专利名称：：一种便捷观察烟株茎尖花芽分化的方法
技术领域：
：本发明涉及一种便捷观察烟株茎尖花芽分化的方法，属植物发育生物学
技术领域：
。
背景技术：
：花芽分化是植物从营养生长转向生殖生长的标志。烤烟花芽分化起始的早晚，不仅影响到烟株的有效叶片数和烟叶产量，而且会对烟叶品质产生重大影响。陈瑞泰[1]、岳彩鹏[2]用石蜡切片法研究报道了花芽分化过程茎端组织的形态变化，刘秀丽[3]等用扫描电镜法研究了花芽发育的过程及特点，并对花序建成与叶型的关系进行了分析。但石蜡切片法操作繁锁、扫描电镜法成本较高。经文献检索，未见与本发明相同的公开报道。参考文献1、中国烟草栽培学[M].上海上�？萍汲霭嫔纾�1987年出版P67-712、低温对烤烟生长发育的影响及其调控研究[D].郑州河南农业大学博士论文，2002年P283、烟草花芽分化的形态建成观察[J].中国烟草科学，2003(1):9-11
发明内容本发明的目的克服现有技术之不足，而是提供一种简便、快速、有效的观察烟株茎尖花芽分化的方法。本发明采用体视显微镜法对烟株茎尖花芽分化进行观察，方法包括取样、样品组织的处理、样品的固定及样品的观察工序，具体步骤如下a.自茎尖向下5公分，用刀片切取样；b.取样后立即将茎尖置于普通15mL以上医用注射器中，将推杆推至底部，以拇指堵紧针管前部，用力拉起推杆至顶部，持续13分钟，重复34次；c.将茎尖样品放入配比为38%甲醛5.0mL、醋酸5.0mL、75X乙醇90.0mL的固定液(FAA)中固定24小时待检；d.采用体视显微镜对样品进行观察将茎尖从固定液中取出，在茎基部插上一根细针，细针的另一端插在长、宽、高为5cmX5cmXlcm的塑料泡沫上，再把塑料泡沫放在体视显微镜的载物台上，移动塑料泡沫和旋转细针，从目镜中观察到茎尖为止；用解剖针轻轻剥开茎尖，调节焦距及放大旋钮，使视野中的图象清晰后进行拍照，得到烟株茎尖花芽分化过程的体视显微照片。本发明与现有的技术相比具有如下的优点1、采用普通医用注射器除去茎尖组织内的气体，操作简便、成本低，在田间即可完成；2、将茎尖用细针支撑后，再插到塑料泡沫上，通过移动塑料泡沫和旋转细针来调节所要观察的组织，不伤茎尖样品；3、用体视显微镜观察代替电子显微镜和石蜡切片法观察，简化了样品制备的过程，不仅能准确地记录花芽分化的各个状态的阶段性特征，还保留了茎尖周围的幼叶，幼叶的存在为茎端提供了较好的辅助定位，使茎尖在空间上的部位特征更为突出；是一种简便、快速、有效的观察烟株花芽分化进程的方法，对试验研究具有重要的指导意义。图1为烤烟花芽分化过程的体视显微观察图(X50)。图中A显示处于营养生长状态的顶芽、B显示生殖生长初期的顶芽、C显示顶花原基分化期、D显示花萼原基分化期、E显示花瓣、雄蕊原基分化期、F显示雌蕊原基分化期。图2为体视显微镜观察图与已报道的电镜图片的比较图。图中小写字母为电镜图片、大写字母为体视显微镜镜检图片、(a，A)显示处于营养生长状态的顶芽、(b，B)显示生殖生长初期的顶芽、(c，C)显示顶花原基分化期、(d，D)显示花萼原基分化期；。具体实施例方式下面结合附图和实施例对本发明作进一步的说明。实施例1:采用常规的漂浮育苗方法进行育苗，成苗后将烟苗移栽到花盆内，移栽20天后取样1-2株，自茎尖向下5公分，用刀片切取茎尖，将茎尖放入普通医用注射器(15mL以上)中，将推杆推至底部，以拇指堵紧针管前部，用力拉起推杆至顶部，持续1或2或3分钟，重复3或4次。将样品放入FAA固定液中固定待检。FAA固定液(100mL)的配比为38%甲醛5.0mL、醋酸5.0mL、75X乙醇90.OmL。24小时以后将样品取出在茎基部插上一根细针，细针的另一端插在长、宽、高为5X5Xlcm的塑料泡沫上，再把塑料泡沫放在OLYMPUSSZX12体视显微镜载物台上，移动塑料泡沫和旋转细针，从目镜中观察到茎尖为止。用解剖针轻轻剥开茎尖，调节焦距及放大旋钮，使视野中的图象清晰即进行拍照，得到烟株茎尖花芽分化过程的体视显微照片，处于营养生长的顶芽，其茎端呈近似三角形的平面状，各顶端分别着生1个叶原基(图l-A);顶芽由营养生长转入花芽分化时，顶端分生组织逐渐隆起成半球形(图l-B);主茎顶部花原基明显突起时，侧枝原基也开始分化，呈椭球形，外侧各形成l苞片(图l-C)。此后侧枝原基沿主茎切线横向伸展，在其1/3-1/2处开始縊裂，变为一大一小两部分；大的突起是该侧枝第1朵花的花原基，小的突起则仍保持侧枝原基状态，继续下一轮縊裂分化，产生第2朵花的花原基和侧枝原基。另外，顶端花原基半球形一侧出现小舌状突起，为花萼原基(图l-D)。花原基由内而外，明显分为4层中央是雌蕊原基，第2层是5个雄蕊原基，第3层是5个花瓣原基，最外层则是5个花萼原基(图l-E);雄蕊原基内侧趋平的一面向内凹陷，形成纵向小沟，为药室分隔和花丝着生之处；随后药室两侧也出现纵向凹沟，表示其内部已出现药隔；雌蕊原基生长较慢，被雄蕊原基围裹于中央，顶端稍凹陷，随发育进程的继续，其上出现裂线，此线即是将柱头一分为二的中央线(图l-F)。从图2中不难看出，用体视显微镜能够清晰地观察烟株花芽分化进程，对试验研究更为有利。实施例2:4选品种为云烟85、云烟87、红大、K326、云烟97和云烟201的包衣种，采用一段式漂浮育苗。待烟苗长至7片真叶，开始进行低温诱导处理，分为对照和低湿处理，对照烟苗在棚内按正常育苗管理，低温诱导在人工气候箱内进行，昼夜温度13.0°C/6.(TC，光照时间8h/d，光照强度l000-15001x。低温诱导10d后，将低温处理烟苗与对照烟苗各移栽15株，进行盆栽试验。移栽20d后按实施例l进行观察，观察结果见表l。从表l可以看出，不同品种花芽分化时间有差异，且低温处理后花芽提前分化的敏感程度也不尽相同。移栽后21d，低温处理株和对照均未检出花芽分化；移栽后26d，在云烟97、云烟85的低温处理株可检出c、d*状态花芽，而其对照在31d后始有花芽出现；红大和云烟87的分化期较长，低温处理株在31d后才观察到c状态花芽，而对照也分别出现了W、b状态花芽；移栽后31d，云烟201可观察到b状态花芽，其对照于36d后检出c状态花芽。从而可以得出云烟85和云烟97对低温敏感性最强，云烟201、云烟87和红大次之，K326较弱。表1、低温处理对不同品种烤烟花芽分化进程的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>注*表示接近但尚未达到该状态；表中的小写字母表示花芽的分化状态c权利要求一种便捷观察烟株茎尖花芽分化的方法，其特征在于本方法包括取样、样品组织的处理、样品的固定及样品的观察工序，具体步骤如下a.自茎尖向下5公分，用刀片切取样；b.取样后立即将茎尖置于普通15mL以上医用注射器中，将推杆推至底部，以拇指堵紧针管前部，用力拉起推杆至顶部，持续1～3分钟，重复3～4次；c.将茎尖样品放入配比为38％甲醛5.0mL、醋酸5.0mL、75％乙醇90.0mL的固定液中固定24小时待检；d.采用体视显微镜对样品进行观察将茎尖从固定液中取出，在茎基部插上一根细针，细针的另一端插在长、宽、高为5cm×5cm×1cm的塑料泡沫上，再把塑料泡沫放在体视显微镜的载物台上，移动塑料泡沫和旋转细针，从目镜中观察到茎尖为止；用解剖针轻轻剥开茎尖，调节焦距及放大旋钮，使视野中的图象清晰后进行拍照。全文摘要本发明涉及一种便捷观察烟株茎尖花芽分化的方法，属植物发育生物学
技术领域：
。本发明方法的步骤为a.自茎尖向下5公分，用刀片切取样；b.取样后立即将茎尖置于普通15mL以上医用注射器中，将推杆推至底部，以拇指堵紧针管前部，用力拉起推杆至顶部，持续1～3分钟，重复3～4次；c.将茎尖样品放入配比为38％甲醛5.0mL、醋酸5.0mL、75％乙醇90.0mL的固定液中固定24小时待检；d.采用体视显微镜对样品进行观察和拍照。本发明具有成本低、操作简便、快捷，不仅能尽快进行观察，还能得到图像清晰的数字化图片的优点，对试验研究具有重要的指导意义。文档编号G01N1/28GK101788499SQ20101914400公开日2010年7月28日申请日期2010年2月8日优先权日2010年2月8日发明者周冀衡,徐照丽,晋艳,杨宇虹,段玉琪,金磊,黄成江申请人:云南省烟草农业科学研究院
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