专利名称：肌酸酐浓度的测定方法、测定器件及测定装置和使用这些的尿中盐分量的测定方法、测定 ...的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于进行样本中所含的肌酸酐和盐分的定量的测定方法、测定器件以 及测定装置。
背景技术：
生物学和非生物学的取样中所含的微量物质的定性和定量的检测在临床检查、诊 断、分析、自我管理(self-care)等中日常性地进行。在这种检测中，通常使存在于样本中的被检验物质与用于与该被检验物质发生特 殊反应的指示物质发生反应。然后，使用比色法(光吸收测量)、荧光法、放射线测量法、化 学发光法、电化学法、阻抗法、质量变化法(QCM)、折射率变化法(SPR)、热透镜效应检测法 等来检测反应所产生的反应生成物或反应化合物，进行被检验物质的检测或者定量。被检 验物质的检测或者定量所使用的通常的指示物质之一，有5-甲基吩嗪鐺硫酸甲酯(化学 式=C14H14N2O4S,以下简称为PMS)。使用电化学法或比色法来检测通过与特定的被检验物质 发生反应而还原的PMS，由此进行被检验物质的检测和定量。但是，PMS不稳定，在水溶液中容易被光氧化。因此，很难保存试剂溶液是众所周 知的。为了避免其储存时的问题，开发了 PMS的衍生物即1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺硫酸甲 酯(化学式为C15H16N2O5S,以下，简称为M-PMS)。M-PMS是在PMS的1位引入了甲氧基的化 合物，对于光非常稳定。另一方面，样本中所含的肌酸酐浓度的测定在临床化学和分析化学领域尤为重 要。由于肌酸酐是肌肉的内在代谢的产物，所以尿中的肌酸酐量反映总肌肉质量是众所周 知的。因此，人一天排泄的尿中的肌酸酐量通常对每个人而言是固定的，可以说没有每日的 变动。因此，尿中的肌酸酐量有时被用作所排泄的尿的浓淡标准。另外，尿中和血中的肌酸 酐量随着尿毒症或肾功能的降低而增减。因此，通过测定尿中或者血中的肌酸酐量，能够知 晓有无尿毒症或肾功能的降低。作为肌酸酐浓度的测定方法，已知有基于采用了碱性的苦味酸溶液的JafTe反应 的方法。该方法中，利用光谱法测定通过苦味酸与肌酸酐反应而得到的橙红色的生成物 (例如，参照专利文献1)。另外，作为其他的肌酸酐浓度测定方法，已知有采用了与肌酸酐发生特殊反应的 酶的方法。作为使用酶的方法，例如有使用肌酐脱亚氨酶来分解肌酸酐的方法。在该方法 中，根据PH或电位的变化等来测定由肌酸酐的分解而生成的氨量，由此得到肌酸酐的浓度 (例如，参照专利文献2)。作为使用酶的其他方法，有利用下式(1) (3)的反应来测定肌酸酐浓度的方法。肌酸酐+水一肌酸…(1)肌酸+水一肌氨酸+尿素 …(2)肌氨酸+水+氧一甘氨酸+甲醛+过氧化氢…(3)
作为催化式(1) (3)的反应的酶，分别依次使用肌酸酐酰胺水解酶(肌酸酐 酶)、肌酸脒基水解酶(肌酸酶)、以及肌氨酸氧化酶或者肌氨酸氢化酶。在此，作为肌酸酐 的定量方法，例如采用如下方法与过氧化物酶同时使用无色色素或Trinder试剂，使在式 (3)中生成的过氧化氢显色，然后利用光谱法进行定量(例如，参照专利文献3)。另外，作 为其他的肌酸酐定量方法，采用使用电极以电化学法将式(3)中生成的过氧化氢氧化、并 根据流过的电流对肌酸酐进行定量的方法(例如，参照专利文献4、5)。另外，作为使用酶的另一方法，提出了如下方法除了式⑴及式⑵的反应之外， 使用肌氨酸和电子载体的反应对肌酸酐进行定量，以替代式(3)的反应(例如，参照专利文 献 6、7)ο专利文献6公开了基板上具有至少一对作用极和对极，在电极上或者电极周边的 基板上使试剂溶液干燥，从而将试剂固定化的肌酸酐生物传感器。试剂溶液是通过使肌酸 酐酶、肌酸酶、肌氨酸氧化酶以及铁氰化钾(电子载体)溶解在PH7 8. 5的缓冲溶液中而 得到的。另外，当缓冲溶液的PH小于7或者大于8. 5时，酶活性降低，所以不优选。专利文献7中公开了以下内容与肌氨酸氧化酶同时使用被环糊精包含的媒介体 (电子载体)，利用比色法或者电化学检测方法对肌酸酐进行定量。具体而言，作为被环糊 精包含的媒介体的例子，可列举出α-萘醌(1，4_萘醌)。但是，在专利文献7中公开了在 媒介体不包含在环糊精中的状态下不适于使用酶的肌酸酐的测定。另外，作为使用酶的另一方法，提出有如下方法除了式⑴及式⑵的反应之外， 使用肌氨酸与四唑指示剂的反应用光谱法定量肌酸酐以替代式(3)的反应(例如，参照专 利文献8)。专利文献8中公开了以下内容作为肌酸酐定量用组成物，使用肌酸酐水解酶、 肌酸脒基水解酶、肌氨酸氢化酶、作为四唑指示剂的由噻唑蓝和ΡΗ7. 5的磷酸钾构成的混 合试剂。另外，作为使用酶的另一方法，提出了以下方案在使用肌酸酐酰胺水解酶、肌酸 脒基水解酶以及肌氨酸氢化酶将肌酸酐改变为甘氨酸和甲醛之后，利用显色剂使所生成的 甲醛显色，利用其吸光度对肌酸酐进行定量(例如，参照专利文献9)。专利文献9公开了 如下内容除了肌酸酐酰胺水解酶、肌酸脒基水解酶、肌氨酸氢化酶以及显色剂之外，使用 ΡΗ7. 5的磷酸缓冲溶液和作为用于促进甲醛生成的反应催化剂的铁氰化钾。另外，作为使用酶的另一方法，提出了如下方法使用将催化肌酸酐水解的聚合 物、肌氨酸氧化酶以及将媒介体固定化的电极，对肌酸酐进行定量(例如，参照专利文献 10)。专利文献10中公开了可使用铁氰化钾、二茂铁、锇衍生物、吩嗪硫酸甲酯(PMS)等来 作为媒介体。进而，作为其他的肌酸酐浓度测定方法，提出有使用1，4_萘醌-2-磺酸钾的方法 (例如，参照专利文献11、非专利文献1 3)。专利文献1 美国专利第3705013号说明书专利文献2 日本特表2001-512692号公报专利文献3 日本特开昭62-257400号公报专利文献4 日本特表2003-533679号公报专利文献5 美国专利第5466575号说明书专利文献6 日本特开2006-349412号公报
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专利文献7 日本特开2005-118014号公报专利文献8 日本特开昭55-023998号公报专利文献9 日本特开昭54-151095号公报专利文献10 日本特开2003-326172号公报专利文献11 日本特开昭63-033661号公报[非专利文献]非专利文献1 :SulliVan、外1名、“肌酸酐的高特异性测试”、生物学化学的期 刊、1958 年、第 233 卷、第 2 号、p. 530-534(Sullivan，“ A Highly Specific Test for Creatinine"，1958，Vol. 233，No. 2，p.530-534)非专利文献2 =NarayananJh 1名、“肌酸酐评论”、临床化学、1980年、第26卷、 第 8 号、ρ· 1119-1126 (Narayanan,，，Creatinine :AReview，，，Clinical Chemistry, 1980, Vol. 26，No. 8，P. 1119-1126)非专利文献3 :C00per、外1名、“四个尿中肌酸酐测定方法的评价”、临床化学、 1961 年、第 7 卷、第 6 号、ρ· 665-673 (Cooper，“ AnEvaluation of Four Methods of Measuring Urinary Creatinine" ,1961, Vol. 7, No. 6, P.665-673)
发明内容
然而，在上述现有的方法中存在如下这样的问题点。在专利文献1所述的方法中，由于受到甘氨酸、组氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸等氨基 酸或蛋白质、葡萄糖等糖、丙酮、胆红素等干扰成分的影响，在含有上述物质的样本、例如尿 或血液等生物样本中，很难正确地对肌酸酐进行定量。例如，氨基酸或葡萄糖等的糖与苦味 酸发生反应。另外，在专利文献2所述的方法中，由于PH或电位的变化不稳定，所以很难正确地 对肌酸酐进行定量。另外，在专利文献2 10所述的方法中，当样本中存在盐分等离子种类或尿素时， 酶发生变性，从而酶的活性降低。因此，根据样本中所含的离子种类或尿素的浓度，反应速 度将产生偏差。因此，在对含有离子种类或尿素的样本、例如尿或血液等的生物样本中的肌 酸酐进行定量时，根据样本中所含的离子种类或尿素的浓度在测定结果中产生误差。另外，对于专利文献11和非专利文献1所述的使用1，4_萘醌-2-磺酸钾的方法， 非专利文献2和3中报告了测定结果的再现性非常低这样的问题。因而，本发明鉴于上述现有问题点而完成，其第一目的在于，提供一种能够高精度 地对样本中所含的肌酸酐进行定量的肌酸酐浓度的测定方法、测定器件以及测定装置。另外，本发明的第二目的在于，提供一种能够高精度地对尿中所含的盐分进行定 量的盐分量的测定方法、测定器件以及测定装置。为了解决上述现有问题，本发明的肌酸酐浓度测定方法包括(A)在作用于肌酸酐的酶和苦味酸都不存在的条件下，将含有肌酸酐的样本和含 有1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的肌酸酐定量用试剂混合，利用肌酸酐使1-甲氧基-5-甲基 吩嗪鐺还原的步骤；(B)用电化学法或者光学法测定在步骤A中被还原的1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的量的步骤；以及(C)根据在步骤B中测定的被还原的1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的量，求出样本中 所含的肌酸酐的浓度的步骤。本发明的盐分量测定方法包括(a)在作用于肌酸酐的酶和苦味酸都不存在的条件下，将作为样本的尿和含有 1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的肌酸酐定量用试剂混合，利用尿中所含的肌酸酐使1-甲氧 基-5-甲基吩嗪鐺还原的步骤；(b)用电化学法或者光学法测定在步骤a中被还原的1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的 量的步骤；(c)测定尿的电特性的步骤；以及(d)根据在步骤b中所测定的被还原的1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的量和在步骤c 中所测定的电特性，求出用于反映向尿中排泄的盐分的排泄量的值的步骤。本发明的肌酸酐浓度测定器件是在上述肌酸酐浓度测定方法中使用的器件，其包 括用于在作用于肌酸酐的酶和苦味酸都不存在的条件下收容含有肌酸酐的样本的 样本收容室；与样本收容室连通，用于向样本收容室内引入样本的样本引入口 ；配置在样本收容室内的含有1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的肌酸酐定量用试剂；以及配置在样本收容室内的2个以上的电极或者形成在样本收容室的光学测定用的 窗部。本发明的盐分量测定器件是上述盐分量测定方法所使用的器件，其包括用于在作用于肌酸酐的酶和苦味酸都不存在的条件下收容作为样本的尿的第一 样本收容室；与第一样本收容室连通，用于向第一样本收容室内引入尿的第一样本引入口 ；配置在第一样本收容室内的含有1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的肌酸酐定量用试 剂；用于收容尿的第二样本收容室；与第二样本收容室连通，用于向第二样本收容室内引入尿的第二样本引入口 ；以 及配置在第二样本收容室内的2个以上的电极。本发明的肌酸酐浓度测定装置包括用于安装上述肌酸酐浓度测定器件的测定器件安装部；在上述肌酸酐浓度测定器件的样本收容室内用电化学法或者光学法测定被肌酸 酐还原的1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的量的测定部；以及根据在测定部所测定的被还原的1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的量来求出样本中所 含的肌酸酐的浓度的运算部。另外，本发明的盐分量测定装置包括用于安装上述盐分量测定器件的测定器件安装部；在上述盐分量测定器件的第一样本收容室内用电化学法或者光学法测定被肌酸
8酐还原的1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的量的第一测定部；在上述盐分量测定器件的第二样本收容室内测定尿的电特性的第二测定部；以及根据在第一测定部所测定的被还原的1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的量和在第二测 定部所测定的电特性来求出用于反映向尿中排泄的盐分的排泄量的值的运算部。在存在磷酸类缓冲剂情况下，1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺是不稳定的。因此，在存在 磷酸类缓冲剂的情况下使肌酸酐与1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺发生反应时，优选与磷酸类缓 冲剂一起使用1价阴离子的电解质盐。根据本发明的肌酸酐浓度测定方法，在作用于肌酸酐的酶和苦味酸都不存在的条 件下，能够高精度地对样本中所含的肌酸酐进行定量。
图1是表示本发明实施方式1的肌酸酐浓度测定器件的结构的分解立体图。图2是表示实施方式1的肌酸酐浓度测定装置的外观的立体图。图3是表示实施方式1的肌酸酐浓度测定装置的结构的框图。图4是表示本发明实施方式2的肌酸酐浓度测定器件的结构的分解立体图。图5是表示实施方式2的肌酸酐浓度测定装置的外观的立体图。图6是表示实施方式2的肌酸酐浓度测定装置的结构的框图。图7是表示本发明实施方式3的从第一基板的第一面侧观察盐分量测定器件的结 构的分解立体图。图8是表示实施方式3的从第一基板的第二面侧观察盐分量测定器件的结构的分 解立体图。图9是表示实施方式3的盐分量测定装置的外观的立体图。图10是表示实施方式3的盐分量测定装置的结构的框图。图11是表示本发明实施方式4的从第一基板的第一面侧观察盐分量测定器件的 结构的分解立体图。图12是表示实施方式4的从第一基板的第二面侧观察盐分量测定器件的结构的 分解立体图。图13是表示实施方式4的盐分量测定装置的外观的立体图。图14是表示实施方式4的盐分量测定装置的结构的框图。图15是表示本发明实施例1的样本中的肌酸酐浓度与所测定的电流值的关系的 曲线图。图16是表示本发明实施例2的样本中的pH与所测定的电流值的关系的曲线图。图17是表示对本发明实施例3的肌酸酐浓度为OmM的样本测定的吸收光谱的历 时变化的曲线图。图18是表示对实施例3的肌酸酐浓度为IOmM的样本测定的吸收光谱的历时变化 的曲线图。图19是表示实施例3的从添加肌酸酐开始起经过5分钟后测定的波长510nm的 吸光度与样本中的肌酸酐浓度的关系的曲线图。图20是表示对参考例1的样本以及标准样本测定的氧化电流值的历时变化的曲线图。图21是表示本发明实施例4中所测定的电流值与样本中所含的肌酸酐的浓度的 关系的曲线图。图22是表示参考例2中所测定的在使用甲基硫酸钠作为1价阴离子的电解质盐 时所得到的CV值、与磷酸缓冲剂浓度相对于M-PMS浓度及电解质盐浓度的总和的比的关系 的曲线图。图23是表示参考例2中所测定的在使用硝酸钠作为1价阴离子的电解质盐时所 得到的CV值、和磷酸缓冲剂浓度相对于M-PMS浓度及电解质盐浓度的总和的比的关系的曲 线图。标号说明100,400 肌酸酐浓度测定器件102 第一基板104 第二基板106间隔物(第一间隔物)108、708 空气孔110、710 缝隙112 第一电极114 第二电极122 第一导线124 第二导线130试剂层132样本引入口(第一样本引入口)200、500肌酸酐浓度测定装置202 壳体204显示器206测定开始按钮208测定器件安装部302电压施加部304电信号检测部306控制部308计时部310存储部502 光源504光接收器700、1000盐分量测定器件702 第一面704第三基板706第二间隔物712第一电极或者第三电极
714第二电极或者第四电极716第三电极或者第五电极718第四电极或者第六电极722第一导线或者第三导线724第二导线或者第四导线726第三导线或者第五导线728第四导线或者第六导线732第二样本引入口802 第二面900、1300盐分量测定装置902恒流交流电源904电压检测器
具体实施例方式本发明的发明人新发现了肌酸酐与1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺直接发生反应。在 该反应中，尽管在作用于肌酸酐的酶(例如肌酸酐酰胺水解酶)和苦味酸都不存在的条件 下，肌酸酐与1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺也发生反应。其结果，肌酸酐和1-甲氧基-5-甲基 吩嗪鐺的量减少，生成肌酸酐的氧化物和被还原的1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺。本发明基于上述新的见解而完成，其特征是使用1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺作为肌 酸酐定量用试剂或试剂组成物的有效成分。1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺通常以盐的状态存 在。例如在固体的状态下，1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺与抗衡阴离子(Counter anion) 一同 构成盐。而在溶液中，1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的盐电离，1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺以溶 剂化的阳离子的状态存在。作为本发明中使用的1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的盐，可列举出1-甲氧基-5-甲 基吩嗪鐺硫酸甲酯、1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺氯化物等。其中，优选用下式(4)的结构式表 示的1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺硫酸甲酯(化学式=C15H16N2O5S,以下简称为M-PMS)。化学式1 本发明的肌酸酐浓度测定方法包括(A)在作用于肌酸酐的酶和苦味酸都不存在的条件下，将含有肌酸酐的样本和含 有1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的肌酸酐定量用试剂混合，利用肌酸酐使1-甲氧基-5-甲基 吩嗪鐺还原的步骤；(B)用电化学法或者光学法测定在步骤A中被还原的1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的量的步骤；以及(C)根据在步骤B中测定的被还原的1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的量，求出样本中 所含的肌酸酐的浓度的步骤。根据该方法，与以往的测定方法不同，在作用于肌酸酐的酶和苦味酸都不存在的 条件下，肌酸酐与1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺直接发生反应。因此，反应进行而不会受到盐 分等的离子种类、尿素、氨基酸、糖等的干扰成分的影响。由此，即使在使用尿或血液等生物 样本时，也能够以优于以往的测定方法的高精度对样本中所含的肌酸酐进行定量。在步骤A中，也可以在样本中混合缓冲剂。作为缓冲剂，可列举出磷酸类缓冲剂、柠檬酸类缓冲剂、邻苯二甲酸类缓冲剂、醋 酸类缓冲剂、MES缓冲剂等。在步骤A中，优选的是，通过在样本中混合磷酸类缓冲剂而将样本的pH调整为 5 10，更优选的是调整为6 7。这样，由于肌酸酐与1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺直接反应(1-甲氧基-5-甲基吩嗪 鐺被肌酸酐还原)的速度变快，所以能够缩短测定时间。对此，在后面与图16所言及的实 施例一起进行详细说明。作为磷酸类缓冲剂，可列举出磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、 磷酸、或者这些的水合物等。优选的是，磷酸类缓冲剂由磷酸氢盐和磷酸二氢盐构成。更优选的是由磷酸氢二 钾和磷酸二氢钾构成。通过将这些磷酸盐溶解在样本中，能够将样本的PH容易地调整在 6 7的范围内。在步骤A中，优选的是，样本中的磷酸类缓冲剂的浓度(磷原子的浓度)为5 lOOOmM，最优选的是5 500mM。本发明人发现了肌酸酐与1_甲氧基_5_甲基吩嗪鐺的反 应速度随着磷酸类离子浓度的增加而变快。如果是磷酸类缓冲剂的浓度为5mM以上，则能 得到足够的反应速度。另外，IOOOmM是将样本的pH调整为6 7的具有缓冲功能的磷酸类 缓冲剂的溶解度的上限。在步骤A中，也可以在样本中混合1价阴离子的电解质盐。由于样本中存在1价 阴离子，使得即使在存在磷酸类缓冲剂的情况下，1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺也稳定地存在。 因此，能够高再现性地对样本中所含的肌酸酐进行定量。作为电解质盐中的1价阴离子，可列举选自氯化物离子、硝酸离子以及甲基硫酸 离子中的阴离子。作为1价阴离子的电解质盐，可列举出氯化锂、氯化钠、氯化钾、硝酸锂、硝酸钠、 硝酸钾、甲基硫酸锂、甲基硫酸钠、甲基硫酸钾等。肌酸酐定量用试剂组成物也可以包含这 些1价阴离子的电解质盐中的多种电解质盐。在步骤A中，样本中的1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的浓度为1 IOOmM,优选的是， 1价阴离子的浓度为5 lOOOmM。在步骤A中，优选的是，样本中所含的磷酸类缓冲剂的摩尔浓度(磷原子的摩尔浓 度)为1价阴离子的摩尔浓度与1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺硫酸甲酯的摩尔浓度的总和的 二分之一以下。这样，使得样本中1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺硫酸甲酯更稳定地存在。因此，能够进一步高再现性地对样本中所含的肌酸酐进行定量。根据以上，优选的是，肌酸酐定量用试剂用作包含1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺、磷酸 类缓冲剂、1价阴离子的电解质盐的肌酸酐定量用试剂组成物。优选的是，试剂组成物中所含的磷酸类缓冲剂的量(磷原子的摩尔数)为1价阴 离子的电解质盐的量(1价阴离子的摩尔数)和1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的量(摩尔数) 总和的二分之一以下。在用电化学法测定被还原的1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的量时，例如，步骤B包括(D)使两个以上的电极与样本接触，向上述两个电极间施加电压的步骤；和(E)检测在上述两个电极间流动的电流值或者电荷量的步骤。另外，步骤C包括根据在步骤E中检测出的电流值或者电荷量来求出样本中所含 的肌酸酐的浓度的步骤。这样，能够用电化学法容易地求出样本中所含的肌酸酐的浓度。在用光学法测定被还原的1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的量时，例如，步骤B包括(F)向样本照射入射光的步骤；和(G)检测从样本透射的透射光或者在样本中反射的反射光的步骤。另外，步骤C包括根据在步骤G中检测出的透射光或者反射光的强度来求出样本 中所含的肌酸酐的浓度的步骤。这样，能够用光学法容易地求出样本中所含的肌酸酐的浓度。本发明的盐分量测定方法使用尿作为样本，除上述肌酸酐浓度则定方法的步骤A 和B之外，还包括下述的步骤c和d。SP，本发明的盐分量测定方法包括(a)在作用于肌酸酐的酶和苦味酸都不存在的条件下，将作为样本的尿和含有 1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的肌酸酐定量用试剂混合，利用尿中所含的肌酸酐使1-甲氧 基-5-甲基吩嗪鐺还原的步骤；(b)用电化学法或者光学法测定在步骤a中被还原的1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的 量的步骤；(c)测定尿的电特性的步骤；以及(d)根据在步骤b中所测定的被还原的1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的量和在步骤c 中所测定的电特性，求出用于反映向尿中排泄的盐分的排泄量的值的步骤。优选的是，步骤c在步骤a之前、例如步骤b之后且步骤d之前进行。肌酸酐定量用试剂未溶解的尿的电特性反映了尿中所含的电解质的浓度。尿中所 含的电解质浓度与尿中所含的盐分浓度有关。盐分等成分受到水分摄取、出汗等的影响，被 浓缩或者稀释后排泄到尿中。随时尿是不管白天、夜间而随时提取的尿。随时尿中所含的 盐分等尿中成分的浓度受到尿的浓缩和稀释的影响而发生变化。另一方面，如上述那样，肌酸酐依赖于肌肉量而产生。因此，每单位时间向尿中排 泄的肌酸酐的排泄量固定是公知的。即使在使用了随时尿的情况下，也能通过例如求出所 测定的尿中成分浓度与肌酸酐浓度之比(尿中成分/肌酸酐比)，修正尿的浓缩和稀释的影响。步骤b中的测定值高精度且高再现性地反映了肌酸酐浓度。步骤c中的电特性反 映了盐分浓度。因此，在本发明的盐分量测定方法中，能高精度且高再现性地修正尿的浓缩 和稀释的影响。因此，能够求出用于适当地反映向尿中排泄的盐分的排泄量的值。在此，作为尿的电特性，可列举出电阻、导电率、阻抗、对于所输入的电流(或者电 压)信号而输出的电压(或者电流)信号、所输入的交流信号的相位与所输出的交流信号 的相位的相位差等。作为在步骤d中求出的用于反映向尿中排泄的盐分的排泄量的值，可列举出每肌 酸酐单位量的盐分量、每单位时间(例如1日)的尿中盐分排泄量、每单位时间(例如1日) 的盐分摄取量等。本发明的肌酸酐浓度测定器件(以下，还称为测定器件A)在上述肌酸酐浓度测定 方法中使用，其包括用于在作用于肌酸酐的酶和苦味酸都不存在的条件下收容含有肌酸 酐的样本的样本收容室；与样本收容室连通，用于向样本收容室内引入样本的样本引入口 ； 和配置在样本收容室内的含有1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的肌酸酐定量用试剂。根据测定器件A，与以往的测定器件不同，在样本收容室内，在作用于肌酸酐的酶 和苦味酸都不存在的条件下，肌酸酐与1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺直接发生反应。因此，反 应进行时不会受到盐分等离子种类、尿素、氨基酸、糖、丙酮等干扰成分的影响。由此，即使 在使用尿或血液等的生物样本时，也能够以优于以往的测定器件的高精度对样本中所含的 肌酸酐进行定量。测定器件A既可以在样本收容室内具有磷酸类缓冲剂等的缓冲剂，也可以在样本 收容室内具有1价阴离子的电解质盐。通过在样本收容室内使1价阴离子、1-甲氧基-5-甲 基吩嗪鐺、磷酸类缓冲剂共存，使得1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺稳定地存在。所以，能够高再 现性地对样本中所含的肌酸酐进行定量。测定器件A也可以在样本收容室内还具有2个以上的电极。这样，能够用电化学法容易地求出样本中所含的肌酸酐的浓度。测定器件A也可以还具有形成在样本收容室的光学测定用的窗部。这样，能够用光学法容易地求出样本中所含的肌酸酐的浓度。本发明的盐分量测定器件(以下，还称为测定器件B)在上述的盐分量测定方法中 使用，其包括用于在作用于肌酸酐的酶和苦味酸都不存在的条件下收容作为样本的尿的 第一样本收容室；与第一样本收容室连通，用于向第一样本收容室内引入尿的第一样本引 入口 ；配置在第一样本收容室内的含有1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的肌酸酐定量用试剂；用 于收容尿的第二样本收容室；与第二样本收容室连通，用于向第二样本收容室内引入尿的 第二样本引入口 ；以及配置在第二样本收容室内的2个以上的电极。根据测定器件B，能够测定高精度地反映了肌酸酐浓度的被还原的1-甲氧 基-5-甲基吩嗪鐺的量和反映了盐分浓度的尿的电特性。通过使用被还原的1-甲氧 基-5-甲基吩嗪鐺的量和电特性，能够高精度地修正尿的浓缩和稀释的影响。因此，能够求 出用于适当地反映向尿中排泄的盐分的排泄量的值。测定器件B也可以是在第一样本收容室内还具有2个以上的电极。这样，能够用电化学法容易地求出用于适当地反映向尿中排泄的盐分的排泄量的
14值。本发明的肌酸酐浓度测定装置(以下，还称为测定装置A)包括用于安装测定器 件A的测定器件安装部；在测定器件A的样本收容室内用电化学法或者光学法测定被肌酸 酐还原的1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的量的测定部；以及根据在测定部所测定的被还原的 1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的量来求出样本中所含的肌酸酐的浓度的运算部。根据测定装置A，能够使用测定器件A并用电化学法或者光学法高精度且高再现 性地测定样本中所含的肌酸酐的浓度。当在样本收容室内用光学法测定被还原的1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的量时，测定 部具有例如射出向测定器件A的样本收容室内射入的入射光的光源、和检测从样本收容室 内透射的透射光或者在样本收容室内反射的反射光的光接收器。在这种情况下，运算部根 据光接收器所检测出的透射光或者反射光的强度来求出样本中所含的肌酸酐的浓度。根据该结构，使用测定器件A，能够用光学法容易地求出样本中所含的肌酸酐的浓 度。光源射出包含吸收强度根据1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺与肌酸酐的反应变化的波 长的光。作为光源，例如可列举出LED、激光等。在测定器件A的样本收容室内还具有2个以上的电极的情况下，测定部具有例如 用于向上述2个电极间施加电压的电压施加部和用于检测在上述2个电极间流动的电流值 或者电荷量的检测部。在这种情况下，运算部根据被检测部检测出的电流值或者电荷量来 求出样本中所含的肌酸酐的浓度。根据该结构，能够使用测定器件A并用电化学法容易地求出样本中所含的肌酸酐 的浓度。本发明的盐分量测定装置(以下，还称为测定装置B)包括用于安装测定器件B 的测定器件安装部；在测定器件B的第一样本收容室内用电化学法或者光学法测定被肌酸 酐还原的1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的量的第一测定部；在测定器件B的第二样本收容室内 测定尿的电特性的第二测定部；以及根据在第一测定部所测定的被还原的1-甲氧基-5-甲 基吩嗪鐺的量和在第二测定部所测定的电特性来求出用于反映向尿中排泄的盐分的排泄 量的值的运算部。根据测定装置B，能够使用测定器件B并用电化学法或者光学法高精度且高再现 性地测定用于反映向尿中排泄的盐分的排泄量的值。当在第一样本收容室内用光学法测定被还原的1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的量时， 测定部具有例如入射到第一样本收容室内的入射光的光源、和检测从第一样本收容室内透 射的透射光或者在样本收容室内反射的反射光的光接收器。在这种情况下，运算部根据在 光接收器中检测出的透射光或者反射光的强度来求出被还原的1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的量。根据该结构，能够使用测定器件B并用光学法容易地求出用于反映向尿中排泄的 盐分的排泄量的值。在测定器件B的第一样本收容室内还具有2个以上的电极时，测定部具有例如向 上述2个电极间施加电压的电压施加部和检测在上述2个电极间流动的电流值或者电荷量 的检测部。在这种情况下，运算部根据被检测部检测出的电流值或者电荷量来求出被还原的1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的量。根据该结构，能够使用测定器件B并用电化学法容易地求出用于反映向尿中排泄 的盐分的排泄量的值。作为样本，除水溶液之外，还可列举出血液、血清、血浆、尿、细胞间液、淋巴液、唾 液等的体液。特别是，尿是在非侵害地进行在家中的日常的健康管理方面非常有效的样本。 由于这些体液中的离子种类和尿素的浓度较高，所以能够非�：玫氐玫奖痉⒚鞯男Ч�。作为本发明的2个以上的电极的材料，优选的是至少包含金、钼、钯或它们的合金 或者混合物、和碳中的任意一个。这些材料在化学性和电化学性方面是稳定的，能够实现稳 定的测定。作为第三电极，可以将电位稳定的电极、例如Ag/AgCl或饱和甘汞电极等的参考 电极与上述2个电极组合来使用。当相对于第三电极规定2个电极中的一个电极的电位时， 用于测定的电位稳定，所以是优选的。另外，作为2个电极中的另一方电极，可以使用例如 Ag/AgCl或饱和甘汞电极等。优选配置成，在测定器件A和B中具有干燥状态的肌酸酐定量用试剂，当在向样本 收容室内引入样本时在样本中溶解。尤其优选的是配置成在测定器件A和B中具有干燥状态的M-PMS、1价阴离子的 电解质盐以及磷酸类缓冲剂，当向样本收容室内引入样本时在样本中溶解。通过使例如由玻璃纤维或滤纸等构成的多孔性的载体含浸包含肌酸酐定量用试 剂的溶液，然后使其干燥，从而使肌酸酐定量用试剂载置到上述载体。并且，只要将该载体 设置于与样本相接触的部分即可。另外，也可以在测定器件的与样本接触的部分的壁面上 直接涂敷了含有肌酸酐定量用试剂的溶液之后进行干燥，将肌酸酐定量用试剂配置在该壁 面上。还可以使含有肌酸酐定量用试剂的溶液包含缓冲剂和1价阴离子的电解质盐。优选的是，测定器件A和B以可装卸的状态安装在测定装置A和B的测定器件安 装部上。另外，优选的是，在特别是使用尿或血液等生物液时，从卫生的观点来看，测定器件 A和B使用完就扔掉。以下，使用
本发明的实施方式。(实施方式1)使用图1来说明本发明实施方式1的肌酸酐浓度测定器件100。图1是表示测定 器件100的结构的的分解立体图。测定器件100用于以电化学法对样本中所含的肌酸酐的浓度进行定量的方法。测 定器件100具有绝缘性的第一基板102和具备空气孔108的绝缘性的第二基板104夹着具 备缝隙110的绝缘性的间隔物106而组合成的构造。第一基板102、第二基板104以及间隔 物106是例如聚对苯二甲酸乙二醇酯制。在第一基板102上配置有第一电极112、第二电极114、与第一电极112电连接的 第一导线122、以及与第二电极114电连接的第二导线124。另外，在第一电极112和第二 电极114之上配置有含有肌酸酐定量用试剂的试剂层130。第一基板102的尺寸只要合适 地设定即可，例如宽度为7mm左右、长度为30mm左右、厚度为0. 7mm左右。接着，说明测定器件100的制造方法。首先，在第一基板102上，在设置有树脂制成的电极图案掩膜的状态下溅射钯。由 此，形成第一电极112、第二电极114、第一导线122、以及第二导线124。第一电极112及第二电极114分别通过第一导线122及第二导线124与后述的肌酸酐浓度测定装置的端子电 连接。接着，在设置于第一基板102上的第一电极112和第二电极114之上，溶解M-PMS、 磷酸二氢钾、以及磷酸氢二钾，使用微型注射器等将根据需要溶解了 1价阴离子的电解质 盐的水溶液滴下一定量。优选的是，1价阴离子的电解质盐使用例如1价阴离子的甲基硫酸 离子的钠盐即甲基硫酸钠。然后，通过将第一基板102静置于室温 30°C左右的环境中使 其干燥，从而形成试剂层130。涂敷的含有试剂的水溶液的浓度和量根据所需的器件特性或尺寸来选择即可。 例如，含有试剂的水溶液中的M-PMS的浓度为IOmM左右，含有试剂的水溶液的滴下量为 1. 4μ L左右。另外，形成试剂层130的区域的面积考虑试剂对于样本的溶解性等来适当地 选择即可，例如将其面积设为3mm2左右。接着，组合形成有电极和试剂层130的第一基板102、间隔物106、以及第二基板 104。在第一基板102、间隔物106以及第二基板104的各接合部分涂敷粘接剂，将这些粘结 后按压并静置，使其粘接。也可以替代该方法，不涂敷粘接剂而组合这些部件，然后使用市 场上销售的熔敷机，利用热或者超声波使接合部分熔敷。当组合了第一基板102、间隔物106以及第二基板104时，在第一基板102与第二 基板104之间，由设置在间隔物106上的缝隙110形成的空间部作为样本收容室发挥作用。 另外，缝隙110的开口部作为样本引入口 132发挥作用。接着，使用图2和图3来说明本实施方式的肌酸酐浓度测定装置200和使用该装 置的肌酸酐浓度测定方法。图2是表示测定装置200的外观的立体图，图3是表示测定装 置200的结构的框图。首先，参照图2说明测定装置200的结构。在测定装置200的壳体202上设置有用于安装测定器件100的测定器件安装部 208、显示测定结果等的显示器204、以及用于使测定装置200开始测定肌酸酐浓度的测定 开始按钮206。另外，在测定器件安装部208的内部设置有分别与测定器件100的第一导线 122和第二导线124电连接的第一端子和第二端子。接着，参照图3说明测定装置200的壳体202内部的结构。测定装置200在壳体202内部包括电压施加部302、电信号检测部304、控制部 306、计时部308、以及存储部310。电压施加部302具有向安装于测定器件安装部208的测定器件100的第一电极 112和第二电极114施加电压或者电位的功能。电压或者电位的施加是经由分别与测定器 件100的第一导线122及第二导线124电连接的第一端子及第二端子而进行的。电信号检测部304具有经由第一端子和第二端子来检测来自第一电极112和第二 电极114的电信号的功能。电信号检测部304相当于本发明的检测部。在存储部310中存储有相当于表示肌酸酐的浓度和被电信号检测部304检测的电 信号之间的关系的标准曲线的相关数据。作为存储部310，可使用例如RAM、R0M等存储器。控制部306具有参照上述相关数据将被电信号检测测定部304检测出的电信号换 算为肌酸酐浓度的功能。控制部306相当于本发明的运算部。作为控制部306，能够使用例 如 CPU(Central ProcessingUnit)等的微型计算机。
接着，说明使用了测定器件100和测定装置200的本实施方式的肌酸酐浓度测定方法。首先，使用者将测定器件100的导线侧插入到测定装置200的测定器件安装部 208。由此，通过测定器件100的第一导线122及第二导线124与设于测定器件安装部208 内部的第一端子及第二端子分别接触而电导通。当向测定器件安装部208插入测定器件100时，设置于测定器件安装部208内的 由微型开关构成的插入检验开关进行工作，向控制部306输出信号。当控制部306利用来 自插入检验开关的输出信号检验测定器件100的插入时，控制部306控制电压施加部302， 经由第一端子和第二端子向第一电极112与第二电极114之间施加用于检验样本引入的电 压(例如0. 2V)。接着，使用者使测定器件100的样本引入口 132与样本接触。通过该接触，经过样 本引入口 132向测定器件100的样本收容室内利用毛细管现象吸引样本(例如，0.6μ L左 右)，样本收容室内被样本填充。当样本与第一电极112以及第二电极114相接触时，电流 经由样本在第一电极112与第二电极114之间流动。因此，电信号检测部304检测由此引 起的电信号的变化。当控制部306根据来自电信号检测部304的输出信号检验到在样本收容室引入了 样本时，控制部306控制电压施加部302，将电压施加部302施加的施加电压切换为不同的 电压(例如OV或者开路)。另外，随着样本引入的检验，控制部306使作为计时器的计时部 308开始计时。当在样本收容室内的露出试剂层130与样本相接触时，试剂层130所含的M-PMS 溶解在样本中。溶解在样本中的M-PMS与样本中所含的肌酸酐直接发生反应，由此生成反 应生成物(肌酸酐的氧化物和被还原的M-PMS)。当控制部306利用来自计时部308的信号判断经过了规定时间(例如60秒)时， 控制部306控制电压施加部302，向第一电极112与第二电极114之间施加用于测定被还原 的M-PMS浓度的电压。例如，施加第一电极112与第二电极114相比为+0.6V的电压。这 样施加电压之后经过一定时间(例如5秒)，在电信号检测部304中测定在第一电极112与 第二电极114之间流动的电流等的电信号。此时，在第一电极112上，氧化被还原的M-PMS。 因此，在电信号检测部304中测定的电信号依赖于样本中所含的肌酸酐浓度。控制部306读出存储于存储部310的表示电信号与肌酸酐浓度之间的关系的相关 数据，并参考该相关数据。由此，在电信号检测部304检测出的电信号被换算成样本中的肌 酸酐浓度。所得到的肌酸酐浓度显示在显示器204上。通过在显示器204上显示肌酸酐浓度， 用户得知肌酸酐浓度测定完成。优选的是，所得到的肌酸酐浓度与由计时部308计时的时 刻一起被保存到存储部310。根据测定器件100，与以往的测定器件不同，在样本收容室内，在作用于肌酸酐的 酶和苦味酸都不存在的条件下，肌酸酐与M-PMS直接发生反应。因此，反应的进行不会受到 盐分等离子种类、尿素、氨基酸、糖、丙酮等干扰成分的影响。由此，即使在使用尿或血液等 的生物样本时，也能够以优于以往的测定器件的高精度对样本中所含的肌酸酐进行定量。 另外，由于样本中存在1价阴离子，使得在存在磷酸类缓冲剂的情况下M-PMS稳定地存在。因此，在样本中存在1价阴离子时，能够以更高再现性对样本中所含的肌酸酐进行定量。在本实施方式中，作为1价阴离子的电解质盐，优选使用甲基硫酸钠，但也未必使 用1价阴离子的电解质盐。另外，1价阴离子的电解质不限于甲基硫酸钠。也可以使用氯化 锂、氯化钠、氯化钾、硝酸锂、硝酸钠、硝酸钾、甲基硫酸锂、甲基硫酸钠、甲基硫酸钾等替代 甲基硫酸钠。在使用这些1价阴离子的电解质盐的情况下，也由于样本中存在1价阴离子， 使得在存在磷酸类缓冲剂的情况下，M-PMS稳定地存在。在本实施方式中示出了测定器件具有1个试剂层的例子，但不限于此。测定器件 也可以具有2个试剂层、例如含有肌酸酐定量用试剂的第一试剂层和含有磷酸类缓冲剂的
第二试齐Ll层。
在本实施方式中示出了通过控制部检验向样本收容室引入了样本而将电压施加 部施加的施加电压切换为不同的电压的例子，但不限于此。只要能得到依赖于肌酸酐的浓 度的电流，未必需要切换电压施加部施加的施加电压。也可以从测定器件的插入检验时开 始施加测定所需的电压值(例如，施加第一电极与第二电极相比为+0. 6V的电压)，在样本 引入的检验后也继续施加该电压值。在本实施方式中示出了将用于得到与被还原的M-PMS浓度对应的电信号的、向第 一电极施加的施加电位设为相对于第二电极为0. 6V例子，但不限于此。第一电极与第二电 极之间的电压只要是通过肌酸酐与M-PMS的氧化还原反应来氧化被还原的M-PMS的电压即可。在本实施方式中示出了将样本引入的检验后直到检测电信号为止的时间(反应 时间)设为60秒的例子，但未必是该值。只要能有意地检测相对于肌酸酐浓度差异的电流 值的差，反应时间也可以比上述时间短。而在使反应时间更长时，肌酸酐与M-PMS的反应到 达完成状态或者稳定状态的可能性提高。因此，容易更正确地定量肌酸酐的存在量而不会 受温度等的环境条件的影响。在本实施方式中示出了从向电极施加电位开始起经过5秒后检测电信号的例子， 但不限于该时间。只要该时间是能有意地检测相对于肌酸酐浓度的差异的电信号的差的时 间即可。另外，电极系统、导线、以及端子的形状、个数、配置等不限于本实施方式。其他实 施方式也相同。为了更顺利地向测定器件的样本收容室内引入样本，也可以在第二基板的内壁涂 敷将卵磷脂溶解于甲苯或者其他有机溶媒中的溶液并使其干燥，从而形成卵磷脂层。通过 形成这样的构造，能够以更高再现性使样本量固定。因此，能够更高精度地定量样本中所含 的肌酸酐。肌酸酐浓度测定装置可以还具有用于将测定结果记录到SD卡等存储介质的记录 部。通过向可拆卸的存储介质保存测定结果，能够容易地从测定装置取出测定结果。因此， 易于委托与分析相关的人员对测定结果进行分析。测定装置可以还具有用于将测定结果发送到测定装置外部的发送部。由此，能够 向医院内的与分析相关的部门或者与分析相关的人员等发送测定结果。因此，能够缩短从 测定到由与分析相关的部门或者与分析相关的人员等进行分析的时间。测定装置可以还具有用于接收与分析相关的部门或者与分析相关的人员等分析的结果的接收部。由此，能够迅速地向使用者反馈分析结果。(实施方式2)
接着，使用图4来说明本发明实施方式2的肌酸酐浓度测定器件400。图4是表示 测定器件400的结构的分解立体图。测定器件400用于以光学法对样本中所含的肌酸酐的浓度进行定量的方法。测定 器件400具有第一基板102和具备空气孔108的第二基板104夹着具备缝隙110的间隔物 106而组合成的构造。第一基板102、第二基板104以及间隔物106是例如聚对苯二甲酸乙
二醇酯制。测定器件400与实施方式1的测定器件100不同，在第一基板102上没有配置第 一电极112、第二电极114、第一导线122以及第二导线124。另外，不是在第一电极112和 第二电极114之上，而是在第一基板102上配置有与实施方式1相同的试剂层130。第一基 板102的尺寸只要合适地设定即可，例如宽度为7mm左右、长度为30mm左右、厚度为0. 7mm
左右ο接着，说明测定器件400的制造方法。首先，在第一基板102上使用微型注射器等将与实施方式1相同的含有肌酸酐定 量用试剂的水溶液滴下一定量。然后，通过将第一基板102静置于室温 30°C左右的环境 中使其干燥，从而形成试剂层130。涂敷的含有试剂的水溶液的浓度和量只要按照所需的器 件特性或尺寸来选择即可，例如，只要与实施方式1相同即可。接着，组合形成有试剂层130的第一基板102、间隔物106、第二基板104。在第一 基板102、间隔物106以及第二基板104的各接合部分涂敷粘接剂，将这些粘结后按压并静 置，使其粘接。替代该方法，也可以不涂敷粘接剂来组合这些部件，然后使用市场上销售的 熔敷机，利用热或者超声波使接合部分熔敷。当组合第一基板102、间隔物106以及第二基板104时，在第一基板102与第二基 板104之间，由设置在间隔物106上的缝隙110形成的空间部作为样本收容室发挥作用。另 夕卜，缝隙110的开口部作为样本引入口 132发挥作用。接着，使用图5和图6来说明本实施方式的肌酸酐浓度测定装置500和使用该装 置的肌酸酐浓度测定方法。图5是表示测定装置500的外观的立体图，图6是表示测定装 置500的结构的框图。首先，参照图5说明测定装置500的结构。在测定装置500的壳体202上设置有用于安装测定器件400的测定器件安装部 208、显示测定结果等的显示器204、以及用于使测定装置500开始测定肌酸酐浓度的测定 开始按钮206。接着，参照图6来说明测定装置500的壳体202内部的结构。测定装置500在壳体202内部包括光源502、光接收器504、控制部306、计时部 308、以及存储部310。光源502具有将射入安装于测定器件安装部208的测定器件400的样本收容室内 的光射出的功能。从光源502射出的光的波长只要选择吸收强度根据M-PMS与肌酸酐的反 应而变化的波长即可。作为光源502，例如使用射出包含510nm的波长范围的光的青绿色 LED。
光接收器504具有检测从光源502射出并在安装于测定器件安装部208的测定器 件400的样本收容室内发生反射的光的功能。在存储部310中存储有相当于表示肌酸酐的浓度和被光接收器504检测的反射光 的强度相关的标准曲线的相关数据。作为存储部310，可使用例如RAM、ROM等存储器。 控制部306具有参照上述相关数据将被光接收器504检测出的反射光的强度换算 为肌酸酐浓度的功能。控制部306相当于本发明的运算部。作为控制部306，能够使用例如 CPU (Central ProcessingUnit)等的微型计算机。接着，说明使用了测定器件400和测定装置500的本实施方式的肌酸酐浓度测定方法。首先，使用者将测定器件400的样本引入口 132的相反侧插入到测定装置500的 测定器件安装部208。当向测定器件安装部208插入测定器件400时，设置于测定器件安装部208内的 由微型开关构成的插入检验开关进行工作，向控制部306输出信号。当控制部306根据来自 插入检验开关的输出信号检验到测定器件400的插入时，控制部306使光源502工作。由 此，向测定器件400的样本收容室照射来自光源502的光。接着，使用者使测定器件400的样本引入口 132与样本接触。通过该接触，经过样 本引入口 132向测定器件400的样本收容室内利用毛细管现象吸引样本，样本收容室内被 样本填充。当样本到达样本收容室内的光的照射位置时，样本收容室内的透射率发生变化。 光接收器504检测由此引起的反射光强度的变化。当控制部306根据来自光接收器504的输出信号检验到在样本收容室引入了样本 时，控制部306使作为计时器的计时部308开始计时。当在样本收容室内露出的试剂层130与样本相接触时，试剂层130所含的M-PMS 溶解在样本中。溶解在样本中的M-PMS与样本中所含的肌酸酐直接发生反应，由此生成反 应生成物(肌酸酐的氧化物和被还原的M-PMS)。M-PMS被还原并减少，由此样本的吸收光 谱发生变化。在此，样本的吸收光谱的变化量依赖于被还原的M-PMS的浓度。当控制部306根据来自计时部308的信号判断出经过了规定时间(例如60秒) 时，在光接收器504中测定在样本收容室内反射的光的强度。此时，在光接收器504中测定 的反射光的强度依赖于样本中所含的肌酸酐浓度。控制部306读出表示存储于存储部310的肌酸酐的浓度与被光接收器504检测到 的反射光的强度之间的关系的相关数据，并参考该相关数据。由此，在光接收器504中检测 出的反射光的强度被换算成样本中的肌酸酐浓度。所得到的肌酸酐浓度显示在显示器204上。通过在显示器204上显示肌酸酐浓度， 用户得知肌酸酐浓度测定完成。优选的是，所得到的肌酸酐浓度与由计时部308计时的时 刻一起被保存到存储部310。根据测定器件400，与以往的测定器件不同，在样本收容室内，在作用于肌酸酐的 酶和苦味酸都不存在的条件下，肌酸酐与M-PMS直接发生反应。因此，反应进行而不会受到 盐分等离子种类、尿素、氨基酸、糖、丙酮等干扰成分的影响。由此，即使在使用尿或血液等 的生物样本时，也能够以优于以往的测定器件的高精度且高再现性地对样本中所含的肌酸 酐进行定量。另外，与实施方式1相同，由于样本中存在1价阴离子，所以能够以更高再现性对样本中所含的肌酸酐进行定量。在本实施方式中，1价阴离子的电解质盐也不限于甲基 硫酸钠。在本实施方式中，与实施方式1相同，测定器件也可以具有2个以上的试剂层。在本实施方式中示出了将样本引入的检验后直到检测反射光强度为止的时间 (反应时间)设为60秒的例子，但也未必是该值。只要能有意地检测相对于肌酸酐浓度的 差异的反射光强度的差，反应时间也可以比上述时间短。另一方面，与实施方式1相同，在 使反应时间更长时，容易更正确地定量肌酸酐的存在量。 为了更顺利地向测定器件的样本收容室内引入样本，与实施方式1相同，也可以 具有卵磷脂层。与实施方式1相同，肌酸酐浓度测定装置可以还具有用于将测定结果记录到SD卡 等的存储介质的记录部。另外，测定装置可以还具有用于将测定结果发送到测定装置外部 的发送部。进而，测定装置可以还具有用于接收与分析相关的部门或者与分析相关的人员 等分析的结果的接收部。(实施方式3)接着，使用图7和图8来说明本发明实施方式3的盐分量测定器件700。图7是表 示从第一基板的第一面侧观察测定器件700的结构的分解立体图，图8是从第一基板的第 二面侧观察测定器件700的结构的分解立体图。测定器件700被用于如下的方法中，即以电化学法测定作为样本的尿中所含的 肌酸酐，并且测定尿的电特性，使用这些测定结果，推算1日排泄的尿中所含的盐分的量。在测定器件700中，绝缘性的第一基板102的第一面702与具有缝隙110的绝缘 性的第一间隔物106接触，第一基板102和具备空气孔108的绝缘性的第二基板104夹着 第一间隔物106而组合成。而且，第一基板102的第二面802与具有缝隙710的绝缘性的 第二间隔物706接触，第一基板102和具有空气孔708的绝缘性的第三基板704夹着第二 间隔物706而组合成。第一基板102、第一间隔物106、第二基板104、第二间隔物706以及 第三基板704是例如聚对苯二甲酸乙二醇酯制。与实施方式1的测定器件100相同，在第一基板102的第一面702上配置有第一 电极112、第二电极114、与第一电极112电连接的第一导线122、以及与第二电极114电连 接的第二导线124。另外，在第一电极112和第二电极114上配置有含有肌酸酐定量用试剂 的试剂层130。而在第一基板102的第二面802上配置有第三电极712、第四电极714、第五电极 716、以及第六电极718。而且，在第二面802上配置有与第三电极712电连接的第三导线 722、与第四电极714电连接的第四导线724、与第五电极716电连接的第五导线726、以及 与第六电极718电连接的第六导线728。第一基板102的尺寸只要合适地设定即可，例如宽 度为7mm左右、长度为30mm左右、厚度为0. 7mm左右。接着，说明测定器件700的制造方法。首先，在第一基板102的第一面702上，在设置有树脂制成的电极图案掩膜的状态 下溅射钯。由此，形成第一电极112、第二电极114、第一导线122、以及第二导线124。第一 电极112及第二电极114分别通过第一导线122及第二导线124与后述的盐分量测定装置 的端子电连接。
接着，在第一基板102的第二面802上，在设置有图案与上述电极图案掩膜不同的 电极图案掩膜的状态下溅射钯。由此，形成第三电极712、第四电极714、第五电极716、第六 电极718、第三导线722、第四导线724、第五导线726、以及第六导线728。第三电极712、第 四电极714、第五电极716、以及第六电极718分别通过第三导线722、第四导线724、第五导 线726以及第六导线728与后述的盐分量测定装置的端子电连接。接着，在设置于第一基板102的第一面702上的第一电极112和第二电极114之 上，使用微型注射器等将与实施方式1相同的含有肌酸酐测定用试剂的水溶液滴下一定 量。然后，通过将第一基板102静置于室温 30°C左右的环境中使其干燥，从而形成试剂层 130。涂敷的含有试剂的水溶液的浓度和量只要按照所需的器件特性或尺寸来选择即可，例 如，只要与实施方式1相同即可。
接着，组合第二基板104、第一间隔物106、第一基板102、第二间隔物706、以及第 三基板704，使得第一基板102的第一面702与第一间隔物106接触，第一基板102的第二 面802与第二间隔物706接触。在各部件的各接合部分涂敷粘接剂，将这些粘结后按压并 静置，使其粘接。替代该方法，也可以不涂敷粘接剂来组合这些部件，然后使用市场上销售 的熔敷机，利用热或者超声波使接合部分熔敷。当组合第一基板102、第一间隔物106以及第二基板104时，在第一基板102与第 二基板104之间，由设置在第一间隔物106上的缝隙110形成的空间部作为肌酸酐浓度测 定用的第一样本收容室发挥作用。另外，缝隙110的开口部作为肌酸酐浓度测定用的第一 样本引入口 132发挥作用。而当组合第一基板102、第二间隔物706以及第三基板704时，在第一基板102与 第三基板704之间，由设置在第二间隔物706上的缝隙710所形成的空间部作为尿的电特 性测定用的第二样本收容室发挥作用。另外，缝隙710的开口部作为尿的电特性测定用的 第二样本引入口 732发挥作用。接着，使用图9和图10来说明本实施方式的盐分量测定装置900和使用该装置的 盐分量测定方法。图9是表示测定装置900的外观的立体图，图10是表示测定装置900的 结构的框图。首先，参照图9说明测定装置900的结构。在测定装置900的壳体202上设置有用于安装测定器件700的测定器件安装部 208、显示测定结果等的显示器204、以及用于使测定装置900开始测定肌酸酐浓度和尿的 电特性的测定开始按钮206。另外，在测定器件安装部208的内部设置有分别与测定器件 700的第一导线122、第二导线124、第三导线722、第四导线724、第五导线726以及第六导 线728电连接的第一端子、第二端子、第三端子、第四端子、第五端子以及第六端子。接着，参照图10说明测定装置900的壳体202内部的结构。测定装置900在壳体202内部包括电压施加部302、电信号检测部304、恒流交流 电源902、电压检测器904、控制部306、计时部308、以及存储部310。电压施加部302具有向安装于测定器件安装部208的测定器件700的第一电极 112和第二电极114施加电压或者电位的功能。电压或者电位的施加是经由分别与测定器 件700的第一导线122和第二导线124电连接的第一端子和第二端子而进行的。电信号检测部304具有经由第一端子和第二端子来检测来自第一电极112和第二电极114的电信号的功能。电信号检测部304相当于本发明的检测部。恒流交流电源902具有在安装于测定器件安装部208的测定器件700的第三电极 712与第六电极718之间施加一定的交流电流的功能。一定的交流电流的施加通过分别与 测定器件700的第三导线722及第六导线728电连接的第三端子及第六端子而进行。施加 的交流电流例如是频率为IkHz左右、电流值为0. ImA左右。电压检测器904具有经由第四端子及第五端子来检测第四电极714与第五电极 716之间的电压(交流电压的有效值)的功能。在存储部310中存储有(i)相当于表示肌酸酐的浓度与被电信号检测部304检测 的电信号之间的关系的第一标准曲线的第一相关数据；(ii)相当于表示盐分的浓度与被 电压检测器904检测的电压之间的关系的第二标准曲线的第二相关数据；以及(iii)相当 于表示每1日的尿中盐分排泄量与根据肌酸酐浓度修正后的盐分浓度之间的关系的第三 标准曲线的第三相关数据。
作为存储部310，可使用例如RAM、ROM等存储器。控制部306具有如下功能(I)参照第一相关数据将被电信号检测测定部304检 测出的电信号换算为肌酸酐浓度；(II)参照第二相关数据将被电压检测器904检测出的电 压换算为盐分浓度；(III)使用所得到的肌酸酐浓度来修正盐分浓度；以及(IV)参照第三 相关数据将修正后的盐分浓度换算为每1日的尿中盐分排泄量。控制部306相当于本发明的运算部。作为控制部306，能够使用例如CPU (Central Processing Unit)等的微型计算机。接着，说明使用了测定器件700和测定装置900的本实施方式的尿中盐分量测定方法。首先，使用者将测定器件700的导线侧插入到测定装置900的测定器件安装部 208。由此，测定器件700的第一导线122、第二导线124、第三导线722、第四导线724、第五 导线726以及第六导线728、与设置于测定器件安装部208内部的第一端子、第二端子、第三 端子、第四端子、第五端子以及第六端子分别电导通。当向测定器件安装部208插入测定器件700时，设置于测定器件安装部208内的 由微型开关构成的插入检验开关进行工作，向控制部306输出信号。当控制部306根据来自 插入检验开关的输出信号检验到测定器件700的插入时，控制部306控制电压施加部302， 经由第一端子和第二端子向第一电极112与第二电极114之间施加电压(例如0. 2V)。接着，使用者使测定器件700的第一样本引入口 132和第二样本引入口 732与样 本接触。通过该接触，经过第一样本引入口 132和第二样本引入口 732向测定器件700的 2个样本收容室内利用毛细管现象吸引样本，2个样本收容室内被样本填充。当在第一样本收容室中样本与第一电极112以及第二电极114相接触时，经由样 本在第一电极112与第二电极114之间流过电流。因此，电信号检测部304检测由此引起 的电信号的变化。控制部306根据来自电信号检测部304的输出信号检验出在第一样本收容室和第 二样本收容室中已引入样本这一情况。当控制部306检验出在第一样本收容室和第二样本收容室中已引入样本时，控制 部306控制电压施加部302，将电压施加部302施加的施加电压切换为不同的电压(例如OV或者开路)。另外，随着样本引入的检验，控制部306使作为计时器的计时部308开始计 时。随着向第二样本收容室引入样本的检验，控制部306控制恒流交流电源902，经由 第三端子和第六端子向第三电极712与第六电极718之间施加一定的交流电流(例如，频 率1kHz、电流值0. ImA)。从施加交流电流起经过规定时间后(例如5秒后)，电压检测器 904测定第四电极714与第五电极716之间的电压(交流电压的有效值)。
控制部306读出存储于存储部310的表示盐分的浓度与被电压检测器904检测的 电压之间的关系的第二相关数据，并参照第二相关数据。由此，将被电压检测器904检测出 的电压换算为样本中的盐分浓度。所得到的盐分浓度显示在显示器204上。当在第一样本收容室中样本与试剂层130相接触时，试剂层130所含的M-PMS溶 解在样本中。溶解在样本中的M-PMS与样本中所含的肌酸酐直接发生反应，由此生成反应 生成物(肌酸酐的氧化物和被还原的M-PMS)。当控制部306根据来自计时部308的信号判断经过了规定时间(例如60秒)时， 控制部306控制电压施加部302，向第一电极112与第二电极114之间再次施加不同的电 压(例如，第一电极112与第二电极114相比为+0.6V的电压)。这样施加电压起经过一定 时间(例如5秒)之后，在电信号检测部304中测定在第一电极112与第二电极114之间 流过的电流等的电信号。此时，在第一电极112上，氧化被还原的M-PMS。在电信号检测部 304中测定的电信号依赖于样本中所含的肌酸酐浓度。控制部306读出存储于存储部310的表示电信号与肌酸酐浓度的相互关系的第一 相关数据，并参照第一相关数据。由此，在电信号检测部304检测出的电信号被换算成样本 中的肌酸酐浓度。接着，控制部306使用所得到的肌酸酐浓度修正盐分浓度。然后，控制部306读出 存储于存储部310的相当于表示每1日的尿中盐分排泄量与根据肌酸酐浓度修正后的盐分 浓度的关系的第三标准曲线的第三相关数据，并参照第三相关数据。由此，将修正后的盐分 浓度换算为每1日的尿中盐分排泄量。所得到的肌酸酐浓度和每1日的尿中盐分排泄量显示在显示器204上。通过在显 示器204上显示肌酸酐浓度和每1日的尿中盐分排泄量，由此用户知晓测定已完成。优选 的是，所得到的肌酸酐浓度和每1日的尿中盐分排泄量与由计时部308计时的时刻一起被 保存到存储部310。根据测定装置900，根据利用以高精度测定的肌酸酐浓度进行修正后的盐分浓度， 能够计算出每1日的尿中盐分排泄量。因此，能够高精度且高再现性地求出每1日的尿中 盐分排泄量。 在本实施方式中，与实施方式1相同，盐分量测定器件可以具有2个以上的试剂层。在本实施方式中，也与实施方式1相同，只要能得到依赖于肌酸酐的浓度的电流， 未必需要将由电压施加部施加的施加电压切换为不同的电压。在本实施方式中，也与实施方式1相同，第一电极与第二电极之间的电压只要是 氧化被还原的M-PMS的电压即可。在本实施方式中，也与实施方式1相同，不限定样本引入的检验后直到检测电信号为止的时间(反应时间)。在本实施方式中示出了向第一电极与第二电极之间施加电压5秒后检测电信号 的例子，但不限于该时间。在本实施方式中示出了在存储部中存储有上述第一 第三相关数据的例子，但不 限于此。也可以取而代之，将表示被电信号检测部检测的电信号、被电压检测器检测的电 压、以及每单位时间(例如1日)的尿中盐分排泄量之间的关系的相关数据存储在存储部。 在这种情况下，也可以不求出肌酸酐浓度和盐分浓度。使用被电信号检测部检测的电信号 和被电压检测器检测的电压，能够直接求出每单位时间的尿中盐分排泄量。另外，为了更顺利地向测定器件的样本收容室内引入样本，也可以在第二基板和 第三基板的内壁形成与实施方式1相同的卵磷脂层。另外，盐分量测定装置可以还具有用于将测定结果记录到SD卡等存储介质的记 录部。另外，盐分量测定装置可以还具有用于将测定结果发送到测定装置外部的发送 部。另外，盐分量测定装置可以还具有用于接收与分析相关的部门或者与分析相关的 人员等分析的结果的接收部。(实施方式4)接着，使用图11和图12来说明本发明实施方式4的盐分量测定器件1000。图11 是表示从第一基板的第一面侧观察盐分量测定器件1000的结构的分解立体图，图12是从 第一基板的第二面侧观察的结构的分解立体图。测定器件1000被用于如下的方法中，即以光学法测定作为样本的尿中所含的肌 酸酐，并且测定尿的电特性，使用这些测定结果，推算1日排泄的尿中所含的盐分的量。在测定器件1000中，绝缘性的第一基板102的第一面702与具有缝隙110的第一 间隔物106接触，第一基板102和具备空气孔108的第二基板104夹着第一间隔物106而 组合成。而且，第一基板102的第二面802与具有缝隙710的第二间隔物706接触，第一基 板102和具有空气孔708的第三基板704夹着第二间隔物706而组合成。第一基板102、第 一间隔物106、第二基板104、第二间隔物706以及第三基板704是例如聚对苯二甲酸乙二 醇酯制。测定器件1000与实施方式1的测定器件100不同，在第一基板102上不配置第一 电极112、第二电极114、第一导线122以及第二导线124。另外，不是在第一电极112和第 二电极114之上而是在第一基板102上配置有与实施方式1相同的试剂层130。而在第一基板102的第二面802上配置有第一电极712、第二电极714、第三电极 716、以及第四电极718。而且，在第二面802上配置有与第一电极712电连接的第一导线 722、与第二电极714电连接的第二导线724、与第三电极716电连接的第三导线726、以及 与第四电极718电连接的第四导线728。第一基板102的尺寸只要合适地设定即可，例如宽 度为7mm左右、长度为30mm左右、厚度为0. 7mm左右。接着，说明测定器件1000的制造方法。首先，与实施方式3的第三 第六电极及第三 第六导线一样，形成第一电极 712、第二电极714、第三电极716、第四电极718、第一导线722、第二导线724、第三导线726以及第四导线728。第一电极712、第二电极714、第三电极716以及第四电极718分别通过 第一导线722、第二导线724、第三导线726以及第四导线728与后述的盐分量测定装置的 端子电连接。接着，在第一基板102的第一面702上，使用微型注射器等将 与实施方式1相同 的含有肌酸酐定量用试剂的水溶液滴下一定量。然后，通过将第一基板102静置于室温 30°C左右的环境中使其干燥，从而形成试剂层130。涂敷的含有试剂的水溶液的浓度和量只 要按照所需的器件特性或尺寸来选择即可，例如，只要与实施方式1相同即可。接着，组合第二基板104、第一间隔物106、第一基板102、第二间隔物706、以及第 三基板704，使得第一基板102的第一面702与第一间隔物106接触，第一基板102的第二 面802与第二间隔物706接触。在各部件的各接合部分涂敷粘接剂，将这些粘结后按压并 静置，使其粘接。替代该方法，也可以不涂敷粘接剂来组合这些部件，然后使用市场上销售 的熔敷机，利用热或者超声波使接合部分熔敷。当组合第一基板102、第一间隔物106以及第二基板104时，在第一基板102与第 二基板104之间，由设置在第一间隔物106上的缝隙110形成的空间部作为肌酸酐浓度测 定用的第一样本收容室发挥作用。另外，缝隙110的开口部作为肌酸酐浓度测定用的第一 样本引入口 132发挥作用。而当组合第一基板102、第二间隔物706以及第三基板704时，在第一基板102与 第三基板704之间，由设置在第二间隔物706上的缝隙710所形成的空间部作为尿的电特 性测定用的第二样本收容室发挥作用。另外，缝隙710的开口部作为尿的电特性测定用的 第二样本引入口 732发挥作用。接着，使用图13和图14来说明本实施方式的盐分量测定装置1300和使用该装置 的盐分量测定方法。图13是表示测定装置1300的外观的立体图，图14是表示测定装置 1300的结构的框图。首先，参照图13说明测定装置1300的结构。在测定装置1300的壳体202上设置有用于安装测定器件1000的测定器件安装部 208、显示测定结果等的显示器204、以及用于使测定装900开始测定肌酸酐浓度和尿的电 特性的测定开始按钮206。另外，在测定器件安装部208的内部设置有分别与测定器件1000 的第一导线722、第二导线724、第三导线726、第四导线728电连接的第一端子、第二端子、
第三端子、第四端子。接着，参照图14说明测定装置1300的壳体202内部的结构。测定装置1300在壳体202内部包括光源502、光接收器504、恒流交流电源902、电 压检测器904、控制部306、计时部308、以及存储部310。光源502具有将射入安装于测定器件安装部208的测定器件1000的第一样本收 容室内的光射出的功能。从光源502射出的光的波长只要与实施方式2同样地选择即可。光接收器504具有检测从光源502射出并在测定器件1000的第一样本收容室内 发生反射的光的功能。恒流交流电源902具有经由第一端子和第四端子向测定器件1000的第一电极712 与第四电极718之间施加一定的交流电流的功能。施加的交流电流例如是频率为IkHz左 右、电流值为0. ImA左右。
电压检测器904具有经由第二端子及第三端子来检测第二电极714与第三电极 716之间的电压(交流电压的有效值)的功能。在存储部310中存储有相对于表示肌酸酐的浓度与被光接收器504检测的反射光 的强度之间的关系的第一标准曲线的第一相关数据。另外，在存储部310中存储有与实施 方式3的存储部310相同的相当于第二标准曲线的第二相关数据、和相当于第三标准曲线 的第三相关数据。控制部306具有如下功能(I)参照第一相关数据将被光接收器504检测出的反 射光的强度换算为肌酸酐浓度；(II)参照第二相关数据将被电压检测器904检测出的电压 换算为盐分浓度；(III)使用所得到的肌酸酐浓度来修正盐分浓度；以及(IV)参照第三相 关数据将修正后的盐分浓度换算为每1日的尿中盐分排泄量。接着，说明使用了测定器件1000和测定装置1300的本实施方式的盐分量测定方 法。首先，使用者将测定器件1000的导线侧插入到测定装置1300的测定器件安装部 208。由此，测定器件1000的第一导线722、第二导线724、第三导线726、以及第四导线728、 与设置于测定器件安装部208内部的第一端子、第二端子、第三端子、以及第四端子分别电 导通。当向测定器件安装部208插入测定器件1000时，设置于测定器件安装部208内的 由微型开关构成的插入检验开关进行工作，向控制部306输出信号。当控制部306根据来 自插入检验开关的输出信号检验出测定器件1000的插入时，控制部306使光源502工作。 由此，向测定器件700的第一样本收容室照射来自光源502的光。接着，使用者使测定器件1000的第一样本引入口 132和第二样本引入口 732与样 本接触。通过该接触，经过第一样本引入口 132和第二样本引入口 732向测定器件1000的 2个样本收容室内利用毛细管现象吸引样本，2个样本收容室内被样本填充。当样本到达第 一样本收容室内的光的照射位置时，样本收容室内的透射率发生变化。光接收器504检测 由此引起的反射光强度的变化。当控制部306根据来自光接收器504的输出信号检验出在第一和第二样本收容室 已引入样本时，控制部306使作为计时器的计时部308开始计时。随着向第二样本收容室引入样本的检验，控制部306控制恒流交流电源902，经由 第一端子和第四端子向第一电极712与第四电极718之间施加一定的交流电流(例如，频 率1kHz、电流值0. ImA)。从施加交流电流起经过规定时间后(例如5秒后)，电压检测器 904测定第二电极714与第三电极716之间的电压(交流电压的有效值)。控制部306读出存储于存储部310的第二相关数据，并参照第二相关数据。由此， 被电压检测器904检测出的电压被换算成样本中的盐分浓度。当在第一样本收容室中样本与试剂层130相接触时，试剂层130所含的M-PMS溶 解在样本中。溶解在样本中的M-PMS与样本中所含的肌酸酐直接发生反应，由此生成反应 生成物(肌酸酐的氧化物和被还原的M-PMS)。由于M-PMS被还原，样本的吸收光谱发生变 化。当控制部306根据来自计时部308的信号判断出经过了规定时间(例如60秒) 时，在光接收器504中测定在样本收容室内反射的光的强度。此时，在光接收器504中测定的反射光的强度依赖于样本中所含的肌酸酐浓度。控制部306读出存储于存储部310的第一相关数据，并参照第一相关数据。由此， 在光接收器504中检测出的反射光的强度被换算成样本中的肌酸酐浓度。接着，控制部306使用所得到的肌酸酐浓度修正盐分浓度。然后，控制部306读出 存储于存储部310的第三相关数据，并参照第三相关数据。由此，修正后的盐分浓度被换算 成每1日的尿中盐分排泄量。所得到的肌酸酐浓度和每1日的尿中盐分排泄量被显示在显 示器204上。根据测定装置1300，根据利用以高精度测定的肌酸酐浓度进行修正后的盐分浓 度，能够计算出每1日的尿中盐分排泄量。因此，能够高精度且高再现性地求出每1日的尿 中盐分排泄量。在本实施方式中，与实施方式1相同，测定器件可以具有2个以上的试剂层。另外，在本实施方式中，也与实施方式2相同，不限定样本引入的检验后直到检测 反射光强度为止的时间。另外，在本实施方式中，也可以在存储部中存储有表示被光接收器检测的反射光 的强度、被电压检测器检测的电压、每单位时间(例如1日)的尿中盐分排泄量之间的关系 的相关数据，来替代上述第一 第三相关数据。在这种情况下，也可以不求出肌酸酐浓度和 盐分浓度。使用被光接收器检测的反射光的强度和被电压检测器检测的电压，能够直接求 出每单位时间的尿中盐分排泄量。另外，为了更顺利地向测定器件的样本收容室内引入样本，也可以在第二基板和 第三基板的内壁形成与实施方式1相同的卵磷脂层。另外，测定装置可以还具有用于将测定结果记录到SD卡等的存储介质的记录部。另外，测定装置可以还具有用于将测定结果发送到测定装置外部的发送部。另外，测定装置可以还具有用于接收与分析相关的部门或者与分析相关的人员等 分析的结果的接收部。实施例(实施例1)为了确认本发明的肌酸酐浓度测定方法的效果，进行了以下的实验。首先，调制了 IOOmM的磷酸氢二钾(和光纯药工业株式会社制，以下的实施例以及 参考例也一样)的水溶液和IOOmM的磷酸二氢钾(和光纯药工业株式会社制，以下的实施 例和参考例也一样)的水溶液。通过边使用pH仪表监视边交替地混合2种水溶液，将得到 的混合水溶液的PH调整为7。在这样得到的IOOmM的磷酸类缓冲溶液(pH = 7)中溶解了 M-PMS(株式会社同仁化学研究所制，以下相同)使浓度变为10mM。将所得到的水溶液放入玻璃制的电解槽容器中，分别将第一电极、第二电极以及 第三电极浸没在上述电解槽容器中的水溶液中。作为第一电极，使用了金电极(电极面积 2mm2)。第二电极通过将长度为5cm的钼线缠绕成线圈状而成。作为第三电极，使用了 Ag/ AgCl (饱和KCl水溶液)参照极。这些电极全部是BAS株式会社的销售品。将第一电极、第 二电极以及第三电极的连接端子分别依次连接在电化学分析器(ALS社制，ALS-660A)的作 用极、对极、参照极的连接端子上。接着，向上述电解槽容器中的水溶液中添加了少量的浓度500mM的肌酸酐水溶液(和光纯药工业株式会社制，以下的实施例和参考例也相同)。肌酸酐水溶液的添加量按照 每次测定调整成电解槽容器中的水溶液所含的肌酸酐浓度成为规定的值。在添加肌酸酐的同时开始计时，从添加肌酸酐起经过10分钟后，向第一电极施加 了相对于第三电极为0.6V的电位。然后，测定了在电位施加5秒钟后的电流值。以上的实 验在室温(约25 °C)下进行。在电解槽容器中的水溶液所含的肌酸酐浓度为0、6、18、27、以及54mM时，分别进 行了以上的测定。图15是将所测定的电流值相对于肌酸酐浓度绘图而成的曲线图。图15中，横轴表 示电解槽容器中的水溶液所含的肌酸酐浓度(mM)，纵轴表示所测定的电流值(μΑ)。从图 15可知，所得 到的电流值相对于电解槽容器中的水溶液所含的肌酸酐浓度的增加而呈直线 性增加(即，成比例)，表示电流值与肌酸酐浓度为高度相关。因此，可知利用本发明的肌酸 酐浓度测定方法能够根据所得到的电流值来进行肌酸酐的定量。根据以上的结果，能够如下述那样说明本发明的肌酸酐浓度测定方法中的反应。在样本中，M-PMS在存在磷酸类缓冲剂的情况下与肌酸酐发生反应而被还原。艮口， 肌酸酐通过该反应向M-PMS提供电子而被氧化。在第一电极上施加了如从被还原的M-PMS 接受电子这样的电位。因此，被还原的M-PMS用电化学法在第一电极上被氧化。伴随于此， 在第一电极上流动电流。在一定时间内被还原的M-PMS的浓度依赖于肌酸酐的浓度。另外， 被还原的M-PMS的氧化电流依赖于样本中存在的被还原的M-PMS的浓度或量。因此，所得 到的电流值依赖于肌酸酐的浓度。(实施例2)接着，为了调查本发明的肌酸酐浓度测定方法中的优选的PH范围，进行了以下的 实验。实验中使用的样本的调制方法和装置结构、以及实验的顺序与实施例1相同，所以 省略说明。但是，在本实施例中，将缓冲溶液的浓度设为400mM，样本中的肌酸酐浓度设为 27mM。另外，在向样本中添加的磷酸类缓冲溶液的pH为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12以及 13时，分别进行了与实施例1相同的测定。图16示出电流值的测定结果。pH为5 10的区域中，产生1μ A以上的电流值。 并且，pH为6 7的区域中，电流值显著增大，且电流值稳定。根据该结果可知，在上述pH 区域中能以极高的灵敏度且高再现性来测定肌酸酐的定量。在pH为6 7的区域，由磷酸 氢离子和磷酸二氢离子来提供。因此，作为磷酸类缓冲剂，可考虑最好将例如磷酸氢二钾或 者磷酸氢二钠与磷酸二氢钾或者磷酸二氢钠组合来使用。(实施例3)首先，调制了 50mM的磷酸氢二钾水溶液和50mM的磷酸二氢钾水溶液。通过边使 用PH仪表监视边交替地混合2种水溶液，将得到的混合水溶液的pH调整为7。在这样得到 的50mM的磷酸类缓冲溶液(pH = 7)中溶解了 M-PMS使浓度变为10mM。接着，向所得到的M-PMS水溶液中添加了少量的浓度500mM的肌酸酐水溶液。肌 酸酐水溶液的添加量按照每次测定调整成M-PMS水溶液所含的肌酸酐浓度成为规定的值。将所得到的水溶液作为样本，放入玻璃制的电解槽容器中，使用分光光度计(株 式会社津制作所制，型号MultiSpeC-1500)，针对400 800nm的波长范围测定吸收光谱。 从添加肌酸酐起经过了 1、5、10、15、20、30、40、60以及80分钟后分别测定了吸收光谱。以上的实验在室温(约25°C )下进行。在电解槽容器中的水溶液所含的肌酸酐浓度为0、10、20以及40mM时，分别进行了 以上的测定。参照图17 19说明测定结果。图17是表示针对肌酸酐浓度为OmM的样本所测 定的吸收光谱的历时变化的曲线图。图18是表示针对肌酸酐浓度为IOmM的样本所测定的 吸收光谱的历时变化的曲线图。图19是表示从添加肌酸酐起经过5分钟后所测定的波长 510nm的吸光度与样本中的肌酸酐浓度的关系的曲线图。在图17和图18中，横轴表示波长 (nm)，纵轴表示吸光度(任意强度)。在图19中，横轴表示样本中的肌酸酐浓度(mM)，纵轴 表示波长510nm的吸光度(任意强度)。从图17可知，在不含有肌酸酐的样本中，吸收光谱不能看出历时变化。相对于此， 从图18可知，在含有肌酸酐的样本中，从添加肌酸酐起随着时间的经过，波长510nm附近的 吸收峰值的强度变小。另外，从添加肌酸酐开始起经过30分钟左右，峰值强度的变化达到 饱和。于是，当将从添加肌酸酐起经过5分钟后测定的波长510nm的吸光度相对于 样本中 的肌酸酐浓度绘图时，如图19所示。即，所得到的吸光度相对于样本中所含的肌酸酐浓度 的增加呈直线性减少，表示出吸光度与肌酸酐浓度为高度相关。因此，利用本发明的肌酸酐 浓度测定方法，就可知道能根据所得到的吸光度来进行肌酸酐的定量。(参考例1)为了确认M-PMS的稳定化效果，进行了以下的实验。在本参考例中，使用了甲基硫 酸钠、硝酸钠、以及氯化钠作为1价阴离子的电解质盐。本参考例的样本如以下那样调制。首先，调制了 IM的磷酸氢二钾水溶液和IM的 磷酸二氢钾水溶液。接着，通过边使用PH仪表监视边交替地混合2种水溶液，将得到的混 合水溶液的PH调整为6。将这样得到的磷酸缓冲溶液(pH = 6)和1价阴离子的电解质盐 水溶液进行混合，使得最终浓度分别成为400mM和800mM。最后，向上述混合水溶液中添加 M-PMS水溶液，使得最终浓度为lOOmM，从而得到本参考例的样本。另外，除了不添加1价阴离子的电解质盐这一点以外，按照同样的顺序调制了标 准样本。从添加M-PMS起，按每1分钟每次取样本0.6 μ L，填充到进行电化学测量的传感 器芯片，进行了电化学测定。使用了爱科来株式会社销售的传感器芯片(商品名称G传感 器)作为电化学测量用的传感器芯片。传感器芯片在蒸馏水中进行5分钟的超声波清洗，除 去传感器芯片内的试剂后使用。传感器芯片的电极由钯构成，将传感器芯片内存在的第一 钯电极和第二钯电极分别依次连接在电化学分析器(ALS社制，ALS-700A)的作用极和参照 极的连接端子上。通过在刚引入样本后向第一电极施加5秒钟的相对于第二电极为400mV 的电位，测定在开始施加5秒钟后流过的电流，由此实施了电化学测定。反应在室温(约 25 0C )下进行。图20是表示针对本参考例的样本及标准样本所测定的氧化电流值的历时变化的 曲线图。在图20中，黑圆表示标准样本的数据，白圆表示添加了甲基硫酸钠时的数据，黑三 角形表示添加了硝酸钠时的数据，X符号表示添加了氯化钠时的数据。在标准样本的情况下，观测到氧化电流值与时间经过成比例地直线性增加。而在 添加了 1价阴离子的电解质盐即甲基硫酸钠、硝酸钠或者氯化钠的样本的情况下，即使在15分钟以后也能抑制电流值的增加。根据该情况，能够确认M-PMS稳定地存在于磷酸缓冲 溶液中。另外，从图20可知，在1价阴离子的电解质盐为甲基硫酸钠的样本中，电流值增加 的抑制效果最大。根据以上的结果可知，由于1价阴离子的电解质盐的添加，M-PMS稳定地存在于磷 酸缓冲溶液中。这样的电化学反应，并不是限定于本实施例中使用的传感器芯片的结果，在 使用了作用极、对极、参照极的3极式的分批式这样的一般的电化学测定系统中也能观察 至IJ。另外，电极材料也不限于钯，即使用玻璃碳、金、钼等电极材料，也能观察到同样的动作。(实施例4) 接着，为了调查本发明的试剂组成物对肌酸酐浓度测定的影响，进行了以下的实 验。在本实施例中，使用甲基硫酸钠作为1价阴离子的电解质盐。在本实施例中，通过在按照与参考例1相同的顺序调制而成的样本中还添加肌酸 酐水溶液，从而调制了肌酸酐浓度为0、10.8、21.6、42.3以及541111这五种样本。另外，除不 添加1价阴离子的电解质盐这一点以外，按照相同的顺序调制了标准样本。使用与参考例 1相同的传感器芯片及测定装置测定了电流值。图21是表示本实施例中测定的电流值与样本中所含的肌酸酐的浓度的关系的曲 线图。在图21中，黑圆表示本实施例的数据，白圆表示标准样本的数据。在标准样本情况下，能确认电流值与肌酸酐浓度的增加对应地增加。而在本实施 例的样本的情况下，能确认与标准样本相比，电流值减少，但氧化电流值与肌酸酐浓度对应 地增加。在本实施例的样本与标准样本之间，电流值相对于肌酸酐浓度的斜率看不出差异。 根据以上的结果，能够确认作为1价阴离子的电解质盐的甲基硫酸钠仅有助于消除M-PMS 的不稳定性，不会影响M-PMS与肌酸酐之间的反应。以上的结果，可如下这样进行说明。在磷酸缓冲溶液中，肌酸酐与M-PMS的反应被 催化，产生反应生成物。所生成的反应生成物被第一电极氧化，从而产生电流。所产生的电 流值依赖于已反应的肌酸酐浓度，所以能够实现肌酸酐的检测。但是，在标准样本中，M-PMS 由于磷酸离子而不稳定，由不稳定生成物产生的氧化电流值增加。在本实施例中，由于存在 作为1价阴离子的电解质盐的甲基硫酸钠，能够消除M-PMS的不稳定。因此，由不稳定生成 物产生的氧化电流值不会增加。另一方面，甲基硫酸钠不会干扰M-PMS与肌酸酐的反应。(参考例2)接着，为了调查本发明的测定再现性提高的效果，进行了以下的实验。在本参考例 中，使用甲基硫酸钠和硝酸钠作为1价阴离子的电解质盐。在本参考例中，将M-PMS的浓度固定为IOOmM,使1价阴离子的电解质盐的浓度和 磷酸缓冲剂的浓度发生变化，使样本中的离子组成发生变化。对于调制成的样本，使用与参 考例1相同的传感器芯片和测定装置，测量了从添加M-PMS起经过1分钟后的电流值。对第 一电极施加5秒钟的相对于第二电极为400mV的电位，测量了开始施加起5秒种后的电流 值。对同一条件的样本进行3次这样的测量，根据变异系数(Coefficient of variation, 以下简称为CV值)评价了此时的值的偏差。图22是表示使用甲基硫酸钠作为1价阴离子的电解质盐时所得到的CV值、和磷 酸缓冲剂浓度与(磷原子的浓度)M-PMS浓度及电解质盐浓度的总和之比之间的关系的曲 线图。图23是表示使用硝酸钠作为1价阴离子的电解质盐时所得到的CV值、和磷酸缓冲剂浓度(磷原子浓度)与M-PMS浓度及电解质盐浓度的总和之比之间的关系的曲线图。从图 22和图23可知，随着磷酸缓冲剂的浓度相对于溶液中存在的M-PMS浓度及电解质盐浓度的 总和而上升，M-PMS的氧化电流值的偏差增加。通过使1价阴离子的电解质盐的添加量增 力口，使溶液中的1价阴离子的电解质盐的浓度增加，成功地降低了 M-PMS的氧化电流值的偏 差。而且，在M-PMS浓度和电解质盐浓度的总和是磷酸缓冲剂的2倍以上的浓度时，M-PMS 的氧化电流值的偏差达到5%以内。如果在不含有肌酸酐的溶液中M-PMS的氧化电流值的 偏差为5%以内，则作为测量使用了 M-PMS的肌酸酐的传感器，能够得到充分的可靠性。因 此，可知M-PMS浓度和电解质盐浓度的总和为磷酸缓冲剂的2倍以上这样的试剂组成是最 佳的。根据以上的结果，能够确认通过在由M-PMS和磷酸缓冲剂构成的试剂组成物中添 加产生1价阴离子的电解质盐，能促进M-PMS的稳定性。能够确认如果试剂组成物中所含 的磷酸类缓冲剂的量是1价阴离子的电解质盐的量和M-PMS的量的总量的二分之一以下， 则添加的电解质盐的量是足够的。工业上的可利用性
本发明在对样本、特别是尿等生物样本中所含的肌酸酐进行定量时是有用的。
权利要求
一种肌酸酐浓度测定方法，包括(A)在作用于肌酸酐的酶和苦味酸都不存在的条件下，将含有肌酸酐的样本和含有1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓的肌酸酐定量用试剂混合，利用上述肌酸酐使上述1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓还原的步骤；(B)用电化学法或者光学法测定在上述步骤A中被还原的1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓的量的步骤；以及(C)根据在上述步骤B中所测定的所述被还原的1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓的量来求出所述样本中所含的所述肌酸酐的浓度的步骤。
2.根据权利要求1所述的肌酸酐浓度测定方法，其特征在于 所述步骤A中的所述样本的pH在5以上且10以下。
3.根据权利要求2所述的肌酸酐浓度测定方法，其特征在于 所述步骤A中的所述样本的pH在6以上且7以下。
4.根据权利要求1所述的肌酸酐浓度测定方法，其特征在于 所述肌酸酐定量用试剂还含有硫酸甲酯阴离子。
5.根据权利要求3所述的肌酸酐浓度测定方法，其特征在于 在所述步骤A中，在所述样本中还混合磷酸类缓冲剂。
6.根据权利要求5所述的肌酸酐浓度测定方法，其特征在于 所述磷酸类缓冲剂含有磷酸氢盐和磷酸二氢盐。
7.根据权利要求3所述的肌酸酐浓度测定方法，其特征在于 在所述步骤A中，在所述样本中还混合1价阴离子的电解质盐。
8.根据权利要求7所述的肌酸酐浓度测定方法，其特征在于 所述1价阴离子选自氯化物离子、硝酸离子以及甲基硫酸离子。
9.根据权利要求7所述的肌酸酐浓度测定方法，其特征在于所述磷酸类缓冲剂的摩尔量是所述1价阴离子的电解质盐的摩尔量和所述ι-甲氧 基-5-甲基吩嗪鐺的摩尔量的总量的二分之一以下。
10.根据权利要求1所述的肌酸酐浓度测定方法，其特征在于 所述步骤B还包括(D)使2个以上的电极与所述样本接触，向所述2个电极之间施加电压的步骤；和(E)检测在所述2个电极间流动的电流值或者电荷量的步骤，在所述步骤C中，根据在所述步骤E中检测出的所述电流值或者所述电荷量来求出所 述样本中所含的所述肌酸酐的浓度。
11.根据权利要求1所述的肌酸酐浓度测定方法，其特征在于 所述步骤B包括(F)向所述样本照射入射光的步骤；和(G)检测从所述样本透射的透射光或者在所述样本中反射的反射光的步骤，在所述步骤C中，根据在所述步骤G中检测出的所述透射光或者所述反射光的强度来 求出所述样本中所含的所述肌酸酐的浓度。
12.—种盐分量测定方法，包括(a)在作用于肌酸酐的酶和苦味酸都不存在的条件下，将作为样本的尿和含有1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的肌酸酐定量用试剂混合，利用所述尿中所含的肌酸酐使1-甲氧 基-5-甲基吩嗪鐺还原的步骤；(b)用电化学法或者光学法测定在所述步骤a中被还原的1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的 量的步骤；(c)测定所述尿的电特性的步骤；以及(d)根据在所述步骤b中所测定的所述被还原的1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的量和在所 述步骤c中所测定的所述电特性，求出用于反映向所述尿中排泄的盐分的排泄量的值的步马聚ο
13.根据权利要求12所述的盐分量测定方法，其特征在于 在所述步骤(a)之前进行所述步骤(c)。
14.根据权利要求12所述的盐分量测定方法，其特征在于 在所述步骤(b)之后且所述步骤(d)之前进行所述步骤(C)。
15.一种肌酸酐浓度测定器件，包括样本收容室，用于在作用于肌酸酐的酶和苦味酸都不存在的条件下收容含有肌酸酐的 样本；样本引入口，与所述样本收容室连通，用于向所述样本收容室内弓丨入所述样本； 肌酸酐定量用试剂，配置在所述样本收容室内，含有1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺；以及 配置在所述样本收容室内的2个以上的电极或者形成在所述样本收容室的光学测定 用的窗部。
16.根据权利要求15所述的肌酸酐浓度测定器件，其特征在于 所述样本收容室内还具有磷酸类缓冲剂。
17.根据权利要求16所述的肌酸酐浓度测定器件，其特征在于 所述样本收容室内还具有1价阴离子的电解质盐。
18.一种盐分量测定器件，包括第一样本收容室，用于在作用于肌酸酐的酶和苦味酸都不存在的条件下收容作为样本 的尿；第一样本引入口，与所述第一样本收容室连通，用于向所述第一样本收容室内引入所 述尿；肌酸酐定量用试剂，配置在所述第一样本收容室内，含有1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺； 第二样本收容室，用于收容所述尿；第二样本引入口，与所述第二样本收容室连通，用于向所述第二样本收容室内引入所 述尿；以及2个以上的电极，配置在所述第二样本收容室内。
19.根据权利要求18所述的盐分量测定器件，其特征在于 所述第一样本收容室内还具有2个以上的电极。
20.一种肌酸酐浓度测定装置，包括测定器件安装部，用于安装肌酸酐浓度测定器件，所述肌酸酐浓度测定器件包括用于 在作用于肌酸酐的酶和苦味酸都不存在的条件下收容含有肌酸酐的样本的样本收容室、与 所述样本收容室连通并用于向所述样本收容室内引入所述样本的样本引入口、和配置在所述样本收容室内的含有1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的肌酸酐定量用试剂；测定部，在所述样本收容室内，用电化学法或者光学法测定被所述肌酸酐还原的ι-甲 氧基-5-甲基吩嗪鐺的量；以及运算部，根据在所述测定部中所测定的所述被还原的1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的量来 求出所述样本中所含的所述肌酸酐的浓度。
21.根据权利要求20所述的肌酸酐浓度测定装置，其特征在于所述肌酸酐浓度测定器件在所述样本收容室内还具有2个以上的电极， 所述测定部具有向所述2个电极间施加电压的电压施加部；和检测在所述2个电极间 流动的电流值或者电荷量的检测部，所述运算部根据被所述检测部检测出的所述电流值或者所述电荷量来求出所述样本 中所含的所述肌酸酐的浓度。
22.根据权利要求20所述的肌酸酐浓度测定装置，其特征在于 所述测定部具有光源，射出向安装于所述测定器件安装部的所述肌酸酐浓度测定器件的所述样本收容 室内射入的入射光；和光接收器，检测从所述样本收容室内透射的透射光或者在所述样本收容室内反射的反 射光，所述运算部根据在所述光接收器中检测出的所述透射光或者所述反射光的强度来求 出所述样本中所含的所述肌酸酐的浓度。
23.一种盐分量测定装置，包括测定器件安装部，用于安装盐分量测定器件，所述盐分量测定器件包括用于在作用于 肌酸酐的酶和苦味酸都不存在的条件下收容作为样本的尿的第一样本收容室、与所述第一 样本收容室连通并用于向所述第一样本收容室内引入所述尿的第一样本引入口、配置在所 述第一样本收容室内的含有1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的肌酸酐定量用试剂、用于收容所述 尿的第二样本收容室、与所述第二样本收容室连通并用于向所述第二样本收容室内引入所 述尿的第二样本引入口、以及配置在所述第二样本收容室内的2个以上的电极；第一测定部，在所述第一样本收容室内，用电化学法或者光学法测定被所述肌酸酐还 原的1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的量；第二测定部，在所述第二样本收容室内测定所述尿的电特性；以及 运算部，根据在所述第一测定部所测定的所述被还原的1-甲氧基-5-甲基吩嗪鐺的 量和在所述第二测定部所测定的所述电特性，求出反映向所述尿中排泄的盐分的排泄量的
全文摘要
本发明提供一种肌酸酐浓度测定方法，包括(A)在作用于肌酸酐的酶和苦味酸都不存在的条件下、将含有肌酸酐的样本和含有1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓的肌酸酐定量用试剂混合并利用肌酸酐使1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓还原的步骤；(B)用电化学法或者光学法测定在步骤A中被还原的1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓的量的步骤；以及(C)根据在步骤B中测定的被还原的1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓的量求出样本中所含的肌酸酐的浓度的步骤。
文档编号G01N21/78GK101883982SQ20098010120
公开日2010年11月10日 申请日期2009年5月7日 优先权日2008年5月9日
发明者中南贵裕, 橘宏明, 铃木雅登 申请人:松下电器产业株式会社
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