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专利名称：一种氨基脲(sem)衍生化试剂及其使用方法
技术领域：
本发明属于免疫化学检测领域，涉及一种氨基脲衍生化试剂及其在氨基脲的衍生化的方法，以及其衍生物的夹心ELISA检测方法。
背景技术：
呋喃西林(nitrofurazone)属于硝基呋喃类药物,是一种广谱抗菌药物,被广泛作治疗药物和饲料添加剂用于禽、畜、水产养殖中控制疾病或疫情。呋喃西林在临床上表现为明显的三致作用(致癌、致畸、致突变)，因此引起各国的高度重视，欧盟早在1995年就禁止呋喃西林用作兽药，澳大利亚、美国也相继在2001年和2002年出台了相关法律，将呋喃西林作为养殖禁用药物。呋喃西林在动物体内极易降解，短短数小时内即可代谢为呋喃西林代谢物氨基脲(式一)，氨基脲易与蛋白质结合，该结合产物性质较稳定不易分解，可在动物体内存留数周。因此氨基脲常被用作检测呋喃西林原药的标记物，世界上大多数国家都以监测氨基脲
来达到对呋喃西林原药监控的目的。
权利要求
1.一种氨基脲衍生化试剂，其特征在于所述的氨基脲衍生化试剂为带有特异性小分子标记的醛基苯甲酸，所述醛基苯甲酸能通过醛基与氨基脲的氨基反应，形成带有特异性小分子标记的氨基脲-醛基苯甲酸衍生物。
2.根据权利要求1所述的氨基脲衍生化试剂，其特征在于所述的特异性小分子标记是能够与特异性蛋白或抗体结合的小分子，包括生物素、地高辛、组氨酸、荧光分子，所述荧光分子包括 CY-5、CY-3、FITC、FAM。
3.根据权利要求1或2所述的氨基脲衍生化试剂，其特征在于所述的特异性小分子标记通过一段短臂连接在醛基苯甲酸的羧基上，短臂为任选地掺杂N或O或S或P的2-30个C的直链分子。
4.根据权利要求1或2所述的氨基脲衍生化试剂，其特征在于所述醛基苯甲酸为对醛基苯酸衍生物或邻醛基苯甲酸。
5.一种检测样品中氨基脲方法，包括: (1)用抗氨基脲-醛基苯甲酸衍生物抗体包被酶标板； (2)使样品与带有特异性小分子标记的醛基苯甲酸接触，形成带有特异性小分子标记的氨基脲-醛基苯甲酸衍生物； (3)将步骤(2)得到的混合物加入步骤(I)的酶标板中，使所述带有特异性小分子标记的氨基脲-醛基苯甲酸衍生物固定在酶标板上； (4)再向所述酶标板中加入能与所述特异性小分子标记结合的酶标二抗，使其与所述特异性小分子标记反应； (5)对步骤(4)中发生的反应进行检`测，根据标准曲线计算氨基脲的含量。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述的氨基脲衍生化试剂被溶解于极性溶剂中，所述极性溶剂选自甲醇、水、乙醇、DMSO、DMF及其混合物。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述的酶标板采用96孔酶标板，并封闭板上未包被抗体的空白孔。
8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述抗氨基脲-醛基苯甲酸衍生物抗体为鼠单抗、兔多抗及基因工程抗体中的任意一种。
9.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述的酶标二抗为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶标记的、能与所述特异性小分子标记结合的蛋白或抗体及其偶联物，所述蛋白或抗体及其偶联物选自亲和素/链霉亲和素、地高辛抗体、组氨酸抗体/含Ni亲和分子、荧光分子抗体。
10.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述检测是用酶标仪测量吸光度。
11.一种检测样品中氨基脲的试剂盒，其特征在于包括: (1)带有特异性小分子标记的醛基苯甲酸； (2)包被有抗氨基脲-醛基苯甲酸衍生物抗体的酶标板； (3)酶标二抗。
12.根据权利要求11所述的试剂盒，其特征在于所述的特异性小分子标记是能够与特异性蛋白或抗体结合的小分子，包括生物素、地高辛、组氨酸、荧光分子，所述荧光分子包括CY-5、CY-3、FITC、FAM。
13.根据权利要求12所述的试剂盒，其特征在于所述的特异性小分子标记通过一段短臂连接在醛基苯甲酸的羧基上，短臂为任选地掺杂N或O或S或P的2-30个C的直链分子。
14.根据权利要求11所述的试剂盒，其特征在于所述抗氨基脲-醛基苯甲酸衍生物抗体为鼠单抗、兔多抗及基因工程抗体中的任意一种。
15.根据权利要求11所述的试剂盒，其特征在于所述的酶标二抗为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶标记的、能与所述特异性小分子标记结合的蛋白或抗体及其偶联物，所述蛋白或抗体及其偶联物选自 亲和素/链霉亲和素、地高辛抗体、组氨酸抗体/含Ni亲和分子、荧光分子抗体。
全文摘要
本发明涉及了一种氨基脲衍生化试剂及试剂盒及其在氨基脲的夹心ELISA检测中的应用。所述试剂为带有特异性小分子标记的醛基苯甲酸，所述醛基苯甲酸能通过醛基与氨基脲的氨基反应，形成带有特异性小分子标记的氨基脲-醛基苯甲酸衍生物。本发明的氨基脲衍生化试剂能简化氨基脲衍生物的分离和纯化步骤，免去了氨基脲半抗原的制备和使用，并可实现其夹心ELISA法的检测，从而极大地简化了检测步骤、降低检测时间和操作误差，同时增强检测的稳定性、精密度和灵敏度。
文档编号G01N33/543GK103105488SQ20121058646
公开日2013年5月15日 申请日期2012年12月31日 优先权日2012年12月31日
发明者戴信敏 申请人:戴信敏