专利名称：通过测定adm和bnp的水平在患有心力衰竭的患者中进行预后和风险评估的制作方法
技术领域：
本发明属于临床诊断学领域。具体来说，本发明涉及通过测定标志物肽的水平在患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者中进行结果预后和风险评估。
背景技术：
心力衰竭(HF)、也称为充血性心力衰竭(CHF)，是一种当心脏的结构或功能问题损伤了其供应充足血流以满足身体需要的能力时发生的心脏病症。它能够引起大量各不相同的症状，特别是在静息时或用力和/或疲劳期间呼吸短促(SOB)、流体潴留的征兆例如肺充血或踝肿胀，以及静息时心脏的结构或功能异常的客观证据。然而，一些患者可能完全无症状，并且心脏的无症状结构或功能异常被认为是有症状心力衰竭的先兆，并伴有高死亡率(Wang等，2003. Circulation 108 =977-82) 心力衰竭是常见疾病影响超过2% 的美国人口或几乎5百万人，并且30%至40%的患者在接受诊断后1年内死于心力衰竭 (McMurray JJ.，Pfeffer Μ. A. 2005. Lancet 365:1877-89)。由于缺乏公认的定义和确定性诊断的困难，心力衰竭通常不能被诊断，特别是在早期阶段。使用适合的疗法，心力衰竭在大多数患者中可以被控制，但它是潜在的威胁生命的病症，并且进行性疾病伴有10%的总年度死亡率。它是年龄超过65岁的人群中住院治疗的主要原因(Haldemarm G. A.等， 1999. Am Heart J 137:352-60)。结果，在欧洲国家，心力衰竭的控制消耗总健康护理费用的 1-2% (Berry 等，2001. Eur J Heart Fail 3 :749-53)。发明描述本发明的主题是提供用于对患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者进行结果预后或风险评估的方法，所述方法包括下列步骤a.提供来自所述患者的样品，b.测定所述样品中ADM或其片段或其前体或所述前体的片段的水平，c.测定所述样品中BNP或其片段或其前体或所述前体的片段的水平，d.将所述ADM或其片段或其前体或所述前体的片段和BNP或其片段或其前体或所述前体的片段的水平与所述患者的结果预后或风险评估相关联。所述结果或所述风险事项可以是指存活和/或功能性结果。在本文中，心力衰竭优选是指急性心力衰竭(AHF)。在本发明的优选实施方案中，预测90日后、优选为60日后、更优选为45日后、最优选为30日后的结果。本发明还提供了用于将患者分层到风险组中的方法，所述患者患有心力衰竭和/ 或呼吸短促，并且所述方法包含上面描述的步骤。在本文中，优选情况下ADM或其片段或其前体或所述前体的片段是中段肾上腺髓质素原(MR-proADM)。此外，优选情况下，BNP或其片段或其前体或所述前体的片段是NT-proBNP。在本发明方法的具体实施方案中，ADM或其片段或其前体或所述前体的片段和BNP或其片段或其前体或所述前体的片段的水平被差分加权。功能性结果可以被确定为疾病严重性的排序或程度，例如确定时间后患者的健康状态。在优选实施方案中，附加地测定选自下列的至少一种临床参数年龄、性别、收缩压、舒张压、抗高血压治疗、体重指数、心率、体温、糖尿病的存在、当前吸烟嗜好，最优选情况下选自心率、体温、体重指数、收缩压和舒张压。在某些特定实施方案中，可以附加地测定其他实验室参数，例如其他预后标志物、 特别是其他肽激素及其片段或其前体或所述前体的片段的水平。其他预后标志物可以选自肌钙蛋白、髓过氧化物酶、CRP、新喋呤、GDF-15、ST2、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C，以及采取成熟肽、前体、激素原和相关激素原片段形式的下列肽心房利尿钠肽、内皮素、血管加压素。
在具体实施方案中，本发明涉及按照上面描述的方法对患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者进行结果预后或风险评估的方法，其中ADM或其片段或其前体或其片段和BNP 或其片段或其前体或其片段的水平单独地或与其他预后有用的实验室或临床参数组合，通过可以选自下列可选方案的方法，用于对患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者进行结果预测或风险评估-与患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者群体中全部预定样品中ADM或其片段或其前体或所述前体的片段和BNP或其片段或其前体或所述前体的片段的水平的中位数进行比较，-与患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者群体中全部预定样品中ADM或其片段或其前体或所述前体的片段和BNP或其片段或其前体或所述前体的片段的水平的分位数进行比较，-根据Cox比例风险分析或使用风险指数计算例如NRI(净重新分类指数)或 IDI (综合鉴别指数)进行计算。在另一个实施方案中，本发明涉及对患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者进行结果预后或风险评估的方法，所述方法包含下列步骤a.提供来自所述患者的样品，b.测定所述样品中ADM或其片段或其前体或所述前体的片段的水平，c.将所述ADM或其片段或其前体或所述前体的片段的水平与所述患者的结果预后或风险评估相关联。当使用ADM作为标志物时，本发明的方法的优选实施方案是除了 ADM或其片段或其前体或所述前体的片段之外还测定肌钙蛋白。ADM增加了肌钙蛋白的有效性，肌钙蛋白为 MR-ADM增加有效性。在该特定实施方案中，优选预测短期结果，即45日后、40日后、35日后、30日后、 25日后、20日后、15日后、10日后或5日内或其后、优选为30日后的结果。在本发明的另一个优选实施方案中，预测90日后的结果。本发明还涉及用于对患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者进行结果预后或风险评估的试剂盒，所述试剂盒包含至少一种针对ADM或其片段或其前体或所述前体的片段的捕获探针和至少一种针对BNP或其片段或其前体或所述前体的片段的捕获探针。
优选情况下，针对ADM或其片段或其前体或所述前体的片段的捕获探针是针对 MR-proADM。针对BNP或其片段或其前体或所述前体的片段的捕获探针优选针对NT-proBNP。本发明还涉及所述方法和试剂盒的应用，用于对患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者进行结果预后或风险评估。此外，本发明涉及方法和试剂盒的应用，用于在患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者中监测治疗。通过本发明的方法或通过使用本发明的方法获得的标志物的水平，可以本技术领域的专业人员熟知的各种方式进行分析。例如，可以将获得的每个测定结果与“正常”值或表明特定疾病或结果的值进行比较。具体的诊断/预后可以取决于每个测定结果与这种值的比较，所述值可以被称为诊断或预后“阈值”。在某些实施方案中，用于一种或多种诊断或预后指示物的测定方法，仅仅通过测定方法中指示物的存在或不存在与病症或疾病相关联。例如，可以设计测定方法，使得只有当高于特定目标阈值浓度时才出现阳性信号，并且低于该浓度时测定方法不提供高于背景的信号。诊断和/或预后测试的灵敏度和特异性不仅取决于测试的分析“质量”，而且还取决于构成异常结果的定义。在实践中，典型地通过将“正常”(即表观健康的)和“患病”群体的变量值对其相对频率进行作图，计算出受试者工作特征曲线(R0C曲线)。对于任何特定标志物来说，患有或未患疾病的对象的标志物水平分布可能交叠。在这些条件下，测试不能以100%准确性绝对辨别正常与疾�。⑶医坏那虮硎静馐圆荒鼙姹鹫Ｓ爰膊〉牡胤�。选择一个阈值，高于它(或低于它，取决于标志物随着疾病如何变化)时测试被认为是异常的，低于它时测试被认为是正常的。ROC曲线下的面积是感觉到的测量值将允许正确鉴定病症的概率的度量。即使在测试结果不一定给出准确数字的情况下，ROC曲线也能使用。只要人们能够对结果排序，人们即能产生ROC曲线。例如，在“患病”样品上进行的测试的结果可以按照程度排序(例如1 =低，2 =正常，3 =高)。这种排序可以与“正常”群体中的结果相关联，并产生ROC曲线。这些方法在本技术领域中是公知的。参见例如Hanley 等，1982. Radiology 143 :29-36.优选情况下，所选的阈值能够提供的ROC曲线面积大于约 0. 5、更优选大于约0. 7、更优选大于约0. 8、更优选大于约0. 85，并且最优选大于约0. 9。在该上下文中，术语“约”是指给定测量值的+/-5 %。ROC曲线的水平轴表示(1-特异性)，其随着假阳性率而增加。曲线的垂直轴表示灵敏度，其随着真阳性率而增加。因此，对于所选的具体截止值来说，可以测定(ι-特异性) 的值，并可以获得相应的灵敏度。ROC曲线下的面积是测量到的标志物水平将允许正确鉴定疾病或病症的概率的度量。因此，ROC曲线下的面积可用于确定测试的有效性。在某些实施方案中，不依赖于组中的一个或多个标志物的具体阈值来确定从对象获得的标志物水平分布情况是否指示了特定诊断/预后。相反，本发明可以利用标志物组 “分布情况”作为不可分割的整体进行评估。这种标志物组中变化的特定“指纹”组合形式能够有效用作特定的诊断或预后指示物。正如在本文中讨论的，变化的组合形式可以从单一样品或组的一个或多个成员的时间变化(或组的响应值)获得。这里的组是指一组标志物。正如在本文后面所描述的，组的响应值优选通过对在各种截止值下特定标志物组的灵敏度(即真阳性)对组的1_(特异性)(即假阳性)进行ROC曲线作图来确定。在这些方法中，来自对象的标志物测量值的分布情况合在一起，被认为提供了诊断或预后的全局概率(表示成数字分值或风险百分率)。在这样的实施方案中，标志物的某些子集的增加可能足以在一个患者中指示特定诊断/预后，而标志物的不同子集的增加可能足以在另一个患者中指示相同或不同的诊断/预后。也可以向组中的一个或多个标志物施加权重因数，例如，当标志物在鉴定特定诊断/预后中效用特别高时，可以将其权重成使得在给定水平下，它单独即足以传递阳性结果的信号。同样，也可以提供权重因数，使得特定标志物的任何给定水平都不足以传递阳性结果的信号，而只有当另一个标志物也有助于分析时才传递结果的信号。在某些实施方案中，标志物和/或标志物组被选择成表现出至少约70%的灵敏度、更优选至少约80%的灵敏度、更优选至少约85%的灵敏度、更优选至少约90%的灵敏度以及最优选至少约95%的灵敏度，与至少约70%的特异性、更优选至少约80%的特异性、更优选至少约85%的特异性、更优选至少约90%的特异性以及最优选至少约95%的特异性的组合。在特别优选实施方案中，灵敏度和特异性两者均为至少约75%、更优选至少约80%、更优选至少约85%、更优选至少约90%以及最优选至少约95%。在这种情况下， 术语“约”是指给定测量值的+/_5%。在其他实施方案中，阳性似然比、阴性似然比、机会比或风险比被用作测试的预测风险或诊断疾病的能力的度量。在阳性似然比的情况下，值为1表示在“患病”和“对照”组二者的对象中阳性结果可能性相等；值大于1表示在患病组中阳性结果可能性更大；值小于1表示在对照组中阳性结果可能性更大。在阴性似然比的情况下，值为1表示在“患病” 和“对照”组二者的对象中阴性结果可能性相等；值大于1表示在测试组中阴性结果可能性更大；值小于1表示在对照组中阴性结果可能性更大。在某些优选实施方案中，标志物和/ 或标志物组优选被选择成表现出至少约1. 5或1. 5以上或约0. 67或0. 67以下、更优选至少约2或2以上或约0. 5或0. 5以下、更优选至少约5或5以上或约0. 2或0. 2以下、更优选至少约10或10以上或约0. 1或0. 1以下，以及最优选至少约20或20以上或约0. 05或 0. 05以下的阳性或阴性似然比。在这种情况下，术语“约”是指给定测量值的+/_5%。在机会比的情况下，值为1表示在“患病”和“对照”组二者的对象中阳性结果可能性相等；值大于1表示在患病组中阳性结果可能性更大；值小于1表示在对照组中阳性结果可能性更大。在某些优选实施方案中，标志物和/或标志物组优选被选择成表现出至少约2或2以上或约0. 5或0. 5以下、更优选至少约3或3以上或约0. 33或0. 33以下、更优选至少约4或4以上或约0. 25或0. 25以下、更优选至少约5或5以上或约0. 2或0. 2 以下以及最优选至少约10或10以上或约0. 1后0. 1以下的机会比。在这种情况下，术语 “约”是指给定测量值的+/-5%。在风险比的情况下，值为1表示在“患病”和“对照”组二者中终点(例如死亡) 的相对风险相等；值大于1表示在患病组中风险更高；值小于1表示在对照组中风险更高。 在某些优选实施方案中，标志物和/或标志物组优选被选择成表现出至少约1. 1或1. 1以上或约0. 91或0. 91以下、更优选至少约1. 25或1. 25以上或约0. 8或0. 8以下、更优选至少约1. 5或1. 5以上或约0. 67或0. 67以下、更优选至少约2或2以上或约0. 5或0. 5以下以及最优选至少约2. 5或2. 5以上或约0.4或0.4以下的风险比。在这种情况下，术语 “约”是指给定测量值的+/-5%。
专业技术人员将会理解，将诊断或预后指示物与诊断或与将来临床结果的预后风险相关联，是一种统计学分析。例如，标志物水平大于X可以传递患者与水平低于或等于X 的患者相比更可能遭受不利后果的信号，正如通过统计学显著性水平所确定的。此外，标志物浓度从基线水平的改变可以反映患者的预后，并且标志物水平变化的程度可能与不利事件的严重性相关。统计学显著性通常通过比较两个或多个群体并确定置信区间和/或ρ值来确定。参见例如Dowdy和Wearden，《用于研究的统计学》(Statistics for Research), John Wiley & Sons，New York，1983。本发明的优选置信区间是 90%、95%、97. 5%、98%、 99 %,99. 5 %,99. 9 % 和 99. 99 %,而优选的 ρ 值是 0. 1、0· 05,0. 025,0. 02,0. 01,0. 005、 0. 001 和 0. 0001。在其他实施方案中，可以进行多次诊断或预后标志物的测定，并使用标志物的时间变化确定诊断或预后。例如，可以在初始时间测定对象样品中的标志物浓度，并在第二个时间从第二个对象样品再次测定。在这样的实施方案中，从初始时间到第二个时间标志物的增加可以指示特定的诊断或特定的预后。同样地，从初始时间到第二个时间标志物的减少可以指示特定的诊断或特定的预后。当在本文中使用时，术语“样品”是指出于对目标对象例如患者进行诊断、预后或评估的目的而获得的体液样品。优选的测试样品包括血液、血清、血浆、脑脊液、尿液、唾液、 痰液和胸膜腔积液。此外，本技术领域的专业人员将会认识到，某些测试样品在分级或纯化步骤、例如将全血分离成血清或血浆组分后，可以更容易地分析。因此，在本发明的优选实施方案中，样品选自血液样品、血清样品、血浆样品、脑脊液样品、唾液样品和尿液样品，或上面提到的任何样品的提取物。优选情况下，样品是血液样品，最优选为血清样品或血浆样品。本文中使用的术语“患者”是指由于疾病而接受医疗护理或将接受医疗护理的活的人类或非人类生物体。这包括患有正对其病征进行研究的未确定疾病的人。因此，本文描述的方法和测定方法适用于人类和兽医疾病两者。当在本文中用于指称诊断和预后标记物的用途时，术语“相关联”是指将患者中标记物的存在或量，与其在已知患有给定病症或已知具有给定病症风险的人、或已知没有给定病症的人中的存在或量进行比较。正如上面讨论的，可以将患者样品中的标志物水平与已知与特定预后相关的水平进行比较。样品的标志物水平被说成已经与诊断相关联；也就是说，专业技术人员可以使用标志物水平确定患者是否具有特定类型的诊断，并做出相应应答。可替选地，样品的标志物水平可以与已知与良好结果(例如不存在疾病等)相关的标志物水平进行比较。在优选实施方案中，标志物水平组与总体概率或特定结果相关联。呼吸困难或呼吸短促(SOB)被美国胸科学会(American Thoracic Society)定义为“由强度不等的性质不同的感觉所构成的呼吸不适的主观经历”(American Heart Society 1999. Am J Respir Crit Care Med 159:321-40)。它是大量医学障碍、特别是涉及心血管和呼吸系统的医学障碍的常见症状。这些障碍包括阻塞性肺病(例如支气管炎， C0PD)、肺炎、脓毒病、心肌症、心力衰竭和缺血性心脏病。患有由外伤或明显心肌梗塞(MI) 引起的SOB的患者不是本发明的对象。急性心力衰竭(AHF)被定义为异常心功能继发症状和征兆的快速发作。它可能在以前患有或未患心脏病的情况下发生。心脏机能障碍可以涉及收缩或舒张机能障碍、心律异常或前负荷与后负荷失谐。AHF自身可以表现为急性新发(在以前没有已知心脏机能障碍的患者中AHF的新发作)或慢性心力衰竭的急性代偿失调(Nieminen等，2005. Eur Heart J 26 :384-416 ；Dickstein 等，2008. Eur Hear J 29 :2388-442)。在本发明的上下文中，ADM涉及肾上腺髓质素或其片段或其前体或所述前体的片段。ADM前体的优选片段是中段proADM(MR-proADM)。在本发明的情形中，ProADM24_71 (或 PreproADM45^92)是特别优选的标志物肽。标志物肽的“片段”是指长度为至少12个氨基酸、优选长度为至少6个氨基酸残基的片段。在本发明的上下文中，术语“水平”是指从患者获取的样品中标志物肽的浓度(优
选表示成重量/体积，M。本文中的术语“结果”是指例如患者在预定时间后例如3日后、5日后、10日后、14 日后、20日后、3周后、4周后、30日后、45日后、60日后、90日后、3个月后、6个月后、1年后， 优选在30日后存活。在本发明的情形中，术语“功能性结果”是指在预定时间后例如3日后、5日后、10 日后、14日后、20日后、3周后、4周后、30日后、45日后、60日后、90日后、3个月后、6个月后、1年后，优选在30日后疾病严重性的程度，即患者的健康状态。本文中标志物肽的水平的测定(或测量或检测)使用下面解释的检测方法和/或诊断测定方法来进行。当在本文中提到时，“测定方法”或“诊断测定方法”可以是在诊断学领域中应用的任何类型的测定方法。这样的测定方法可以基于待检测被分析物与具有一定亲和性的一种或多种捕获探针的结合。对于捕获分子与靶分子或目标分子之间的相互作用来说，亲和常数优选大于IO8M4。在本发明的上下文中，“捕获分子”是可用于结合来自样品的靶分子或目标分子、 即被分析物(即在本发明的情况下是心血管肽)的分子。因此，捕获分子必须在空间上和表面特征例如表面电荷、疏水性、亲水性、路易斯供体和/或受体是否存在等方面适当塑造， 以特异性结合靶分子或目标分子。因此，结合可以由例如捕获分子与靶分子或目标分子之间的离子、范德华、n-n、S-Ji、疏水或氢键相互作用或两种以上上面提到的相互作用的组合来介导。在本发明的情形中，捕获分子可以例如选自核酸分子、糖类分子、RNA分子、蛋白质、抗体、肽或糖蛋白。优选情况下，捕获分子是抗体，包括其与靶分子或目标分子具有足够亲和性的片段，并包括重组抗体或重组抗体片段，以及所述抗体或其源自于变体链的长度为至少12个氨基酸的片段的化学和/或生物化学修饰的衍生物。优选的检测方法包括各种格式的免疫测定法，例如放射免疫测定法(RIA)、化学发光和荧光免疫测定法、酶联免疫测定法(ELISA)、基于Luminex的珠子阵列、蛋白质微阵列测定法，以及快速检测格式例如免疫层析条样试验。测定法可以是均相或非均相测定法、竞争和非竞争性夹心测定法。在特别优选的实施方案中，测定法采用夹心测定法形式，其是非竞争性免疫测定法，其中待检测和/或定量分子与第一抗体并与第二抗体结合。第一抗体可以结合到固相例如珠子、孔或其他容器的表面、芯片或条上，并且第二抗体是例如用染料、放射性同位素或反应性或催化活性部分标记的抗体。然后通过适合的方法测量与被分析物结合的标记抗体的量。“夹心测定法”所涉及的通用组合物和步骤是已确立的，并为专业技术人员所公知。(《免疫测定手册》(The Immunoassay Handbook) ,David Wild Elsevier LTD，Oxford ；第三片反(2005 年 5 月)， ISBN-13 :978-0080445267 ；Hultschig C等，Curr Opin Chem Biol. 2006 Feb ；10(1) :4-10. PMID :16376134)，在此引为参考。在特别优选实施方案中，测定方法包含两种捕获分子，优选为都作为分散相存在于液体反应混合物中的抗体，其中第一种标记组分附着在第一种捕获分子上，其中所述第一种标记组分是基于荧光或化学发光淬灭或扩增的标记系统的一部分，并且所述标记系统的第二种标记组分附着于第二种捕获分子上，使得当两种捕获分子与被分析物结合后产生可测量信号，允许检测在包含样品的溶液中形成的夹心复合物。在更优选情况下，所述标记系统包含稀土穴状化合物或稀土螯合物与荧光染料或化学发光染料、特别是花青类型的染料的组合。在本发明的情形中，基于荧光的测定方法包含使用染料，所述染料可以例如选自 FAM(5-或6-羧基荧光素)、VIC、NED、荧光素、荧光素异硫氰酸酯(FITC)、IRD-700/800、 花青染料例如CY3、CY5、CY3. 5、CY5. 5、Cy7、占吨、6-羧基-2’，4’，7’，4，7-六氯荧光素 (HEX)、TET、6-羧基-4，，5，- 二氯-2，，7，- 二甲氧基荧光素(J0E)、N，N，N' , N'-四甲基-6-羧基罗丹明(TAMRA)、6-羧基-X-罗丹明(ROX)、5_羧基罗丹明-6G (R6G5)、6_羧基罗丹明_6G(RG6)、罗丹明、罗丹明绿、罗丹明红、罗丹明110、BODIPY染料例如BODIPY TMR、俄勒冈绿、香豆素类例如伞形酮、苯并亚胺类例如Hoechst 33258 ；菲啶类例如德克萨斯红、 雅吉瓦黄、Alexa Fluor、PET、溴化乙锭、吖啶类染料、咔唑染料、吩噁嗪染料、吓啉染料、聚甲炔染料等。在本发明的情形中，基于化学发光的测定方法包含使用基于化学发光材料的物理原理的染料，所述原理描述在Kirk-Othmer的《化学技术百科全书》(Encyclopedia of chemical technology) H四 ，J. I. KroschwitzΜ. Howe-GrantJohn Wiley & Sons，1993，vol. 15，p. 518-562中，在此引为参考，包括在551-562页中的引用文献。优选的化学发光染料是吖啶酯。将患者样品中的一种或多种标志物肽(或其片段或其前体或所述前体的片段)的水平、即浓度，与患者的结果预后或风险评估相关联。例如，标志物肽的浓度高于某个阈值表明患者的不利结果或高风险。这样的阈值，对于MR-proADM来说优选在约0. 5至5. Onmol/ 1、更优选在1. 0至2. 5pmol/l的范围内，最优选为1. 985nmol/l，对于NT-proBNP来说，优选在约250至15000pg/ml、更优选为5000至15000pg/ml的范围内，最优选为10472pg/ml。在本发明的另一个实施方案中，通过将患者个体的标志物肽水平与健康群体的某个百分位数(例如97. 5百分位数)相关联，来确定患者的风险和/或结果。Kaplan-Meier估量值可用于评估或预测患者的结果或风险(例如发病率)。序列肾上腺髓质素的前体肽(前肾上腺髓质素原)的氨基酸序列提供在SEQ ID NO=I 中。肾上腺髓质素原是指前肾上腺髓质素原序列的22至185位氨基酸残基。肾上腺髓质素原(pro-ADM)的氨基酸序列提供在SEQ ID N0. 2中。pro-ADM N-端20肽(PAMP)是指 pre-proADM的22-41位氨基酸残基。PAMP的氨基酸序列提供在SEQ ID NO 3中。MR-pro-肾上腺髓质素(MR-pro-ADM)是指pre-pro_ADM的45-92位氨基酸残基。MR-pro_ADM的氨基酸序列提供在SEQ ID N0:4中。成熟的肾上腺髓质素(ADM)的氨基酸序列提供在SEQ ID NO :5 中。 134个氨基酸的脑利尿钠肽的前体肽(pre-pro-BNP)的序列提供在SEQ ID NO 6 中。Pro-BNP是指pre-pro-BNP的27至1；34位氨基酸残基。pro-BNP的序列显示在SEQ ID NO :7 中。Pro-BNP 被切割成 N-端 pro-BNP (NT-pro-BNP)和成熟 BNP。NT-pro-BNP 包含 27 至102位氨基酸残基，其序列显示在SEQ ID NO :8中。SEQ ID NO 9显示了 BNP的序列，其包含pre-pro-BNP肽的103至134位氨基酸残基。SEQID NO 1 (pre-pro-ADM 的氨基酸序列)
1MKLVSVALMY LGSLAFLGAD TARLDVASEFRKKffNKffALSRGKRELRMSS
51SYPTGLADVK AGPAQTLIRP QDMKGASRSPEDSSPDAARIRVKRYRQSMN
101NFQGLRSFGC RFGTCTVQKL AHQIYQFTDKDKDNVAPRSKISPQGYGRRR
151RRSLPEAGPG RTLVSSKPQA HGAPAPPSGSAPHFL
SEQID NO :2(pro-ADM的氨基酸序列)
1ARLDVASEFR KKffNKffALSR GKRELRMSSSYPTGLADVKAGPAQTLIRPQ
51DMKGASRSPE DSSPDAARIR VKRYRQSMNNFQGLRSFGCRFGTCTVQKLA
101HQIYQFTDKD KDNVAPRSKI SPQGYGRRRRRSLPEAGPGRTLVSSKPQAH
151GAPAPPSGSA PHFL
SEQID NO :3(pro-ADM N20的氨基酸序列)
1ARLDVASEFR KKffNKffALSR
SEQID NO :4(MR-pro-ADM 的氨基酸序列)
1ELRMSSSYPT GLADVKAGPA QTLIRPQDMKGASRSPEDSS
SEQID NO :5(ADM的氨基酸序列)
1YRQSMNNFQG LRSFGCRFGT CTVQKLAHQIYQFTDKDKDNVAPRSKISPQ
51GY
SEQID NO 6 (pre-pro-BNP 的氨基酸序列)
1MDPQTAPSRA LLLLLFLHLA FLGGRSHPLGSPGSASDLETSGLQEQRNHL
51QGKLSELQVE QTSLEPLQES PRPTGVffKSREVATEGIRGHRKMVLYTLRA
101PRSPKMVQGS GCFGRKMDRI SSSSGLGCKVLRRH
SEQID NO 7 (pro-BNP的氨基酸序列)
1HPLGSPGSAS DLETSGLQEQ RNHLQGKLSELQVEQTSLEPLQESPRPTGV
51WKSREVATEG IRGHRKMVLY TLRAPRSPKMVQGSGCFGRKMDRISSSSGL
101GCKVLRRH
SEQID NO 8 (NT-pro-BNP 的氨基酸序列)
1HPLGSPGSAS DLETSGLQEQ RNHLQGKLSELQVEQTSLEPLQESPRPTGV
51WKSREVATEG IRGHRKMVLY TLRAPR
SEQID NO :9(BNP的氨基酸序列)
1SPKMVQGSGC FGRKMDRISS SSGLGCKVLR RH
图1 存活率对AHF患者中MR-proADM水平的四个四分位数的作图。图2 存活率对AHF患者中MR-proADM水平的四个四分位数的作图，四分位数1至 3已被合并。图3 存活率对AHF患者中BNP水平的四个四分位数的作图。图4 存活率对AHF患者中BNP水平的四个四分位数的作图，四分位数1至3已被合并。图5 存活率对AHF患者中NT-proBNP水平的四个四分位数的作图。图6 存活率对AHF患者中NT-proBNP水平的四个四分位数的作图，四分位数1至 3已被合并。图7 来自不同天数下对标志物BNP、NT-proBNP和MR-proADM的ROC图的曲线下面积(AUC)。图 8 对标志物 BNP、NT-proBNP 和 MR-proADM 的 ROC 图。图9 :MR-proADM高于和低于1. 985pmol/L的阈值的患有或未患AHF的患者中的存活率(依赖于天数的累积存活率)作图。图10患者概述。
图11= SEQIDNO:1 (pre-pro-ADM的氨基酸序列)
图12= SEQIDNO:2(pro-ADM的氨基酸序列)
图13= SEQIDNO:3(pro-ADM N20的氨基酸序列)
图14= SEQIDNO4 (MR-pro-ADM的氨基酸序列)
图15= SEQIDNO5 (ADM的氨基酸序列)
图16= SEQIDNO:6(pre-pro-BNP的氨基酸序列)
图17= SEQIDNO:7(pro-BNP的氨基酸序列)
图18= SEQIDNO8 (NT-pro-BNP的氨基酸序列)
图19= SEQIDNO:9 (BNP的氨基酸序列)
实施例实施例1 临床研究15个登记中心——召集1641位具有呼吸短促(SoB)和急性心力衰竭(AHF)的患者表1:患者概述
权利要求
1.一种对患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者进行结果预后或风险评估的方法，所述方法包含下列步骤a.提供来自所述患者的样品，b.测定所述样品中ADM或其片段或其前体或所述前体的片段的水平，c.将所述ADM或其片段或其前体或所述前体的片段的水平与所述患者的结果预后或风险评估相关联。
2.一种对患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者进行结果预后或风险评估的方法，所述方法包含下列步骤a.提供来自所述患者的样品，b.测定所述样品中ADM或其片段或其前体或所述前体的片段的水平，c.测定所述样品中BNP或其片段或其前体或所述前体的片段的水平，d.将所述ADM或其片段或其前体或所述前体的片段和BNP或其片段或其前体或所述前体的片段的水平与所述患者的结果预后或风险评估相关联。
3.权利要求1或2的方法，其中所述结果或所述风险是指存活和/或功能性结果。
4.权利要求1到3的方法，其中预测3天后、5天后、10天后、14天后、20天后、3周后、 4周后、30天后、90天后、3个月后、6个月后、1年后后，优选30天后的结果。
5.用于将患者分层到风险组中的方法，其中所述患者患有心力衰竭和/或呼吸短促， 并且所述方法包含权利要求1或权利要求2的步骤。
6.权利要求1到5的方法，其中ADM或其片段或其前体或所述前体的片段是 MR-proADM。
7.权利要求1到6的方法，其中BNP或其片段或其前体或所述前体的片段是 NT-proBNPo
8.权利要求1到7的方法，其中ADM或其片段或其前体或所述前体的片段和BNP或其片段或其前体或所述前体的片段的水平被差分加权。
9.权利要求1到8的方法，其中功能性结果被确定为结果严重性的排序或程度。
10.前述权利要求任一项的对患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者进行结果预后或风险评估的方法，其中ADM或其片段或其前体或所述前体的片段和BNP或其片段或其前体或所述前体的片段的水平单独地或与其他预后有用的实验室或临床参数组合，通过可以选自下列可选方案的方法，用于对患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者进行结果预测或风险评估-与患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者群体中全部预定样品中ADM或其片段或其前体或所述前体的片段和BNP或其片段或其前体或所述前体的片段的水平的中位数进行比较，-与患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者群体中全部预定样品中ADM或其片段或其前体或所述前体的片段和BNP或其片段或其前体或所述前体的片段的水平的分位数进行比较，-根据Cox比例风险分析或使用风险指数计算例如NRI (净重新分类指数)或IDI (综合鉴别指数)进行计算。
11.权利要求1到10的方法，其中附加地测定选自下列的至少一种临床参数年龄、性别、收缩压、舒张压、抗高血压治疗、体重指数、心率、体温、糖尿病的存在、当前吸烟嗜好。
12.权利要求1到11的方法，其中附加地测定选自下列的至少一种其他实验室参数 肌钙蛋白、髓过氧化物酶、CRP、新喋呤、GDF-15、ST2、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C，以及采取成熟肽、前体、激素原和相关激素原片段形式的下列肽心房利尿钠肽、内皮素、血管加压素。
13.用于对患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者进行结果预后或风险评估的试剂盒， 所述试剂盒包含至少一种针对ADM或其片段或其前体或所述前体的片段的捕获探针和至少一种针对BNP或其片段或其前体或所述前体的片段的捕获探针。
14.权利要求13的试剂盒，其中针对ADM或其片段或其前体或所述前体的片段的捕获探针是针对MR-proADM。
15.权利要求15的试剂盒，其中针对BNP或其片段或其前体或所述前体的片段的捕获探针是针对NT-proBNP。
16.权利要求1到12任一项的方法或权利要求13到15的试剂盒在对患有心力衰竭和 /或呼吸短促的患者进行结果预后或风险评估中的应用。
17.权利要求1到12任一项的方法或权利要求13到15的试剂盒在对患有心力衰竭和 /或呼吸短促的患者监测治疗中的应用。
全文摘要
本发明涉及对患有心力衰竭和/或呼吸短促的患者进行结果预后或风险评估的方法，所述方法包含测定所述患者的所述样品中ADM或其片段或其前体或所述前体的片段和BNP或其片段或其前体所述前体的片段的水平。
文档编号G01N33/74GK102317790SQ200980145015
公开日2012年1月11日 申请日期2009年11月6日 优先权日2008年11月11日
发明者奥利弗·哈特曼, 安德烈亚斯·贝格曼 申请人:B.R.A.H.M.S有限公司
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