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专利名称：肺炎衣原体抗体检测试剂盒及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种肺炎衣原体抗体检测试剂盒及其制备方法，属于生物技术领域。

背景技术：
肺炎衣原体(Chlamydia pneumonia)，又称为TWAR组衣原体，为专性细胞内寄生的微生物。该衣原体主要寄生于人类，无动物储存宿主，属严格的人类病原体，目前只有一种血清型。肺炎衣原体传染途径是呼吸道分泌物的人与人的传播、其扩散较为缓慢。潜伏期平均30d左右。
肺炎衣原体感染是全世界各地广泛存在、高度流行的常见病。四季均可流行，重复感染较常见，主要引起急性呼吸道感染。目前，肺炎衣原体感染约占社区获得性肺炎的10％。肺炎衣原体感染的临床表现轻重不一，以肺炎为主，无特征性，通常症状较轻，有发热、咳嗽、寒战、胸痛和肌痛等，可伴随肺外表现，如脑炎、吉兰一巴雷综合征等。除此之外，肺炎衣原体感染可引起中耳炎、鼻窦炎、扁桃体炎、咽炎、喉炎、支气管炎、肺炎等疾病。
肺炎衣原体感染的诊断方法通常有细胞培养分离技术、血清微量免疫荧光抗体技术(MIF)、直接免疫荧光试验(DIF)和酶联免疫吸附试验(ELISA)，其中细胞培养分离技术操作繁琐、培养时间长、设备要求高并且技术难度大，一般实验室难以具备；血清微量免疫荧光抗体技术(MIF)能检测出特异性抗体，但要求读片人受过专业训练并且该技术很难标准化，除此之外，由于病原体从进入机体进行复制和抗原刺激产生抗体需要一段较长的窗口期(初次感染一般需要3周)，时间跨度长，不能满足早期病原体确诊的需要，不利于病人的早期诊断和治疗；直接免疫荧光试验(DIF)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测标本中的衣原体两者均需一些大型的仪器设备，操作步骤繁琐，使用不方便。


发明内容
本发明要解决的问题是针对现有技术的不足，提供一种适用于临床辅助诊断和鉴别的肺炎衣原体抗体检测试剂盒及其制备方法，该试剂盒具有结构简单、使用便捷、检测速度快的优点。
为解决以上问题，本发明的技术方案如下肺炎衣原体抗体检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒包括 检测盒，包括检测盒盒体和盒盖，盒盖的内侧设有硝酸纤维素膜，与硝酸纤维素膜位置对应的盒盖上设有反应孔，检测盒盒体内设有吸水垫，硝酸纤维素膜上设有有检测点和质控点； 金标工作液瓶，盛有金标工作液，该金标工作液由金标浓缩液与稀释液混合而成；和 洗涤液瓶，盛有洗涤液，该洗涤液包括三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、牛血清白蛋白和盐酸； 其中，检测点包被有肺炎衣原体抗原，质控点包被有羊抗鼠抗体。
作为上述技术方案的进一步改进 所述金标浓缩液与稀释液的混合体积比为1∶15-30。
所述金标浓缩液与稀释液的混合体积比为1∶20。
所述制备方法包括检测盒、金标工作液和洗涤液的制备； 其中，金标工作液的制备包括以下步骤 a、制备金标浓缩液 取1-4％的氯金酸水溶液100ml，加热至沸腾，加入0.5-1％柠檬酸三钠溶液0.8ml，迅速混匀，待溶液颜色由淡黄→蓝色→紫色→完全透明的酒红色，继续煮沸10分钟，停止加热，冷却至室温； 向得到的溶液中加入1mg/ml的抗人IgG单克隆抗体溶液100μl，得到混合溶液； 然后将混合溶液进行离心处理，弃去上清液，得到下层金标浓缩液，备用； b、制备稀释液 将121.1-363.3mg的三羟甲基氨基甲烷、0.1-1mg的氯化钠和0.5-2mg的牛血清白蛋白置于容量瓶内，加入双蒸水，轻摇使之完全溶解，然后继续加入双蒸水至100mL，最后用盐酸将其pH调节至7.4，得到稀释液，在2～8℃下保存，备用； c、将稀释液与金标浓缩液按比例混合，得到金标工作液，并放置在金标工作液瓶内。
所述洗涤液的制备包括以下步骤 将121.1-242.2mg的三羟甲基氨基甲烷、0.1-1mg的氯化钠和0.1-1mg的牛血清白蛋白置于容量瓶内，加入双蒸水，轻摇使之完全溶解，然后继续加入双蒸水至100mL，再用盐酸将其pH调节为7.4，得到洗涤液，放在洗涤液瓶内，置于2～8℃下保存。
所述检测盒的制备包括以下步骤 首先在硝酸纤维素膜的检测点包被肺炎衣原体抗原，在质控点包被羊抗鼠抗体； 然后将盒盖、硝酸纤维素膜、吸水垫和检测盒盒体按照从上而下的顺序组装并扣紧，组装成检测盒； 将检测盒放置在湿度小于40％的环境下干燥2小时； 最后将干燥后的检测盒放置在铝箔袋内并封口。
步骤b中，三羟甲基氨基甲烷的用量为242.2mg，氯化钠的用量为0.9mg，牛血清白蛋白的用量为1mg。
所述三羟甲基氨基甲烷的用量为121.1mg，氯化钠的用量为0.9mg，牛血清白蛋白的用量为0.5mg。
本发明采用以上技术方案，与现有技术相比，具有以下优点由检测盒、金标工作液瓶和洗涤液瓶组成，结构简单，只需将待测血清滴入检测盒的硝酸纤维素膜上，就能快速诊断肺炎衣原体特异性抗体，使用简单便捷、检测速度快，临床检验不需任何仪器，避免了实验过程中各种因素对结果的影响以及减轻了操作人员的劳动强度。
下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明


附图1为本发明实施例中试剂盒的结构示意图； 附图2为本发明实施例中检测盒的结构示意图； 附图3为附图2中A-A向的剖视图。
图中， 1-金标工作液瓶，2-洗涤液瓶，3-盒盖，4-硝酸纤维素膜，5-吸水垫，6-检测盒盒体，7-检测点，8-质控点，9-反应孔，10-铝箔袋。
具体实施例 实施例1，如图1所示，肺炎衣原体抗体检测试剂盒，包括检测盒、金标工作液瓶1以及洗涤液瓶2，检测盒放置在铝箔袋10内。
如图2、图3所示，检测盒包括检测盒盒体6和盒盖3，盒盖3的内侧设有硝酸纤维素膜4，与硝酸纤维素膜4位置对应的盒盖3上设有反应孔9，检测盒盒体6内设有吸水垫5，硝酸纤维素膜4上设有检测点7和质控点8，检测点7包被有肺炎衣原体抗原，质控点8包被有羊抗鼠抗体。
金标工作液瓶1内盛有金标工作液，该金标工作液是由金标浓缩液经稀释液稀释所获得的。
洗涤液瓶2内盛有洗涤液，该洗涤液是由三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、牛血清白蛋白和盐酸配制获得的。
该试剂盒通过以下步骤制备 (一)检测盒的制备 首先在硝酸纤维素膜的检测点7包被肺炎衣原体抗原，在质控点8包被羊抗鼠抗体； 然后将盒盖3、硝酸纤维素膜4、吸水垫5和检测盒盒体6按照从上而下的顺序组装并扣紧，组装成检测盒； 将检测盒放置在湿度小于40％的环境下干燥2小时； 最后将干燥后的检测盒放置在铝箔袋10内并封口； (二)金标工作液的制备 a、制备金标浓缩液 取1％的氯金酸水溶液100ml，加热至沸腾，加入0.5％柠檬酸三钠溶液0.8ml，迅速混匀，待溶液颜色由淡黄→蓝色→紫色→完全透明的酒红色，继续煮沸10分钟，停止加热，冷却至室温； 向得到的溶液中加入1mg/ml的抗人IgG单克隆抗体溶液100μl，得到混合溶液； 然后将混合溶液进行离心处理，弃去上清液，得到下层金标浓缩液，备用； b、制备稀释液 将121.1mg的三羟甲基氨基甲烷、0.1mg的氯化钠和0.5mg的牛血清白蛋白置于容量瓶内，加入双蒸水，轻摇使之完全溶解，然后继续加入双蒸水至100mL，最后用盐酸将其pH调节至7.4，得到稀释液，在2～8℃下保存，备用； c、将稀释液与金标浓缩液按15∶1的体积比混合，得到金标工作液，并放置在金标工作液瓶1内； (三)制备洗涤液 将121.1mg的三羟甲基氨基甲烷、0.1mg的氯化钠和0.1mg的牛血清白蛋白置于容量瓶内，加入双蒸水，轻摇使之完全溶解，然后继续加入双蒸水至100mL，再用盐酸将其pH调节为7.4，得到洗涤液，放在洗涤液瓶内，置于2～8℃下保存； (四)在金标工作液瓶1和洗涤液瓶2上贴好标签后与检测盒一起组装成试剂盒。
以上试剂盒的使用、检测方法 1、样本收集 将静脉血置于干净、未加抗凝剂的容器内，静置使血自然收缩，离心取血清检测。
2、检测 a、取出试剂盒，室温平衡20～30分钟； b、滴加1滴洗涤液于硝酸纤维素膜4上，待液体将硝酸纤维膜4完全湿润； c、滴加150μl待测血清于硝酸纤维素膜4上，待液体充分吸入； d、滴加3滴金标工作液于硝酸纤维素膜4上，待液体充分吸入； e、滴加3滴洗涤液于硝酸纤维素膜4上，待液体充分吸入后于3分钟内观察结果。
3、结果判断 阳性若被测标本中含有肺炎衣原体抗体，标本中的Cpn特异性抗体便与硝酸纤维素膜4上的固相Cpn抗原发生特异性结合形成复合物，而其他无关物质则被滤过，再加上金标鼠抗人单克隆抗体，滤过时金标记单抗便与复合物结合，即可在检测点7观察到红色反应标记。同时，金标鼠抗人单克隆抗体与质控点8上包被的羊抗鼠抗体结合，在质控点8形成红色反应标记。检测点7有红色反应标记出现，这表明被测标本中含有肺炎衣原体抗体，为阳性结果。
阴性若被测标本中不含有肺炎衣原体抗体，反应体系中的金标鼠抗人单克隆抗体与包被的Cpn抗原无法形成间接抗原-抗体反应，即在检测点7无红色反应标记。同时，金标单克隆抗体与质控点上包被的羊抗鼠抗体结合，在质控点8形成红色反应标记。检测点7无红色反应标记出现，这表明被测标本中不含有肺炎衣原体抗体，为阴性结果。
无效反应后，若质控点8不显色，表明操作失误或试剂失效。
使用本发明实施例的试剂盒对1000例测试标本进行检测，结果如下表
从以上检测方法及检测结果可以看出，本发明的试剂盒只需将待测血清滴入检测盒的硝酸纤维素膜上，就能快速诊断肺炎衣原体特异性抗体，使用简单便捷、检测速度快，符合率高，临床检验不需任何仪器，避免了实验过程中各种因素对结果的影响以及减轻了操作人员的劳动强度。
实施例2，如图1所示，肺炎衣原体抗体检测试剂盒，包括检测盒、金标工作液瓶1以及洗涤液瓶2，检测盒放置在铝箔袋10内。
如图2、图3所示，检测盒包括检测盒盒体6和盒盖3，盒盖3的内侧设有硝酸纤维素膜4，与硝酸纤维素膜4位置对应的盒盖3上设有反应孔9，检测盒盒体6内设有吸水垫5，硝酸纤维素膜4上设有检测点7和质控点8，检测点7包被有肺炎衣原体抗原，质控点8包被有羊抗鼠抗体。
金标工作液瓶1内盛有金标工作液，该金标工作液是由金标浓缩液经稀释液稀释所获得的。
洗涤液瓶2内盛有洗涤液，该洗涤液是由三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、牛血清白蛋白和盐酸配制获得的。
该试剂盒通过以下步骤制备 (一)检测盒的制备 首先在硝酸纤维素膜的检测点7包被肺炎衣原体抗原，在质控点8包被羊抗鼠抗体； 然后将盒盖3、硝酸纤维素膜4、吸水垫5和检测盒盒体6按照从上而下的顺序组装并扣紧，组装成检测盒； 将检测盒放置在湿度小于40％的环境下干燥2小时； 最后将干燥后的检测盒放置在铝箔袋10内并封口； (二)金标工作液的制备 a、制备金标浓缩液 取2％的氯金酸水溶液100ml，加热至沸腾，加入0.7％柠檬酸三钠溶液0.8ml，迅速混匀，待溶液颜色由淡黄→蓝色→紫色→完全透明的酒红色，继续煮沸10分钟，停止加热，冷却至室温； 向得到的溶液中加入1mg/ml的抗人IgG单克隆抗体溶液100μl，得到混合溶液； 然后将混合溶液进行离心处理，弃去上清液，得到下层金标浓缩液，备用； b、制备稀释液 将242.2mg的三羟甲基氨基甲烷、0.9mg的氯化钠和1.0mg的牛血清白蛋白置于容量瓶内，加入双蒸水，轻摇使之完全溶解，然后继续加入双蒸水至100mL，最后用盐酸将其pH调节至7.4，得到稀释液，在2～8℃下保存，备用； c、将稀释液与金标浓缩液按20∶1的体积比混合，得到金标工作液，并放置在金标工作液瓶1内； (三)制备洗涤液 将121.1mg的三羟甲基氨基甲烷、0.9mg的氯化钠和0.5mg的牛血清白蛋白置于容量瓶内，加入双蒸水，轻摇使之完全溶解，然后继续加入双蒸水至100mL，再用盐酸将其pH调节为7.4，得到洗涤液，放在洗涤液瓶内，置于2～8℃下保存； (四)在金标工作液瓶1和洗涤液瓶2上贴好标签后与检测盒一起组装成试剂盒。
以上试剂盒的使用、检测方法 1、样本收集 将静脉血置于干净、未加抗凝剂的容器内，静置使血自然收缩，离心取血清检测。
2、检测 a、取出试剂盒，室温平衡20～30分钟； b、滴加1滴洗涤液于硝酸纤维素膜4上，待液体将硝酸纤维膜4完全湿润； c、滴加150μl待测血清于硝酸纤维素膜4上，待液体充分吸入； d、滴加3滴金标工作液于硝酸纤维素膜4上，待液体充分吸入； e、滴加3滴洗涤液于硝酸纤维素膜4上，待液体充分吸入后于3分钟内观察结果。
3、结果判断 阳性若被测标本中含有肺炎衣原体抗体，标本中的Cpn特异性抗体便与硝酸纤维素膜4上的固相Cpn抗原发生特异性结合形成复合物，而其他无关物质则被滤过，再加上金标鼠抗人单克隆抗体，滤过时金标记单抗便与复合物结合，即可在检测点7观察到红色反应标记。同时，金标鼠抗人单克隆抗体与质控点8上包被的羊抗鼠抗体结合，在质控点8形成红色反应标记。检测点7有红色反应标记出现，这表明被测标本中含有肺炎衣原体抗体，为阳性结果。
阴性若被测标本中不含有肺炎衣原体抗体，反应体系中的金标鼠抗人单克隆抗体与包被的Cpn抗原无法形成间接抗原-抗体反应，即在检测点7无红色反应标记。同时，金标单克隆抗体与质控点上包被的羊抗鼠抗体结合，在质控点8形成红色反应标记。检测点7无红色反应标记出现，这表明被测标本中不含有肺炎衣原体抗体，为阴性结果。
无效反应后，若质控点8不显色，表明操作失误或试剂失效。
使用本发明实施例的试剂盒对1000例测试标本进行检测，结果如下表
从以上检测方法及检测结果可以看出，本发明的试剂盒只需将待测血清滴入检测盒的硝酸纤维素膜上，就能快速诊断肺炎衣原体特异性抗体，使用简单便捷、检测速度快，符合率高，临床检验不需任何仪器，避免了实验过程中各种因素对结果的影响以及减轻了操作人员的劳动强度。
实施例3，如图1所示，肺炎衣原体抗体检测试剂盒，包括检测盒、金标工作液瓶1以及洗涤液瓶2，检测盒放置在铝箔袋10内。
如图2、图3所示，检测盒包括检测盒盒体6和盒盖3，盒盖3的内侧设有硝酸纤维素膜4，与硝酸纤维素膜4位置对应的盒盖3上设有反应孔9，检测盒盒体6内设有吸水垫5，硝酸纤维素膜4上设有检测点7和质控点8，检测点7包被有肺炎衣原体抗原，质控点8包被有羊抗鼠抗体。
金标工作液瓶1内盛有金标工作液，该金标工作液是由金标浓缩液经稀释液稀释所获得的。
洗涤液瓶2内盛有洗涤液，该洗涤液是由三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、牛血清白蛋白和盐酸配制获得的。
该试剂盒通过以下步骤制备 (一)检测盒的制备 首先在硝酸纤维素膜的检测点7包被肺炎衣原体抗原，在质控点8包被羊抗鼠抗体； 然后将盒盖3、硝酸纤维素膜4、吸水垫5和检测盒盒体6按照从上而下的顺序组装并扣紧，组装成检测盒； 将检测盒放置在湿度小于40％的环境下干燥2小时； 最后将干燥后的检测盒放置在铝箔袋10内并封口； (二)金标工作液的制备 a、制备金标浓缩液 取3％的氯金酸水溶液100ml，加热至沸腾，加入0.8％柠檬酸三钠溶液0.8ml，迅速混匀，待溶液颜色由淡黄→蓝色→紫色→完全透明的酒红色，继续煮沸10分钟，停止加热，冷却至室温； 向得到的溶液中加入1mg/ml的抗人IgG单克隆抗体溶液100μl，得到混合溶液； 然后将混合溶液进行离心处理，弃去上清液，得到下层金标浓缩液，备用； b、制备稀释液 将363.3mg的三羟甲基氨基甲烷、0.5mg的氯化钠和1.5mg的牛血清白蛋白置于容量瓶内，加入双蒸水，轻摇使之完全溶解，然后继续加入双蒸水至100mL，最后用盐酸将其pH调节至7.4，得到稀释液，在2～8℃下保存，备用； c、将稀释液与金标浓缩液按25∶1的体积比混合，得到金标工作液，并放置在金标工作液瓶1内； (三)制备洗涤液 将242.2mg的三羟甲基氨基甲烷、0.5mg的氯化钠和0.7mg的牛血清白蛋白置于容量瓶内，加入双蒸水，轻摇使之完全溶解，然后继续加入双蒸水至100mL，再用盐酸将其pH调节为7.4，得到洗涤液，放在洗涤液瓶内，置于2～8℃下保存； (四)在金标工作液瓶1和洗涤液瓶2上贴好标签后与检测盒一起组装成试剂盒。
以上试剂盒的使用、检测方法 1、样本收集 将静脉血置于干净、未加抗凝剂的容器内，静置使血自然收缩，离心取血清检测。
2、检测 a、取出试剂盒，室温平衡20～30分钟； b、滴加1滴洗涤液于硝酸纤维素膜4上，待液体将硝酸纤维膜4完全湿润； c、滴加150μl待测血清于硝酸纤维素膜4上，待液体充分吸入； d、滴加3滴金标工作液于硝酸纤维素膜4上，待液体充分吸入； e、滴加3滴洗涤液于硝酸纤维素膜4上，待液体充分吸入后于3分钟内观察结果。
3、结果判断 阳性若被测标本中含有肺炎衣原体抗体，标本中的Cpn特异性抗体便与硝酸纤维素膜4上的固相Cpn抗原发生特异性结合形成复合物，而其他无关物质则被滤过，再加上金标鼠抗人单克隆抗体，滤过时金标记单抗便与复合物结合，即可在检测点7观察到红色反应标记。同时，金标鼠抗人单克隆抗体与质控点8上包被的羊抗鼠抗体结合，在质控点8形成红色反应标记。检测点7有红色反应标记出现，这表明被测标本中含有肺炎衣原体抗体，为阳性结果。
阴性若被测标本中不含有肺炎衣原体抗体，反应体系中的金标鼠抗人单克隆抗体与包被的Cpn抗原无法形成间接抗原-抗体反应，即在检测点7无红色反应标记。同时，金标单克隆抗体与质控点上包被的羊抗鼠抗体结合，在质控点8形成红色反应标记。检测点7无红色反应标记出现，这表明被测标本中不含有肺炎衣原体抗体，为阴性结果。
无效反应后，若质控点8不显色，表明操作失误或试剂失效。
使用本发明实施例的试剂盒对1000例测试标本进行检测，结果如下表
从以上检测方法及检测结果可以看出，本发明的试剂盒只需将待测血清滴入检测盒的硝酸纤维素膜上，就能快速诊断肺炎衣原体特异性抗体，使用简单便捷、检测速度快，符合率高，临床检验不需任何仪器，避免了实验过程中各种因素对结果的影响以及减轻了操作人员的劳动强度。
实施例4，如图1所示，肺炎衣原体抗体检测试剂盒，包括检测盒、金标工作液瓶1以及洗涤液瓶2，检测盒放置在铝箔袋10内。
如图2、图3所示，检测盒包括检测盒盒体6和盒盖3，盒盖3的内侧设有硝酸纤维素膜4，与硝酸纤维素膜4位置对应的盒盖3上设有反应孔9，检测盒盒体6内设有吸水垫5，硝酸纤维素膜4上设有检测点7和质控点8，检测点7包被有肺炎衣原体抗原，质控点8包被有羊抗鼠抗体。
金标工作液瓶1内盛有金标工作液，该金标工作液是由金标浓缩液经稀释液稀释所获得的。
洗涤液瓶2内盛有洗涤液，该洗涤液是由三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、牛血清白蛋白和盐酸配制获得的。
该试剂盒通过以下步骤制备 (一)检测盒的制备 首先在硝酸纤维素膜的检测点7包被肺炎衣原体抗原，在质控点8包被羊抗鼠抗体； 然后将盒盖3、硝酸纤维素膜4、吸水垫5和检测盒盒体6按照从上而下的顺序组装并扣紧，组装成检测盒； 将检测盒放置在湿度小于40％的环境下干燥2小时； 最后将干燥后的检测盒放置在铝箔袋10内并封口； (二)金标工作液的制备 a、制备金标浓缩液 取4％的氯金酸水溶液100ml，加热至沸腾，加入1.0％柠檬酸三钠溶液0.8ml，迅速混匀，待溶液颜色由淡黄→蓝色→紫色→完全透明的酒红色，继续煮沸10分钟，停止加热，冷却至室温； 向得到的溶液中加入1mg/ml的抗人IgG单克隆抗体溶液100μl，得到混合溶液； 然后将混合溶液进行离心处理，弃去上清液，得到下层金标浓缩液，备用； b、制备稀释液 将242.2mg的三羟甲基氨基甲烷、1mg的氯化钠和2.0mg的牛血清白蛋白置于容量瓶内，加入双蒸水，轻摇使之完全溶解，然后继续加入双蒸水至100mL，最后用盐酸将其pH调节至7.4，得到稀释液，在2～8℃下保存，备用； c、将稀释液与金标浓缩液按30∶1的体积比混合，得到金标工作液，并放置在金标工作液瓶1内； (三)制备洗涤液 将121.1mg的三羟甲基氨基甲烷、1mg的氯化钠和1mg的牛血清白蛋白置于容量瓶内，加入双蒸水，轻摇使之完全溶解，然后继续加入双蒸水至100mL，再用盐酸将其pH调节为7.4，得到洗涤液，放在洗涤液瓶内，置于2～8℃下保存； (四)在金标工作液瓶1和洗涤液瓶2上贴好标签后与检测盒一起组装成试剂盒。
以上试剂盒的使用、检测方法 1、样本收集 将静脉血置于干净、未加抗凝剂的容器内，静置使血自然收缩，离心取血清检测。
2、检测 a、取出试剂盒，室温平衡20～30分钟； b、滴加1滴洗涤液于硝酸纤维素膜4上，待液体将硝酸纤维膜4完全湿润； c、滴加150μl待测血清于硝酸纤维素膜4上，待液体充分吸入； d、滴加3滴金标工作液于硝酸纤维素膜4上，待液体充分吸入； e、滴加3滴洗涤液于硝酸纤维素膜4上，待液体充分吸入后于3分钟内观察结果。
3、结果判断 阳性若被测标本中含有肺炎衣原体抗体，标本中的Cpn特异性抗体便与硝酸纤维素膜4上的固相Cpn抗原发生特异性结合形成复合物，而其他无关物质则被滤过，再加上金标鼠抗人单克隆抗体，滤过时金标记单抗便与复合物结合，即可在检测点7观察到红色反应标记。同时，金标鼠抗人单克隆抗体与质控点8上包被的羊抗鼠抗体结合，在质控点8形成红色反应标记。检测点7有红色反应标记出现，这表明被测标本中含有肺炎衣原体抗体，为阳性结果。
阴性若被测标本中不含有肺炎衣原体抗体，反应体系中的金标鼠抗人单克隆抗体与包被的Cpn抗原无法形成间接抗原-抗体反应，即在检测点7无红色反应标记。同时，金标单克隆抗体与质控点上包被的羊抗鼠抗体结合，在质控点8形成红色反应标记。检测点7无红色反应标记出现，这表明被测标本中不含有肺炎衣原体抗体，为阴性结果。
无效反应后，若质控点8不显色，表明操作失误或试剂失效。
使用本发明实施例的试剂盒对1000例测试标本进行检测，结果如下表
从以上检测方法及检测结果可以看出，本发明的试剂盒只需将待测血清滴入检测盒的硝酸纤维素膜上，就能快速诊断肺炎衣原体特异性抗体，使用简单便捷、检测速度快，符合率高，临床检验不需任何仪器，避免了实验过程中各种因素对结果的影响以及减轻了操作人员的劳动强度。
权利要求
1.肺炎衣原体抗体检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒包括
检测盒，包括检测盒盒体(6)和盒盖(3)，盒盖(3)的内侧设有硝酸纤维素膜(4)，与硝酸纤维素膜(4)位置对应的盒盖(3)上设有反应孔(9)，检测盒盒体(6)内设有吸水垫(5)，硝酸纤维素膜(4)上设有有检测点(7)和质控点(8)；
金标工作液瓶(1)，盛有金标工作液，该金标工作液由金标浓缩液与稀释液混合而成；和
洗涤液瓶(2)，盛有洗涤液，该洗涤液包括三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、牛血清白蛋白和盐酸；
其中，检测点(7)包被有肺炎衣原体抗原，质控点(8)包被有羊抗鼠抗体。
2.如权利要求1所述的肺炎衣原体抗体检测试剂盒其特征在于所述金标浓缩液与稀释液的混合体积比为1∶15-30。
3.如权利要求2所述的肺炎衣原体抗体检测试剂盒其特征在于所述金标浓缩液与稀释液的混合体积比为1∶20。
4.肺炎衣原体抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于所述制备方法包括检测盒、金标工作液和洗涤液的制备；
其中，金标工作液的制备包括以下步骤
a、制备金标浓缩液
取1-4％的氯金酸水溶液100ml，加热至沸腾，加入0.5-1％柠檬酸三钠溶液0.8ml，迅速混匀，待溶液颜色由淡黄→蓝色→紫色→完全透明的酒红色，继续煮沸10分钟，停止加热，冷却至室温；
向得到的溶液中加入1mg/ml的抗人IgG单克隆抗体溶液100μl，得到混合溶液；
然后将混合溶液进行离心处理，弃去上清液，得到下层金标浓缩液，备用；
b、制备稀释液
将121.1-363.3mg的三羟甲基氨基甲烷、0.1-1mg的氯化钠和0.5-2mg的牛血清白蛋白置于容量瓶内，加入双蒸水，轻摇使之完全溶解，然后继续加入双蒸水至100mL，最后用盐酸将其pH调节至7.4，得到稀释液，在2～8℃下保存，备用；
c、将稀释液与金标浓缩液按比例混合，得到金标工作液，并放置在金标工作液瓶(1)内。
5.如权利要求4所述的肺炎衣原体抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于所述洗涤液的制备包括以下步骤
将121.1-242.2mg的三羟甲基氨基甲烷、0.1-1mg的氯化钠和0.1-1mg的牛血清白蛋白置于容量瓶内，加入双蒸水，轻摇使之完全溶解，然后继续加入双蒸水至100mL，再用盐酸将其pH调节为7.4，得到洗涤液，放在洗涤液瓶内，置于2～8℃下保存。
6.如权利要求4所述的肺炎衣原体抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于所述检测盒的制备包括以下步骤
首先在硝酸纤维素膜的检测点(7)包被肺炎衣原体抗原，在质控点(8)包被羊抗鼠抗体；
然后将盒盖(3)、硝酸纤维素膜(4)、吸水垫(5)和检测盒盒体(6)按照从上而下的顺序组装并扣紧，组装成检测盒；
将检测盒放置在湿度小于40％的环境下干燥2小时；
最后将干燥后的检测盒放置在铝箔袋内并封口。
7.如权利要求4所述的肺炎衣原体抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于步骤b中，三羟甲基氨基甲烷的用量为242.2mg，氯化钠的用量为0.9mg，牛血清白蛋白的用量为1mg。
8.如权利要求5所述的肺炎衣原体抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于所述三羟甲基氨基甲烷的用量为121.1mg，氯化钠的用量为0.9mg，牛血清白蛋白的用量为0.5mg。
全文摘要
本发明涉及一种肺炎衣原体抗体检测试剂盒，包括检测盒、盛有金标工作液的金标工作液瓶和盛有洗涤液的洗涤液瓶，检测盒包括检测盒盒体和盒盖，盒盖的内侧设有硝酸纤维素膜，与硝酸纤维素膜位置对应的盒盖上设有反应孔，检测盒盒体内设有吸水垫，硝酸纤维素膜上设有有检测点和质控点，检测点包被有肺炎衣原体抗原，质控点包被有羊抗鼠抗体，只需将待测血清滴入检测盒的硝酸纤维素膜上，就能快速诊断肺炎衣原体特异性抗体，使用简单便捷、检测速度快，临床检验不需任何仪器，避免了实验过程中各种因素对结果的影响以及减轻了操作人员的劳动强度。
文档编号G01N33/569GK101762696SQ20101001133
公开日2010年6月30日 申请日期2010年1月11日 优先权日2010年1月11日
发明者杨致亭, 刘安明, 傅爱华, 刘玉华, 祝希梅 申请人:杨致亭