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专利名称：双三元二维柱高效色谱法测定牙膏中三七皂苷R₁和人参皂苷含量的方法
技术领域：
本发明涉及牙膏中三七皂苷R1、人参皂苷Rbp Re、Rg1含量的测定方法，属于高效液相色谱法测定物质含量技术领域。
背景技术：
随着食品安全事件引起社会广泛关注，部分学者和社会舆论将视角延伸到“入口形”日化用品领域中，而牙膏作为口腔清洁用品是这一类产品的典型代表，关系到人身安全。功能单一的牙膏已不能满足人们的需求，根据传统中草药所具有性温、刺激小、安全无毒等特点，添加多种药物制成中药牙膏，以预防多种口腔疾病越来越多的受到人们的欢迎。目前，中药牙膏已占口腔清洁市场40 60%的比例。我国在中草药功效方面的研究有着辉煌悠久的历史，中草药功效型牙膏从面市至今已有几十年的历史，已经成为国内牙膏市场中的主类产品，一些国际日化用品企业为了加入中国市场也纷纷对中草药功效型牙膏进行开发和生产。三七又名田七，为五加科植物三七Panaxnotoginseng (Burk.) F.H.Chen的干燥根和根茎。具有散血止瘀、消肿定痛等功效，并有着“金不换”的美誉。三七的主要有效成分为三七总皂苷类化合物，现已从三七中分离的皂苷成分已有75余种，其中人参皂苷!^1^(35%)、人参皂苷Rg1 (40%)是三七总皂苷中含量最高的两种成分，而三七皂苷R1 (15%)则是三七总皂苷的特征化合物。三七中人参皂苷Rg1和人参皂苷Re同属于20 (S)-原人参三醇类，结构性质相近，极性相近，在液相色谱中的保留时间相近。目前，口腔清洁用品市场中草药功能性牙膏的品类繁多，有些牙膏不仅仅添加一种或两种的中药有效成分，有些牙膏品种直接添加功能性的成熟的中药配方精华，如云南白药、双黄连等。牙膏基质为复杂的混合物，通常由摩擦剂、保湿剂、表面活性剂、增稠剂、甜味剂、色素、香精和活性添加物等组成。某些添加成分的化合物碳链比较长，在前处理中难以去除，同时，也对色谱柱的柱效有影响。用传统的高效液相色谱方法去分离、检测，其中的杂质对标准品氯化两面针碱的测定有干扰。

发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种双三元二维柱高效液相色谱法测定牙膏中三七皂苷R1和人参皂苷含量的方法，方法简单，缩短了分析时间，实现了快速、方便、准确的检测牙膏中三七皂苷和人参皂苷等活性成分。为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是:一种双三元二维柱高效液相色谱法测定牙膏中三七皂苷R1和人参皂苷含量的方法，包括以下步骤:(I)绘制三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1的标准曲线 (2)称取待测牙膏放置于具塞离心管中，加入乙醇振荡、摇匀，用乙醇定容，密塞，称定
重量；(3)将步骤(I)称定重量后的具塞离心管超声处理，处理完成后冷却至室温，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，离心处理，取上清液用0.22 μ m的有机相滤膜过滤得待测溶液；
(4)利用双三元高效液相色谱法二维色谱柱分离，通过多波长紫外检测器或二极管阵列检测器测定待测溶液中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1，根据步骤
(I)的标准曲线得出牙膏待测溶液中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rbi的含量。对流动相进行洗脱；第一维色谱柱为富集柱C18柱(2.1mmX 100mm, 5 μ m),第二维色谱柱为分析柱C18柱(4.6mmX 250mm, 5 μ m)。采用C18 二维色谱柱的优选测定的条件为:采用C18 二维色谱柱，以乙腈和水为流动相，检测波长为203nm，进样量为10 μ L,色谱柱柱温为30°C，对流动相进行洗脱。将上述步骤(4)中的流动相进行洗脱的优选程序如表1:
权利要求
1.一种双三元二维柱高效液相色谱法测定牙膏中三七皂苷R1和人参皂苷含量的方法，其特征在于:包括以下步骤:(I)绘制三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1的标准曲线图； (2)称取待测牙膏放置于具塞离心管中，加入乙醇振荡、摇匀，用乙醇定容，密塞，称定重量； (3)将步骤(I)称定重量后的具塞离心管超声处理，处理完成后冷却至室温，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，离心处理，取上清液用0.22 μ m的有机相滤膜过滤得待测溶液； (4)利用双三元高效液相色谱法，进行二维色谱柱分离，通过多波长紫外检测器或二极管阵列检测器测定待测溶液中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1，根据步骤(I)的标准曲线得出牙膏待测溶液中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1的含量； 采用C18 二维色谱柱测定； 第一维色谱柱为富集柱C18柱(2.1mmX IOOmm, 5 μ m),第二维色谱柱为分析柱C18柱(4.6mmX 250mm, 5 μ m)。
2.如权利要求1所述的双三元二维柱高效液相色谱法测定牙膏中三七皂苷R1和人参皂苷含量的方法，其特征在于:采用C18 二维色谱柱测定的条件为，以乙腈和水为流动相，检测波长为203nm，进样量为10 μ L，色谱柱柱温为30°C，对流动相进行洗脱。
3.如权利要求2所述的双三元二维柱高效液相色谱法测定牙膏中三七皂苷R1和人参皂苷含量的方法，其特征在于:步骤(4)中的流动相进行洗脱的程序如下:
4.如权利要求1所述的双三元二维柱高效液相色谱法测定牙膏中三七皂苷R1和人参皂苷含量的方法，其特征在于:步骤(2)和步骤(3)所用的乙醇为体积分数为75%的乙醇。
5.如权利要求1所述的双三元二维柱高效液相色谱法测定牙膏中三七皂苷R1和人参皂苷含量的方法，其特征在于:步骤(2)中每克待测牙膏定容到10mL。
6.如权利要求1所述的双三元二维柱高效液相色谱法测定牙膏中三七皂苷R1和人参皂苷含量的方法，其特征在于:步骤(3)中30°C超声处理45分钟。
7.如权利要求1所述的双三元二维柱高效液相色谱法测定牙膏中三七皂苷R1和人参皂苷含量的方法 ，其特征在于:步骤(3)中IOOOOrpm离心2分钟。
全文摘要
本发明公开了一种双三元二维柱高效液相色谱法测定牙膏中三七皂苷R1和人参皂苷含量的方法，属于高效液相色谱法测定物质含量技术领域。包括以下步骤(1)绘制标准曲线图；(2)将待测牙膏用乙醇溶解定容，称定重量；(3)制备待测溶液；(4)利用双三元高效液相色谱法二维色谱柱分离，通过多波长紫外检测器或二极管阵列检测器测定待测溶液中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1，根据标准曲线得出三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1的含量。本发明方法简单，缩短了分析时间，实现了快速、方便、准确的检测牙膏中三七皂苷和人参皂苷等活性成分。
文档编号G01N30/02GK103235055SQ20131013759
公开日2013年8月7日 申请日期2013年4月19日 优先权日2013年4月19日
发明者张岩, 丛斌, 张敬轩, 滕文华, 李挥, 刘敬泽, 吕品, 庞坤, 李强, 夏静 申请人:河北省食品质量监督检验研究院