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专利名称：一种液相色谱外标法测定1,3-二羟基丙酮含量的方法
技术领域：
本发明涉及一种液相色谱外标法测定1，3- 二羟基丙酮(DHA)含量的方法。具体涉及一种使用液相色谱外标法测定以甲醛为原料在离子液为催化剂、有机碱为助催化剂、在140°C，均相反应30分钟的条件下制备1，3-二羟基丙酮，并测定合成混合液中1，3-二羟基丙酮含量的方法。
背景技术：
1，3-二轻基丙酮(1，3-Dihydroxyacetone)简称DHA,是多轻基酮糖,是最简单的酮糖，外观是带有甜味的白色粉末状结晶，易溶于水、乙醇、乙醚和丙酮等有机溶剂，熔点为75-80°C，水溶性 >250g/L(20°C )，在 pH 为 6.0 时稳定。I, 3- 二羟基丙酮是一种重要的化工原料、医药中间体和功能添加剂。其用途主要是一种天然存在具有生物可降解性的酮糖，可食用且对人体和环境无毒害；是一种具有多功能的添加剂，可用于化妆品、医药和食品行业等。同时其能广泛参与诸如聚合、缩合等反应，是一种重要的医药、农药合成中间体。目前，I,3- 二羟基丙酮生产方法主要有化学合成法和微生物发酵法。北京旭阳化工技术研究院有限公司独立研发了由甲醛为原料在离子液为催化剂、有机碱为助催化剂、在140°C，均相反应30分钟的条件下制备1，3-二羟基丙酮，它是一种绿色环保新型的合成工艺路线。甲醛、离子液、有机碱的摩尔比=30:1:0.02。在以甲醛为原料，离子液为催化剂、有机碱为助催化剂制备1，3- 二羟基丙酮研发与生产过程中，反应液中1，3-二羟基丙酮的准确快速定量分析非常重要，这关系到甲醛转化率的高低和离子液催化剂选择性的确定。但是目前还没有普遍认可的较为准确快速的分析方法，严重制约了 1，3-二羟基丙酮合成工艺的优化。DHA主要分析方法比较DHA的分析方法主要有薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法等方法。薄层色谱分析法所用试剂昂贵且准确定量困难。张智宏、孙小娟在《二羟基丙酮的气相色谱分析》(《分析测试学报》，1999，18 (3) 56-63)中采取气相色谱来定量测定DHA。但由于DHA的挥发性不高，需要先将其衍生化为易挥发且稳定性较高的衍生物才可间接测定DHA含量，但此方法预处理复杂，且衍生化过程中水分的影响较大，需要加入大量的衍生化试剂。中国药科大学生命科学与技术学院陈菁、陈建华等在中国生化药物杂志(ChineseJournal of Biochemical Pharmaceutics2007 年第 28 卷第 3 期)提出建立二轻基丙酮(DHA)发酵过程中产物和残余甘油底物的高效液相色谱检测方法。方法流动相为乙腈-水(90:10),色谱柱为 Lichrospher5_NH2 (4.6mm*250mm),用紫外检测器在 271nm 处检测 DHA,用示差折光检测器检测甘油。
江南大学饶志明、徐美娟中国生物工程杂志(China Biotechnology,2008，28(1):61-64)建立了测定I, 3- 二羟基丙酮(DHA)的高效液相色谱(HPLC)方法。以Allt ima C18 (250*4.6mm)为分离柱，5% 甲醇水溶液(0.05%H3P0JMPH至 3.0)，流速为 Iml/min,用紫外检测器在200nm处检测DHA。但是上述两种HPLC分析方法一是测定以甘油为原料采用微生物发发酵液中DHA含量，正常情况下，发酵液显示弱酸性。北京旭阳化工技术研究院有限公司独立研发以甲醛在离子液为催化剂制备1，3-二羟基丙酮合成工艺，反应液显示碱性(PH=9.5-11.0)。且色谱柱在高比例水为流动相长时间分析运行条件下，很容易造成柱固定相疏水坍塌，即DHA保留明显降低或完全不保留的现象(DHA的保留时间发生严重漂移)。

发明内容
本发明的发明人针对研发的独特合成工艺，经过潜心研究发现:采用合适的流动相乙腈-水(10: 90)水用氨水调节pH=10.5 ;DAD二极管阵列检测器，ZORBAX Extend_C18。能够准确、快捷、可靠地测定由甲醛在离子液为催化剂制备1，3- 二羟基丙酮含量。由此完成了本发明。本发明的目的为提供一种液相色谱外标法测定1，3-二羟基丙酮含量的方法，其特征在于，采用标准1，3- 二羟基丙酮作为外标物，乙腈-水溶液为溶剂配制标准溶液，其中，在乙腈-水溶液中，乙腈与水的体积比为10:90，且水用氨水调节pH至10.5。在本申请的一个优选实施方式中，所述方法包括如下步骤，该方法包括如下步骤:(I)采用标准1，3-二羟基丙酮作为外标物，乙腈-水溶液为溶剂配制标准溶液，其中，在乙腈-水溶液中，乙腈与水的体积比为10:90，且水用氨水调节pH至10.5 ;(2)用液相色谱仪分别测定标准溶液和待测样品中的1，3- 二羟基丙酮的峰面积，计算标准曲线的线性回归方程:C=AX式中，C为1，3- 二羟基丙酮的含量(g/L)X为标准曲线的斜率A为1，3- 二羟基丙酮的峰面积；(3)由线性回归方程计算样品中各组分含量Ci (g/L)Ci=4E-07A式中，A为1，3- 二羟基丙酮的峰面积。对标准溶液中各组分的浓度没有特殊限制，可以根据实际反应过程中反应物和生成物变化的相对情况进行调整，以便准确的测量。试剂1，3- 二羟基丙酮为分析纯，称量质量精确至0.0002go用液相色谱仪分别测定标准溶液中的外标物的峰面积，并由含量与峰面积关系计算标准曲线的线性回归方程。在根据本发明的测量方法的一个优选实施方式中，液相色谱的最优检测条件为:液相色谱仪:Agilentl260；
色谱柱:ZORBAXExtend_C18 (4.6mmX 250mm);检测器:DAD 二极管阵列检测器，使用波长200nm ；柱箱温度:25°C ;流动相:乙腈-水溶液，其中乙腈与水的体积比为10:90，水用氨水调节pH=10.5 ；-进样量 0.5u L ；流速:流动相梯度变化见如下表-1表-1:流动相梯度变化表
权利要求
1.一种液相色谱外标法测定1，3- 二羟基丙酮含量的方法，其特征在于，采用标准1，3-二羟基丙酮作为外标物，乙腈-水溶液为溶剂配制标准溶液，其中，在乙腈-水溶液中，乙腈与水的体积比为10:90,且水用氨水调节pH至10.5。
2.根据权利要求1所述的方法，该方法包括如下步骤: (1)采用标准1，3-二羟基丙酮作为外标物，乙腈-水溶液为溶剂配制标准溶液，其中，在乙腈-水溶液中，乙腈与水的体积比为10:90，且水用氨水调节pH至10.5 ; (2)用液相色谱仪分别测定标准溶液和待测样品中的1，3-二羟基丙酮的峰面积，计算标准曲线的线性回归方程: C=AX 式中，C为1，3- 二羟基丙酮的含量 X为标准曲线的斜率 A为1，3- 二羟基丙酮的峰面积； (3)由线性回归方程计算样品中各组分含量Ci Ci=4E-07A 式中，A为1，3-二羟基丙酮的峰面积。
3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述液相色谱的检测条件为:液相色谱仪:Agilentl260 ；色谱柱:ZORBAX Extend-C18，4.6mmX 250mm ; 检测器:DAD 二极管阵列检测器，使用波长200nm ； 柱箱温度:25°C ; 流动相:乙腈-水溶液，其中乙腈与水的体积比为10:90，水用氨水调节pH=10.5 ; 进样量0.5iiL; 流速:流动相梯度变化见如下表
4.根据权利要求1 3任一项所述的方法，该方法用于测定以甲醛为原料在离子液为催化剂、有机碱为助催化剂、均相反应的条件下制备1，3- 二羟基丙酮的合成混合液中`1，3-二羟基丙酮的含量。
全文摘要
本发明涉及一种液相色谱外标法测定1,3-二羟基丙酮(DHA)含量的方法，其特征在于，采用标准1,3-二羟基丙酮作为外标物，乙腈-水溶液为溶剂配制标准溶液，其中，在乙腈-水溶液中，乙腈与水的体积比为10:90，且水用氨水调节pH至10.5。本发明的所述方法具有以下优点1、选择了通用、方便的色谱条件；2、选择了与反应物、生成物性质相近且非常稳定的流动相；3、测量结果准确、快捷、方便，且分析成本低。
文档编号G01N30/02GK103197012SQ20131014386
公开日2013年7月10日 申请日期2013年4月23日 优先权日2013年4月23日
发明者张英伟, 陈希生, 冯新坡, 赵玉伟, 翟从旺, 孙长江 申请人:北京旭阳化工技术研究院有限公司