专利名称：赖氨酸脱羧酶抗原表位、抗赖氨酸脱羧酶抗体及其用途的制作方法
技术领域：
本发明属于分子生物学和免疫学领域。具体地，涉及一种赖氨酸脱羧酶抗原表位、 抗赖氨酸脱羧酶抗体。本发明还涉及分别含有所述抗原表位或抗体的组合物、以及所述抗体在检测赖氨酸脱羧酶中的用途。
背景技术：
赖氨酸脱羧酶(英文名称为lysine decarboxylase,酶分类号EC :EC4. 1. 1. 18)， 据cDNA序列推译的水稻赖氨酸脱羧酶蛋白(putative lysine decarboxylase-like protein, Pldclp)基因位于水稻基因组的第4条染色体上，由0s04g0518800基因编码，其 cDNA全长为1109bp，其中参与编码赖氨酸脱羧酶氨基酸的碱基有750bp，编码250个氨基酸残基，分子量为27493. 85Da。赖氨酸脱羧酶家族具有保守结构域PGGxGTxxE。Sioshi Kikuchi等(Science 301,376(2003))最早克隆测序了籼稻日本种群的cDNA，在据cDNA推译的氨基酸序列中发现有赖氨酸脱羧酶家族的保守结构域，从而推测此基因可能是赖氨酸脱羧酶家族成员之一。水稻(Oryza sativa L.)是世界上最重要的粮食作物之一，也是植物生长发育、逆境反应等基础研究的模式植物，因为相对于其它禾本科植物，它的基因组相对较小 (430Mb)。水稻基因组测序成果极大地推动了水稻相关研究的进展，带动了水稻转录组学的研究，也推动了蛋白质组学的研究，利用2DE-MASS技术对水稻发育、逆境、愈伤组织分化等进行蛋白质组学分析，鉴定了一系列的差异表达蛋白质，同时，随着水稻功能基因组学工作的开展，对水稻蛋白质功能的验证和比较研究也日益增加，蛋白质印迹(Western blotting,WB)技术因具有灵敏度高、特异性好、操作简便、结果直观等优点而被广泛应用于检测水稻蛋白质在不同组织中的表达水平。随着水稻基因组计划的完成，蛋白质研究已成为后基因组研究的重要任务。抗体是研究蛋白质必不可少的工具之一，在一种新的cDNA被克隆以后，由此推译出的氨基酸序列人工合成多肽并与载体偶联，免疫制备其抗体，是一种快速而有效的手段。水稻赖氨酸脱羧酶蛋白主要定位于质膜上，在植物的耐寒、解毒等抗逆生理中发挥作用。赖氨酸脱羧酶的主要生物学功能是催化L-赖氨酸脱羧生成尸胺(1，5_戊二胺)， 尸胺有刺激性气味，它是生物体内广泛存在的具有生理活性的含氮碱，在腐烂的尸体和精液中都可分离得到。尸胺可以作为第二信使调控植物衰老进程、促进雌雄蕊的发育，外源施用尸胺可以改善坐果和促进果实发育，在增加果实产量和研究植物生长中有重要利用价值。赖氨酸脱羧酶在大肠杆菌中有大量的研究，并且在大肠杆菌体内发现多种赖氨酸脱羧酶，但在水稻中的作用研究较少，在水稻中的具体生理功能还不清楚。然而，迄今为止，水稻赖氨酸脱羧酶仍属于高度有待鉴定的蛋白，该蛋白在转录水平上的活动是其存在的证据。并且在现有技术中，通常制备的多克隆抗体特异性不高，用于检测目标物质会存在准确性不足的问题。另一方面，如果用赖氨酸脱羧酶制备抗原的话，如果是用化学合成的方法，全长的氨基酸序列有1996个氨基酸，蛋白质空间结构的重建是一个很困难的工作，再现与生物体内相同的空间构象仍然是现阶段蛋白质学研究的难点。一般来说抗原表位合成简易，准确性高，成本低廉，空间构象容易再现，因此有必要开发一种具有代表赖氨酸脱羧酶本身的抗原表位(antigenic determinant, AD)(又称抗原决定簇， 是指抗原分子中决定抗原特异性的特殊化学基团)来代替全长蛋白。尽管目前已经有用于预测抗原表位的软件，例如ΒΕΡΙΤ0ΡΕ软件，但是预测得到的抗原表位中会有30%左右的非有效抗原表位，即不能特异性地代表抗原的抗原表位， 或者不能引发免疫应答(Chang HT, Liu CH, Pai Tff. Estimation and extraction of B-cell linear epitopes predicted by mathematical morphology approaches. J Mol Recognit. 2008 Nov-Dec ；21 (6) :431-41)。
发明内容
为了解决上述问题，本发明人在通过BEPIT0PE软件预测得到多个抗原表位序列的基础上，进行了大量的实验和不懈的努力，结果发现在预测的M个抗原表位中有一个抗原表位序列SSQGKKKSYQDAA(SEQID NO 3)是最有效的抗原表位，并且其具有良好的抗原特异性，并且制备了能与该蛋白酶特异免疫结合的抗体，该抗体具有足够的灵敏性和准确性。 由此提供了下述发明本发明的一个方面涉及一种赖氨酸脱羧酶抗原表位，其氨基酸序列如SEQ ID NO 3所示。在本发明的一个实施方案中，为了增加与载体的交联性，在上述抗原表位的C末端添加了一个半胱氨酸(半胱氨酸提供二硫键与载体交联)，得到序列为 SSQGKKKSYQDAAC(SEQ ID NO 4)的抗原表位。半胱氨酸也可以加在多肽的N末端，得到序列为CSSQGKKKSYQDAA(SEQ ID NO 5) 的抗原表位。末端加1个半胱氨酸就可以了。如果在同一端加多个半胱氨酸，导致成本上升，并且二硫键密度太大，而实际上也不需要这么多二硫键。另外不宜在N末端和C末端都加半胱氨酸，因为一个抗原表位和一个载体结合，如果在两端分别加1个半胱氨酸，半胱氨酸与载体结合后，抗原表位少了游离端，反而不利于产生抗体。本发明的抗原表位可以通过常规的肽合成技术化学合成得到，也可以在适当的宿主中表达得到；优选的是化学合成。本发明的还一方面涉及一种组合物，其包含SEQ ID NO :3或SEQID NO :4或SEQ ID NO :5所示的赖氨酸脱羧酶抗原表位，任选地，可以含有免疫佐剂，例如氢氧化铝、弗氏完全佐剂、或者弗氏不完全佐剂等。本发明的还一方面涉及一种赖氨酸脱羧酶抗原表位-载体复合物；其中，所述赖氨酸脱羧酶抗原表位为SEQ ID NO :3或SEQ ID NO :4或SEQ ID NO :5所示的赖氨酸脱羧酶抗原表位，所述载体可以是钥孔戚血蓝素(KLH)、BSA、或酪蛋白等。本发明的还一方面涉及一种抗赖氨酸脱羧酶抗体，所述抗赖氨酸脱羧酶抗体能够特异性地结合SEQ ID NO :3或SEQ ID NO :4或SEQID NO :5所示的赖氨酸脱羧酶抗原表位。 所述抗赖氨酸脱羧酶抗体可以是单克隆抗体，也可以是多克隆抗体。本发明的抗赖氨酸脱羧酶多克隆抗体可以得自各种常规制备多克隆抗体的动物，例如山羊，兔子，大鼠，小鼠等。对本领域技术人员而言，可以根据SEQ ID NO :3或SEQ ID NO :4或SEQ ID NO: 5所示的赖氨酸脱羧酶抗原表位制备单克隆抗体，具体操作可以参见本领域的技术手册，也可以参考文献例如 Nature 1975Kohler & Milstein Vol256，p495。本发明的还一方面涉及一种含有抗赖氨酸脱羧酶多克隆抗体的血清(简称多抗血清)，其通过使用SEQ ID NO 3或SEQ ID NO 4或SEQ ID NO 5所示的抗原表位免疫动物制得。本发明的还一方面涉及一种抗赖氨酸脱羧酶多克隆抗体制备方法，包括将SEQ ID NO :3或SEQ ID NO :4或SEQ ID NO :5所示的赖氨酸脱羧酶抗原表位作为抗原免疫动物的步骤。任选地，所述免疫步骤可以加入佐剂，例如氢氧化铝、弗氏完全佐剂、或者弗氏不完全佐剂，等等。本发明的一个实施方案中，所述抗赖氨酸脱羧酶多克隆抗体制备方法，包括如下步骤1)将SEQ ID NO :3或SEQ ID NO 4或SEQ ID NO 5所示的赖氨酸脱羧酶抗原表位作为抗原免疫动物；2)取血，离心收集多抗血清；和3)纯化步骤2、中的多抗血清，得到抗赖氨酸脱羧酶多克隆抗体。本发明的还一方面涉及一种组合物，其包含本发明的抗赖氨酸脱羧酶多克隆抗体。本发明的还一方面涉及一种赖氨酸脱羧酶检测剂，其包含本发明的抗赖氨酸脱羧酶多克隆抗体。其中赖氨酸脱羧酶的序列(SEQ ID NO 1)如下MMDTDHTE11KEGEAVVEAMALLQSRFRRICVFC G|S S QGKKKS YQDA A丨V ELGKELVARNIDLVYG
GGSVGLMGLVSQAVYNGGRHVIGVIPKTLMPREITGETVGEVKAVADMHQRKAEMARQSDAFIALPGGYGTLEELLE VIAWAQLGIHDKPVGLLNVDGYYNSLLSFIDKAVEEEFISPSARHIIVLAPTPKELLEKLEAYSPRHDKVVPKMQWE MEKMSYCKSCEIPGLKEGNKATIQAQRGSML(SEQ ID NO 1)其中，加边框的序列为SEQ ID NO :3。本发明的还一方面涉及本发明的抗赖氨酸脱羧酶多克隆抗体在制备检测赖氨酸脱羧酶的药物中的用途。本发明的还一方面涉及一种检测赖氨酸脱羧酶的方法，所述方法包括使用本发明的抗赖氨酸脱羧酶多克隆抗体的步骤。具体地，包括如下步骤1)将待测样品与本发明的抗赖氨酸脱羧酶多克隆抗体孵育，使所述的抗赖氨酸脱羧酶多克隆抗体与待测样品中的赖氨酸脱羧酶特异性结合，由此形成免疫复合物；和2)检测是否存在免疫复合物。上述检测赖氨酸脱羧酶的方法可以检测赖氨酸脱羧酶的有无、对其进行半定量 (例如western blot方法)；在有赖氨酸脱羧酶标准品的情况下，还可以通过ELISA方法对赖氨酸脱羧酶进行定量检测。在本发明的一个实施方案中，所述赖氨酸脱羧酶为水稻的赖氨酸脱羧酶。具体的， 所述水稻为水稻93-11。
发明的有益效果1)本发明提供的多克隆抗体，特异性高；2)本发明提供的赖氨酸脱羧酶抗原合成简易，准确性高。本发明提供的抗原表位是经软件预测选出的抗原表位片段后化学合成的，片段短�。菀缀铣桑占涔瓜笤傧秩�
易ο3)本发明提供的多克隆抗体可用于所有检测赖氨酸脱羧酶存在与否的试剂。4)赖氨酸脱羧酶在水稻中的作用研究较少，在水稻各组织的定位，以及在水稻各组织中的具体生理功能尚不清楚。本发明制备Pldclp蛋白的抗体为研究Pldclp蛋白的功能及作用机制获得重要的实验工具，也为后续功能相关的研究，如免疫印迹、蛋白质定量、 免疫共沉淀、蛋白芯片、蛋白质-蛋白质相互作用、免疫组化及其它基于抗原抗体反应的应用，以及在抗病、抗逆反应中Pldclp蛋白质的表达研究提供了重要的实验工具。随着水稻基因组序列信息的阐释和转录谱数据的积累，基于抗体的蛋白质组学研究将成为现实。
图1 使用抗赖氨酸脱羧酶多克隆抗体对赖氨酸脱羧酶在水稻不同组织的免疫印迹检测结果。
具体实施例方式下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件(例如参考J.萨姆布鲁克等著， 黄培堂等译的《分子克隆实验指南》，第三版，科学出版社)或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。实施例1 候选抗原表位的预测水稻赖氨酸脱羧酶对应的基因在GenBank中的基因ID是NP_0010533^。读码框序列如下ATGATGGATACAGATCACACTGAGATAATTAAGGAGGGAGAGGCAGTAGTGGAAGCCATGGCTCTACTC CAGTCTCGGTTCAGGAGGATATGCGTCTTCTGCGGGAGCAGCCAGGGCAAGAAGAAGAGCTACCAGGACGCAGCCGT TGAGCTTGGCAAGGAGCTGGTAGCAAGGAACATTGATCTAGTGTATGGTGGAGGAAGTGTGGGGCTCATGGGCCTGG TCTCTCAAGCTGTCTACAATGGAGGGAGGCATGTTATTGGGGTGATTCCCAAGACTCTTATGCCTAGAGAGATTACG GGTGAGACAGTAGGGGAGGTGAAAGCAGTGGCAGATATGCATCAGAGGAAGGCTGAGATGGCCAGGCAATCTGATGC GTTCATAGCACTGCCTGGTGGGTATGGAACACTTGAAGAGCTCCTGGAAGTAATTGCCTGGGCTCAGCTCGGCATTC ACGACAAGCCGGTTGGCCTGCTAAATGTGGACGGCTACTACAACTCTCTGCTGTCGTTCATCGATAAAGCTGTGGAG GAAGAGTTCATCAGCCCCTCTGCGCGCCATATCATCGTGTTAGCTCCAACACCAAAAGAACTTCTCGAGAAGCTAG AGGCGTACTCCCCTCGGCATGACAAGGTCGTGCCGAAGATGCAGTGGGAGATGGAGAAGATGAGCTACTGCAAGAG CTGCGAGATCCCTGGCCTGAAAGAAGGCAACAAGGCGACCATCCAAGCACAGCGAGGAAGCATGCTCTGA(SEQ ID NO 2)所编码的水稻赖氨酸脱羧酶全长序列如下MMDTDHTE11KEGEAVVEAMALLQSRFRRICVFC G|SSQGKKKSYQDAAV ELGKELVARNIDLVYGGGSVGLMGLVSQAVYNGGRHVIGVIPKTLMPREITGETVGEVKAVADMHQRKAEMARQSDAFIALPGGYGTLEELLE VIAWAQLGIHDKPVGLLNVDGYYNSLLSFIDKAVEEEFISPSARHIIVLAPTPKELLEKLEAYSPRHDKVVPKMQWE MEKMSYCKSCEIPGLKEGNKATIQAQRGSML (SEQ ID NO :1，其中第 36 48 位氨基酸即加框的序列为 SEQ IDNO 3)然后根据SEQ ID NO :3，用ΒΕΡΙΤ0ΡΕ软件对水稻赖氨酸脱羧酶基因编码的蛋白质进行抗原表位的预测。本实施例中使用了 ΒΕΡΙΤ0ΡΕ软件提供的五种方法Mandard、 KarpIus> Emini> Amphiphi> Pellequer,以及这五禾中方法的综合方法 cons_Sta_Kar_Emi_ Amp_Pel，所有参数选择默认。具体方法可以参考Odorico M, Pellequer J L. BEPITOPE predicting the location of continuous epitopes and patterns in proteins[J]. JMol Recognit，2003，16(1) :20-22。根据抗原指数(Antigenic Index)、亲水性结构(Hydrophi licity Plot)、柔韧区(Flexible Regions)及表面概率结构(Surface Probability Plot)4个参数及特异性、合成难易程度等方面综合分析氨基酸序列的特点， 用BLASTP对水稻蛋白质库进行唯一性检测后，最终确定欲合成的肽序列。在这项技术中， 选择一个有效的抗原表位至关重要。一般认为，亲水性强且具有稳定构象的线性表位对维持抗原的免疫反应性极其重要。利用ΒΕΡΙΤ0ΡΕ软件一共预测得到了 M个候选的抗原表位，选出抗原表位峰值较高的片段 SSQGKKKSYQDAA (SEQ ID NO 3)。然后该片段在水稻蛋白质库(RAP-DB数据库，网址http//rapdb. dna. affrc. go.jp/)进行唯一性检索(蛋白序列比对)，确定了该片段在水稻蛋白质库中的唯一性。实施例2 抗原表位的化学合成实施例1中得到的候选抗原表位的两端没有半胱氨酸，为了实现与载体的交联， 合成的序列需加入半胱氨酸，因此要合成的多肽序列为SSQGKKKSYQDAAC(SEQ ID NO :4)。对SEQ ID NO 4所示的多肽序列进行化学合成(由吉尔生化公司合成)，得到赖氨酸脱羧酶的抗原表位。实施例3 抗原表位-KLH复合物的制备采用戊二醛连接法，将实施例2中合成的抗原表位的C端与交联载体蛋白-钥孔戚血蓝素(KLH)交联，得到抗原表位-KLH复合物。具体实施步骤如下将5mg合成多肽加入7mg KLH中，边震荡边缓慢加入新鲜配制的3g/L戊二醛溶液 lml，室温孵育池。以pH8. 5的硼酸缓冲液透析Mh，得到抗原表位-KLH复合物，KLH作为多肽抗原的载体蛋白。实施例4 多抗血清的制备取l-2mg实施例3中制备的抗原表位-KLH复合物，取合成肽-KLH偶联物与等量的完全福氏佐剂充分乳化后，于兔颈部和背部皮下多点注射，每点约ΙΟΟμ g。4周后加强免疫，剂量同前，用不完全福氏佐剂充分乳化后，于兔背部皮下多点注射；以后隔2周加强免疫1次；从第2次加强免疫开始，每次免疫后7d，经耳中央动脉采血测定抗体的效价，经过 4次加强免疫后符合要求时，立即颈动脉采血，分离血清后，无菌分装保存于-80°C备用。同时按照相同的步骤，用抗原表位(SEQ ID NO 4)作为对照。其中，耳静脉取血进行效价检测(ELISA法)的步骤如下
将Pldclp合成肽稀释至lmg/L包被ELISA酶标板，100 μ 1/孔，10g/L BSA 37°C封闭 2h。PBS-T(PBS+0. 5mL/L Tween-20)洗涤 3 次后，加入不同稀释度(1 104，1 105， 1 5X 105,1 106)的免疫前后兔血清，100μ 1/孔，37°C孵育2h。彻底洗涤后加入HRP 标记的羊抗兔二抗(1 5000)，37°C孵育Ih后洗涤，加入TMB底物室温避光显色15min，加入2mol/L H2S04终止反应，当KLH > 51200和裸肽> 25600时确定为抗体阳性。经过4次加强免疫后，效价检测的结果如下多抗血清(抗原表位-KLH复合物免疫)> 51200 (抗原表位-KLH复合物有免疫原性的最大稀释倍数是51200)；裸肽免疫(抗原表位，SEQ ID NO 4)得到的多抗血清> 25600 (仅仅由抗原表位组成的裸肽具有免疫原性的最大稀释倍数是25600)。上述结果已经符合要求，遂于末次加强免疫7天后颈动脉放血，收集血样。将收集的血样在3-4°C下静置3-4小时，然后5000rpm离心10分钟，收集血清，得到多抗血清(耳静脉检测效价符合要求后，颈动脉取的血样不必再检测效价)。无菌分装保存于-80°C备用。实施例5 抗赖氨酸脱羧酶多克隆抗体(多抗)的制备将实施例4中制备的多抗血清进行纯化，制得多克隆抗体(多抗)。将抗原表位SSQGKKKSYQDAA(SEQ ID NO 4)多肽与溴化氰活化的kpharose 4B偶联，制备多肽亲和层析柱。将制备的多抗血清加入到以上制备的层析柱中，放置于4°C孵育过夜后，洗脱抗体，即得到抗赖氨酸脱羧酶多克隆抗体(多抗)。实施例6 多抗1对赖氨酸脱羧酶的特异性检验选取新鲜的水稻93-11 (Oryza sativa L. ssp. Indica，获自国家杂交水稻工程技术中心)苗期地上部、分蘖期叶片、孕穗期剑叶、开花期剑叶、成熟期剑叶、苗期地下部、分蘖期茎、开花期穗子、成熟期种子(共9个部位)，分别提取总蛋白质。福氏佐剂为Sigma公司产品。Western Blot Marker为北京全式金生物技术有限公司产品。羊抗兔IgG-HRP为北京中杉金桥生物技术公司产品。总蛋白质样品的制备在水稻材料93-11 (Oryza sativa L. ssp. Indica)苗期(地上部、地下部)、分蘖期(茎、叶)、孕穗期(剑叶)、开花期(剑叶、穗子)、成熟期(剑叶、穗子)共5个时期9个部位分别取材；用液氮研磨新鲜水稻组织至粉末状，每300 μ 1粉末加入 800μ 1 蛋白质裂解液(62. 5mmol/L ρΗ7· 4 Tris-HCl，10%甘油，2% SDS，20mmol/L NaF， 2mmol/L EDTA，lmmol/L PMSF,5% β -巯基乙醇)，冰水混合物中孵育lOmin，期间震荡混勻 4 5次，4°C，12000r/min离心15min，取上清，转移到新的1. 5mL离心管中，_70°C保存备用。Western 印记分别取5g水稻93-11不同发育阶段和不同部位的组织提取的总蛋白液体加入等体积2 X SDS加样缓冲液，于100°C加热5min后，进行常规SDS-PAGE电泳，SDS-PAGE分离胶浓度为15%，160V电压电泳70分钟，电泳结束后，电转至PVDF膜上，用50g/L脱脂奶粉室温下封闭Ih;然后加入1 1000稀释的兔抗水稻Pldclp合成肽N端多肽多抗检测水稻蛋白质表达，室温下孵育 3h，TTBS (2mmol/LTris-HCl pH7. 6,13. 6mmol/L NaCl，0· 1 % Tween-20)洗膜3次，加入羊抗兔IgG-HRP抗体(1 5000稀释)，室温下孵育lh，TTBS洗膜3次，每次5min，ECL法显色。水稻各组织的多克隆抗体Wfestern blot显示在27KD附近有单一的条带(结果见图1)，和理论值接近，苗期的根、分蘖期的茎及开花期的穗子没有检测到条带，其余苗期的叶、分蘖期的叶、孕穗期的叶、开花期的叶、成熟期的叶以及成熟期的穗子中都检测到单一条带，在成熟期的叶片中表达量最大，Westernblot检测结果表明制备的多克隆抗体具有很好的特异性和灵敏度。需要说明的是，尽管水稻全蛋白中可能有很多分子量与其相似的蛋白，但是与多抗特异性结合的就只有赖氨酸脱羧酶一个。关于特异性的预测SEQ ID N0:4经过http:// rice, ρlantbiology· msu. edu/blast. shtml (与实施例 1 中的 http://rapdb. dna. affrc. go. jp/作用相同，目的是再次检验唯一性)的检查，确定此多肽序列特异，该序列在水稻总蛋白中唯一确定赖氨酸脱羧酶。尽管本发明的具体实施方式
已经得到详细的描述，本领域技术人员将会理解。根据已经公开的所有教导，可以对那些细节进行各种修改和替换，这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。
权利要求
1.一种赖氨酸脱羧酶抗原表位，其由SEQ ID NO :3或SEQ ID NO :4或SEQ ID N0:5所示的氨基酸序列组成。
2.一种组合物，其中含有权利要求1所述的赖氨酸脱羧酶抗原表位，任选地，还含有用于免疫的佐剂。
3.一种赖氨酸脱羧酶抗原表位-载体复合物，其中，所述赖氨酸脱羧酶抗原表位为权利要求1所述的赖氨酸脱羧酶抗原表位，所述载体选自钥孔戚血蓝素、BSA、以及酪蛋白。
4.一种抗赖氨酸脱羧酶抗体的制备方法，包括使用权利要求1的赖氨酸脱羧酶抗原表位或者权利要求2的组合物或者权利要求3的复合物的步骤；任选地，所述抗赖氨酸脱羧酶抗体是单克隆抗体或者多克隆抗体；具体地，所述制备方法包括如下步骤1)将权利要求1所述的赖氨酸脱羧酶抗原表位或者权利要求2的组合物或者权利要求 3的复合物免疫动物得到的血样进行离心，得到多抗血清；和2)纯化步骤1)中的多抗血清，得到抗赖氨酸脱羧酶多克隆抗体。
5.一种多抗血清，其由权利要求1的赖氨酸脱羧酶抗原表位或者权利要求2的组合物或者权利要求3的复合物免疫动物制得。
6.一种抗赖氨酸脱羧酶抗体，其能够特异地结合权利要求1所述的赖氨酸脱羧酶抗原表位，任选地，其为多克隆抗体或者单克隆抗体。
7.一种组合物，其包含权利要求6所述的抗赖氨酸脱羧酶抗体。
8.一种赖氨酸脱羧酶检测剂，其包含权利要求6所述的抗赖氨酸脱羧酶抗体。
9.权利要求6所述的抗体在制备检测赖氨酸脱羧酶的药物中的用途。
10.一种检测赖氨酸脱羧酶的方法，所述方法包括使用权利要求6所述的抗赖氨酸脱羧酶多克隆抗体的步骤；具体地，所述赖氨酸脱羧酶为水稻的赖氨酸脱羧酶。
全文摘要
本发明属于分子生物学和免疫学领域，涉及赖氨酸脱羧酶抗原表位、抗赖氨酸脱羧酶抗体及其用途。具体地，所述赖氨酸脱羧酶抗原表位具有SEQ ID NO3或SEQ ID NO4或SEQ ID NO5所示的序列。本发明还涉及一种抗赖氨酸脱羧酶多克隆抗体，所述多克隆抗体与上述抗原表位特异性结合。所述多克隆抗体具有高的特异性和效价。本发明还涉及所述多克隆抗体的制备方法和用途、含有该多克隆抗体的组合物、以及检测赖氨酸脱羧酶的方法。
文档编号G01N33/577GK102206254SQ201010520338
公开日2011年10月5日 申请日期2010年10月25日 优先权日2010年10月25日
发明者刘佳, 吴 琳, 张军, 曾海攀, 王银竹 申请人:深圳华大基因科技有限公司
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