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专利名称：一种规模化制备细胞显微样品的方法
技术领域：
本发明涉及一种制备细胞显微样品的方法，特别是指一种规模化制备细 胞显微样品的方法。
背景技术：
制备细胞显微样品是生物学、医学和药学等生命科学领域常用的实验方 法。现有的制作细胞显微标本的方法通常是先利用诸如微孔培养板等培养器 皿培养出细胞，再将培养好的细胞自培养器皿中取出再移至载玻片上并用盖 玻片盖好，从而完成一个细胞显微样品的制作。现有的这种制作细胞显微标 本的方法存在一个突出的问题将细胞自培养器皿转移至载玻片的操作费时， 工作效率低。发明内容本发明所要解决的技术问题是提供一种规模化制备细胞显微样品的方 法，其操作便捷，工作效率高。为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案 一种规模化制备细胞 显微样品的方法，其包括在无菌条件下进行的如下步骤放置盖玻片步骤，将含有铁粉成分的盖玻片放置于微孔板的微孔中，盖 玻片全面与微孔底部接触；细胞培养步骤，将预先制备好的单细胞悬液按具体的实验要求加至盖玻 片上进行培养；清洗细胞步骤，细胞生长一定时间后，当细胞的密度或者状态达到具体 的实验要求后，吸出培养液，再清洗细胞，每次摇震清洗4-5分钟，再吸去清 洗剂；生物化学反应步骤，在微孔中进行生物化学反应，具体反应步骤按照具 体的实验进行；再次清洗细胞步骤，生物化学反应结束后，再次清洗细胞，每次摇震清
洗4-5分钟，以清除多余的反应试剂，清洗后再吸去清洗剂；取出盖玻片步骤，将表面平整的具有磁吸吸附能力的磁吸板平置，磁吸 板面积与微孔板面积一致，再将载玻片编号、 一块一块铺在磁吸板上面，并 在载玻片上涂布盖玻片固定液，然后将微孔板倒置于载玻片上，盖玻片即在 磁吸板的磁力作用下移至载玻片上。上述技术方案的进一步改进是细胞培养步骤中，采用96孔板，单细胞 悬液加入量为200微升/孔。上述技术方案的进一步改进是清洗步骤以及再次清洗步骤中，采用的 清洗剂均为HBSS或者PBS。上述技术方案的进一步改进是清洗步骤及再次清洗步骤中，利用清洗 剂清洗细胞3次。本实用新型还提供如下一种技术方案 一种规模化制备细胞显微样品的 方法，其包括在无菌条件下进行的如下步骤放置盖玻片步骤，先将与盖玻片大小一致的可被磁性吸附的金属垫片放 置于微孔板的微孔底部中，再将普通盖玻片放置于金属垫片上，使两者之间 紧贴无空隙；细胞培养步骤，将预先制备好的单细胞悬液按具体的实验要求加至盖玻 片上进行培养；清洗细胞步骤，细胞生长一定时间后，当细胞的密度或者状态达到具体 的实验要求后，吸出培养液，再清洗细胞，每次摇震清洗4-5分钟，再吸去清 洗剂；生物化学反应步骤，在微孔中进行生物化学反应，具体反应步骤按照具 体的实验进行；再次清洗细胞步骤，生物化学反应结束后，再次清洗细胞，每次摇震清 洗4-5分钟，以清除多余的反应试剂，清洗后再吸去清洗剂；取出盖玻片步骤，将表面平整的具有磁吸吸附能力的磁吸板平置，磁吸 板面积与微孔板面积一致，再将载玻片编号、 一块一块铺在磁吸板上面，并 在载玻片上涂布盖玻片固定液，然后将微孔板倒置于载玻片上，金属垫片在 磁吸板的磁力作用下即推动盖玻片移至载玻片上。
上述技术方案的进一步改进是所述金属垫片为可被磁性吸附的不锈钢片。
本发明的有益效果是通过直接利用含有铁粉成分的盖玻片置于微孔板 内来培养细胞，或者通过在底面垫有可被磁性吸附的金属垫片的普通盖玻片 上培养细胞，当培养的细胞达到要求后，而可再利用具有磁性吸附能力的磁 吸板将所有盖玻片一次性全部吸出移至载玻片上制成细胞显微样品，操作简 单，尤其是将带有细胞的盖玻片移至载玻片上非常便捷，工作效率非常高， 可以实现规模化制备细胞显微样品，再配合采用48 L、 96孔的微孔板来培养细胞，其制备样品的效率比传统的一片片取出盖玻片的方法要高io倍以上。
本发明的方法可广泛应用于细胞生物学、药学、医学、遗传学等学科进行细 胞显微样品制备。
具体实施方式
在本发明第一实施方式中，本发明提供一种规模化制备细胞显微样品的方法，其包括在无菌条件下进行的如下步骤放置盖玻片步骤，将含有铁粉成分的盖玻片放置于微孔板的微孔中，盖 玻片全面与微孔底部接触；细胞培养步骤，将预先制备好的单细胞悬液按具体的实验要求加至盖玻 片上进行培养，以采用96孔的微孔板为例，其单细胞悬液的加入量为200微 升/孔；
清洗细胞步骤，细胞生长一定时间后，例如生长出克隆球需要培养10-20 天，当细胞的密度或者状态达到具体的实验要求后，吸出培养液，再清洗细 胞，每次摇震清洗4-5分钟，再吸去清洗剂，优选地，采用的清洗剂为HBSS 或者PBS， 一般清洗细胞3次；生物化学反应步骤，在微孔中进行生物化学反应，例如抗原抗体反应、 染色等，具体反应步骤按照具体的实验进行；再次清洗细胞步骤，生物化学反应结束后，再次清洗细胞，每次摇震清 洗4-5分钟，以清除多余的反应试剂，清洗后再吸去清洗剂，与清洗细胞步骤 相同地，本步骤也优选采用HBSS或者PBS为清洗剂， 一般清洗细胞3次；取出盖玻片步骤，将具有磁吸力的磁吸板置于实验桌面，磁吸板面积与
微孔板面积一致，再将载玻片编号、 一块一块铺在磁吸板上面，并在载玻片 上涂布盖玻片固定液，然后将微孔板倒置于载玻片上，盖玻片即在磁吸板的 磁力作用下移至载玻片上。在上述第一实施方式中，是直接采用了含有铁粉成分的盖玻片，以便在 取出盖玻片时由磁吸板将盖玻片吸至载玻片上，而在本发明第二实施方式中， 则进行了如下变化在放置盖玻片步骤，不采用含有铁粉成分的盖玻片，而 是先将与盖玻片大小一致的可被磁性吸附的金属垫片放置于微孔板的微孔底 部中，再将普通盖玻片放置于金属垫片上，使两者之间紧贴无空隙；这样， 在取出盖玻片步骤中，当微孔板倒置于载玻片上时，该金属垫片在磁力作用 下即会推动盖玻片移至载玻片上。从而同样可以便捷地将盖玻片自微孔中取 出并移至载玻片上形成细胞显微样品。通过直接利用含有铁粉成分的盖玻片置于微孔板内来培养细胞，或者通 过在底面垫有可被磁性吸附的金属垫片的普通盖玻片上培养细胞，当培养的 细胞达到要求后，而可再利用具有磁性吸附能力的磁吸板将所有盖玻片一次 性全部吸出移至载玻片上制成细胞显微样品，操作简单，尤其是将带有细胞 的盖玻片移至载玻片上非常便捷，工作效率非常高，可以实现规模化制备细 胞显微样品，再配合采用48孔、96孔的微孔板来培养细胞，其制备样品的效 率比传统的一片片取出盖玻片的方法要高10倍以上。本发明的方法可广泛应 用于细胞生物学、药学、医学、遗传学等学科进行细胞显微样品制备。
权利要求
1、一种规模化制备细胞显微样品的方法，其特征在于，包括在无菌条件下进行的如下步骤放置盖玻片步骤，将含有铁粉成分的盖玻片放置于微孔板的微孔中，盖玻片全面与微孔底部接触；细胞培养步骤，将预先制备好的单细胞悬液按具体的实验要求加至盖玻片上进行培养；清洗细胞步骤，细胞生长一定时间后，当细胞的密度或者状态达到具体的实验要求后，吸出培养液，再清洗细胞，每次摇震清洗4-5分钟，再吸去清洗剂；生物化学反应步骤，在微孔中进行生物化学反应，具体反应步骤按照具体的实验进行；再次清洗细胞步骤，生物化学反应结束后，再次清洗细胞，每次摇震清洗4-5分钟，以清除多余的反应试剂，清洗后再吸去清洗剂；取出盖玻片步骤，将表面平整的具有磁吸吸附能力的磁吸板平置，磁吸板面积与微孔板面积一致，再将载玻片编号、一块一块铺在磁吸板上面，并在载玻片上涂布盖玻片固定液，然后将微孔板倒置于载玻片上，盖玻片即在磁吸板的磁力作用下移至载玻片上。
2、 如权利要求l所述的一种规模化制备细胞显微样品的方法，其特征在 于细胞培养步骤中，采用96孔板，单细胞悬液加入量为200微升/孔。
3、 如权利要求l所述的一种规模化制备细胞显微样品的方法，其特征在 于清洗步骤以及再次清洗步骤中，采用的清洗剂均为HBSS或者PBS。
4、 如权利要求1或3所述的一种规模化制备细胞显微样品的方法，其特 征在于清洗步骤及再次清洗步骤中，利用清洗剂清洗细胞3次。
5、 一种规模化制备细胞显微样品的方法，其特征在于，包括在无菌条件 下进行的如下步骤放置盖玻片步骤，将与盖玻片大小一致的可被磁性吸附的金属垫片先放 置于微孔板的微孔底部中，再将普通盖玻片放置于金属垫片上，使两者之间 紧贴无空隙；细胞培养步骤，将预先制备好的单细胞悬液按具体的实验要求加至盖玻 片上进行培养；清洗细胞步骤，细胞生长一定时间后，当细胞的密度或者状态达到具体 的实验要求后，吸出培养液，再清洗细胞，每次摇震清洗4-5分钟，再吸去清 洗剂；生物化学反应步骤，在微孔中进行生物化学反应，具体反应步骤按照具 体的实验进行；再次清洗细胞步骤，生物化学反应结束后，再次清洗细胞，每次摇震清 洗4-5分钟，以清除多余的反应试剂，清洗后再吸去清洗剂；取出盖玻片步骤，将表面平整的具有磁吸吸附能力的磁吸板平置，磁吸 板面积与微孔板面积一致，再将载玻片编号、 一块一块铺在磁吸板上面，并 在载玻片上涂布盖玻片固定液，然后将微孔板倒置于载玻片上，金属垫片在 磁吸板的磁力作用下即推动盖玻片移至载玻片上。
6、 如权利要求5所述的一种规模化制备细胞显微样品的方法，其特征在 于细胞培养步骤中，采用96孔板，单细胞悬液加入量为200微升/孔。
7、 如权利要求5所述的一种规模化制备细胞显微样品的方法，其特征在 于清洗步骤以及再次清洗步骤中，采用的清洗剂均为HBSS或者PBS。
8、 如权利要求5或7所述的一种规模化制备细胞显微样品的方法，其特 征在于清洗步骤及再次清洗步骤中，利用清洗剂清洗细胞3次。
9、 如权利要求5所述的一种规模化制备细胞显微样品的方法，其特征在 于所述金属垫片为可以被磁性吸附的不锈钢片。
全文摘要
一种规模化制备细胞显微样品的方法，包括在无菌条件下进行的如下步骤将含有铁粉成分的盖玻片置于微孔板的微孔中，或先将可被磁性吸附的金属垫片置于微孔底部再将普通盖玻片置于金属垫片上；将单细胞悬液加至盖玻片上进行培养；细胞生长达到要求后，吸出培养液，清洗细胞；在微孔中进行生物化学反应；反应结束后，再次清洗细胞；将具有磁吸吸附能力的磁吸板平置，将载玻片铺在磁吸板上，并在载玻片上涂布盖玻片固定液，然后将微孔板倒置于载玻片上，盖玻片即在磁吸板的磁力作用下移至载玻片上。本发明通过采用含铁粉的盖玻片或在盖玻片底面垫有可被磁性吸附的金属垫片，而可利用磁吸板将所有盖玻片一次全部吸出移至载玻片上，操作便捷，效率高。
文档编号G01N33/48GK101126688SQ20071007704
公开日2008年2月20日 申请日期2007年9月11日 优先权日2007年9月11日
发明者莉 丁, 代建国, 刚 金 申请人:深圳职业技术学院