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专利名称：含有烟酰胺的液体能力验证样品及制备方法
技术领域：
本发明涉及毒理学能力验证技术领域，特别是含有单一食品添加剂成分液体能力验证样品，及该样品的制备方法。
背景技术：
烟酰胺即维生素PP促进消化系统的健康，减轻胃肠障碍；促进皮肤健康；预防和缓解严重的偏头痛；促进血液循环，使血压降低；减轻腹泻现象；减轻美尼尔氏症的不适症；使人体能充分利用食物来增加能量；治疗口腔、嘴唇炎症，防止口臭；降低胆固醇及甘油三脂。因其具有上述多种功效所以在医药、饲料及保健食品方面应用广泛，但是某些人群会有不良反应，如头昏、恶心、上腹不适等，而且人体每日摄入烟酰胺过量对人体健康具有不良影响，如可导致肾细胞中毒等。因此须对烟酰胺的毒性及烟酰胺在各类产品中的含量进行检验，检测结果是否准确性有赖于实验室的检测能力。
实验室间能力验证活动是评价参试实验室测试能力的重要手段之一，而组织者提供给各参试实验室的测试样品则是保证能力验证计划顺利实施的前提条件。能力验证样品不同于一般的实验室测试样品，它必须具备均匀性和稳定性特征，同时还应满足统计评价的要求。资料查新表明用于毒理学实验室间能力验证活动的测试样品国内外尚未见报道。

发明内容
本发明的目的是添补毒理学实验室间能力验证活动空白，提供一种含有烟酰胺的液体能力验证样品，样品均匀性、稳定性及统计评价符合能力验证要求，另外还提供该样品的制备方法，方法简单且保证样品性能及制备成功率。
本发明为实现上述目的所采用的技术方案是含有烟酰胺的液体能力验证样品，包括4～9个浓度呈等比关系的液体样品，各样品之间的等比系数为0.60～0.95，样品的溶剂为0.9％氯化钠生理盐水。
所述样品分为7个样品，各样品之间的等比系数为0.9。各样品浓度分别为1号液-177.78mg/mL；2号液-160.00mg/mL；3号液-144.00mg/mL；4号液-129.60mg/mL；5号液-116.64mg/mL；6号液-104.98mg/mL；7号液94.48mg/mL。
所述含有烟酰胺的液体能力验证样品，本发明所述含有烟酰胺的液体能力验证样品的制备方法为1.首先根据动物实验，确定该组样品的最高浓度和最低浓度。
2.再根据动物实验所呈现出的量．效关系确定该组样品应分为多少个样品及各样品之间的等比系数，采用“低比稀释法”配制溶液。
2.1.称取一定量药用烟酰胺纯粉，加入一定容积的0.9％氯化钠生理盐水，混合均匀后定容，再混匀，此溶液为1号液。
2.2.从1号液中取出一定量进行无菌分装，同时向原容量瓶中添加相同量的0.9％氯化钠生理盐水，混合均匀后定容，再混匀，此溶液即为2号液。
2.3.重复2.2操作，依次配得3号液，4号液，5号液，6号液，7号液。
2.4.封装样品，进行均匀性，稳定性测试，合格即可。
本发明的有益效果是本发明能力验证样品，其稳定性、均匀性符合能力验证要求，并可进行统计评价。样品加以唯一性标示，并随机抽样发放，可以有效防止参试实验室间的串通行为，使测试结果更加可信。本发明能力验证样品具有广泛的适用性，它不仅适用于毒理学实验室的能力验证活动，还广泛适用于与食品安全性有关的各个行业检测人员的水平测试及实验室的质量控制，例如食品安全性检验检疫部门；食品添加剂生产与使用部门；食品加工部门等。本发明首次完成了毒理学实验室间能力验证样品的制备，填补了该领域的空白，同时首次将药理学实验方法中“药物溶液的配制方法-低比稀释法”应用到能力验证样品制备技术中。
具体实施例方式
以下结合实施例对本发明进一步详细说明。
实施例1配制100mL含有烟酰胺的液体能力验证样品根据食品添加剂-烟酰胺的性质及毒理学实验要求选择制备该能力验证液体样品的溶剂为0.9％氯化钠生理盐水。
1.首先根据动物实验，确定该组样品的最高浓度为177.78mg/mL，最低浓度为94.48mg/mL。
2.再根据动物实验所呈现出的量-效关系确定该组样品分为7个样品，各样品之间的等比系数为0.9，按等比关系配制各样品，具体采用“低比稀释法”配制溶液2.1称取177.78g药用烟酰胺纯粉，加入1000mL的0.9％氯化钠生理盐水，混合均匀后定容，再混匀，此溶液为1号液。
2.2从1号液中取出100mL进行无菌分装，同时向原容量瓶中添加100mL0.9％氯化钠生理盐水，混合均匀后定容，再混匀，此溶液即为2号液。
2.3重复2.2操作，依次配得3号液，4号液，5号液，6号液，7号液。各样品浓度分别为1号液-177.78mg/mL；2号液-160.00mg/mL；3号液-144.00mg/mL；4号液-129.60mg/mL；5号液-116.64mg/mL；6号液-104.98mg/mL；7号液94.48mg/mL。
2.4将封装好的经检验合格的样品，经双人复核，登记，并加以唯一性标示。随机抽取一定数量的样品进行均匀性，稳定性测试，合格即可向参试实验室发放样品。
对所制备的样品性能进行测试从已包装和封识的每个剂量样品中分别随机选取28个样品用于均匀性和稳定性检查，共计选取样品196个，使所选取的样品具有高度的代表性。
1均匀性测试从包装好的每个剂量样品中分别随机选取10个样品进行均匀性检查。每个样品分成两份试料，所有试料以随机次序在重复性条件下测试261nm下的吸光度值A，即在同一实验室中由相同的人员使用相同的测试方法和仪器在较短时间内测试。由吸光度值换算样品的对数剂量。吸光度测试结果及对应的对数剂量值见表1。
对于每个剂量，样品的对数剂量为logD=log(A430×6.5×10-6×0.210),]]>式中A为吸光度值；样品对数剂量平均值为logDx‾=(logDx1+logDx2)/2;]]>试料间对数剂量极差为wx＝|logDx1-logDx2|；对数剂量总平均值为logDx‾‾=∑logDx‾/g]]>，g为均匀性测试中选取的样品数对数剂量总平均值的标准偏差为sx=∑(logDxt‾-logDx‾‾)2/(g-1);]]>样品内对数剂量标准偏差为sw=Σwx2/2g;]]>样品间对数剂量标准偏差为ss=sx2-sw2/2.]]>
表1样品对数剂量值及均匀性评价
表C1样品对数剂量值及均匀性评价(续) 使用总体概率单位-对数剂量图将实验室报告的每个剂量样品的致死率回归换算成对数剂量值，并分别求出这些对数剂量值的标准偏差SDi(也列于表1)。
从表1中的结果可知，对于每个剂量的样品，样品间对数剂量标准偏差ss远远小于由该剂量样品的致死率换算得到的对数剂量值的标准偏差SDi的0.3倍。这表明样品间的变动性在随后进行的统计分析和能力评价中可以忽略，也就是说样品是均匀的。
2稳定性测试从包装好的每个剂量样品中分别随机选取18个样品用于稳定性测试。这些样品被放置在室温下(18～25℃)5天，然后放置在40℃保温箱中5天，再放置再室温下20天。在均匀性测试当天，从均匀性测试后的第10天和第20天分别进行稳定性测试。每次稳定性测试分别从每个剂量的18个样品中选取6个样品，其中3个样品用于吸光度测试，3个样品用于动物实验。
在样品吸光度测试中，每个样品被分成2份试料，采用均匀性测试相同的人员、仪器、测试方法和实验室进行测试。由吸光度测试结果及换算的对数剂量值见表2，稳定性测试中样品的对数剂量结果与均匀性测试中的对数剂量总平均值的绝对差值由下式计算对每个剂量，样品对数剂量均值logDy‾=(logDy1+logDy2)/2;]]>总对数剂量平均值logDy‾‾=∑logDy‾/h]]>，h为稳定性测试中选取的样品数；均匀性和稳定性测试对数剂量结果之间的绝对差值d=|logDy‾‾-logDx‾‾|.]]>对每个剂量，该绝对差值远远小于由该剂量样品的致死率换算得到的对数剂量值的标准偏差SDi的0.3倍。这表明在随后进行的统计分析及能力评价中可疑忽略样品在上述条件下的变化所带来的影响。
表2样品对数剂量值稳定性评价 同时，采用3个系列样品进行动物实验，并采用改进的Bliss法计算对数半数致死量(logLD50)，每个样品所导致的小鼠死亡率结果及logLD50计算结果列于表3。设da为第10天和第20天所测得的logLD50值与均匀性测试当天所测得的logLD50值的绝对差值，该差值小于能力评价用稳健标准偏差NIQR的0.3倍。表明样品随时间和历经条件的变化而产生的变动性对动物实验结果所产生的影响同样可在随后的统计分析和能力评价中忽略。
表3对数半数致死量稳定性评价

无论是吸光度测试实验还是动物实验结果都说明了样品是足够稳定的。
权利要求
1.含有烟酰胺的液体能力验证样品，其特征在于样品分为4～9个等比关系样品，各样品之间的等比系数为0.6～0.95，样品的溶剂为0.9％氯化钠生理盐水。
2.根据权利要求1所述的含有烟酰胺的液体能力验证样品，其特征在于样品分为7个样品，各样品之间的等比系数为0.9。
3.根据权利要求1所述的含有烟酰胺的液体能力验证样品，其特征在于样品分为7个样品，各样品浓度分别为1号液-177.78mg/mL；2号液-160.00mg/mL；3号液-144.00mg/mL；4号液-129.60mg/mL；5号液-116.64mg/mL；6号液-104.98mg/mL；7号液94.48mg/mL。
4.根据权利要求1、2或3所述含有烟酰胺的液体能力验证样品的制备方法为(1)根据动物实验，确定该组样品的最高浓度和最低浓度；(2)再根据动物实验所呈现出的量-效关系确定该组样品应分为多少个样品及各样品之间的等比系数，采用“低比稀释法”配制溶液2.1称取一定量药用烟酰胺纯粉，加入一定容积的0.9％氯化钠生理盐水，混合均匀后定容，再混匀，此溶液为1号液；2.2从1号液中取出一定量进行无菌分装，同时向原容量瓶中添加相同量的0.9％氯化钠生理盐水，混合均匀后定容，再混匀，此溶液即为2号液；2.3重复2.2操作，依次配得3号液，4号液，5号液，6号液，7号液；2.4封装样品，进行均匀性，稳定性测试，合格即可。
全文摘要
含有烟酰胺的液体能力验证样品及其制备方法，涉及毒理学能力验证技术领域，样品包括4～9个浓度呈等比关系的液体样品，各样品之间的等比系数为0.60～0.95，样品的溶剂为0.9％氯化钠生理盐水。本发明能力验证样品，其稳定性、均匀性符合能力验证要求，并可进行统计评价。可以有效防止参试实验室间的串通行为，使测试结果更加可信。本发明能力验证样品具有广泛的适用性，它不仅适用于毒理学实验室的能力验证活动，还广泛适用于与食品安全性有关的各个行业检测人员的水平测试及实验室的质量控制，本发明首次完成了毒理学实验室间能力验证样品的制备，填补了该领域的空白。
文档编号G01N1/28GK1696641SQ200510046458
公开日2005年11月16日 申请日期2005年5月16日 优先权日2005年5月16日
发明者秦成, 宋慧君, 郑江 申请人:秦成, 宋慧君, 郑江