和荧光标记，如荧光素和罗丹明。
本发明的一方面是检测和诊断人中癌症，尤其卵巢癌的易患性。在一个实施方案中，诊断包括a)对受试者施用(例如，肠胃外、皮下或腹膜内)一定量的对诊断有效的标记抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物，其优选结合细胞缔合的CA 125/0772P，和b)检测受试者中该标记抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物以便做出所述诊断。按照该实施方案，抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽和类似物优选被成像部分标记，使用本领域中技术人员公知的成像系统可以检测该成像部分。通过各种方法可以确定背景水平，这些方法包括将所检测的标记分子的量与以前对具体系统所确定的标准值比较。
使用用于体内扫描的本领域中公知的方法可以检测受试者中标记分子的存在。这些方法取决于所用的标记类型。技术人员将能够确定检测特定标记的适宜方法。可用于本发明的诊断方法的方法包括，但不限于，计算层析X射线照相术(CT)、整体扫描比如正电子发射断层显象(PET)、磁共振成象(MRI)，和声图描记法。
在特定实施方案中，该分子被放射性同位素标记并使用放射响应手术设备(见，例如，美国专利号5,441,050)检测受试者中的该分子。在另一实施方案中，该分子被荧光化合物标记并使用荧光响应扫描设备检测受试者中的该分子。在另一实施方案中，该分子被正电子发射金属标记并使用PET检测受试者中的该分子。在另一实施方案中，该分子被顺磁性标记物标记并使用MRI检测受试者中的该分子。
本领域中将理解受试者的大小和重量以及所用的成像系统的类型将决定产生有用的诊断图像所需的成像部分的类型和量。对于用于人受试者的含有99mTc的放射性同位素部分，注射的放射性的量将通常为约5到20毫居里。然后标记的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物优选在显示细胞缔合的CA 125/0772P多肽的细胞部位积累。在Burchiel等人“放射标记抗体和它们的片段的免疫药物动力学”，Tumor ImagingThe Radiochemical Detection of Cancer，Burchiel等人，编者，Masson Publishing Inc.(1982)第13章中描述了体内肿瘤成像。
根据一些变量(包括所用的标记类型和施用模式)，施用后允许标记分子优选浓缩在受试者部位和未结合的标记分子从背景水平清除的时间间隔可以为约6到48小时或约6到24小时或约6到12小时。在另一实施方案中，施用后的时间间隔为约5到20天或约5到10天。
在一个实施方案中，通过重复成像方法可以在一些时间点实施对CA 125/0772P相关失调，例如，癌症的监视，时间点可以为例如，最初诊断后1个月、最初诊断后6个月、和/或最初诊断后1年，等等。
本发明还包括诊断或监视癌症的方法，其包括对需要这种诊断或监视的受试者施用一定量的优选结合细胞缔合的CA 125/0772P的标记的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物，所施用的量足够检测，并检测结合到受试者的器官或组织的标记的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物。此外，本发明提供了检测生物样品中细胞缔合的CA 125/0772P的方法，该方法包括将样品接触优选结合细胞缔合的CA 125/0772P的标记的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物，并检测结合到样品的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物。
在这些实施方案中，可以将结合到细胞缔合的CA 125/0772P的标记分子的量与标准量或对照，或者在更早时间点在样品中以前检测的量相比较。
5.10产生抗体的方法通过本领域公知的任一种合成抗体的方法，例如，通过杂交瘤技术、化学合成或优选地，通过重组表达技术可以产生本发明的抗体。
通过本领域中熟知的各种方法可以产生多克隆抗体。例如，可将含有细胞缔合的CA 125/0772P多肽的人CA 125/0772P施用于各种宿主动物，包括但不限于，兔、小鼠、大鼠和马，以诱导产生含有对人抗原特异的多克隆抗体的血清。根据各种宿主的种类，可以使用各种佐剂以增加免疫应答，这些佐剂包括，但不限于弗氏佐剂(完全或不完全)、矿物凝胶如氢氧化铝，表面活性物质如溶血卵磷脂、复合多元醇、聚阴离子、肽、油乳剂、匙孔血蓝蛋白、二硝基酚，并且可能有用的人佐剂如BCG(卡介苗)和coryhebacterium parvum。这些佐剂也是本领域中熟知的。
利用本领域中公知的各种技术可以制备单克隆抗体，这些技术包括使用杂交瘤、重组体、和噬菌体展示技术，或者它们的组合。例如，使用杂交瘤技术可以制备单克隆抗体，这些杂交瘤技术包括本领域中公知的并且在Harlow等人，AntibodiesA Laboratory Manual，第二版，Cold Spring Harbor Laboratory Press(1988)；或Hammering等人，Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas，Elsevier(1981)563-681页中教导的那些杂交瘤技术，这些文献在此处被完整并入作为参考。
使用杂交瘤技术产生和筛选特异抗体的方法是常规的和本领域中熟知的。简言之，在一个实施方案中，可以用CA 125/0772P多肽，例如，细胞缔合的CA 125/0772P多肽免疫小鼠，并且一旦在小鼠血清中检测到免疫应答，例如，对抗原特异的抗体，那么收获小鼠脾脏并分离脾细胞。然后通过熟知的技术将脾细胞与任一适宜的骨髓瘤细胞，例如，来自可从ATCC得到的细胞系SP2/0-Ag14(ATCC记录号CRL-1581)的细胞融合。通过有限稀释选择和克隆杂交瘤。然后通过本领域中公知的方法测定杂交瘤以得到分泌能够结合细胞缔合的CA 125/0772P的抗体。通过用阳性杂交瘤克隆注射小鼠可以产生通�：懈咚娇固宓母顾�。
因此，本发明提供了产生单克隆抗体的方法以及通过该方法产生的抗体，该方法包括培养分泌本发明抗体的杂交瘤细胞其中，优选地，通过将从用CA 125/0772P多肽，例如细胞缔合的CA 125/0772P多肽免疫的小鼠分离的脾细胞与骨髓瘤细胞融合产生杂交瘤，然后从所得融合物筛选杂交瘤以得到分泌能够结合CA 125/0772P多肽，例如细胞缔合的CA 125/0772P多肽的抗体的杂交瘤克隆。
通过本领域技术人员公知的任一种技术可以产生特异识别特定表位的抗体片段。例如，用酶如木瓜蛋白酶(以产生Fab片段)或胃蛋白酶(以产生F(ab’)2片段)对免疫球蛋白分子实施蛋白水解切割可以产生Fab和F(ab’)2片段。F(ab’)2片段含有可变区、轻链恒定区和重链的CH1结构域。此外，用本领域中公知的各种噬菌体展示方法也可以产生本发明的抗体。
在噬菌体展示方法中，功能抗体结构域被展示在噬菌体颗粒表面上，该噬菌体颗粒携带编码功能抗体结构域的多核苷酸序列。用抗原，例如，使用标记抗原或者结合或被捕获到固体表面或珠子的抗原可以选择或鉴定表达结合CA 125/0772P多肽抗原的抗原结合结构域的噬菌体。可被修改从而可以用于制备或鉴定本发明抗体的噬菌体展示方法的实例包括在Brinkmann等人，J.Immunol.Methods.182(1)41-50(1995)；Ames等人，J.Immunol.Methods.184(2)177-186(1995)；Kettleborough等人，Eur.J.Immunol.24(4)952-958(1994)；Persic等人，Gene.187(1)9-18(1997)；Burton等人，Adv.Immunol.57191-280(1994)；PCT公布号WO 91/10737和WO 95/15982；EP 853,661；和美国专利号5,223,409、5,403,484、5,427,908、5,516,637、5,571,698、5,580,717、5,658,727、5,667,988、5,698,426、5,712,089、5,733,743、5,780,225、5,789,208、5,821,047、5,885,793、5,969,108、6,096,551、6,140,470、6,376,170、6,265,150和6,335,163中公开的那些方法，这些文献在此处被完整并入作为参考。
如在上面参考文献中描述的，噬菌体选择后，可以从噬菌体分离抗体编码区并将其用于产生完整抗体，包括人抗体，或者希望的抗原结合片段，并在宿主中表达，这些宿主包括哺乳动物细胞、昆虫细胞、植物细胞、酵母和细菌，例如，如下面描述的。使用本领域中公知的方法如美国专利号5,595,898、5,698,417和6,204,023；Mullinax等人，Bio Techniques 12(6)864-869(1992)；Sawai等人，Am.J.Reprod.Immunol.34(1)26-34(1995)；和Better等人Science.240(4855)1041-1043(1988)(所述参考文献被完整并入作为参考)中公开的方法也可以重组产生Fab、Fab’和F(ab’)2片段。
为了产生完整抗体，可以用PCR引物(包括VH或VL核苷酸序列、限制性位点，和保护该限制性位点的侧翼序列)扩增scFv克隆中的VH或VL序列。利用本领域中技术人员公知的克隆技术，可以将PCR扩增的VH结构域克隆到表达VH恒定区，并且PCR扩增的VL结构域可被克隆到表达VL恒定区，例如人κ或λ恒定区的载体中。优选地，表达VH或VL结构域的载体可以含有EF-1α启动子、分泌信号、可变结构域的克隆位点、恒定结构域，和选择标记如新霉素。也可以将VH和VL结构域克隆到表达必要恒定区的载体。使用本领域中技术人员公知的技术，然后将重链表达载体和轻链表达载体共转染到细胞系以产生稳定的或者暂时的细胞系，该细胞系表达全长抗体，例如，IgG。
对于一些用途，包括抗体在人和体内检测测定中的用途，优选使用嵌合的、人源化的或完全人的抗体。嵌合抗体中，该抗体的不同部分来自不同物种的免疫球蛋白。例如，并且不作为限制，嵌合抗体可以具有来自鼠抗体的轻和/或重链可变区和来自人免疫球蛋白的轻和/或重链恒定区。产生重组嵌合抗体的方法是本领域中公知的。见，例如，Morrison，Science.229(4719)1202-1207(1985)；Oi等人，BioTechniques.4(3)214-221(1986)；Gillies等人，J.Enmunol.Methods.125(1-2)191-202(1989)；和美国专利号4,816,397、4,816,567和5,807,715。这些文献的每一篇都被完整并入作为参考。
人源化抗体是一种抗体，其含有人框架，包括人恒定区，和来自非人物种，例如，小鼠种类的抗体的一个或多个CDRs。使用本领域中公知的各种技术可以常规地产生这些人源化抗体，这些技术包括，例如，CDR-嫁接(EP 239,400；PCT公开号WO 91/09967；和美国专利号5,225,539、5,530,101、5,585,089、5,766,886、5,859,205、6,180,370和6,407,213)、镶面或改面(美国专利号5,639,641；EP519,596；Padlan，Padlan，Mol.Immunol.28(4/5)489-498(1991)；Studnicka等人，Protein Eng.7(6)805-814(1994)；和Roguska等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.91(3)969-973(1994))、链改组(美国专利号5,565,332和6,455,253)。在优选实施方案中，人源化抗体含有一种CDR和人框架区，该CDR具有表1、表2、表3、表4、表5、或表6中所列的CDRs的任一种的氨基酸序列。通常，框架区中的框架残基将被来自CDR供体抗体的相应残基置换以改变，优选提高抗原结合。通过本领域中熟知的方法鉴定这些框架置换，例如，通过CDR和框架残基的相互作用建模鉴定对抗原结合重要的框架残基，通过序列比较鉴定特定位置的不寻�？蚣懿谢�。见，例如，美国专利号5,585,089、5,770,196和5,869,619；和Riechmann等人，Nature.332(6162)323-327(1988)，它们在此处被完整并入作为参考。
完整或完全人抗体是人受试者的治疗性治疗所希望的。通过本领域中公知的各种方法，使用从人免疫球蛋白序列得到的抗体文库，可以制备人抗体，这些方法包括噬菌体展示方法。还见美国专利号4,444,887、4,716,111、5,916,771、5,939,598、6,075,181、6,114,598、6,150,584、6,162,963、6,235,883；PCT公开WO 98/46645；和EP 463,151；它们在此处被完整并入作为参考。
也可以用转基因小鼠产生人抗体，该转基因小鼠不能表达功能内源免疫球蛋白，但是能够表达人免疫球蛋白基因。例如，可以将人重链和轻链免疫球蛋白基因复合体随机或通过同源重组导入小鼠胚胎干细胞。备选地，除了人重链和轻链基因，还可将人可变区、恒定区，和多样性区导入小鼠胚胎干细胞中。通过同源重组导入人免疫球蛋白基因座可以使小鼠重链和轻链免疫球蛋白基因单独或同时失去功能。具体地，JH区的纯合缺失防止内源抗体产生。将修饰的胚胎干细胞扩大并微注射到胚泡中以产生嵌合小鼠。然后繁殖嵌合小鼠以产生纯合后代，该纯合后代表达人抗体。用所选抗原，例如，CA 125/0772P所有或部分，如细胞缔合的CA 125/0772P多肽以正常方式免疫转基因小鼠。用常规杂交瘤技术可以从免疫的转基因小鼠得到针对该抗原的单克隆抗体。转基因小鼠所含有的人免疫球蛋白转基因在B细胞分化期间重排，并随后经历类别转换和体细胞突变。从而，使用这种技术，可能产生可用于治疗的IgG、IgA、IgM和IgE抗体。关于产生人抗体的该技术的综述，见Lonberg等人，Int.Rev.Immunol.13(1)65-93(1995)。用于产生人抗体和人单克隆抗体的该技术的详细讨论和产生这些抗体的方案见，例如，美国专利号5,413,923、5,625,126、5,633,425、5,569,825、5,661,016、5,545,806、5,814,318、5,939,598、6,075,181、6,091,001、6,114,598、6,150,584和6,162,963，这些文献都在此处被完整并入作为参考。此外，公司如Abgenix，Inc.(Freemont，CA)和Genpharm(San Jose，CA)使用类似于上面描述的技术提供针对所选抗原的人抗体。
使用称作“指导选择”的技术可以产生识别所选表位的完全人抗体。在该方法中，所选的非人单克隆抗体，例如，小鼠抗体，被用于指导识别相同表位的完全人抗体的选择。见，例如，Jespers等人Bio/Technology.12(4)899-903(1994)。
此外，使用本领域中技术人员熟知的技术，特异结合抗原的抗体可以反过来被用于产生“模拟”抗原的抗独特型抗体，并且可以从中制备结合该抗原的抗-抗-独特型抗体。见，例如，Greenspan等人，FASEB J.7(5)437-444(1993)；和Nisonoff，J.Immunol.147(8)2429-2438(1991)。
5.11抗体和多肽的重组表达使用含有编码本发明的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物的表达载体可以重组表达优选结合细胞缔合的CA 125/0772P的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物。一旦得到编码本发明的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物的多核苷酸，使用本领域中熟知的技术通过重组DNA技术可以产生用于生产该抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物的载体。见，例如，美国专利号4,816,567、5,545,405、和6,331,415，这些专利的每一篇被完整并入本文作为参考。
本领域中技术人员熟知的方法可用于构建表达载体，该表达载体含有抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物编码序列和适宜的转录和翻译控制信号。这些方法包括，例如，体外重组DNA技术、合成技术，和体内遗传重组。因此，本发明提供了可复制的载体，其含有编码本发明的抗体、本发明的结合抗原的抗体片段、本发明的融合多肽或类似物、抗体的重链或轻链、抗体的重链或轻链的可变结构域或该结构域的部分，或者重或轻链CDR的核苷酸序列，该核苷酸序列与启动子可操作地连接。这些载体可以还包括编码抗体分子的恒定区的核酸序列(见，例如，EP 216,846、EP 323,997、和美国专利号5,122,464)，并且该抗体的可变结构域可被克隆到这种载体中以表达完整重链、完整轻链或完整重链和完整轻链。
通过常规技术将表达载体转移到宿主细胞并通过常规技术，在有助于，或者允许产生本发明的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物的条件下培养所转化或转染的细胞。从而，本发明包括宿主细胞，其含有编码本发明的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物或其片段，或其重或轻链，或其部分，或本发明的单链抗体的载体或多核苷酸，该多核苷酸分子可操作地连接到异源启动子。在双链抗体表达的优选实施方案中，编码重链和轻链的载体可以在宿主细胞中共表达以表达完整免疫球蛋白分子，如下面详述。
可以用各种宿主表达载体系统表达本发明的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物(见，例如，美国专利号5,807,715)。这些宿主表达系统代表载体，通过该载体可以产生目标编码序列并将其随后纯化，而且还代表细胞，其当被适宜的核苷酸编码序列转化或转染时，原位表达本发明的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物。这些宿主表达系统包括，但不限于，微生物如细菌(例如，大肠杆菌或枯草芽孢杆菌)，它们被含有抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物编码序列的重组噬菌体DNA、质粒DNA或粘粒DNA表达载体转化；酵母(例如，酿酒酵母，毕赤酵母，或Pichiamaetlanolica)，它们被含有抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物编码序列的重组酵母表达载体转化；昆虫细胞系统，它们被含有抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物编码序列的重组病毒表达载体(例如，杆状病毒)转染；植物细胞系统，它们被重组病毒表达载体(例如，花椰菜花叶病毒CaMV、烟草花叶病毒TMV)转染或者被含有抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物编码序列的重组质粒表达载体(例如，Ti质粒)转化；或哺乳动物细胞系统(例如，COS、CHO、BHK、293、NSO或3T3细胞)，它们含有来自哺乳动物细胞基因组的启动子(例如，金属硫蛋白启动子)或来自哺乳动物病毒(例如，腺病毒晚启动子或牛痘病毒7.5K启动子)的重组表达构建体。优选地，细菌细胞如大肠杆菌，更优选地，真核细胞，特别用于表达完整重组抗体分子的真核细胞，被用于表达重组抗体分子。例如，哺乳动物细胞诸如中国仓鼠卵巢细胞(CHO)与一种载体如来自人巨细胞病毒的主要中间早基因启动子元件联合是抗体的有效表达系统(Foecking等人，Gene.45(1)101-105(1986)和Cockett等人，Bio/Technology.8(7)662-667(1990))。在特定实施方案中，组成性启动子、可诱导的启动子、细胞型或组织特异的启动子调节编码本发明的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物的核苷酸序列的表达。
在细菌系统中，根据所要表达的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物的用途可以有利地选择许多表达载体。例如，当将产生大量这种蛋白质以生产抗体分子的药物组合物时，希望载体指导蛋白产物的高水平表达的载体易于纯化是希望的，其中可容易地纯化蛋白产物。这些载体包括，但不限于，大肠杆菌表达载体pUR278(Ruther等人，EMBO J.2(10)1791-1794(1983))，其中抗体编码序列可以单独地连接到载体并与Lac Z编码区处于同一读框内从而产生融合蛋白；pIN载体(Inouye等人，Nucleic Acids Res.13(9)3101-3110(1985)；Van Heeke等人，J.Biol.Chem.264(10)5503-5509(1989))；等等。pGEX载体也可用于表达外来多肽，该外来多肽作为与谷胱甘肽5-转移酶(GST)(Hakes等人，Anal.Biochem.202(2)293-298(1992))的融合蛋白。通常，这些融合蛋白是可溶的并且可从裂解的细胞容易地纯化，纯化方法是将融合蛋白吸附并结合到基质谷胱甘肽琼脂糖珠，然后在游离谷胱甘肽存在下洗脱。设计pGEX载体以包括凝血酶或因子Xa蛋白酶切割位点，从而所克隆的靶基因可以从GST部分释放。
在插入系统中，苜蓿银纹夜蛾核型多脚体病毒(AcNPV)被用作载体以表达外来基因。病毒在草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞中生长。可将抗体编码序列单独克隆到病毒的非必需区(例如，多角体蛋白基因)并置于AcNPV启动子(例如多角体蛋白启动子)的控制下。见，例如，Kumar等人，Biosci.Rep.19(3)227-234(1999)。
在哺乳动物宿主细胞中，可以利用许多基于病毒的表达系统。当用腺病毒作为表达载体时，可将该抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物的编码序列连接到腺病毒转录/翻译控制复合体，例如，晚启动子和三联前导序列。然后通过体外或体内重组将该嵌合基因插入到腺病毒基因组中。插入病毒基因组的非必需区(例如，区域E1或E3)将得到重组病毒，该病毒是可存活的并且能够在受感染的宿主中表达抗体分子(例如，见Logan等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.81(12)3655-3659(1984))。为了有效翻译所插入的编码序列可能还需要特定启动信号。这些信号包括ATG起始密码子和相邻序列。此外，起始密码子必须与所希望的编码序列的读框同相以确保完整插入序列的翻译。这些外源翻译控制信号和起始密码子可以是各种来源的(天然和合成的)。通过包括适宜的转录增强元件、转录终止子等可以提高表达效率(见，例如，Bittner等人，Methods Enzymol.153516-544(1987))。
此外，可以利用宿主细胞株系，该株系调节插入序列的表达，或者以所希望的方式修饰和加工基因产物。蛋白质产物的这些修饰(例如，糖基化)和加工(例如，切割)可能对于蛋白质的功能是重要的。不同宿主细胞的蛋白质和基因产物的翻译后加工和修饰具有特征性和特定机理。可以选择适宜的细胞系或宿主系统以确保所表达的外来蛋白的正确修饰和加工。为此，可以使用真核宿主细胞，其细胞机器可以对最初转录产物正确加工、对基因产物正确糖基化和磷酸化。这些哺乳动物宿主细胞包括但不限于CHO，VERO、BHK、Hela、COS、MDCK、293、3T3、W138、BT483、Hs578T、HTB2、BT20和T47D、NSO(不内源产生任何免疫球蛋白链的鼠骨髓瘤细胞系)、CRL7030和HsS78Bst细胞。
对于重组蛋白的长期、高产率生产，优选稳定表达蛋白质。例如，可以将稳定表达抗体分子的细胞系工程化。与其使用含有病毒复制原点的表达载体，不如通过受到适宜的表达控制元件(例如，启动子序列、增强子序列、转录终止子、多腺苷酸化位点，等)和适宜的选择标记控制的DNA转化宿主细胞。导入外来DNA后，可以让工程化细胞在富集培养基中生长1-2天，然后转向选择培养基。重组质粒中的选择标记赋予对选择的抗性并使得细胞将质粒稳定整合到它们的染色体并生长而形成转化灶，该转化灶又可以被克隆并扩大成细胞系。该方法可有利地用于工程化稳定表达抗体分子的细胞系。
可以使用许多选择系统，包括但不限于，单纯疱疹病毒胸苷激酶(Wigler等人，Cell.11(1)223-232(1977))、次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(Spring等人，Biochim.Biophys.Acta.2118(2)158-162(1994))和腺嘌呤磷酸核糖基转移酶(Lowy等人，Cell.22(3)817-823(1980))基因可分别用于tk-、hgprt-或aprt-细胞。此外，抗代谢物抗性可用作下列基因的选择基础dhfr，其赋予氨甲蝶呤抗性(Wigler等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.77(6)3567-3570(1980)；O′Hare等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.78(3)1527-1531(1981))；gpt，其赋予霉酚酸抗性(Mulligan等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.78(4)2072-2076(1981))；neo，其赋予氨基糖苷G-418抗性(Wu等人，Biotherapy.3(1)87-95(1991)；Tolstoshev，Ann.Rev.Pharmacol.Toxicol.33573-596(1993)；Mulligan，Science.260(5110)926-932(1993)；和Morgan等人，Ann.Rev.Biochem.62191-217(1993))；和hygro，其赋予潮霉素抗性(Santerre等人，Gene30(1-3)147-156(1984))。本领域中公知的重组DNA技术的方法可常规地用于选择所希望的重组克�。⑶艺庑┓椒ㄔ诶纾珻urrent Protocols in Molecular Biology，Ausubel等人，编者，John Wiley & Sons(1989-2002)；Kriegler，Gene Transfer and Expression，A Laboratory Manual，StocktonPress(1990)；Current Protocols in Human Genetics中第12和13章，Dracopoli等人，编者，John Wiley & Sons(1994)；和Colbere-Garapin etal.，J.Mol.Biol.150(1)1-14(1981)中描述，这些文献在此处被完整并入作为参考。
通过载体扩增可以增加抗体、结合抗原的抗体片段或融合多肽分子的表达水平(综述，见Bebbington和Hentschel，使用基于基因扩增的载体在哺乳动物细胞中表达克隆的基因，DNA cloning，卷3(Academic Press1987))。当表达抗体的载体系统中的标记物是可扩增的时候，宿主培养物中存在的抑制剂的水平的增加将增加该标记基因的拷贝数。因为扩增的区域与抗体基因结合，所以抗体的产量也将增加(Crouse等人，Mol.Cell.Biol.3(2)257-266(1983))。
可以用本发明的两种表达载体共转染宿主细胞，第一种载体编码来自多肽的重链，第二种载体编码来自多肽的轻链。这两种载体可以含有相同的选择标记，其使得重链和轻链多肽的表达相等。备选地，可以使用单一载体，其编码并且能够表达重链和轻链多肽。在这种情况下，轻链应该置于重链之前以避免无毒性的重链过量(Proudfoot，Nature.322(6079)562-565(1986)；和Kohler，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.77(4)2197-2199(1980))。重链和轻链的编码序列可以含有cDNA或基因组DNA，或者它们的组合。
一旦通过重组表达产生了本发明的抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物，就可以通过本领域中任一公知的用于纯化免疫球蛋白分子的方法纯化该抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物，例如，通过层析(例如，离子交换、亲和，尤其最初用蛋白质A纯化后通过对特异CA 125/0772P抗原的亲和，和大小排阻柱层析)、离心、差别溶解性，或用于蛋白质纯化的任一其他标准技术纯化该抗体、结合抗原的抗体片段、融合多肽或类似物。此外，本发明的抗体或其片段可以与此处描述的或本领域中其他公知的异源多肽序列融合以方便纯化。
下面的实施例用于阐明并且不作为对本发明范围的限制。
6.实施例此处提供的结果证明CA 125/0772P多肽的一部分作为脱落CA125/0772P释放后，CA 125/0772P的细胞外部分以细胞缔合的形式保留。具体地，通过产生和表征相对于脱落CA 125/0772P种类优选结合细胞缔合的CA 125/0772P种类的几种抗体证明存在细胞缔合的CA125/0772P。除了优选结合，此处提供的结果表明抗体显示出对CA125/0772P的高度特异性和对细胞缔合的CA 125/0772P抗原的高度亲和性。此外，此处提供的结果表明这些抗体可以起介导CA 125/0772P-阳性肿瘤细胞的裂解的功能。
6.1抗体产生此处提供的实验描述了产生针对CA 125/0772P的细胞外部分的单克隆抗体。如在随后的小节中阐明的，通过这些技术产生的抗体包括对CA 125/0772P特异，优选结合细胞缔合的CA 125/0772P，表现出对细胞缔合的CA 125/0772P的高度亲和性，并且可以起介导CA125/0772P-阳性肿瘤细胞的裂解的功能的抗体。
抗原和抗原-表达构建体产生了表达构建体以表达用于抗体生产的CA 125/0772P抗原。所要表达的第一种抗原被指定为0772P 3-重复(图1；SEQ ID NO1)，其包括CA 125/0772P的细胞外结构域的羧基-末端三个串联重复直到，但不包括，CA 125/0772P跨膜序列。所要表达的第二种抗原被指定为0772P 3-重复TM(图2；SEQ ID NO2)，其包括CA 125/0772P的细胞外结构域的羧基-末端三个串联重复以及图2中描绘的跨膜和细胞质序列。具体地，将编码每种抗原的序列亚克隆到pSecTag2B载体(Invitrogen)中。该载体编码用于分泌的Igκ信号序列和用于所表达蛋白的检测和纯化的myc和6xhis标记。
抗原表达用上面描述的构建体瞬时转染悬浮CHO-KI细胞产生重组抗原。用于转染的培养基是补充GS(JRH Biosciences Lenexa，KS)的ProCHOCDM(BioWhittaker Inc.Walkersville，MD)。为了产生1升物质，将2mg转染试剂ClonfectionTM(Clontech，Palo Alto，Ca)再水合，稀释到24ml转染培养基中并与相同培养基中的125μg DNA孵育15分钟。将转染混合物加入450ml含有1.25×109悬浮CHO-KI细胞的转染培养基中并在有轨摇床上37℃下孵育4小时。孵育后，向被转染的细胞加入500ml含有GS补加物、青霉素-链霉素和10％超低IgGFBS(Life Technologies Rockville，MD)的ProCHO 4-CDM中，并将培养物转移到摇瓶中。在第3天收集样品并在第7天收获培养物。
抗原纯化用Millipore Pellicon系统，使用50K截留膜将转染上清液浓缩到250ml。将从TALON纯化试剂盒(目录号K1253-1)得到的2mlTalon树脂(Clontech，Palo Alto，CA)转移到2ml柱子并用20ml 1×洗涤/提取缓冲液(随试剂盒提供，pH 7.0)提取。然后将浓缩样品加到柱上，流速为1ml/min。用15ml提取/洗涤缓冲液洗涤柱子。然后以4×1ml洗脱缓冲液(50mM磷酸钠，300mM NaCl，150mMimidizole，pH 7.0)洗脱结合的蛋白。收集半毫升部分并通过SDS-PAGE分析并使用考马斯亮蓝G-250显色。通过ConA Sepharose层析进一步纯化含有0772P 3-重复重组蛋白的部分。将1ml ConASepharose(Vector Laboratories，Inc.，cat#AC-1003，lot #K0425)转移到15ml锥形离心管并用10ml 1×磷酸盐缓冲液(PBS)，pH 7.2洗涤。通过离心除去洗涤缓冲液。用1×PBS(pH 7.2)以1∶1稀释含有0772P 3-重复蛋白的来自TALON纯化的级分并将其加入洗涤的ConA Sepharose并在4℃过夜旋转。然后将树脂浆液转移到5ml重力流动柱并用10ml 1×PBS，pH 7.2洗涤。用溶于1×PBS，pH 7.2中的0.6M甲基α-D-甘露吡喃糖苷洗脱样品，每部分0.5ml，体积共6ml。通过SDS-PAGE分析级分并使用考马斯亮蓝G-250染色。将含有0772P 3-重复蛋白的级分合并并对2L 1×PBS，pH 7.2透析，并在4℃保存。
免疫在第0、21、42和63天腹膜内(i.p.)免疫BALB/c小鼠。第一次注射使用NIHOVCAR-3(ATCC HTB-161)，随后的注射使用没有跨膜结构域的0772P 3-重复。完全弗氏佐剂被用于第一次蛋白质注射，不完全弗氏佐剂被用于剩余的注射。在第35、56和77天收集血清并通过ELISA和下面描述的细胞流式术分析。选择具有最佳血清效价的小鼠用于细胞融合。在融合前的第一天和第二天，用哺乳动物表达的0772P 3-重复蛋白腹膜内和静脉内(i.v.)强化所选小鼠。融合的前一天静脉内强化小鼠。
杂交瘤产生除去小鼠脾脏并通过用镊子切碎收获脾细胞，通过筛网滤过细胞。将细胞在IMDM培养基中洗涤两次并进行细胞计数。收获对数生长期的P3X63Ag8.653小鼠骨髓瘤细胞(ATCC CRL-1580)，在IMDM培养基中洗涤两次并计数细胞。将脾细胞和骨髓瘤细胞以5∶1的比例混合在一起并以200×g离心5分钟。吸出后，轻敲管底使沉淀变松。在30秒内逐滴加入1ml 50％ PEG(分子量1450)溶液，然后用移液管轻轻混合沉淀30秒。让所得悬浮液再静置30秒。在90秒内加入5ml IMDM，接着立即再加入5ml。所得细胞悬液静置5分钟。离心后，将细胞重悬在HAT培养基(含有10％FBS、2mM L-谷氨酰胺、0.6％ 2-巯基乙醇(0.04％溶液)、次黄嘌呤、氨基蝶呤、胸苷和10％ORIGENO杂交瘤克隆因子(IGEN International，Gaithersburg，MD)的IMDM)中至浓度为5×105个细胞/ml并以1×105个细胞/孔铺到96孔板。将96孔板在37℃下7％CO2湿度为100％的空气中孵育。融合后7天，除去培养基并用含有10％FBS、2mM L-谷氨酰胺、0.6％ 2-巯基乙醇母液(0.04％溶液)、次黄嘌呤、和胸苷的IMDM代替。融合后10到14天，从含有正在生长的杂交瘤集落的孔取出上清液并如此处描述的检验对CA125/0772P的结合。
从杂交瘤上清液纯化抗体将0.5ml蛋白质G树脂(Sigma，St.Louis，MO)装入5ml一次性柱子(Bio-Rad，Hercules，CA)。用20ml结合缓冲液(20mM PBS，pH 7.0)预平衡柱子。将杂交瘤上清液加入柱子，流速小于0.5ml/min。然后以1ml/min的流速用20ml结合缓冲液洗涤柱子。备选地，使用预装蛋白质G柱(Amersham Pharmacia Biotech)。然后用3ml洗脱缓冲液(0.1M甘氨酸，pH 2.7)洗脱抗体。将0.5ml部分收集到含有50μl 1M Tris，pH 9.0的1ml管中。样品对PBS(0.5L)透析并浓缩到约1mg/ml蛋白。
杂交瘤上清液中的抗体浓度用Easy-Titer小鼠IgG测定试剂盒(Pierce Biotechnology，Rockford，IL)确定抗体的浓度。简言之，将小鼠IgG完整分子标准(Pierce Biotechnology，Rockford，IL)用稀释缓冲液(随试剂盒提供)稀释到500ng/ml。将该标准在稀释缓冲液中连续以1∶2稀释6次以产生标准曲线。将20μl每种标准加到96孔板的相应孔中。还向板加入杂交瘤上清液稀释液(20μl)。为每种标准和样品进行双份孔。向每孔加入20μl聚苯乙烯珠子(随试剂盒提供)，混合样品，密封板，并将板在板振荡器上室温下孵育5分钟。然后向每孔加入来自试剂盒的100μl封闭试剂。将板再次在室温下振荡5分钟。然后在Vmax板读出器(Molecular Devices Corp.，Sunnyvale，CA)上读出405nm处的吸光度，并用4参数拟合产生标准曲线。
6.2 CA 125/0772P特异性此处给出的结果表明通过上面描述的技术制备抗体导致产生了对CA 125/0772P特异的抗体。
ELISA特异性测定法方法将96孔板用100μl(每孔)溶于碳酸氢钠缓冲液(0.2MNa2CO3/NaHCO3，pH 9.6，Sigma)中的1μg/ml 0772P 3-重复蛋白(SEQID NO1)(亲和纯化的)在4℃过夜孵育和包被。第二天，用200μl 1×PBST(1×磷酸盐缓冲液(PBS)，0.05％Tween 20)洗涤板三次并用含有1％牛血清白蛋白(BSA)的100μl 1×PBST在37℃封闭2小时。用1×PBST洗涤板三次后，向板(单个孔)加入鼠抗-CA 125/0772P选择的杂交瘤产生的抗体(0.04mg/μl)。37℃孵育1小时后，用1×PBST洗涤板三次。为了检测信号，向每孔加入100μl缀合HRP(辣根过氧化物酶)的绵羊抗小鼠IgG(1∶2000稀释成1×PBST+1％BSA；AmarshamBiosciences)并在37℃孵育1h。用1×PBST再次洗涤板3次。最后，向每孔加入TMB(3，3’，5，5’-四甲基联苯胺)底物和H2O2(1∶1比例，KPLKirkguard Perry Laboratories)的混合物100μl并孵育5分钟后，用平板读出器(Molecular Device Corp.，Sunnyvale，CA)在405nm测量吸光度。对每种0772P杂交瘤产生的抗体一式三份地进行测定并作为动力学测定收集和分析数据，在5分钟内测量。计算并给出平均值。每个实验中还包括空白和各种试剂的对照。
结果下面的表7给出了四种选择的抗-CA 125/0772P杂交瘤产生的抗体(117.1、368.1、501.1、776.1)的ELISA特异性测定结果。该表还显示了两种通过商业途径可得到的CA 125/0772P抗体(OC125和M11，Dako Corp.，Carpinteria，CA)的ELISA特异性测定结果。如果一种抗体(或结合抗原的抗体片段)显示出吸光度为至少5到大于30OD/微克抗体，那么认为该抗体(或结合抗原的抗体片段)在该测定中是阳性的(即，对CA 125/0772P特异)。这些结果表明每种所检验的抗体对于CA 125/0772P都是特异的。注意到，如下面所阐明的，尽管认为OC125和M11对于CA 125/0772P是特异的，但是它们都不相对于脱落CA125/0772P优选结合细胞缔合的CA 125/0772P。SD＝标准误。
表7
下面表8中的结果显示了使用上述技术产生的20种额外抗体的吸光度数据。如吸光度数据所显示的，这些抗体的每一种对于CA125/0772P也是特异的。
表8
流式细胞术特异性测定方法将细胞(OVCAR-3(ATCC保藏号HTB-161)、SK-OV3(ATCC保藏号HTB-77)、NIH/3T3(ATCC保藏号CRL-1658)和用表达0772P 3-重复蛋白的序列(SEQ ID NO2)转染的NIH/3T3细胞)通过用胰蛋白酶(0.25％)消化从培养板除去。计数细胞并通过锥虫蓝(0.2％)排除评估存活性。离心(500×g，5分钟)细胞并将其重悬在FACS缓冲液(含有1％BSA和0.1％叠氮化钠的1×DPBS)中至浓度为5-10×107个细胞/ml。然后将细胞以100μl/孔分布到96孔板圆底板中并以500×g离心3分钟。通过抽吸除去抗体上清液，将50μl杂交瘤上清液在FACS缓冲液中稀释到1μg/ml到0.5μg/μl，并将其加入含有细胞的每个孔中。包括鼠IgGlκ(Sigma，St.Louis，MO)(2.0、1.0、0.5、0.1μg/μl)作为阴性对照，包括OC125和M11(DAKO Corp，Carpinteria，CA)作为阳性对照。摇动下，将板在4℃孵育30分钟。随后用FACS缓冲液(200μl/孔)洗涤细胞两次，每次洗涤后离心并吸出缓冲液)。将山羊抗小鼠IgG(Fc)-生物素(Sigma，St.Louis，MO)在FACS缓冲液中以1∶1000稀释并向含有细胞的每孔加入50μl。摇动下在4℃孵育板30分钟。然后如上面的用FACS缓冲液洗涤细胞。将链霉抗生物素-Alexa-Four488(Molecular Probes，Eugene，OR)以1∶1000稀释到FACS缓冲液中并向含有细胞的每孔加入50μl。摇动下在4℃孵育板30分钟。然后如上面的用FACS缓冲液洗涤细胞。然后将细胞重悬在1ml FACS缓冲液中并转移到Falcon 2052管中并在Becton-Dickinson免疫细胞计量术系统FACSCalibur流式血细胞计数器(San Jose，CA)上分析。
结果下表9给出了从四种所选的抗-CA 125/0772P杂交瘤产生的抗体(117.1、368.1、501.1、776.1)得到的流式细胞术特异性测定结果。该表还显示了通过商业途径可得到的OC125和M11的流式细胞术特异性测定结果。认为NIH/3T3细胞和SK-OV3细胞(一种卵巢癌细胞系)是阴性对照，因为它们都不产生CA 125/0772P。
如果抗体(或结合抗原的抗体片段)显示出流式细胞术特异性测定结果位于下面的阳性细胞范围内少于约5％阳性NIH/3T3细胞，和至少约60％阳性NIH/3T3细胞产生SEQ ID NO2多肽；或者少于约25％阳性SK-OV3细胞和至少约80％阳性OVCAR-3细胞，那么认为这些抗体(或结合抗原的抗体片段)是阳性的(即，对CA 125/0772P特异)(nd-未确定)。
这些结果表明所检验的抗体的每一种都对CA 125/0772P特异。注意到，如下面所阐明的，尽管认为OC 125和M11对于CA 125/0772P是特异的，但是它们都不相对于脱落CA 125/0772P优选结合细胞缔合的CA 125/0772P。
表9
下面表10中的结果给出了使用上述技术产生的20种额外抗体的OVCAR-3/SK-OV3数据，这些结果表明这些抗体对于CA 125/0772P也是特异的。
表10
6.3竞争测定法表明成功地产生了优选结合CA 125/0772P的抗体此处给出的结果表明通过上面描述的技术产生的抗体可以产生相对于脱落CA 125/0772P优选结合细胞缔合的CA 125/0772P的抗体。可以产生抗体这一事实还第一次表明存在细胞缔合的CA 125/0772P多肽，即，CA 125/0772P多肽的一部分作为脱落CA 125/0772P释放后，CA 125/0772P的细胞外部分以细胞缔合的形式保留，然而该保留是暂时的。
ELISA竞争测定方法将96孔板用100μl(每孔)溶于碳酸氢钠缓冲液(0.2MNa2CO3/NaHCO3，pH 9.6，Sigma)中的1μg/ml 0772P 3-重复(SEQ IDNO1)多肽(亲和纯化的)在4℃过夜包被。第二天，用1×PBST(1×磷酸盐缓冲液(PBS)，0.05％ Tween 20)200μl洗涤板三次并用含有1％牛血清白蛋白(BSA)的100μl 1×PBST在37℃封闭2小时。用1×PBST洗涤板三次后，向已经用过量(例如，10-50倍w/w)脱落CA125/0772P(Fitzgerald Industries International，Concord，MA；Scripps Laboratories，La Jolla，CA；和/或United StatesBiological Corp.)预孵育的孔加入所指示浓度(例如，0.04μg/ml)选择的抗-CA 125/0772P的杂交瘤产生的抗体。37℃孵育1小时后，用1×PBST洗涤板三次。为了检测信号，向每孔加入100μl缀合HRP的绵羊抗小鼠IgG(1∶2000稀释成1×PBST+1％BSA；AmarshamBiosciences)并在37℃孵育1h。用1×PBST再次洗涤板3次。最后，向每孔加入TMB底物和H2O2(1∶1比例，KPL)的混合物100μl并用平板读出器(Molecular Device Corp.，Sunnyvale，CA)在405nm测量吸光度。对每种所选抗体一式三份地进行测定，计算并给出平均值。基于平均值为各自抗体计算与无竞争相比的百分数抑制。每个实验中还包括空白和各种试剂的对照。
结果下面的表11给出了四种所选的抗-CA 125/0772P杂交瘤产生的抗体(117.1、368.1、501.1、776.1)的ELISA竞争测定结果。该表还显示了通过商业途径可得到的CA 125/0772P抗体(OC 125；Dako Corp.，Carpinteria，CA)的ELISA竞争测定结果。如果一种抗体(或结合抗原的抗体片段)在25倍(w/w)过量脱落CA 125/0772P存在下的结合小于约25％的抑制，那么认为该抗体(或结合抗原的抗体片段)在该测定中是阳性的(即，优选结合细胞缔合的CA 125/0772P)。这些结果表明抗体117.1、368.1、501.1和776.1的每一种优选结合细胞缔合的CA125/0772P。这些结果还表明OC125抗体不能优选结合细胞缔合的CA125/0772P。(SD-标准误)表11
下表12中给出的结果给出了通过上述技术产生的20种额外抗体的CA 125/0772P竞争者数据，这些数据表明这些抗体也优选结合细胞缔合的CA 125/0772P。
表12
流式细胞术竞争测定方法
将NIHOVCAR-3(ATCC保藏号HTB-161)细胞通过用胰蛋白酶(0.25％)消化从培养板除去。计数细胞并通过锥虫蓝(0.2％)排除评估存活性。离心(500×g，5分钟)细胞并将其重悬在FACS缓冲液(含有1％BSA和0.1％叠氮化钠的1×DPBS)中至浓度为5-10×107个细胞/ml。然后将细胞(100μl/孔)分布到96孔板圆底平板中并以500×g离心3分钟。通过抽吸除去上清液，将50μl杂交瘤上清液在FACS缓冲液中稀释到0.2μg/ml。将CA 125(Fizgerald IndustriesInternational，Concord，MA)在FACS缓冲液中稀释到1000μg/ml、500μg/ml、200μg/ml、60μg/ml、20μg/ml、6μg/ml、或2μg/ml。将30μl抗体溶液与30μl稀释的CA125或者仅缓冲液在4℃孵育30分钟。向含有细胞的每个孔加入50μl混合物。包括鼠IgG1κ(Sigma，St.Louis，MO)和M11(DAKO Corp，Carpinteria，CA)分别作为阴性和阳性对照。摇动下，将平板在4℃孵育30分钟。随后用FACS缓冲液(200μl/孔)洗涤细胞两次，每次洗涤后离心并吸出缓冲液。将山羊抗小鼠IgG(Fc)-生物素(Sigma，St.Louis，MO)在FACS缓冲液中以1∶1000稀释并向含有细胞的每孔加入50μl。摇动下在4℃孵育板30分钟。然后如上面用FACS缓冲液洗涤细胞。将链霉抗生物素-Alexa-Four488(Molecular Probes，Eugene，OR)以1∶1000稀释到FACS缓冲液中并向含有细胞的每孔加入50μl。摇动下在4℃孵育板30分钟。然后如上面的用FACS缓冲液洗涤细胞。将细胞重悬在1ml FACS缓冲液中并转移到Falcon 2052管中并在Becton-Dickinson免疫细胞计量术系统FACSCalibur流式血细胞计数器(San Jose，CA)上分析。用GraphPad作图软件随着CA 125/0772P浓度而变对百分数阳性细胞作图。用线性回归分析确定IC50，IC50表达为结合的50％抑制时脱落CA 125/0772P的浓度。
结果图3显示了对于117.1抗体和M11抗体对照(正方形)，脱落CA125/0772P浓度对百分数阳性细胞的代表性图。
下表13给出了流式细胞术竞争测定结果的概述。如果抗体(或结合抗原的抗体片段)显示出IC50(通过百分数阳性细胞测量)为至少约0.05mg/ml脱落CA 125/0772P，那么认为该抗体(或结合抗原的抗体片段)是阳性的(即，被认为优选结合细胞缔合的CA 125/0772P)。
下表13中显示的结果表明117.1、501.1、776.1、8C3、16H9、325.1、633.1和725.1抗体的每一种都优选结合细胞缔合的CA125/0772P。注意到表13中的结果还表明OC 125和M11抗体不优选结合细胞缔合的CA 125/0772P。
表13
6.4亲和测定此处给出的结果表明所产生的优选结合CA 125/0772P的抗体包括表现出对细胞缔合的CA 125/0772P高度亲和性的抗体。
BIAcore亲和测定方法将GM5 BIAcore生物传感器芯片对接到BIAcore X设备中并在室温下用55μl 1∶1 NHS/EDC激活。将溶于0.05M乙酸缓冲液(pH 4.5)的10μg/ml 0772P 3重复区蛋白和BSA分别固定在被激活芯片的流式细胞(FC)1和FC2上，流速为5μl/分钟以实现1000-2000RU的共振反应。注射55μl乙醇胺-HCl(pH 8.5)封闭芯片，然后用50mM NaOH-1M NaCl洗涤芯片5次。为了测量抗-0722P mAbs对固定到芯片的0772P3重复区的结合，将溶于BIAcore运行缓冲液(HBS-EP，Cat.#1001-080，BIAcore，Piscataway，NJ)的各种浓度的30μl抗-0772P以5μl/min的流速注射到传感器表面上。注射期完成后，在BIAcore运行缓冲液中以相同流速监视解离，持续360秒。在两次注射之间用30μl 50mM NaOH-1M NaCl使表面再生。使用BIAevaluation分析各自传感图(sensorgram)。
BIAcore亲和测定结果下面的表14给出了117.1、368.1、501.1和776.1抗体，以及M11和OC125抗体的BIAcore亲和测定概述。如表中所示，抗体117.1、368.1、501.1、776.1、4E7、7C6、7F10、7G10、7H1、8A1、8B5、8C3、8E3、15C9、16C7、16H9、325.1、621.1、633.1和725.1的每一种对CA 125/0772P多肽的结合都具有高亲和性。
表14
6.5功能测定此处给出的结果表明所产生的优选结合细胞缔合的CA 125/0772P的抗体包括起介导CA 125/0772P-阳性肿瘤细胞裂解的功能的抗体。
ADCC测定方法通过Histopaque-1077梯度离心方法(Sigma Co.，St.Louis，MO)从正常供体的外周血分离人白细胞并将其用作效应细胞。将OVCAR-3靶细胞(5×103个/孔)与Histopaque-纯化的人白细胞以效应细胞对靶标(E/T)比例为12.5∶1到50∶1的比例在96孔板的U形底部混合，孔中存在或不存在各种浓度的单克隆抗体，抗体溶于补加10％FBS的RPMI1640，总体积为120μl。将96孔板在37℃下湿润的5％CO2空气中孵育。不加所试验的抗体的靶细胞和效应细胞用作阴性对照。孵育16-18小时后，收集培养上清液的50μl等分试样并用Cytotox 96无放射性细胞毒性测定试剂盒(Promega Co.，Madison，WI)根据生产商的使用说明在平底96孔板中测量乳酸脱氢酶活性。如下计算肿瘤细胞的百分数裂解％细胞毒性＝(实验释放-效应细胞自发释放-靶细胞自发释放)/(靶细胞最大释放-靶细胞自发释放)×100。结果表达为一式两份样品的平均百分比裂解±S.D.。
结果图4显示了百分数裂解对117.1抗体的抗体浓度(4个不同供体的平均值)的代表性图。如图中所示，117.1抗体以依赖剂量的方式介导OVCAR-3卵巢癌细胞的裂解。
CDC测定将OVCAR-3靶细胞(2×104个/孔)与稀释(15∶1、20∶1、25∶1)的人或豚鼠补体在96孔板的U形底部混合，孔中存在或不存在各种浓度的抗体，抗体溶于补加10％FBS的RPMI 1640，总体积为120μl。将96孔板在37℃下湿润的5％CO2空气中孵育。不加抗体的靶细胞用作阴性对照。孵育4小时后，收集培养上清液的50μl等分试样并用Cytotox96无放射性细胞毒性测定试剂盒(Promega Co.，Madison，WI)根据生产商的使用说明在平底96孔板中测量乳酸脱氢酶活性。如下计算肿瘤细胞的百分数裂解％细胞毒性＝(实验释放-效应细胞自发释放-靶细胞自发释放)/(靶细胞最大释放-靶细胞自发释放)×100。结果表达为一式两份样品的平均百分比裂解±S.D.。
优选结合细胞缔合的CA125/0772P的抗体的序列此处给出的结果提供了本文中描述的6种单克隆抗体的可变区的氨基酸和核苷酸序列117.1、368.1、501.1、776.1、725.1和16H9，包括CDR序列。
方法收获杂交瘤并将其以1800rpm在4℃离心10分钟。向每107个细胞加入1ml TRIzol(Invitrogen)并处理总RNA。向每1ml TRIzol试剂加入200μl氯仿，手工剧烈摇动15秒并以12,000×g在4℃离心15分钟。将含有RNA的水相转移到新管中并通过对每1ml用于最初匀浆的1ml TRIzol试剂加入500μl异丙醇实施沉淀。将RNA沉淀用70％乙醇洗涤1次并简单地空气干燥，之后重悬在DEPC水中。在50℃下以10单位小牛肠磷酸酶(CIP)处理3μg总RNA 1小时以除去5’磷酸。该步骤从随后步骤除去了截断的mRNA和非-mRNA。用0.5单位烟草酸性焦磷酸酶(TAP)在37℃处理脱磷酸化RNA 1小时以从完整的全长mRNA除去5’帽结构。用5单位T4 RNA连接酶在37℃下1小时将GeneRacer RNA Oligo(5′-CGACUGGAGCACGAGGACACUGACAUGGACUGAAGGAGUAGAAA-3′；SEQ ID NO43)连接到mRNA的5’末端。用AMV-逆转录酶和GeneRacer Oligo dT 引物(5′-GCTGTCAACGATACGCTACGTAACGGCATGACAGTG(T)18-3′；SEQ ID NO44)在42℃逆转录连接的mRNA 1小时以产生在5’和3’末端具有已知的引发位点的cDNA。用位于所希望的基因的恒定区的基因特异的3’引物(重链5′-AYCTCCACACACAGGRRCCAGTGGATAGAC(SEQ ID NO45)，轻链5′-GGATACAGTTGGTGCAGCATC-3′(SEQ ID NO46))和与GeneRacer RNA Oligo同源的GeneRacer 5′引物(5′-CGACTGGAGCACGAGGACACTGA-3′；SEQ ID NO47)扩增5’末端。使用2μl cDNA在GeneAmp 9700 PCR系统上实施PCR反应，反应过程是94℃5分钟然后94℃30秒变性模板，55℃30秒退火，72℃1分钟实施延长，共30个循环，最后一个循环是72℃7分钟。用Qiagen凝胶纯化试剂盒纯化凝胶的目标带并将其用TOPO-4克隆试剂盒(Invitrogen)克隆。在GeneAmp 9700仪器中通过PCR筛选所得分离菌落的具有正确大小的插入片段。通过以下步骤实施PCR94℃8分钟裂解细菌，然后94℃30秒变性，55℃30秒退火，72℃1-4分钟延伸，共25个循环，72℃7分钟的最后一个循环延伸。用于筛选的引物为正义，5′-ATTAACCCTCACTAAAGGGA-3′(SEQ ID NO48)或5′-TAATACGACTCACTATAGGG-3′(SEQ ID NO49)，反义重链或轻链恒定区引物(见上面)。阳性克隆在4ml培养基中过夜生长以扩增该克隆并实施SNAP Miniprep(Invitrogen)。然后用BigDye(Perkin Elmer)化学在GeneAmp 9700 PCR系统中对克隆测序，测序方法为将DNA在94℃10秒变性，50℃5秒退火引物(5′-ATTAACCCTCACTAAAGGGA-3′(SEQ ID NO50)或5′-TAATACGACTCA CTATAGGG-3′(SEQ IDNO51))，并在72℃4分钟延伸引物，共25个循环。将反应物通过DyeEx柱(Qiagen)并在Applied Biosystems 310自动DNA测序仪上测序。
结果得到优选结合细胞缔合的CA 125/0772P的6种单克隆抗体的可变区的核酸序列并且这些序列在图5-10中描绘。具体地，图5A、6A、7A、8A、9A和10A描绘了分别编码单克隆抗体117.1、368.1、501.1、776.1、725.1和16H9的可变轻链区的核苷酸序列，而图5B、6B、7B、8B、9B和10B描绘了分别编码单克隆抗体117.1、368.1、501.1、776.1、725.1和16H9的可变重链区的核苷酸序列。编码引导序列的核苷酸序列被双下划线标出，编码CDR序列的核苷酸序列被下划线标出。
得到编码优选结合细胞缔合的CA 125/0772P的6种单克隆抗体的可变区的氨基酸序列并且这些序列在图5-10中描绘。具体地，图5C、6C、7C、8C、9C和10C分别描绘了单克隆抗体117.1、368.1、501.1、776.1、725.1和16H9的可变轻链区的氨基酸序列，而图5D、6D、7D、8D、9D和10D分别描绘了单克隆抗体117.1、368.1、501.1、776.1、725.1和16H9的可变重链区的氨基酸序列。引导序列被双下划线标出，CDR序列被下划线标出。注意到引导序列不成为成熟抗体的一部分，并且同样不被考虑为抗体的可变区的一部分。
6.7 OVCAR-3上清液的蛋白质印迹分析此处给出的工作实施例提供了蛋白质印迹分析，设计该蛋白质印迹分析用于直接检验抗体368.1或776.1结合脱落CA 125/0772P的能力。此处给出的数据直接证明368.1和776.1抗体都不识别相应于脱落CA 125/0772P的高分子量种类。相反，抗体OC 125和M11识别该高分子量种类，尽管所试验的所有抗体都强烈结合对照——含有3-重复的重组0772P多肽。从而，这些数据额外地证明368.1和776.1抗体优选结合细胞缔合的CA 125/0772P多肽。
方法从培养的OVCAR-3细胞除去培养基(补加10％胎牛血清的RPMI)并用新鲜补加的培养基代替。在1小时、6小时、24小时、48小时和72小时时除去条件培养基的等分试样。所补加的培养基用作时间0点。
向4-12％ Bis-Tris(Invitrogen)胶加入来自每个时间点的10μl条件培养基并通过电泳以200伏特分离45分钟。加入100ng、10ng和1.0ng纯化的0772P 3-重复多肽作为阳性对照。
以30伏特1小时将蛋白质转移到硝酸纤维素膜，然后在无脂奶中4℃过夜封闭。将第一抗体用PBS调节到400μg/ml并用无脂奶(OC125Dako#M3519，M11 Dako#M3520)以1∶1000稀释。将印迹在PBS/Tween中洗涤三次，每次10分钟。将第二抗体(抗-小鼠IgG Fc-特异的，Sigma#B-7410)在无脂奶中以1∶1000稀释并室温下孵育1小时。如上面的实施洗涤。将NeutraAvidin-HRP(Molecular Probes#A-2664)在PBS/Tween中以1∶1000稀释并在室温孵育15分钟。将印迹在大体积PBS-Tween中洗涤并通过化学发光显色(曝光30秒)。
结果为了确定368.1或776.1抗体是否结合脱落CA 125/0772P多肽，对培养的OVCAR-3细胞的上清液实施蛋白质印迹分析，已知这些细胞从它们的表面脱落CA 125/0772P。这种分析检验抗体直接结合脱落的CA 125/0772P的能力。
如图11中所示，蛋白质印迹分析的结果表明368.1和776.1抗体都不识别相应于脱落CA 125/0772P的高分子量种类。相反，抗体M11和OC125(即不优选结合细胞缔合的CA 125/0772P的抗体)识别该高分子量种类。所试验的所有4种抗体都强烈结合对照——含有3-重复的重组0772P多肽，即0772P 3-重复，其含有与CA 125/0772P跨膜结构域直接相邻的细胞外结构域序列。从而，这些数据额外地证明368.1和776.1抗体优选结合细胞缔合的CA 125/0772P多肽。
6.8放射标记的776.1抗体延缓肿瘤生长此处给出的结果表明放射标记的776.1抗体成功地延缓了人卵巢癌的动物模型中的肿瘤生长。
方法动物6-7周龄的雌性NCr nu/nu(“裸露”)小鼠(Taconic Farms，Germantown，N.Y.)用于所有研究。随意地对所有动物给食和水。
肿瘤细胞移植对于效能研究，OVCAR-3人卵巢癌细胞系用作人卵巢癌的模型。OVCAR-3细胞系(Hamilton，等人，Cancer Res.435379-5389(1983))来自人来源的卵巢腺瘤并且从ATCC购买(目录号HTB-161)。将OVCAR-3细胞保持在补加10％ FBS的RPMI-1640，37℃下，5％CO2中。OVCAR-3在细胞表面上表达肿瘤相关的CA 125/0772P。皮下植入OVCAR-3异种移植物并且其在免疫缺陷NCr裸鼠中作为异位肿瘤生长。皮下OVCAR-3肿瘤生长的主要标准是移植后2周达到150-250m3肿瘤，此时将开始实验性治疗。
为了方便皮下肿瘤形成，将OVCAR-3系在NCr nu/nu小鼠的腹膜腔内体内连续增殖(Burbridge等人，Int.J.Oncol.151155-1162(1999)；Guichard等人，Clin.Cancer Res.73222-3228(2001))。皮下移植前，将0.9％盐水中的10×106个体外培养的OVCAR-3细胞(第32代)腹膜内注射到NCr nu/nu小鼠(第一代)。7周后，通过腹膜灌洗收获肿瘤细胞并将5×106个细胞注射到一组新的受体(第二代)。4周后，通过腹膜灌洗收获细胞并将5×106个细胞注射到一组新的受体(第三代)。3周后收获第三代细胞并分析CA 125/0772P表达和存活力。
对于放射免疫治疗研究，植入第三代细胞进行皮下肿瘤生长。第三代细胞通常＞95％是存活的并且保持高水平CA 125/0772P表达，这通过流式细胞术证实。为了异位、实体肿瘤生长，将细胞重悬在Matrigel(Matrigel，BD BiosciencesLot#005002，14.6mg/mL)和0.9％盐水的混合物中，细胞终浓度为15×106个细胞/ml，Matrigel终浓度为7.3mg/mL。用0.2ml体积细胞悬液注射小鼠，最终剂量为3×106个细胞。用23号针将细胞悬液皮下注射在腹部区的腹侧。通过70％乙醇中的无菌纱布擦抹使注射部位无菌。移植后约10天，用电子测径器(Fowler Instruments)跨越两个维测测量可触知的肿瘤。根据肿瘤体积将小鼠分组，每组10只。对于一个研究中的所有组，平均肿瘤体积之间没有显著差异。每周两次记录肿瘤测量和观察。用标准公式(长×宽2)×0.5计算肿瘤体积。
776.1与131碘的偶联通过改良的IODO-GEN方法(Visser等人，J.Nucl.Med.42509-519(2001))在Perkin-Elmer碘化鼠IgG1 776.1，该方法是将高剂量131I偶联到单克隆抗体而使化学和辐射诱导的损伤最小的一种有效方法。将10微升1.41mg/ml抗坏血酸溶液(pH 5.0)加入10mCi131I中，并孵育混合物1分钟。然后加入100μl 0.5M磷酸盐(pH 7.4)。接着加入0.5mg 776.1mAb(用抗体浓度计算以得到所需要的体积)。然后加入IODO-GEN溶于乙腈的1mg/ml溶液35μl。孵育3分钟后，加入100μl抗坏血酸溶液(25mg/ml，pH 5.0)。再过5分钟后，加入溶于50mM PBS中的0.1％鼠血清白蛋白(MSA)100μl。孵育4分钟后，在生理盐水中通过即时薄层层析(ITLC)分析131I掺入。用预装NAP-10柱(Amersham-Pharmacia)通过Sephadex G-25层析除去未掺入的碘，以含有0.1％MSA的PBS作为缓冲液。所有步骤都在室温进行。再次通过ITLC分析纯化的mAb的游离碘含量，如果游离碘＜5％所存在的总碘，那么认为所纯化的mAb是合适的。
通过ELISA测量放射标记的776.1的免疫反应性通过ELISA测定法确定放射标记的776.1的免疫反应性。以100μl/孔溶于DPBS中的1μg/ml具有血凝素(HA)标记的0772P 3-重复(亲和纯化)包被Immunlon 4(Dynatech)96孔板。第二天，以200μl/孔封闭缓冲液(1×PBS，含有1％BSA)在室温下封闭板1小时。将未标记的和放射标记的776.1在封闭缓冲液中稀释到3μg/ml并以150μl/孔一式三份地加入被封闭的板的第一行，向剩余的孔中加入100μl封闭缓冲液。然后将抗体连续三倍稀释，共稀释7次。将平板在室温孵育1小时，接着用含有0.05％Tween-20(PBST；200μl/孔)的DPBS洗涤三次。为了检测信号，向每孔加入100μl 1∶2000稀释的缀合HRP的山羊抗小鼠IgG(Amarsham Biosciences)并在室温孵育1h。用PBS洗涤板3次并通过加入TMB(KPL)底物和H2O2(1∶1比例，100μl/孔)的混合物检测HRP缀合物。将平板孵育10分钟并用平板读出器(Molecular Device)在650nm测量吸光度。通过比较达到50％饱和时放射标记的和未标记的抗体的浓度确定免疫反应性。
用[131I]776.1实施单剂放射免疫治疗(RIT)对携带成熟OVCAR-3肿瘤(理想体积为150mm3到250mm3)的小鼠施用单次静脉内注射溶于0.2ml 0.9％氯化钠的[131I]776.1(小鼠IgG1)。对于所有研究，10只一组的小鼠接受100或300μCi溶于0.9％氯化钠的[131I]776.1。对照组中的小鼠被注射仅0.9％氯化钠或者未标记的776.1，其剂量相当于高剂量放射标记的776.1组中给予的蛋白质剂量。每周测量肿瘤两次。当肿瘤体积大于它们体重的10％时，将小鼠处死。
结果在人卵巢癌的OVCAR-3异种移植肿瘤模型中作为单次静脉内剂量施用的[131I]776.1 IgG1抗体与300μCi剂量的三个研究的IgG1对照和100μCi剂量的三个研究中的两个中的IgG1对照相比有效延缓肿瘤生长。关于这些研究之一的概述，见图12。与盐水对照相比，[131I]776.1IgG1在100μCi和300μCi剂量下的三个研究中的两个研究中可以有效延缓肿瘤生长。在三个研究中的两个，300μCi剂量下的[131I]776.1IgG1表明肿瘤退化，其被定义为获得小于研究开始时起始肿瘤体积的平均肿瘤体积。在一个研究中，与盐水对照相比，[131I]776.1 IgG1治疗组没有观察到肿瘤生长的统计学上的延缓，并且对300μCi[131I]776.1 IgG1剂量组没有观察到退化。然而，在该特定研究开始时起始平均肿瘤体积比剩下的两个研究中的起始平均肿瘤体积显著更大。
用[90Y]776.1放射标记的抗体得到类似结果。具体地，观察到肿瘤生长的显著减小(p＜0.05)。在四个研究中的三个中，在抗体的50μCi和150μCi剂量下观察到生长的显著减小。在这些相同的三个研究中，在最高剂量的[90Y]776.1下观察到肿瘤生长的退化，并且对肿瘤生长的影响相当于或者好于6mg/kg顺铂的3次剂量。
7.0抗体/结合抗原的抗体片段竞争测定ELISA交叉竞争测定用EZ-Link Sulfo-NHS-LC-生物素化试剂盒(PierceBiotechnology，Rockford，IL)，根据生产商的使用说明将所要试验的抗体生物素化，然后在4℃对1L磷酸盐缓冲液透析48小时以除去未反应的生物素化试剂，其间更换两次缓冲液。用溶于碳酸氢盐缓冲液(0.2M Na2CO3/NaHCO3，pH 9.6，Sigma)的1μg/ml 3rpt-0772P 100μl(每孔)4℃下过夜包被96孔板。
第二天，用200μl 1×PBST(1×磷酸盐缓冲液(PBS)，0.05％ Tween20)洗涤板3次并用含有1％牛血清白蛋白(BSA)的1×PBST 100μl室温下封闭1小时。用1×PBST洗涤3次后，从95μl 1×PBST+1％BSA中的0到1000倍过量竞争者抗体(相对于后面步骤加入的标记抗体)得到滴定曲线，该竞争者抗体被加入单独的孔中并在37℃孵育1小时。然后将生物素化的抗体加入5μl 1×PBST+1％BSA，在室温再孵育1小时。所加入的生物素化抗体的浓度为使用下面描述的检测条件，没有竞争者时达到0772P3-rpt蛋白的70％最大结合的浓度。所加入的抗体的量取决于结合特征并且在试验性质的研究中通常通过经验确定。
然后用1×PBST洗涤板三次。为了检测信号，向每孔加入100μl链霉抗生物素-HRP(1∶4000-1∶8000稀释到1×PBST+1％BSA中，Southern Biotechnology Associates，Inc.(Birmingham，Alabama))并在室温孵育1小时。用1×PBST洗涤平板3次。最后向每孔加入TMB底物和H2O2(1∶1比例，KPL)的混合物100μl并用平板读出器(Molecular Devices Corp.，Sunnyvale，CA)测量405nm处的吸光度。为每种抗体一式三份地进行该测定并计算平均值。
用正常小鼠IgG1代替特异竞争者确定非特异竞争。每个实验中还包括空白、各自试剂的对照以及自身竞争。将百分数抑制(减去非特异竞争)作为竞争者竞争的函数作图，并确定IC50或者观察到50％竞争时竞争者的浓度。
FACS交叉竞争测定用EZ-Link Sulfo-NHS-LC-生物素化试剂盒(PierceBiotechnology，Rockford，IL)，根据生产商的使用说明将所要试验的抗体生物素化，然后在4℃对1L磷酸盐缓冲液透析48小时以除去未反应的生物素化试剂，其间更换两次缓冲液。收获培养的OVCAR-3细胞并在FACS缓冲液(1×Dulbecco氏磷酸盐缓冲液(DPBS)，0.05％NaN3，2％BSA)中洗涤。在96孔板中准备竞争测定，总体积50μl。
将20μ10-到1000-倍过量未标记的竞争者抗体(相对于后面步骤加入的生物素化抗体)滴定加入25μl悬浮在FACS缓冲液中的OVCAR-3细胞(4×105)(单独的孔中)，充分混合，分配到96孔板中，并在室温孵育30分钟。然后向含有细胞的每孔加入FACS缓冲液中的生物素化抗体5微升，充分混合，再在室温下孵育30分钟。所用的抗体的量是实现OVCAR-3细胞的最大结合(表达为百分数阳性细胞)的最小浓度。所加入的抗体的量取决于结合特征并且在试验性质的研究中通常通过经验确定。
收集细胞并用200μl FACS缓冲液洗涤细胞两次。为了检测信号，将细胞与50μl 1μg/ml缀合FITC的链霉抗生物素蛋白(用FACS缓冲液制备，Molecular Probes，Eugene，OR)在室温下孵育30分钟。用200μl FACS缓冲液洗涤2次后，将来自每个孔的细胞重悬在400μl FACS缓冲液中并进行FACS分析。根据生产商的推荐使用FACScan仪器和CellQues t软件(Becton Dickinson)实施FACS分析。在每种实验条件下得到的数据代表10,000种事件。每个实验中还包括空白、各自试剂的对照以及自身竞争。将百分数抑制(减去非特异竞争)，或者百分数-阳性染色OVCAR-3细胞的减小作为竞争者竞争的函数作图，并确定IC50或者观察到50％竞争时竞争者的浓度。
如果竞争者的IC50为高于标记抗体的不超过约100倍的浓度时，那么认为抗体竞争。更优选地，如果竞争者的IC50为高于标记抗体的不超过约10倍的浓度时，那么认为抗体竞争。更优选地，如果竞争者的IC50为标记抗体的不超过约等摩尔浓度时，那么认为抗体竞争。
8.0杂交瘤保藏杂交瘤117.1分泌单克隆抗体117.1，根据关于为了专利程序目的的微生物保藏的国际公认的布达佩斯条约，该杂交瘤在2002年8月2日被保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)(10801 UniversityBoulevard，Manassass，Virginia 20110-2209)，保藏号为PTA-4567。
杂交瘤368.1分泌单克隆抗体368.1，根据关于为了专利程序目的的微生物保藏的国际公认的布达佩斯条约，该杂交瘤在2002年8月2日被保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)(10801 UniversityBoulevard，Manassass，Virginia 20110-2209)，保藏号为PTA-4568。
杂交瘤501.1分泌单克隆抗体501.1，根据关于为了专利程序目的的微生物保藏的国际公认的布达佩斯条约，该杂交瘤在2002年8月2日被保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)(10801 UniversityBoulevard，Manassass，Virginia 20110-2209)，保藏号为PTA-4569。
杂交瘤776.1分泌单克隆抗体776.1，根据关于为了专利程序目的的微生物保藏的国际公认的布达佩斯条约，该杂交瘤在2002年8月2日被保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)(10801 UniversityBoulevard，Manassass，Virginia 20110-2209)，保藏号为PTA-4570。
杂交瘤15C9分泌单克隆抗体15C9，根据关于为了专利程序目的的微生物保藏的国际公认的布达佩斯条约，该杂交瘤在2003年4月3日被保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)(10801 UniversityBoulevard，Manassass，Virginia 20110-2209)，保藏号为PTA-5106。
杂交瘤16C7分泌单克隆抗体16C7，根据关于为了专利程序目的的微生物保藏的国际公认的布达佩斯条约，该杂交瘤在2003年4月3日被保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)(10801 UniversityBoulevard，Manassass，Virgina 20110-2209)，保藏号为PTA-5107。
杂交瘤16H9分泌单克隆抗体16H9，根据关于为了专利程序目的的微生物保藏的国际公认的布达佩斯条约，该杂交瘤在2003年4月3日被保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)(10801 UniversityBoulevard，Manassass，Virgina 20110-2209)，保藏号为PTA-5108。
杂交瘤4E7分泌单克隆抗体4E 7，根据关于为了专利程序目的的微生物保藏的国际公认的布达佩斯条约，该杂交瘤在2003年4月3日被保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)(10801 UniversityBoulevard，Manassass，Virginia 20110-2209)，保藏号为PTA-5109。
杂交瘤7A11分泌单克隆抗体7A11，根据关于为了专利程序目的的微生物保藏的国际公认的布达佩斯条约，该杂交瘤在2003年4月3日被保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)(10801 UniverstyBoulevard，Manassass，Virginia 20110-2209)，保藏号为PTA-5110。
杂交瘤7C6分泌单克隆抗体7C6，根据关于为了专利程序目的的微生物保藏的国际公认的布达佩斯条约，该杂交瘤在2003年4月3日被保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)(10801 UniverstyBoulevard，Manassass，Virginia 20110-2209)，保藏号为PTA-5111。
杂交瘤7F10分泌单克隆抗体7F10，根据关于为了专利程序目的的微生物保藏的国际公认的布达佩斯条约，该杂交瘤在2003年4月3日被保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)(10801 UniverstyBoulevard，Manassass，Virginia 20110-2209)，保藏号为PTA-5112。
杂交瘤7G10分泌单克隆抗体7G10，根据关于为了专利程序目的的微生物保藏的国际公认的布达佩斯条约，该杂交瘤在2003年6月4日被保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)(10801 UniversityBoulevard，Manassass，Virgina 20110-2209)，保藏号为5245。
杂交瘤7H1分泌单克隆抗体7H1，根据关于为了专利程序目的的微生物保藏的国际公认的布达佩斯条约，该杂交瘤在2003年4月3日被保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)(10801 UniversityBoulevard，Manassass，Virginia 20110-2209)，保藏号为PTA-5114。
杂交瘤8A1分泌单克隆抗体8A1，根据关于为了专利程序目的的微生物保藏的国际公认的布达佩斯条约，该杂交瘤在2003年4月3日被保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)(10801 UniversityBoulevard，Manassass，Virginia 20110-2209)，保藏号为PTA-5115。
杂交瘤8B5分泌单克隆抗体8B5，根据关于为了专利程序目的的微生物保藏的国际公认的布达佩斯条约，该杂交瘤在2003年4月3日被保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)(10801 UniversityBoulevard，Manassass，Virginia 20110-2209)，保藏号为PTA-5116。
杂交瘤8C3分泌单克隆抗体8C3，根据关于为了专利程序目的的微生物保藏的国际公认的布达佩斯条约，该杂交瘤在2003年6月4日被保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)(10801 UniversityBoulevard，Manassass，Virginia 20110-2209)，保藏号为5246。
杂交瘤8E3分泌单克隆抗体8E3，根据关于为了专利程序目的的微生物保藏的国际公认的布达佩斯条约，该杂交瘤在2003年4月3日被保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)(10801 UniversityBoulevard，Manassass，Virginia 20110-2209)，保藏号为PTA-5118。
杂交瘤8G9分泌单克隆抗体8G9，根据关于为了专利程序目的的微生物保藏的国际公认的布达佩斯条约，该杂交瘤在2003年4月3日被保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)(10801 UniversityBoulevard，Manassass，Virginia 20110-2209)，保藏号为PTA-5119。
杂交瘤325.1分泌单克隆抗体325.1，根据关于为了专利程序目的的微生物保藏的国际公认的布达佩斯条约，该杂交瘤在2003年4月3日被保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)(10801 UniversityBoulevard，Manassass，Virginia 20110-2209)，保藏号为PTA-5120。杂交瘤325.1分泌单克隆抗体325.1，根据关于为了专利程序目的的微生物保藏的国际公认的布达佩斯条约，该杂交瘤在2003年4月3日被保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)(10801 UniversityBoulevard，Manassass，Virginia 20110-2209)，保藏号为PTA-5120。
杂交瘤621.1分泌单克隆抗体621.1，根据关于为了专利程序目的的微生物保藏的国际公认的布达佩斯条约，该杂交瘤在2003年4月3日被保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)(10801 UniversityBoulevard，Manassass，Virginia 20110-2209)，保藏号为PTA-5121。
杂交瘤633.1分泌单克隆抗体633.1，根据关于为了专利程序目的的微生物保藏的国际公认的布达佩斯条约，该杂交瘤在2003年4月3日被保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)(10801 UniversityBoulevard，Manassass，Virginia 20110-2209)，保藏号为PTA-5122。
杂交瘤654.1分泌单克隆抗体654.1，根据关于为了专利程序目的的微生物保藏的国际公认的布达佩斯条约，该杂交瘤在2003年6月4日被保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)(10801 UniversityBoulevard，Manassass，Virginia 20110-2209)，保藏号为5247。
杂交瘤725.1分泌单克隆抗体725.1，根据关于为了专利程序目的的微生物保藏的国际公认的布达佩斯条约，该杂交瘤在2003年4月3日被保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)(10801 UniversityBoulevard，Manassass，Virginia 20110-2209)，保藏号为PTA-5124。
杂交瘤446.1分泌单克隆抗体446.1，根据关于为了专利程序目的的微生物保藏的国际公认的布达佩斯条约，该杂交瘤在2003年9月25日被保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)(10801 UniversityBoulevard，Manassass，Virginia 20110-2209)，保藏号为PTA-5549。
本发明的范围不被此处描述的特定实施方案所限制。实际上，根据前面的描述和附图，除了此处描述的方案，本发明的各种修饰将对本领域技术人员是显而易见的。这些修饰将属于所附权利要求书的范围。
在该说明书中提到的所有出版物、专利和专利申请在此处作为参考文献并入本说明书，就像每个单独的出版物、专利或专利申请在此处被特别和单独指出被并入作为参考一样。此处的参考文献的引用或讨论不应被理解为承认这些参考文献是本申请的现有技术。
序列表<110>Euro-Celtique S.A.
<120>结合细胞缔合的CA 125/0772P的抗体和其使用方法<130>6750-214-228<140>待分配<141>2003-10-15<150>60/485,986<151>2003-07-10<150>60/418,828<151>2003-10-12<160>71<170>FastSEQ for Windows Version 4.0<210>1<211>748<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>CA 125/0772P 3-重复<400>1Ala Ala Gln Pro Ala Arg Arg Ala Arg Arg Thr Lys Leu Phe Thr His1 5 10 15Arg Ser Ser Val Ser Thr Thr Ser Thr Pro Gly Thr Pro Thr Val Tyr20 25 30Leu Gly Ala Ser Lys Thr Pro Ala Ser Ile Phe Gly Pro Ser Ala Ala35 40 45Ser His Leu Leu Ile Leu Phe Thr Leu Asn Phe Thr Ile Thr Asn Leu
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<223>CA 125/0772P 3-重复TM<400>2Ala Ala Gln Pro Ala Arg Arg Ala Arg Arg Thr Lys Leu Phe Thr His1 5 10 15Arg Ser Ser Val Ser Thr Thr Ser Thr Pro Gly Thr Pro Thr Val Tyr20 25 30Leu Gly Ala Ser Lys Thr Pro Ala Ser Ile Phe Gly Pro Ser Ala Ala35 40 45Ser His Leu Leu Ile Leu Phe Thr Leu Asn Phe Thr Ile Thr Asn Leu50 55 60Arg Tyr Glu Glu Asn Met Trp Pro Gly Ser Arg Lys Phe Asn Thr Thr65 70 75 80Glu Arg Val Leu Gln Gly Leu Leu Arg Pro Leu Phe Lys Asn Thr Ser85 90 95Val Gly Pro Leu Tyr Ser Gly Cys Arg Leu Thr Leu Leu Arg Pro Glu100 105 110Lys Asp Gly Glu Ala Thr Gly Val Asp Ala Ile Cys Thr His Arg Pro115 120 125
Asp Pro Thr Gly Pro Gly Leu Asp Arg Glu Gln Leu Tyr Leu Glu Leu130 135 140Ser Gln Leu Thr His Ser Ile Thr Glu Leu Gly Pro Tyr Thr Leu Asp145 150 155 160Arg Asp Ser Leu Tyr Val Asn Gly Phe Thr His Arg Ser Ser Val Pro165 170 175Thr Thr Ser Thr Gly Val Val Ser Glu Glu Pro Phe Thr Leu Asn Phe180 185 190Thr Ile Asn Asn Leu Arg Tyr Met Ala Asp Met Gly Gln Pro Gly Ser195 200 205Leu Lys Phe Asn Ile Thr Asp Asn Val Met Lys His Leu Leu Ser Pro210 215 220Leu Phe Gln Arg Ser Ser Leu Gly Ala Arg Tyr Thr Gly Cys Arg Val225 230 235 240Ile Ala Leu Arg Ser Val Lys Asn Gly Ala Glu Thr Arg Val Asp Leu245 250 255Leu Cys Thr Tyr Leu Gln Pro Leu Ser Gly Pro Gly Leu Pro Ile Lys260 265 270Gln Val Phe His Glu Leu Ser Gln Gln Thr His Gly Ile Thr Arg Leu275 280 285Gly Pro Tyr Ser Leu Asp Lys Asp Ser Leu Tyr Leu Asn Gly Tyr Asn290 295 300Glu Pro Gly Pro Asp Glu Pro Pro Thr Thr Pro Lys Pro Ala Thr Thr305 310 315 320Phe Leu Pro Pro Leu Ser Glu Ala Thr Thr Ala Met Gly Tyr His Leu325 330 335Lys Thr Leu Thr Leu Asn Phe Thr Ile Ser Asn Leu Gln Tyr Ser Pro340 345 350Asp Met Gly Lys Gly Ser Ala Thr Phe Asn Ser Thr Glu Gly Val Leu355 360 365Gln His Leu Leu Arg Pro Leu Phe Gln Lys Ser Ser Met Gly Pro Phe370 375 380Tyr Leu Gly Cys Gln Leu Ile Ser Leu Arg Pro Glu Lys Asp Gly Ala385 390 395 400Ala Thr Gly Val Asp Thr Thr Cys Thr Tyr His Pro Asp Pro Val Gly405 410 415Pro Gly Leu Asp Ile Gln Gln Leu Tyr Trp Glu Leu Ser Gln Leu Thr420 425 430
His Gly Val Thr Gln Leu Gly Phe Tyr Val Leu Asp Arg Asp Ser Leu435 440 445Phe Ile Asn Gly Tyr Ala Pro Gln Asn Leu Ser Ile Arg Gly Glu Tyr450 455 460Gln Ile Asn Phe His Ile Val Asn Trp Asn Leu Ser Asn Pro Asp Pro465 470 475 480Thr Ser Ser Glu Tyr Ile Thr Leu Leu Arg Asp Ile Gln Asp Lys Val485 490 495Thr Thr Leu Tyr Lys Gly Ser Gln Leu His Asp Thr Phe Arg Phe Cys500 505 510Leu Val Thr Asn Leu Thr Met Asp Ser Val Leu Val Thr Val Lys Ala515 520 525Leu Phe Ser Ser Asn Leu Asp Pro Ser Leu Val Glu Gln Val Phe Leu530 535 540Asp Lys Thr Leu Asn Ala Ser Phe His Trp Leu Gly Ser Thr Tyr Gln545 550 555 560Leu Val Asp Ile His Val Thr Glu Met Glu Ser Ser Val Tyr Gln Pro565 570 575Thr Ser Ser Ser Ser Thr Gln His Phe Tyr Leu Asn Phe Thr Ile Thr580 585 590Asn Leu Pro Tyr Ser Gln Asp Lys Ala Gln Pro Gly Thr Thr Asn Tyr595 600 605Gln Arg Asn Lys Arg Asn Ile Glu Asp Ala Leu Asn Gln Leu Phe Arg610 615 620Asn Ser Ser Ile Lys Ser Tyr Phe Ser Asp Cys Gln Val Ser Thr Phe625 630 635 640Arg Ser Val Pro Asn Arg His His Thr Gly Val Asp Ser Leu Cys Asn645 650 655Phe Ser Pro Leu Ala Arg Arg Val Asp Arg Val Ala Ile Tyr Glu Glu660 665 670Phe Leu Arg Met Thr Arg Asn Gly Thr Gln Leu Gln Asn Phe Thr Leu675 680 685Asp Arg Ser Ser Val Leu Val Asp Gly Tyr Ser Pro Asn Arg Asn Glu690 695 700Pro Leu Thr Gly Asn Ser Asp Leu Pro Phe Trp Ala Val Ile Leu Ile705 710 715 720Gly Leu Ala Gly Leu Leu Gly Leu Ile Thr Cys Leu Ile Cys Gly Val725 730 735
Leu Val Thr Thr Arg Arg Arg Lys Lys Glu Gly Glu Tyr Asn Val Gln740 745 750Gln Gln Cys Pro Gly Tyr Tyr Gln Ser His Leu Asp Leu Glu Asp Leu755 760 765Gln Asn Ser Ala Asp Ile Gln His Ser Gly Gly Arg Ser Ser Leu Glu770 775 780Gly Pro Arg Phe Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Asn Met785 790 795 800His Thr Gly His His His His His His805<210>3<211>12<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>117.1 VH1 CDR<400>3Gly Phe Ser Leu Ser Thr Pro Gly Met Gly Val Gly1 5 10<210>4<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>117.1 VH2 CDR<400>4His Ile Trp Trp Asp Asp Phe Lys Arg Asp Asn Pro Ala Leu Lys Ser1 5 10 15<210>5
<211>12<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>117.1 VH3 CDR<400>5Val Asp Gly Asn Phe Leu Ser Trp Tyr Phe Asp Val1 5 10<210>6<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>117.1 VL1 CDR<400>6Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His1 5 10 15<210>7<211>7<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>117.1 VL2 CDR<400>7Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser1 5
<210>8<211>9<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>117.1 VL3 CDR<400>8Ser Gln Ser Arg Tyr Val Pro Glu Thr1 5<210>9<211>10<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>368.1 VH1 CDR<400>9Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Phe Tyr Met His1 5 10<210>10<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>368.1 VH2 CDR<400>10Tyr Val Ser Cys Tyr Thr Gly Ala Thr Thr Tyr Thr Gln Lys Phe Lys1 5 10 15
Gly<210>11<211>9<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>368.1 VH3 CDR<400>11Glu Gly Asp Tyr Tyr Ser Met Asp Phe1 5<210>12<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>368.1 VL1 CDR<400>12Arg Ser Ser Gln Ser Leu Glu Arg Thr Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His1 5 10 15<210>13<211>7<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>368.1 VL2 CDR
<400>13Lys Val Ser Ser Arg Phe Ser1 5<210>14<211>9<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>368.1 VL3 CDR<400>14Ser Gln Thr Thr His Gly Pro Pro Thr1 5<210>15<211>10<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>501.1 VH1 CDR<400>15Gly Tyr Ile Phe Thr Asp Tyr Gly Met Asn1 5 10<210>16<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>501.1 VH2 CDR
<400>16Cys Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Thr Ile Tyr Ser Asp Asp Phe Arg1 5 10 15Gly<210>17<211>9<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>501.1 VH3 CDR<400>17Gly Asn Tyr Arg Asp Ala Ile Asp Tyr1 5<210>18<211>11<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>501.1 VL1 CDR<400>18Lys Ala Ser Gln Asp Ile Lys Ser Tyr Leu Ser1 5 10<210>19<211>7<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>501.1 VL2 CDR<400>19Tyr Ala Thr Thr Leu Ala Asp1 5<210>20<211>9<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>501.1 VL3 CDR<400>20Leu His His Asp Glu Ser Pro Phe Thr1 5<210>21<211>10<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>776.1 VH1 CDR<400>21Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Asn Ile His1 5 10<210>22<211>15<212>PRT
<213>人工序列<220>
<223>776.1 VH2 CDR<400>22Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Val Ser Asp Tyr Asn Gln Asn Phe1 5 10 15<210>23<211>12<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>776.1 VH3 CDR<400>23Arg Trp Asp Phe Gly Ser Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr1 5 10<210>24<211>10<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>776.1 VL1 CDR<400>24Arg Ala Ser Ser Ser Val Ile Tyr Met Cys1 5 10<210>25<211>7
<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>776.1 VL2 CDR<400>25Gly Thr Ser Thr Leu Ala Ser1 5<210>26<211>9<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>776.1 VL3 CDR<400>26Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr1 5<210>27<211>131<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>117.1轻链多肽可变区(117.1L)<400>27Met Lys Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Met Phe Trp Ile Pro Gly1 5 10 15Ser Ser Ser Asp Ala Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val20 25 30Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu
35 40 45Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro50 55 60Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser65 70 75 80Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr85 90 95Leu Arg Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys100 105 110Ser Gln Ser Arg Tyr Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu115 120 125Glu Ile Lys130<210>28<211>141<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>117.1重链多肽可变区 (117.1H)<400>28Met Gly Arg Leu Thr Ser Ser Phe Leu Leu Leu Ile Val Pro Ala Tyr1 5 10 15Val Leu Ser Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln20 25 30Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu35 40 45Ser Thr Pro Gly Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys50 55 60Gly Leu Glu Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Phe Lys Arg Asp65 70 75 80Asn Pro Ala Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Ser85 90 95Ser Gln Val Phe Leu Lys Ile Ala Ser Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala
100 105 110Thr Tyr Tyr Cys Val Arg Val Asp Gly Asn Phe Leu Ser Trp Tyr Phe115 120 125Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser130 135 140<210>29<211>131<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>368.1轻链多肽可变区(368.1L)<400>29Met Lys Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Met Phe Trp Ile Pro Ala1 5 10 15Ser Ser Ser Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val20 25 30Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu35 40 45Glu Arg Thr Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro50 55 60Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Ser Arg Phe Ser65 70 75 80Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr85 90 95Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Ile Tyr Phe Cys100 105 110Ser Gln Thr Thr His Gly Pro Pro Thr Cys Gly Gly Gly Thr Lys Leu115 120 125Glu Ile Lys130<210>30
<211>137<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>368.1重链多肽可变区(368.1H)<400>30Met Gly Trp Ile Trp Ile Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly1 5 10 15Val His Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Arg20 25 30Thr Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe35 40 45Thr Gly Phe Tyr Met His Trp Val Lys Gln Ser Leu Gly Lys Ser Leu50 55 60Glu Trp Ile Gly Tyr Val Ser Cys Tyr Thr Gly Ala Thr Thr Tyr Thr65 70 75 80Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser85 90 95Thr Ala Tyr Met Gln Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val100 105 110Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Gly Asp Tyr Tyr Ser Met Asp Phe Trp Gly115 120 125Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser130 135<210>31<211>128<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>501.1轻链多肽可变区(501.1L)
<400>31Met Asp Met Arg Ala Pro Ala Gln Phe Phe Gly Ile Leu Leu Leu Trp1 5 10 15Phe Pro Gly Ile Arg Cys Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser20 25 30Ile Tyr Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser35 40 45Gln Asp Ile Lys Ser Tyr Leu Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Trp Lys50 55 60Ser Pro Lys Thr Leu Ile Tyr Tyr Ala Thr Thr Leu Ala Asp Gly Val65 70 75 80Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Leu Ile85 90 95Ile Asn Ser Leu Glu Ser Asp Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Leu His100 105 110His Asp Glu Ser Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile115 120 125<210>32<211>137<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>501.1重链多肽可变区(501.1H)<400>32Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser1 5 10 15Ala Gln Ala Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys20 25 30Pro Gly Glu Thr Val Gln Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe35 40 45Thr Asp Tyr Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu50 55 60Lys Trp Met Gly Cys Ile Ash Thr Tyr Thr Gly Glu Thr Ile Tyr Ser
65 70 75 80Asp Asp Phe Arg Gly Arg Phe Ala Ile Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser85 90 95Thr Ala Phe Ile Gln Ile Asn Asn Leu Lys Asn Glu Asp Ala Ala Thr100 105 110Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Asn Tyr Arg Asp Ala Ile Asp Tyr Trp Gly115 120 125Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser130 135<210>33<211>127<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>776.1轻链多肽可变区(776.1L)<400>33Met Asp Phe Gln Val Gln Ile Phe Ser Phe Leu Leu Ile Ser Ala Ser1 5 10 15Val Ile Met Ser Arg Gly Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile20 25 30Leu Phe Ala Ser Pro Gly Glu Thr Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser35 40 45Ser Ser Val Ile Tyr Met Cys Trp Asn Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser50 55 60Pro Lys Pro Trp Ile Tyr Gly Thr Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro65 70 75 80Thr Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile85 90 95Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp100 105 110Ser Ser Asn Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile115 120 125
<210>34<211>139<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>776.1重链多肽可变区(776.1H)<400>34Met Gly Trp Ser Trp Ile Phe Leu Phe Leu Leu Ser Gly Thr Ala Gly1 5 10 15Val His Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys20 25 30Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe35 40 45Thr Asp Tyr Asn Ile His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ile Leu50 55 60Glu Trp Ile Gly Tyr Ile Tyr Pro Tyr Asn Gly Val Ser Asp Tyr Asn65 70 75 80Gln Asn Phe Lys Ser Lys Ala Thr Leu Ile Val Asp Asn Ser Ser Asn85 90 95Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val100 105 110Tyr Tyr Cys Ala Arg Trp Asp Phe Gly Ser Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr115 120 125Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser130 135<210>35<211>393<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>117.1轻链多肽可变区(117.1L)
<400>35atgaagttgc ctgttaggct gttggtgctg atgttctgga ttcctggttc cagcagtgat 60gctgtgatga cccaaactcc actctccctg cctgtcagtc ttggagatca ggcctccatc 120tcttgcagat ctagtcagag ccttgtacac agtaatggaa acacctattt acattggtac 180ctgcagaagc caggccagtc tccaaaactc ctgatctaca aagtttccaa ccgattttct 240ggggtcccag acaggttcag tggcagtgga tcagggacag atttcacact caggatcagc 300agagtggagg ctgaggatct gggagtttat ttctgctctc aaagtagata tgttccgtgg 360acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaa 393<210>36<211>423<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>117.1重链多肽可变区(117.1H)<400>36atgggcaggc ttacttcttc attcctgcta ctgattgtcc ctgcatatgt cctgtcccag 60gttactctga aagagtctgg ccctgggata ttgcagccct cccagaccct cagtctgact 120tgttctttct ctgggttttc actgagcact cctggtatgg gtgtaggctg gattcgtcag 180ccatcaggga agggtctgga gtggctggca cacatttggt gggatgattt caagcgcgat 240aatccagccc ttaagagccg actgactatc tctaaggata cctccagcag ccaggttttc 300ctcaaaatcg ccagtgtgga cactgcagat actgccacat attactgtgt tcgagtggat 360ggtaacttcc tctcctggta tttcgatgtc tggggcgctg ggaccacggt caccgtctcc 420tca 423<210>37<211>393<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>368.1轻链多肽可变区(368.1L)<400>37atgaagttgc ctgttaggct gttggtgctg atgttctgga ttcctgcttc cagcagtgat 60gttgtgatga cccaaactcc actctccctg cctgtcagtc ttggagatca agcctccatc 120
tcttgcagat ctagtcagag ccttgaacgc actaatggaa acacctattt acattggtac 180ctgcagaagc caggccagtc tccaaaactc ctgatctaca aagtttccag ccgattttct 240ggggtcccag ataggttcag tggcagtgga tcagggacag atttcacact caagatcagt 300agagtggagg ctgaggatct gggaatttat ttctgttctc aaactacaca tggtcctccg 360acgtgcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaa 393<210>38<211>411<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>368.1重链多肽可变区(368.1H)<400>38atgggatgga tctggatctt tctcttcctc ctgtcaggaa ctgcaggtgt ccactctgag 60gtccagctgc agcagtctgg acctgagtta gtgaggactg gggcttcagt gaagatatcc 120tgcaaggctt ctggttactc attcactggt ttctacatgc actgggtcaa gcagagcctt 180ggaaagagcc ttgagtggat tggatatgtt agttgttaca ctggtgctac tacctacacc 240cagaagttca agggcaaggc cacatttact gttgacacat cctccagcac agcctacatg 300caactcaaca gcctgacatc tgaagactct gcggtctatt actgtgcaag agaaggggat 360tactattcta tggacttctg gggtcaagga acctcagtca ccgtctcctc a 411<210>39<211>386<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>501.1轻链多肽可变区(501.1L)<400>39atggacatga gggcccctgc tcagtttttt gggatcttgt tgctctggtt tccaggtatc 60agatgtgaca tcaagatgac ccagtctcca tcgtccattt atgcatcgct gggagagagg 120gtcactataa cttgcaaggc gagtcaggac attaaaagct atttaagctg gtaccaacag 180aaaccctgga aatctcctaa gaccctgatc tattatgcaa caaccttggc agatggggtc 240ccatcaagat tcagtggcag tggatctggg caagattatt ctctaatcat caacagcctg 300gagtctgacg atatagctac ttatttctgt ctacaccatg atgagagccc attcacgttc 360
ggctcgggga caaaattgga aataaa 386<210>40<211>411<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>501.1重链多肽可变区(501.1H)<400>40atggcttggg tgtggacctt gctgttcctg atggcagctg cccaaagtgc ccaagcacag 60atccagttgg tgcagtctgg acctgagctg aagaagcctg gagagacagt ccagatctcc 120tgcaaggctt ctggctatat cttcacagac tatggaatga actgggtgaa acaggctcca 180ggaaagggtt taaaatggat gggctgtata aacacctaca ctggagagac aatatatagt 240gatgacttca ggggacggtt tgccatctct ttggaaacct ctgccagcac tgcctttatt 300cagatcaaca acctcaaaaa tgaggacgcg gcaacatatt tctgtgcaag gggaaattac 360agggatgcta ttgactattg gggtcaagga acctcagtca ccgtctcctc a 411<210>41<211>383<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>776.1轻链多肽可变区(776.1L)<400>41atggattttc aagtgcagat tttcagcttc ctgctaatca gtgcttcagt cataatgtcc 60agaggacaaa ttgttctctc ccagtctcca gcaatcctgt ttgcatctcc aggggagacg 120gtcacaatga cttgcagggc cagttcaagt gtaatttaca tgtgttggaa tcagcagaag 180ccaggatcct cccccaaacc ctggatttat ggcacatcca ccctggcttc tggagtccct 240actcgcttca gtggcagtgg gtctgggacc tcttactctc tcacaatcag cagagtagag 300gctgaagatg ctgccactta ttactgccag cagtggagta gtaacccatt cacgttcggc 360tcggggacaa agttggaaat aaa 383<210>42<211>417
<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>776.1重链多肽可变区(776.1H)<400>42atgggatgga gctggatctt tctcttcctc ctgtcaggaa ctgcaggcgt ccactctgag 60gtccagcttc agcagtcagg acctgagctg gtgaaacctg gggcctcagt gaagatatcc 120tgcaaggctt ctggatacac attcactgac tacaacattc actgggtgaa acagagccat 180ggaaagatcc ttgagtggat tggatatatt tatccttata atggtgtttc tgactacaac 240cagaatttca agagcaaggc cacattgatt gtagacaatt cctccaacac agcctacatg 300gaactccgca gcctgacatc tgaggactct gcagtctatt attgtgcaag atgggacttc 360ggtagtggct actactttga ctactggggc caaggcacca ctctcacagt ctcctca417<210>43<211>45<212>RNA<213>人工序列<220>
<223>引物(见章节6.6)<400>43rcgacuggag cacgaggaca cugacaugga cugaaggagu agaaa 45<210>44<211>54<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物(见章节6.6)<400>44gctgtcaacg atacgctacg taacggcatg acagtgtttt tttttttttt tttt 54<210>45
<211>30<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物(见章节6.6)<400>45ayctccacac acaggrrcca gtggatagac30<210>46<211>21<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物(见章节6.6)<400>46ggatacagtt ggtgcagcatc 21<210>47<211>23<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物(见章节6.6)<400>47cgactggagc acgaggacac tga 23<210>48<211>20<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物(见章节6.6)<400>48attaaccctc actaaaggga 20<210>49<211>20<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物(见章节6.6)<400>49taatacgact cactataggg 20<210>50<211>20<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物(见章节6.6)<400>50attaaccctc actaaaggga 20<210>51<211>20<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>引物(见章节6.6)<400>51taatacgact cactataggg 20
<210>52<211>383<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>725.1轻链多肽可变区(725.1L)<400>52atggattttc aagtgcagat tttcagcttc ctgctaatca gtgcttcagt cataatgtcc 60agaggacaaa ttattctctc ccagtctcca gcaatcctgt ctgcatctcc aggggagaag 120gtcacaatga cttgcagggc cagttcaagt gtaagttcca ttcactggta ccagcagaag 180ccagaatcct cccccaaacc ctggatttac gccacatcca acctggcttc tggagtccct 240gttcgcttca gtggcagtgg gtctgggacc tcttatactc tcacaatcag cagaatggag 300gctgcagatg ctgccactta ttactgccag cagtggagta ttgatccagc cacgttcgga 360ggggggacca agctggaaat aaa 383<210>53<211>135<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>725.1重链多肽可变区(725.1H)<400>53Met Ala Trp Val Trp Thr Leu Leu Phe Leu Met Ala Ala Ala Gln Ser1 5 10 15Ala Gln Ala Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys20 25 30Pro Gly Glu Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe35 40 45Thr Asn Tyr Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu50 55 60Lys Trp Met Gly Trp Ile Asn Ala Tyr Ile Gly Glu Pro Thr Tyr Ala65 70 75 80Asp Asp Phe Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Ala Ser Thr His
85 90 95Thr Ala Tyr Leu Gln Ile Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Thr100 105 110Tyr Phe Cys Ala Ser Gly Gly Asn Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly115 120 125Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser130 135<210>54<211>127<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>725.1轻链多肽可变区(725.1L)<400>54Met Asp Phe Gln Val Gln Ile Phe Ser Phe Leu Leu Ile Ser Ala Ser1 5 10 15Val Ile Met Ser Arg Gly Gln Ile Ile Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile20 25 30Leu Ser Ala Ser Pro Gly Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser35 40 45Ser Ser Val Ser Ser Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Ser Ser50 55 60Pro Lys Pro Trp Ile Tyr Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro65 70 75 80Val Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Thr Leu Thr Ile85 90 95Ser Arg Met Glu Ala Ala Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp100 105 110Ser Ile Asp Pro Ala Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile115 120 125<210>55
<211>141<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>16H9重链多肽可变区(16H9H)<400>55Met Lys Cys Ser Trp Val Ile Phe Phe Leu Met Ala Val Val Thr Gly1 5 10 15Val Asn Ser Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys20 25 30Pro Gly Ala Ser Val Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Asn Ile35 40 45Lys Asp Thr Tyr Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu50 55 60Glu Trp Ile Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Asp65 70 75 80Pro Lys Phe Gln Gly Lys Ala Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn85 90 95Thr Ala Tyr Val Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val100 105 110Tyr Tyr Cys Ala Ser Ser Asp Ile Tyr Tyr Gly Asn Pro Gly Gly Phe115 120 125Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala130 135 140<210>56<211>129<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>16H9轻链多肽可变区(16H9L)<400>56
Met Asp Phe Gln Val Gln Ile Phe Ser Phe Leu Leu Ile Ser Ala Ser1 5 10 15Val Ile Met Ser Arg Gly Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile20 25 30Met Ser Ala Ser Leu Gly Glu Arg Val Thr Met Thr Cys Thr Ala Ser35 40 45Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly50 55 60Ser Ser Pro Lys Leu Trp Ile Tyr Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly65 70 75 80Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu85 90 95Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys his100 105 110Gln Tyr His Arg Ser Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu115 120 125Ile<210>57<211>406<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>725.1重链多肽可变区(725.1H)<400>57atggcttggg tgtggacctt gctattcctg atggcagctg cccaaagtgc ccaagcacag 60atccagttgg tgcagtctgg acctgaactg aagaagcctg gagagacagt caagatctcc 120tgcaaggctt ctggatattc cttcacaaac tatggaatga actgggtgaa gcaggctcca 180gggaagggtt taaagtggat gggctggata aacgcctaca ttggagagcc aacatatgct 240gatgacttca agggacgatt tgccttctct ctggaagcct ctacccacac tgcctatttg 300cagatcaaca gcctcaaaag tgaggacacg gctacatatt tctgtgcaag tgggggtaac 360tcccttgact tttggggcca aggcaccact ctcacagtct cctcag406<210>58
<211>423<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>16H9重链多肽可变区(16H9H)<400>58atgaaatgca gctgggttat cttcttcctg atggcagtgg ttacaggggt caattcagag 60gttcagctgc agcagtctgg ggcagagctt gtgaagccag gggcctcagt caagttgtcc 120tgcacagctt ctggcttcaa cattaaagac acctatatgc actgggtgaa gcagaggcct 180gaacagggcc tggagtggat tggaaggatt gatcctgcga atggtaatac taaatatgac 240ccgaagttcc agggcaaggc cactataaca gcagacacat cctccaacac agcctacgtg 300cagctcagca gcctgacatc tgaggacact gccgtctatt actgtgctag tagtgacatc 360tactatggta accccggggg gtttgcttac tggggccaag ggactctggt cactgtctct 420gca 423<210>59<211>389<212>DNA<213>人工序列<220>
<223>16H9轻链多肽可变区(16H9L)<400>59atggattttc aggtgcagat tttcagcttc ctgctaatca gtgcctcagt cataatgtcc 60agaggacaaa ttgttctcac ccagtctcca gcaatcatgt ctgcatctct aggggaacgg 120gtcaccatga cctgcactgc cagctcaagt gtaagttcca gttacttgca ctggtaccag 180cagaagccag gatcctcccc caaactctgg atttatagca catccaacct ggcttctgga 240gtcccagctc gcttcagtgg cagtgggtct gggacctctt actctctcac aatcagcagc 300atggaggctg aagatgctgc cacttattac tgccaccagt atcatcgttc cccattcacg 360ttcggctcgg ggacaaagtt ggaaataaa 389<210>60<211>10<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>725.1 VH1 CDR<400>60Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr Gly Met Asn1 5 10<210>61<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>725.1 VH2 CDR<400>61Trp Ile Asn Ala Tyr Ile Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Asp Phe Lys1 5 10 15Gly<210>62<211>7<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>725.1 VH3 CDR<400>62Gly Gly Asn Ser Leu Asp Phe1 5<210>63
<211>10<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>725.1 VL1 CDR<400>63Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ile His1 5 10<210>64<211>7<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>725.1 VL2 CDR<400>64Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser1 5<210>65<211>9<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>725.1 VL3 CDR<400>65Gln Gln Trp Ser Ile Asp Pro Ala Thr1 5
<210>66<211>10<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>16H9 VH1 CDR<400>66Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Met His1 5 10<210>67<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>16H9 VH2 CDR<400>67Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe Gln1 5 10 15Gly<210>68<211>13<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>16H9 VH3 CDR<400>68Ser Asp Ile Tyr Tyr Gly Asn Pro Gly Gly Phe Ala Tyr
15 10<210>69<211>12<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>16H9 VL1 CDR<400>69Thr Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu His1 5 10<210>70<211>7<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>16H9 VL2 CDR<400>70Ser Thr Ser Asn Leu Ala Ser1 5<210>71<211>9<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>16H9 VL3 CDR<400>71
His Gln Tyr His Arg Ser Pro Phe Thr1 权利要求
1.分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其相对于脱落CA125/0772P多肽优选结合细胞缔合的CA125/0772P多肽。
2.权利要求1的分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其中在ELISA竞争测定中，在脱落CA125/0772P比图1的肽过量25倍(重量/重量)的情况下，该抗体或抗体片段显示出对图1肽的结合小于约25％的抑制。
3.权利要求2的分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其中在ELISA竞争测定中，在脱落CA125/0772P比图1的肽过量25倍(重量/重量)的情况下，该抗体或抗体片段显示出对图1肽的结合小于约20％的抑制。
4.权利要求3的分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其中在ELISA竞争测定中，在脱落CA125/0772P比图1的肽过量25倍(重量/重量)的情况下，该抗体或抗体片段显示出对图1肽的结合小于约15％的抑制。
5.权利要求4的分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其中在ELISA竞争测定中，在脱落CA125/0772P比图1的肽过量25倍(重量/重量)的情况下，该抗体或抗体片段显示出对图1肽的结合小于约10％的抑制。
6.权利要求5的分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其中在ELISA竞争测定中，在脱落CA125/0772P比图1的肽过量25倍(重量/重量)的情况下，该抗体或抗体片段显示出对图1肽的结合小于约5％的抑制。
7.权利要求1的分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其中在流式细胞术测定中，该抗体或抗体片段显示出通过百分数阳性细胞所测量的IC50为至少约0.05mg/ml脱落CA125/0772P。
8.权利要求7的分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其中在流式细胞术测定中，该抗体或抗体片段显示出通过百分数阳性细胞所测量的IC50为至少约0.25mg/ml脱落CA125/0772P。
9.权利要求8的分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其中在流式细胞术测定中，该抗体或抗体片段显示出通过百分数阳性细胞所测量的IC50为至少约0.5mg/ml脱落CA125/0772P。
10.权利要求9的分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其中在流式细胞术测定中，该抗体或抗体片段显示出通过百分数阳性细胞所测量的IC50为至少约0.75mg/ml脱落CA125/0772P。
11.权利要求10的分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其中在流式细胞术测定中，该抗体或抗体片段显示出通过百分数阳性细胞所测量的IC50为至少约1.0mg/ml脱落CA125/0772P。
12.权利要求1的分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其中该抗体或抗体片段结合图1的肽，但是不能检测到对脱落CA125/0772P的结合。
13.权利要求1的分离的抗体，其中该抗体是IgG类抗体。
14.权利要求13的分离的抗体，其中该抗体是IgG1同种型。
15.权利要求1的分离的抗体，其中该抗体是单克隆抗体。
16.权利要求15的分离的抗体，其中该抗体是嵌合单克隆抗体。
17.权利要求16的分离的抗体，其中嵌合单克隆抗体含有Cγ1恒定区。
18.权利要求16的分离的抗体，其中嵌合单克隆抗体含有Cγ4恒定区。
19.权利要求1的分离的抗体，其中该抗体是人源化单克隆抗体。
20.权利要求15的分离的抗体，其中该抗体是人单克隆抗体。
21.权利要求1的分离的抗体，其中该抗体是双特异性抗体。
22.权利要求1的分离的抗体，其中该抗体是多特异性抗体。
23.权利要求1的分离的抗体，其中该抗体是嵌合抗体。
24.权利要求1的分离的抗体，其中该抗体是单链抗体、二硫键连接的Fvs、单链Fvs，或抗独特型抗体。
25.权利要求1的结合抗原的抗体片段，其中结合抗原的抗体片段是Fab片段、F(ab’)2片段、含有VL的片段、含有VH的片段，或含有互补决定区(CDR)的片段。
26.杂交瘤4E7(ATCC记录号PTA-5109)、杂交瘤7A11(ATCC记录号PTA-5110)、杂交瘤7C6(ATCC记录号PTA-5111)、杂交瘤7F10(ATCC记录号PTA-5112)、杂交瘤7G10(ATCC记录号PTA-5245)、杂交瘤7H1(ATCC记录号PTA-5114)、杂交瘤8A1(ATCC记录号PTA-5115)、杂交瘤8B5(ATCC记录号PTA-5116)、杂交瘤8C3(ATCC记录号PTA-5246)、杂交瘤8E3(ATCC记录号PTA-5118)、杂交瘤8G9(ATCC记录号PTA-5119)、杂交瘤15C9(ATCC记录号PTA-5106)、杂交瘤16C7(ATCC记录号PTA-5107)、杂交瘤16H9(ATCC记录号PTA-5108)、杂交瘤117.1(ATCC记录号PTA-4567)、杂交瘤325.1(ATCC记录号PTA-5120)、杂交瘤368.1(ATCC记录号PTA-4568)、杂交瘤446.1(ATCC记录号PTA-5549)、杂交瘤501.1(ATCC记录号PTA-4569)、杂交瘤621.1(ATCC记录号PTA-5121)、杂交瘤633.1(ATCC记录号PTA-5122)、杂交瘤654.1(ATCC记录号PTA-5247)、杂交瘤725.1(ATCC记录号PTA-5124)、或杂交瘤776.1(ATCC记录号PTA-4570)产生的单克隆抗体。
27.与权利要求26的单克隆抗体竞争结合的单克隆抗体。
28.保藏为杂交瘤4E7(ATCC记录号PTA-5109)、杂交瘤7A11(ATCC记录号PTA-5110)、杂交瘤7C6(ATCC记录号PTA-5111)、杂交瘤7F10(ATCC记录号PTA-5112)、杂交瘤7G10(ATCC记录号PTA-5245)、杂交瘤7H1(ATCC记录号PTA-5114)、杂交瘤8A1(ATCC记录号PTA-5115)、杂交瘤8B5(ATCC记录号PTA-5116)、杂交瘤8C3(ATCC记录号PTA-5246)、杂交瘤8E3(ATCC记录号PTA-5118)、杂交瘤8G9(ATCC记录号PTA-5119)、杂交瘤15C9(ATCC记录号PTA-5106)、杂交瘤16C7(ATCC记录号PTA-5107)、杂交瘤16H9(ATCC记录号PTA-5108)、杂交瘤117.1(ATCC记录号PTA-4567)、杂交瘤325.1(ATCC记录号PTA-5120)、杂交瘤368.1(ATCC记录号PTA-4568)、杂交瘤446.1(ATCC记录号PTA-5549)、杂交瘤501.1(ATCC记录号PTA-4569)、杂交瘤621.1(ATCC记录号PTA-5121)、杂交瘤633.1(ATCC记录号PTA-5122)、杂交瘤654.1(ATCC记录号PTA-5247)、杂交瘤725.1(ATCC记录号PTA-5124)、或杂交瘤776.1(ATCC记录号PTA-4570)的杂交瘤。
29.权利要求1的分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其中该抗体或结合抗原的抗体片段含有包含SEQ ID NO27中描绘的氨基酸序列的轻链可变区。
30.权利要求1的分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其中该抗体或结合抗原的抗体片段含有包含SEQ ID NO29中描绘的氨基酸序列的轻链可变区。
31.权利要求1的分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其中该抗体或结合抗原的抗体片段含有包含SEQ ID NO31中描绘的氨基酸序列的轻链可变区。
32.权利要求1的分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其中该抗体或结合抗原的抗体片段含有包含SEQ ID NO33中描绘的氨基酸序列的轻链可变区。
33.权利要求1的分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其中该抗体或结合抗原的抗体片段含有包含SEQ ID NO54中描绘的氨基酸序列的轻链可变区。
34.权利要求1的分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其中该抗体或结合抗原的抗体片段含有包含SEQ ID NO56中描绘的氨基酸序列的轻链可变区。
35.权利要求1的分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其中该抗体或结合抗原的抗体片段含有包含SEQ ID NO28中描绘的氨基酸序列的重链可变区。
36.权利要求1的分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其中该抗体或结合抗原的抗体片段含有包含SEQ ID NO30中描绘的氨基酸序列的重链可变区。
37.权利要求1的分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其中该抗体或结合抗原的抗体片段含有包含SEQ ID NO32中描绘的氨基酸序列的重链可变区。
38.权利要求1的分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其中该抗体或结合抗原的抗体片段含有包含SEQ ID NO34中描绘的氨基酸序列的重链可变区。
39.权利要求1的分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其中该抗体或结合抗原的抗体片段含有包含SEQ ID NO53中描绘的氨基酸序列的重链可变区。
40.权利要求1的分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其中该抗体或结合抗原的抗体片段含有包含SEQ ID NO55中描绘的氨基酸序列的重链可变区。
41.权利要求29的分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其中该抗体或结合抗原的抗体片段含有包含SEQ ID NO28中描绘的氨基酸序列的重链可变区。
42.权利要求30的分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其中该抗体或结合抗原的抗体片段含有包含SEQ ID NO30中描绘的氨基酸序列的重链可变区。
43.权利要求31的分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其中该抗体或结合抗原的抗体片段含有包含SEQ ID NO32中描绘的氨基酸序列的重链可变区。
44.权利要求32的分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其中该抗体或结合抗原的抗体片段含有包含SEQ ID NO34中描绘的氨基酸序列的重链可变区。
45.权利要求33的分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其中该抗体或结合抗原的抗体片段含有包含SEQ ID NO53中描绘的氨基酸序列的重链可变区。
46.权利要求34的分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其中该抗体或结合抗原的抗体片段含有包含SEQ ID NO55中描绘的氨基酸序列的重链可变区。
47.分离的核酸分子，其含有编码权利要求29到40任一项的抗体或结合抗原的抗体片段的可变链区的核苷酸序列。
48.权利要求41的核酸分子，其中该核酸分子含有SEQ IDNO35、36、37、38、39、40、41、42、52、57、58或59的核苷酸序列。
49.权利要求1的分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其中在BIAcore亲和测定中测量到该抗体或结合抗原的抗体片段结合图1的肽的Kd小于约100nM。
50.权利要求49的分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其中在BIAcore亲和测定中测量到该抗体或结合抗原的抗体片段结合图1的肽的Kd小于约10nM。
51.权利要求50的分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其中在BIAcore亲和测定中测量到该抗体或结合抗原的抗体片段结合图1的肽的Kd小于约1nM。
52.权利要求51的分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其中在BIAcore亲和测定中测量到该抗体或结合抗原的抗体片段结合图1的肽的Kd小于约100pM。
53.权利要求52的分离的抗体，或者结合抗原的抗体片段，其中在BIAcore亲和测定中测量到该抗体或结合抗原的抗体片段结合图1的肽的Kd小于约10pM。
54.权利要求1的抗体或结合抗原的抗体片段，其中该抗体或结合抗原的抗体片段被氨基酸置换、缺失、或加入，或它们的组合修饰，并且相对于相应来修饰的抗体或结合抗原的抗体片段对细胞缔合的CA125/0772P具有相同或更大的亲和性。
55.权利要求1的分离的抗体或结合抗原的抗体片段，其中该抗体或结合抗原的抗体片段被氨基酸置换、缺失、或加入，或它们的组合修饰，并且其中该抗体或结合抗原的抗体片段与相应未修饰的抗体或结合抗原的抗体片段相比显示出相同或更长的血清半寿期。
56.权利要求1的分离的抗体或结合抗原的抗体片段，其中该抗体或抗体片段在ADCC测定中介导CA125/0772P-阳性肿瘤细胞的裂解。
57.权利要求56的分离的抗体，或结合抗原的抗体片段，其中在ADCC测定中，在效应物靶标比例为50∶1，抗体或抗原结合片段的浓度为5.0μg/ml下，该抗体或抗体片段介导CA125/0772P-阳性肿瘤细胞的至少约10％裂解。
58.权利要求56的分离的抗体，或结合抗原的抗体片段，其中在ADCC测定中，在效应物靶标比例为25∶1，抗体或抗原结合片段的浓度为5.0μg/ml下，该抗体或抗体片段介导CA125/0772P-阳性肿瘤细胞的至少约10％裂解。
59.权利要求56的分离的抗体，或结合抗原的抗体片段，其中在ADCC测定中，在效应物靶标比例为12.5∶1，抗体或抗原结合片段的浓度为5.0μg/ml下，该抗体或抗体片段介导CA125/0772P-阳性肿瘤细胞的至少约10％裂解。
60.权利要求56的分离的抗体，或结合抗原的抗体片段，其中在ADCC测定中，在效应物靶标比例为12.5∶1，抗体或抗原结合片段的浓度为50ng/ml下，该抗体或抗体片段介导CA125/0772P-阳性肿瘤细胞的至少约10％裂解。
61.权利要求1的分离的抗体，或结合抗原的抗体片段，其中该抗体或抗体片段在依赖补体的细胞毒性(CDC)测定中介导CA125/0772P-阳性肿瘤细胞的裂解。
62.权利要求61的分离的抗体，或结合抗原的抗体片段，其中该抗体或抗体片段介导从在5μg/ml抗体或结合抗原的抗体片段下约15％裂解到约0.1μg/ml抗体或结合抗原的抗体片段下约95％裂解。
63.权利要求1的分离的抗体，或结合抗原的抗体片段，其中该抗体或抗体片段抑制CA125/0772P-阳性肿瘤生长。
64.药物组合物，其含有相对于脱落CA125/0772P多肽优选结合细胞缔合CA125/0772P多肽的抗体或结合抗原的抗体片段，和药学上可接受的载体。
65.药物组合物，其含有相对于脱落CA125/0772P多肽优选结合细胞缔合CA125/0772P多肽的单克隆抗体或结合抗原的单克隆抗体片段，和药学上可接受的载体。
66.包含包装材料和该包装材料中所含的药物组合物的产品，其中药物组合物含有相对于脱落CA125/0772P多肽优选结合细胞缔合CA125/0772P多肽的抗体或结合抗原的抗体片段和药学上可接受的载体，所述药物组合物为适于施用于受试者的形式。
67.权利要求66的产品，其还包含关于药物组合物的使用或施用的印刷的使用说明书。
68.权利要求67的产品，其中使用说明书建议用于预防或治疗CA125/0772P相关的失调的一种或多种症状的给药方案。
69.权利要求67的产品，其中使用说明书建议用于预防或治疗细胞增殖性失调的一种或多种症状的给药方案。
70.权利要求69的产品，其中使用说明书建议用于预防或治疗癌症的一种或多种症状的给药方案。
71.权利要求70的产品，其中使用说明书建议用于预防或治疗卵巢癌的一种或多种症状的给药方案。
72.权利要求66的产品，其还包含关于药物组合物的使用或施用的标签。
73.权利要求66的产品，其中标签建议用于预防或治疗CA125/0772P相关的失调的一种或多种症状的给药方案。
74.权利要求73的产品，其中标签建议用于预防或治疗细胞增殖性失调的一种或多种症状的给药方案。
75.权利要求74的产品，其中标签建议用于预防或治疗癌症的一种或多种症状的给药方案。
76.权利要求75的产品，其中标签建议用于预防或治疗卵巢癌的一种或多种症状的给药方案。
77.融合多肽，其含有与异源剂可操作地连接的相对于脱落CA125/0772P优选结合细胞缔合CA125/0772P的抗体或结合抗原的抗体片段。
78.改善CA125/0772P相关失调的症状的方法，该方法包括对需要所述改善的受试者施用足够量的抗体或抗体的抗原结合片段以改善该细胞增殖性失调的症状，其中所述抗体或结合抗原的抗体片段相对于脱落CA125/0772P优选结合细胞缔合CA125/0772P。
79.权利要求78的方法，其中CA125/0772P相关失调是细胞增殖性失调。
80.权利要求79的方法，其中细胞增殖性失调是癌症。
81.权利要求80的方法，其中癌症是宫颈癌或子宫癌。
82.权利要求80的方法，其中癌症是乳腺癌或肺癌。
83.权利要求80的方法，其中癌症是卵巢癌。
84.权利要求78的方法，其中抗体或结合抗原的抗体片段是单克隆抗体或结合抗原的单克隆抗体片段。
85.权利要求78的方法，其中抗体或结合抗原的抗体片段以约5μg/kg到约10mg/kg的剂量施用。
86.权利要求78的方法，其中该方法作为联合癌症疗法的部分实施。
87.权利要求86的方法，其中联合癌症疗法还包括将化学治疗剂施用于受试者。
88.权利要求87的方法，其中化学治疗剂是紫杉醇或顺铂。
89.权利要求86的方法，其中联合癌症疗法包括放射疗法。
90.权利要求78的方法，其中抗体选自325.1、621.1、633.1、654.1、725.1、8G9、7F10、8A1、8C3、15C9、8E3、8B5、7G10、16C7、7C6、7H1、16H9、7A11、4E7、117.1、368.1、446.1、501.1和776.1。
91.辅助鉴定优选结合细胞缔合CA125/0772P的抗体或结合抗原的抗体片段的方法，该方法包括(a)在脱落CA125/0772P存在下在允许抗体或结合抗原的抗体片段与含有细胞缔合CA125/0772P的肽或脱落CA125/0772P结合的条件下，将该抗体或结合抗原的抗体片段与该含有细胞缔合的CA125/0772P的肽孵育；(b)除去未结合所述含有细胞缔合的CA125/0772P的肽的抗体或结合抗原的抗体片段以及脱落CA125/0772P；(c)测量与所述含有细胞缔合的CA125/0772P的肽结合的抗体或结合抗原的抗体片段的量；和(d)将(c)中的量与不存在脱落CA125/0772P时结合所述含有细胞缔合的CA125/0772P的肽的抗体或结合抗原的抗体片段的量相比较。
92.权利要求91的方法，其中含有细胞缔合的CA125/0772P的肽被固定在固体表面上。
93.权利要求92的方法，其中以ELISA形式实施该方法。
94.权利要求91的方法，其中脱落CA125/0772P和含有细胞缔合的CA125/0772P的肽以脱落CA125/0772P与含有细胞缔合的CA125/0772P的肽以约25∶1(wt/wt)的比例存在。
95.有助于鉴定优选结合细胞缔合的CA125/0772P的抗体，或结合抗原的抗体片段的方法，该方法包括(a)在脱落CA125/0772P存在下在允许含有细胞缔合的CA125/0772P的肽与抗体或结合抗原的抗体片段结合的条件下，将该抗体或结合抗原的抗体片段与该含有细胞缔合的CA125/0772P的肽接触；(b)除去未结合的所述含有细胞缔合的CA125/0772P的肽；(c)测量被抗体或结合抗原的片段结合的含有细胞缔合的CA125/0772P的肽的量；和(d)将(c)中测量的量与不存在脱落CA125/0772P时抗体或结合抗原的抗体片段所结合的含有细胞缔合的CA125/0772P的肽的量相比较。
96.权利要求95的方法，其中脱落CA125/0772P的量为约25倍(重量/重量)过量。
97.权利要求95的方法，其中抗体或结合抗原的抗体片段被固定在固体表面上。
98.权利要求97的方法，其中以ELISA形式实施该方法。
99.有助于鉴定优选结合细胞缔合CA125/0772P的抗体或结合抗原的抗体片段的方法，该方法包括(a)将抗体或结合抗原的片段与表达CA125/0772P的细胞在一定量脱落CA125/0772P存在下，在允许CA125/0772P与该抗体或结合抗原的抗体片段结合的条件下接触；(b)除去未结合的细胞；(c)测量被抗体或结合抗原的抗体片段结合的表达CA125/0772P的细胞的量；(d)将(c)中测量的量与不存在所述量的脱落CA125/0772P时结合抗体或结合抗原的抗体片段的表达CA125/0772P的细胞的量相比较。
100.权利要求99的方法，其中脱落CA125/0772P的量为至少约0.5mg/ml。
101.权利要求99的方法，其中通过流式细胞术实施测量。
102.权利要求99的方法，其中通过荧光激活细胞分类术实施测量。
103.可以分泌权利要求1的抗体的杂交瘤。
104.缀合到细胞毒性剂的权利要求1的分离的抗体或抗原结合片段。
105.权利要求104的分离的抗体或抗原结合片段，其中细胞毒性剂是放射性同位素。
106.权利要求105的分离的抗体或抗原结合片段，其中放射性同位素选自125I、131I、111In、99mTc和90Y。
107.权利要求26或27的单克隆抗体，该单克隆抗体缀合到细胞毒性剂。
108.权利要求107的单克隆抗体，其中细胞毒性剂是放射性同位素。
109.权利要求108的单克隆抗体，其中放射性同位素选自125I、131I、111In、99mTc和90Y。
110.权利要求64或65的药物组合物，其中抗体或抗原结合片段缀合到细胞毒性剂。
111.权利要求110的药物组合物，其中细胞毒性剂是放射性同位素。
112.权利要求111的药物组合物，其中放射性同位素选自125I、131I、111In、99mTc和90Y。
113.权利要求78的方法，其中抗体或抗原结合片段缀合到细胞毒性剂。
114.权利要求113的方法，其中细胞毒性剂是放射性同位素。
115.权利要求114的方法，其中放射性同位素选自125I、131I、111In、99mTc和90Y。
116.选自325.1、621.1、633.1、654.1、725.1、8G9、7F10、8A1、8C3、15C9、8E3、8B5、7G10、16C7、7C6、7H1、16H9、7A11、4E7、117.1、368.1、446.1、501.1和776.1的单克隆抗体，或者其结合抗原的抗体片段。
117.与权利要求116的单克隆抗体竞争结合的抗体或结合抗原的抗体片段。
118.药物组合物，其含有选自325.1、621.1、633.1、654.1、725.1、8G9、7F10、8A1、8C3、15C9、8E3、8B5、7G10、16C7、7C6、7H1、16H9、7A11、4E7、117.1、368.1、446.1、501.1、和776.1的单克隆抗体，或者其结合抗原的抗体片段，和药学上可接受的载体。
119.结合图1的肽的分离的抗体或结合抗原的抗体片段。
全文摘要
本发明提供了抗体和抗体的抗原结合片段、融合多肽和类似物，它们相对于脱落CA 125/0772P多肽优选结合细胞缔合CA 125/0772P多肽。本发明还提供了预防、处理、治疗或改善与CA 125/0772P相关的失调有关的一种或多种症状的方法。具体地，本发明提供了预防、处理、治疗或改善与细胞增殖性失调，如癌症，例如，卵巢癌有关的一种或多种症状的方法。本发明还提供了诊断CA 125/0772P相关的失调或发生这种失调的易患性的方法，以及鉴定相对于脱落CA125/0772P多肽优选结合细胞缔合CA 125/0772P多肽的抗体和抗体的抗原结合片段的方法。
文档编号G01N33/53GK1726226SQ200380106344
公开日2006年1月25日申请日期2003年10月15日优先权日2002年10月16日
发明者E·F·阿尔邦, D·A·索尔蒂斯申请人:欧洲凯尔特公司

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结合细胞缔合的ca1250772p的抗体及其使用方法