专利名称：一种测定茶叶中香气组分的分析方法
技术领域：
本发明属茶叶分析检测技术领域，涉及一种测定茶叶中香气组分的分析方法。
背景技术：
茶叶香气作为茶叶观感审评的重要组成部分，其作为影响茶叶品质的一个标准，对其分析研究越来越被人们所重视。目前为止，已从各种茶叶中分离出700多种香气物质，包括醇、醛、酮、酯、酸、氮等十余大类化合物。茶叶香气由各种挥发性风味化合物(VolatileFlavour Compounds VFC)组成,不同茶叶品种和生长环境、不同的加工工艺及时间和不同的存储方法都会对这些化合物组分和含量造成较大差异，且部分化合物产生过程和机理复杂。因此建立一种能对这些挥发性风味化合物组分进行准确定性和定量的方法显得尤为重要。常用的香气提取方法有萃取法(固-液萃取如索氏抽提法，液-液萃取如用Deanstar 装置萃取)、超临界流体萃取法(Supercritical Fluid Extraction Method,简称 SFE法)、同时蒸懼萃取法(Simultaneous Distillated Extraction Method,简称 SDE 法)、减压蒸懼萃取法(Vacuum Distillation Extraction Method,简称VDE法)和顶空吸附法(Headspace Absorb Method，简称HAS法)等，这些提取方法不同程度的存在某些缺点，例如耗时太多、提取成本太高、操作时对部分香气组分的损失或有些组分根本无法提取等。固相微萃取技术(solid phase microextraction, SPME)是集提取、净化、浓缩、进样为一体的联用技术，以无溶剂、方便、快速等优势在分析化学的许多领域得到广泛应用。衍生化顶空-固相微萃取(Headspace-solid phase microextraction, HS-SPME)是这一技术的最新发展，该技术对那些水溶性强、无挥发性毒物的快速提取分析十分有效，且能诱导待测物的挥发性并降低其极性，其优势在于能提高待测物在涂层/气相、气相/液相间的分配系数，从而提高SPME的萃取效率和灵敏度。该技术操作简单，条件温和，能杜绝溶剂带来的污染，与茶叶感官评审相关性较好，所得到的香气成分与人体嗅觉所感觉到的气味最接近。萃取头上萃取纤维的涂层作为SPME核心，其具备以下特点，对目标物有一定的萃取富集能力，即有较大的分配系数；要有合适的分子结构，能使目标物较快地从涂层上解吸下来；涂层要有热稳定性好、耐溶剂、耐酸碱等。目前常见的涂层有聚二甲基硅氧烷(PDMS);聚丙烯酸酯(PA);二乙烯基苯(DVB)；羧乙基(CAR);聚乙二醇(PEG);模板树脂(TPR)等及其复合材料。商品涂层种类有限，选择性较差，而且不同涂层对不同结构分子的富集能力差异较大，因此选择适合茶叶香气组分采集的萃取头具有重要意义。自动质谱去卷积鉴定系统(Automated Mass Spectral Deconvolution & IdentificationSystem, AMDIS)是美国国家标准与技术研究院(NIST)开发的一种能够对GC-MS测试所得谱图中所有谱峰在同次扫描进行自动筛查鉴定是否有目标化合物存在的应用软件。AMDIS能有效的优化全扫描总离子流色谱图(TIC图)，自动筛查鉴定目标化合物并计算出该化合物Kovats保留指数，自行建立所需图谱库。AMDIS较传统的TIC图逐个进行比较及NIST谱库检索匹配分析更为精确、高效和全面。尤其是大多数TIC图往往较为复杂，AMDIS能够从大的背景干扰质谱中及共流物掩盖质谱中鉴定目标物，能够可靠鉴定很低信号水平的目标物。
发明内容
本发明的目的是提供一种测定茶叶中香气组分的分析方法，采用顶空-固相微萃取对茶叶香气进行捕集，并运用气相色谱质谱联用(GC-MS)结合Kovats保留指数及自动质谱解卷积定性系统(AMDIS)进行茶叶香气组分的定性鉴定分析和相对定量分析。具体通过以下步骤实现:(I)采用顶空-固相微萃取对茶叶香气进行捕集:称取茶叶5g_15g，加沸水10ml-40ml，水浴温度40°C -70°C，待茶样浸水平衡5min后，将萃取头插入500ml采样瓶，静态顶空固相微萃�。腿∈奔浞段�30min-60min，GC-MS进样时间为3min，其中顶空-固相微萃取采用50/30 μ m DVB/CAR/PDMS型固相微萃取头；所述采样瓶由瓶盖I ;萃取针体2 ；密封圈3 ;橡胶垫片4 ;萃取针头5 ;集气瓶体6构成。(2)运用气相色谱质谱联用(GC-MS)结合Kovats保留指数及自动质谱解卷积定性系统(AMDIS)进行茶叶香气组分的定性鉴定分析和相对定量分析。
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GC-MS 条件:载气 He，流速为 lmL/min ;色谱柱:Agilent DB-5MS (60mX0.32mm，
0.25 μ m);进样方式:不分流；模式:恒流；柱温梯度条件:初始温度50°C，保持5min，以30C /min的速率升温至180°C，保持2min ;再以10°C /min的速率升温至250°C，保持3min ；质谱条件中四极杆；扫描方式:全扫描；质量范围:50 600u ;电子轰击离子源(electron impact, EI),温度 230。。,电子能量 70eV ；香气组分的定性鉴定分析和相对定量分析数据处理都由自动质谱解卷积定性系统(AMDIS)完成。定性鉴定分析:利用经AMDIS对正构烷烃标准样品和茶叶中常见的香气组分如香叶醇、丁香烯、顺己酸-3-己烯酯、β -紫罗酮等标准样品进行分析计算Kovats保留指数，并建立茶叶香气图谱库。运用所建立图谱库对茶叶香气组分进行定性鉴定分析，较常规检索NIST谱图库，该方法定性准确度大大提高。定量分析:选择葵酸乙酯内标，在香气采集瓶中的浓度为5gm/ml，利用峰面积归一法，计算各组分百分含量，实现香气组分的相对定量。计算公式如下:
权利要求
1.一种测定茶叶中香气组分的分析方法，其特征在于，采用顶空-固相微萃取对茶叶香气进行捕集，并运用气相色谱质谱联用结合KovatS保留指数及自动质谱解卷积定性系统进行茶叶香气组分的定性鉴定分析和相对定量分析，具体通过以下步骤实现: (1)采用顶空-固相微萃取对茶叶香气进行捕集:称取茶叶5g-15g,加沸水10ml-40ml,水浴温度40°C -70°C，待茶样浸水平衡5min后，将萃取头插入采样瓶，静态顶空固相微萃�。腿∈奔浞段�30min-60min，气相色谱质谱联用进样时间为3min，其中顶空-固相微萃取采用50/30 μ m DVB/CAR/PDMS型固相微萃取头； (2)运用气相色谱质谱联用结合Kovats保留指数及自动质谱解卷积定性系统进行茶叶香气组分的定性鉴定分析和相对定量分析； 气相色谱质谱联用条件:载气He，流速为lmL/min ;色谱柱:Agilent DB_5MS，60m X0.32mm,0.25 μ m ;进样方式:不分流；模式:恒流；柱温梯度条件:初始温度50°C，保持5min，以3°C /min的速率升温至180°C，保持2min ;再以10°C /min的速率升温至250°C，保持3min ； 质谱条件中四极杆；扫描方 式:全扫描；质量范围:50 600u ;电子轰击离子源，温度230°C，电子能量70eV ； 定性鉴定分析:利用经自动质谱去卷积鉴定系统对正构烷烃标准样品和茶叶中的香气组分标准样品进行分析计算Kovats保留指数，并建立茶叶香气图谱库，运用所建立的图谱库对茶叶香气组分进行定性鉴定分析； 定量分析:选择葵酸乙酯内标，在香气米集瓶中的浓度为5gm/ml,利用峰面积归一法，计算各组分百分含量，实现香气组分的相对定量。
2.根据权利要求1所述的一种测定茶叶中香气组分的分析方法，其特征在于，步骤(2)所述香气组分选用香叶醇、丁香烯、顺己酸-3-己烯酯或β -紫罗酮。
3.根据权利要求1所述的一种测定茶叶中香气组分的分析方法，其特征在于，香气组分的定性鉴定分析和相对定量分析数据处理都由自动质谱解卷积定性系统完成。
4.根据权利要求1所述的一种测定茶叶中香气组分的分析方法，其特征在于，定量分析峰面积归一法计算公式为:
全文摘要
本发明提供一种测定茶叶中香气组分的分析方法，采用顶空-固相微萃�。⒃擞闷嗌字势琢媒岷螷ovats保留指数分析方法，采用50/30μmDVB/CAR/PDMS型固相微萃取头，优化了HS-SPME参数，建立自动质谱解卷积定性系统结合KI并建立茶叶香气图谱库的分析方法进行分析。本发明提供的分析方法较传统茶叶香气分析更准确、高效、灵活、全面，可有效运用于茶叶中香气组分的鉴定定性和定量分析。
文档编号G01N30/02GK103076411SQ201310006788
公开日2013年5月1日 申请日期2013年1月7日 优先权日2013年1月7日
发明者王川丕, 刘新, 诸力 申请人:中国农业科学院茶叶研究所
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