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    4.ÒÔÒ»ÖÖ»ùÓÚȫѪ(Whole Blood)µÄY -¸ÉÈÅËØÊÍ·ÅÊÔÑé¼°Tϸ°ûÔöֳʵÑéµÄ ·½·¨½øÐÐϵͳµÄ¿¹Ô­±íλ×÷ͼ(Epitope Mapping)¡£²¢Í¨¹ý·´¸´µÄÁÙ´²Ñé֤ʵÑ飬ÕÒµ½T ϸ°û¿¹Ô­±íλÐòÁУ¬Æä½á¹ûÒÔÍâÖÜѪTϸ°ûʶ±ðº¬¿¹Ô­±íλµÄ¶àëIJ¢±»¼¤»îµÄ·´Ó¦ÂÊÀ´±í ʾ£¬Èçͼ1ºÍͼ2Ëùʾ¡£Í¨¹ýÅųýÓëBCGÖ®¼äÓн»²æ·´Ó¦µÄ¿¹Ô­±í룬²¢ÓÅÑ¡ÓëÔÚ²»Í¬HLA ·ÖÐÍÖÐʶ±ðÂʽϸߵĿ¹Ô­±í룬µÃµ½SEQ ID N0. 1-10µÄ¶àëÄ¡£Æä¾ù°üº¬ÓнáºË¸Ë¾úÌØÒìÐÔ Tϸ°û¿¹Ô­±íλµÄºËÐÄÐòÁС£ÊµÊ©Àý2 ͨ¹ýȫѪIFN- ¦ÃÊÍ·ÅʵÑéÒÔELISA·½·¨¼ì²âIFN- ¦ÃÒÔȫѪIFN- ¦ÃÊÍ·ÅʵÑ飬·Ö±ðÔÚ̵ͿƬ»òÅàÑøÑôÐԵĽáºË²¡È˺ÍBCG½ÓÖֵĽ¡¿µ ÈËȺÖнøÐмì²â¡£ËùÊöSEQ ID Nol-IOµÄ¶àëÄͨ¹ý¹ÌÏàºÏ³ÉÒǰ´ºÏ³ÉÒÇ˵Ã÷ÊéµÄʵÑéÌõ ¼þºÏ³É²¢Í¨¹ýHPLC·ÖÎöºÍ´¿»¯¡£´¿»¯ºóµÄ¶àëĸɷÛÒÔDMSOÈܽ⣬ÅäÖóÉ10mg/mlµÄ´¢´æ Òº£¬"80¶È¶³´æ¡£ÁÙÓÃǰÒÔRPMI1640ÅàÑøÒºÏ¡ÊÍÖÁʹÓÃŨ¶È10ug/ml.ʵÑé¶ÔÏó½áºË¸ÐȾÕߺͽ¡¿µÈË·Ö±ð´ÓÖØÇì·Î¿ÆÒ½Ôº²¡È˼°¼ÒÊôºÍÉϺ£¸´µ©´óѧѧÉúÖÐ×é Ö¯ÕÐļ¡£½áºË¸ÐȾÕß°üÀ¨»î¶¯ÐÔ½áºË»¼ÕߺÍDZ·üÐÔ½áºË¸ÐȾÕß¡£´ÓÊܲâÕßÖгéÈ¡µÄѪҺÑù Æ·¾­¹ý¸ÎËØ¿¹Äý´¦Àí£¬ËùÓÐÊÔÑé¾ùÔÚ²ÉѪºó6СʱÄÚÍê³É¡£Èý×éÈËȺÈëÑ¡±ê×¼ÈçÏÂ24Àý·Î½áºË»¼Õß̵ͿƬ»ò̵ÅàÑøÑôÐÔ£¬ÁÙ´²±íÏÖÓëXÏß¼ì²é½á¹ûÏà·û£¬ÇÒ½ÓÊÜ¿¹ ½áºËÖÎÁƵÄʱ¼äÉÙÓÚÈýÖÜ¡£HIV¼ì²âÒõÐÔ¡£25Àý½¡¿µ¶ÔÕÕ½ÓÖÖ¹ýBCGÒßÃ磬ÎÞ·¢ÈÈ¡¢¿ÈËÔµÈÖ¢×´£¬½üÆÚÎÞ½áºË²¡È˽Ӵ¥Ê·µÄ ½¡¿µÈËȺ¡£HIV¼ì²âÒõÐÔ¡£10ÀýDZ·üÐÔ½áºË¸ÐȾÕß(¸ßΣÈËȺ)ÎÞ·¢ÉÕ¡¢¿ÈËÔµÈÃ÷ÏÔÖ¢×´£¬ÐØÆ¬ÎÞÒì³££¬½üÆÚ Óë»î¶¯ÐԷνáºË²¡ÈËÓÐÃÜÇнӴ¥£¬È繲ͬÉú»îµÈ£¬ÇÒT-SPOTÊÔÑéÑôÐÔ¡£ÊµÑé·½·¨·½·¨Ò»1.²É¼¯ÊÜÊÔÕ߸ÎËØ¿¹ÄýȫѪ£¬ÒÔ1 10µÄ±ÈÀýÓëRPMI1640»ìºÏºó£¬¼ÓÈë96¿×ϸ °ûÅàÑø°åÄÚ¡£2.ÿ¿×ÄÚ·Ö±ð¼ÓÈëµ¥Ìõ¶àëÄ»ò¶àëÄ»ìºÏÎï×÷Ϊ´Ì¼¤¿¹Ô­£¬Ê¹Ã¿Ìõ¶àëĵÄÖÕŨ¶ÈΪ 10ug/ml£¬Ã¿¿×ÄÚÖÕÌå»ýΪ200ul¡£Í¬Ê±ÉèÁ¢¶ÔÕÕÑôÐÔ¶ÔÕÕPHAÖÕŨ¶È5ug/ml£¬PPDÖÕŨ¶È 5ug/ml£¬²»¼Ó¶àëĵÄȫѪϡÊÍҺΪÒõÐÔ¶ÔÕÕ¡£¶àëĿ׺ÍÑôÐÔ¶ÔÕÕ¡¢ÒõÐÔ¶ÔÕÕ¾ù×ö¸´¿×¡£3. 37¡ãC,5% C02ÅàÑøÏäÖзõÓý5Ììºó£¬ÊÕ¼¯ÅàÑøÒºÉÏÇ壬-20¡ãC¶³´æÒÔ±¸¼ì²â¡£
    4. ELISA·½·¨¼ì²âȫѪÅàÑøÒºÉÏÇåÖÐIFN- ¦ÃµÄÊÍ·ÅÁ¿£¬¾ßÌå²½ÖèΪÔÚ96¿×ø±ê °åÉϰü±»ÈËIFN-¦Ãµ¥¿Ë¡¿¹Ìå¹ýÒ¹£¬BSA·â±Õºó¼ÓÈë´ý²â±ê±¾ºÍÒÑ֪Ũ¶ÈµÄIFN-Y±ê×¼ Æ·£¬Í¬Ê±¼ÓÈëÏ¡ÊͺóµÄÉúÎïËØ»¯¿¹Ìå(Biotinylated antibody)£¬ÊÒηõÓý2Сʱ£¬Ï´°åºó ¼ÓÈëStrÓ¡tavidin-HRP£¬ÊÒηõÓý20·ÖÖÓ£¬Ï´°å3´Îºó¼ÓÈëTMBÏÔɫҺ£¬ÊÒαܹâ·õÓý10 15·ÖÖÓºó¼ÓÈëÖÕÖ¹Òº¡£Ó¦ÓÃø±êÒÇÔÚ450nm²¨³¤¶ÁÈ¡ODÖµ¡£¸ù¾Ý±ê׼Ʒ×ö±ê×¼ÇúÏßºó¼Æ ËãÑù±¾ÖÐIFN-YµÄÊÍ·ÅÁ¿¡£5.½á¹ûÅж¨ÔÚÑôÐÔ¶ÔÕÕ¿×·´Ó¦Õý³£µÄÇé¿öÏÂ(Ò»°ãÓ¦áê100pg/ml)£¬¶àëĴ̼¤¿× µÄIFN-YÊÍ·ÅÁ¿¼õÈ¥ÒõÐÔ¶ÔÕÕ¿×´óÓÚ15pg/mlÔòÅж¨ÎªÑôÐÔ¡£·½·¨¶þ1.²É¼¯ÊÜÊÔÕ߸ÎËØ¿¹ÄýȫѪ£¬²¢³ä·Ö»ì„ò2.½«»ì„òºóµÄȫѪֱ½Ó¼ÓÈë24¿×ϸ°ûÅàÑø°åÄÚ£¬Ã¿¿×Iml3.ÿ¿×ÄÚ·Ö±ð¼ÓÈë¶àëÄ(ÖÕŨ¶ÈlOug/ml)£¬ÑôÐÔ¶ÔÕÕPHA(ÖÕŨ¶È5ug/ml)ºÍÒõ ÐÔ¶ÔÕÕ(ÉúÀíÑÎË®)£¬²¢³ä·Ö»ì„ò 4. 37¡ãC>5% C02ÅàÑøÏäÖзõÓý16 24Сʱºó£¬Ã¿¿×ÊÕ¼¯200 300ulѪ½¬£¬_20¡ãC ¶³´æÒÔ±¸¼ì²â¡£5. ELISA·½·¨¼ì²âIFN- ¦ÃµÄÊÍ·ÅÁ¿¼°½á¹ûÅж¨Í¬·½·¨Ò»¡£½á¹ûÏÔʾ£¬ÔÚ34Àý½áºË¸ÐȾÕßÖУ¬µ¥Ìõ¶àëĵÄÑôÐÔ·´Ó¦ÂÊ×î¸ßΪ59% (20/34)£¬×îµÍΪ32% (11/34)£»ÔÚ25ÀýBCG½ÓÖֵĽ¡¿µ¶ÔÕÕÖУ¬Ã¿Ìõ¶àëĵÄÑôÐÔ·´Ó¦ÈËÊý¾ùµÍÓÚ1ÈË£¬¼´Õï¶ÏµÄ ÌØÒìÐÔ¾ùÔÚ90%ÒÔÉÏ¡£¶Ô¶àëÄ»ìºÏÎïÀ´½²£¬ÆäÑôÐÔ·´Ó¦Âʼ´Õï¶ÏµÄÃô¸ÐÐÔΪ82% (28/34)£¬ ÌØÒìÐÔΪ96% (1/25)¡£±í1ΪÁ½×éÈËȺTϸ°û¶ÔSEQ ID NO. 1-10µÄ¶àëļ°Æä»ìºÏÎï²úÉú µÄÓ¦´ð¡£±í ȨÀûÒªÇó
    1.Ò»ÖÖ¼ì²â½áºË·ÖÖ¦¸Ë¾ú¸ÐȾµÄÊÔ¼Á£¬ÆäÌØÕ÷ÔÚÓÚ£¬Æä°üº¬SEQ ID No. 1-10Ëù´ú±íµÄ ¶àëÄ»òÆäÀàËÆÎï¡£
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    3.¸ù¾ÝȨÀûÒªÇó1ËùÊöµÄ¼ì²â½áºË·ÖÖ¦¸Ë¾ú¸ÐȾµÄÊÔ¼Á£¬ÆäÌØÕ÷ÔÚÓÚ£¬ËùÊö¶àëÄ»òÆä ÀàËÆÎÊÇÈ˹¤ºÏ³ÉµÄ»òÊÇÌìÈ»·ÖÀëµÄ¡£
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    7.¸ù¾ÝȨÀûÒªÇó5ËùÊöµÄÊÔ¼ÁºÐ£¬Æä¼ì²â·½·¨°üÀ¨ELISA¡¢ELISP0T¡¢Ï¸°ûÄÚϸ°ûÒò×Ó È¾É«¡¢ImmunoblottingºÍTϸ°ûÔöÖ³ÊÔÑé¡£
    8.¸ù¾ÝȨÀûÒªÇó5ËùÊöµÄÊÔ¼ÁºÐ£¬ÆäÖеÄTϸ°ûÀ´Ô´ÓÚѪҺ¡¢·ÎÅݹàÏ´Òº¡¢ÐØË®¡¢ÄÔ¼¹ Òº¡¢Áܰͽá»òÆäËü°üº¬Tϸ°ûµÄ×éÖ¯¡£
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