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专利名称：：那西肽制剂含量的检测方法
技术领域：
：本发明属于生物化学
技术领域：
，涉及一种饲料药物添加剂及其各种制剂的含量检测的改进方法，具体涉及含硫多肽类抗生素那西肽在稀释过程中的保护方法。
背景技术：
：饲料安全是绿色环保食品的基本点，我国幅员辽阔，人口众多，随着改革开放的步伐加快，人民生活水平提高，畜禽水产的需求量也日益增多。另外我国是一个农业大国，禽畜产品出口量很大，但药物残留问题很严重，因此研究和开发绿色饲料添加剂对保障人民身体健康和发展我国农业经济十分必要。2001年7月农业部颁发了《饲料药物添加剂使用规范》的通知，并列出了33种符合规范的饲料药物添加剂，那西肽是其中之一。新兽药那西肽(又名诺西肽，英文名Nosih印tide)是生物工程的产物，由Str印tomycesactuosus发酵产生，是一种新型非吸收型的饲用抗生素。其中的有效成分含硫多肤类抗生素那西肽，结构为12种氨基酸及衍生物形成的多肽物质，分子量为1222，分子式为C51H43N13012S6，结构式(Merckindex，fourthedtion)参见结构式1。那西肽纯品是一种黄色结晶，为一种脂溶性产物，极难溶于非脂溶性或弱脂溶性体系中。结构式1:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>那西肽作为饲料用添加剂具有以下特点1、动物专用抗生素，不引起交叉耐药。2、在动物体内不残留，不污染食品。3、添加量少，2.5-10ppm，促生长效果明显，提高增重8-10%，并提高饲料报酬。4、应用范围广，可用于畜、禽、鱼等。那西肽是国外1961年发现的化合物，70年代法国朗普洛克公司曾对其进行研究，80年代未由日本三菱公司开发成新型非吸收型的词用抗生素，并于19S7年12月25日被日本政府批准为法定的饲料添加剂，列入了日本饲料安全法，其商品名为PrilnofaX(Hess&Clark)。由于其在体内不残留的性质，目前被欧共体、北美、日本等国广泛使用1988年上海医科大学对那西肽进行开发研究，1998年6月获农业部颁发那西肽新兽药证书(三类)(原料药和预混剂)。并经中国兽药监察所对那西肽样品的测试鉴定，产品质量与国外同类产品完全一致。2002年，杭州汇能生物技术公司与复旦大学合作将那西肽产业化，商品名为"诺农"。在禽、畜和水产上广泛应用，获得良好的社会效益。由于那西肽的结构性质决定了其为脂溶性物质，在非脂溶性溶液体系中溶解性差而且不稳定，如果用非脂溶性或弱脂溶性体系进行处理时，会发生溶解不完全、溶液中不稳定或稀释时不能完全定量转移等问题。现行规定的那西肽制剂含量测定方法(抗生素微生物检定法)中，其制剂液的稀释制备，所用的是脂溶性很差的混合稀释液，因此在该方法操作过程中会产生测试结果的较大偏差和重复性不好的情况。必须进行有效改进后，测定的准确性精密性才会得到保障。
发明内容本发明的目的是针对现行的那西肽制剂含量测定方法(抗生素微生物检定法)中所用的稀释液脂溶性差，检测过程中会产生测试结果的较大偏差和重复性不好的情况，提供一种改进的检测方法，使测定的准确性得到保障。本发明那西肽制剂含量检测改进法是在那西肽制剂提取液用弱脂溶性溶液稀释前，预先加入有机溶剂对其稳定性进行保护。用于预先加入的有机溶剂是指对那西肽有相当脂溶性的有机溶剂系列，这些有机溶剂是指N,N-二甲基甲酰胺(N，N-dimethylformamideDMF)、二甲基亚砜、丙酮、氯仿、甲醇、乙醇其一。用于预先加入的对其稳定性进行保护的脂溶性有机溶剂优选为N,N-二甲基甲酰胺(DMF)。本发明设计利用预先添加有机溶剂来保护那西肽的溶出及后处理中的稳定性，以使得能够被定量且稳定地转移到非脂溶性稀释液中，从而使得含量能被准确测定，并且明显改进方法的重复性。本发明以DMF为例来说明保护那西肽的效果。本发明涉及的检测方法主要步骤如下1)待测液的制备按照中华人民共和国农业部《兽药质量标准2003版》中那西肽项下规定的方法进行。2)其它测试用试液的制备按照中华人民共和国农业部《兽药质量标准2003版》中那西肽项下规定的方法进行。3)参考液稀释中保护取上述1)待用的参考贮备液5ml，置于50ml容量瓶中，加入lml的匿F进行保护，用国家规定的稀释液稀释到刻度，混合匀匀。精密移取该稀释液2ml和lml，分别置于50ml容量瓶中，各加入lml的DMF进行保护，用近水溶性稀释液稀释到刻度，混匀成2单位每毫升和0.5单位每毫升的测定用液。4)稀释待测液取上述l)获得的制剂待测贮备液5ml，置于50ml容量瓶中，加入lml的面F进行保护，用近水溶性稀释液稀释到刻度，混合均匀。精密移取该稀释液2ml和lml，分别置于50ml容量瓶中，各加入lml的DMF进行保护，用近水溶性稀释液稀释到刻度，混匀成2单位每毫升和0.5单位每毫升的测定用液。5)按照《中华人民共和国兽药典2005版》一部附录103页的"抗生素微生物检定法"进行培养、测定、结果的计算。具体实施例方式1、以1%那西肽预混剂8个批号分别按原有方法和本发明方法进行检验测定对比，结果具体如下表一。表一1%那西肽预混剂样生物效价测定结果及相关偏差统计:<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>2、以75%含量的那西肽提纯品8个批号，分别按原有方法和发明方法进行检验测定对比，结果具体如下表二。表二75%那西肽提纯品生物效价测定结果及相关偏差统计<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>3、结果分析综述:1)从上述两表的对比结果可以看到不论是75%的那西肽纯品或1%的预混剂，在检验测定操作中不添加有机溶剂进行预保护，测定结果明显低于待测样品的真实含量值，并且测定结果之间的平行性及重复性均不高。2)不论是75%的那西肽纯品或1%的预混剂，在检验测定操作中先添加有机溶剂进行预保护的，测定结果非常接近待测样品的真实含量值，并且测定结果之间的平行性及重复性均很好。3)由上述结果，我们可以得出结论为在那西肽及各种制剂在用任何方法溶解或提取后，如果希望用非脂溶性体系进行溶解、稀释和分散，预先加入有机溶剂，可增加那西肽的溶出，稀释中那西肽的定量转移，从而达到提高含量测定的准确度和可靠性。在使用此同等保护概念的处理方法进行处理时，还可以用于那西肽的其它类似的分散处理，以保持其稳定，以及定量地被转移到非脂溶分散体系中。权利要求1、那西肽制剂的生物效价检测方法，其特征在于在那西肽制剂用非脂溶性或弱脂溶性体系进行稀释处理前，预先加入对那西肽有相当脂溶性的有机溶剂对其稳定性进行保护。2、如权利要求1所述那西肽制剂的生物效价检测方法，其特征在于用于预先加入的对那西肽有相当脂溶性的有机溶剂为N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、丙酮、氯仿、甲醇、乙醇其一。3、如权利要求1所述那西肽制剂的生物效价检测方法，其特征在于用于预先加入的有机溶剂优选为N，N-二甲基甲酰胺。全文摘要本发明那西肽制剂含量的检测方法，其改进在于在那西肽制剂用非脂溶性或弱脂溶性体系进行稀释处理前，预先加入有机溶剂对其稳定性进行保护。用于预先加入的有机溶剂是指对那西肽有相当脂溶性的有机溶剂系列，如DMF，又如二甲基亚砜，还有如丙酮、氯仿、甲醇、乙醇等。优选为DMF。本发明利用预先添加有机溶剂来保护那西肽的溶出及后处理中的稳定性，以使得能够被定量且稳定地转移到非脂溶性稀释液中，从而使得含量能被准确测定，或用于其它目的的稀释分散过程。本发明明显改进了原检测方法的准确性、精密性和重复性。文档编号G01N1/38GK101299010SQ20081006241公开日2008年11月5日申请日期2008年6月6日优先权日2008年6月6日发明者瑜丁,曹春华,陈贵才申请人:浙江汇能动物药品有限公司