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专利名称：对甲氧西林抗性金黄色葡萄球菌特异的抗体及将其用于甲氧西林抗性葡萄球菌的检测方 ...的制作方法
对甲氧西林抗性金黄色葡萄球菌特异的抗体及将其用于甲氧西林抗性葡萄球菌的检测方法和试剂盒技术领域
本发明提供了针对在金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的甲氧西林抗性株(MRSA)中特异性表达的蛋白质的抗体，和用于检测MRSA的方法和试剂盒，所述方法和试剂盒包括所述抗体，从而可从其他金黄色葡萄球菌株中快速且准确地选择性区分并检测 MRSA。
背景技术：
金黄色葡萄球菌(S. aureus)是医院感染和非医院感染的最常见病原体之一。金黄色葡萄球菌S. aureus的代表类型包括甲氧西林抗性金黄色葡萄球菌(MRSA)、甲氧西林抗性凝固酶阴性葡萄球菌(MR-CNQ、甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)和甲氧西林敏感凝固酶阴性葡萄球菌(MS-CNS)。在这些细菌中，MRSA是最常见医院细菌之一，感染免疫力弱的患者。然而，仅很少的抗菌药物被开发，因此由该细菌引起的患者感染率非常高。
目前，MRSA感染可通过以下方法诊断(1)在培养的细菌上进行抗生素敏感性测试，(2)从培养细菌菌落检测MRSA特异的基因，和C3)从培养的细菌菌落中检测MRSA特异的蛋白。虽然大部分医院使用方法(1)，但是获得测试结果至少需要2-3天。特别是对于小型医院，通过观察培养细菌中MRSA特异的蛋白检测感染的方法很难进行，因为该方法可能再需要另外一天或两天。因此，经常不进行诊断测试就使用抗生素。在实践中，方法(2)和[3]对于普通诊所太复杂而难以进行，使得仅为研究目的而进行这些方法。
以这些目前可获得的方法，MRSA感染的检测被延迟，经常的情况是失去最佳的治疗时间点或者施用了不合适的抗生素。因此，非常需要开发用于快速且准确检测MRSA的方法和试剂盒。


图Ia至Ic显示了，根据本发明的实施方案，金黄色葡萄球菌的菌株中青霉素结合蛋白2a(下文称作PBP2a)氨基酸序列的种间同源性。
图2显示了，根据本发明的实施方案，含PBPh的细菌中多个PBPh蛋白的氨基酸同源性，目的是选择金黄色葡萄球菌特异的序列。
图3显示了，根据本发明实施方案，细菌表达的多肽的电泳结果，其中所述多肽通过使用PBPh特异性引物获得。在所述凝胶上，M列分别显示175kDa、83kDa、62kDa、 47. 5kDa、32.^kDa的分子量标志。1列是前蛋白质表达物，2列是37kDa His_PBP2a 表达，3列是纯化后获得的蛋白。
图4显示了，根据本发明的实施方案，其中显示His-PBPh特异性抗体形成的 ELISA分析结果，与His-凝固酶(阴性对照抗原)比较。
图fe和恥显示本发明的单克隆抗体展示的对His-PBPh的亲和度。具体地，图 5a是His-PBPh被稀释并通过ELISA测定的曲线图，而图恥是本发明的单克隆抗体被稀释并通过ELISA测定的曲线图。
图6的曲线图显示了，根据本发明的实施方案，测定本发明的单克隆抗体展示的对蛋白质A的亲和性的ELISA结果。
图7a和7b显示使用本发明的单克隆抗体在MRSA、MSSA和MS-CNS中检查的PBPh 的存在情况。具体地，图7a是免疫印迹测定的结果，而图7b是ELISA的结果。
图fe是夹心ELISA的简单操作思路。图8b是(快速)侧流免疫谱测定(lateral flow immunographic assay)的简单操作思路。
图9a至9c显示了，PBPh抗原可以通过以下方式检测从本发明的单克隆抗体制备包被抗体和检测抗体对，并且使用这样的抗体对。具体地，图9a显示了夹心ELISA的结果，其中与生物素结合的本发明的单克隆抗体被用作检测抗体。图9b显示了夹心ELISA的结果，其中本发明的6G10单克隆抗体被用作检测抗体，并且本发明的'9C6'单克隆抗体作为包被抗体。图9c显示了夹心ELISA结果，其中His-PBPh被连续稀释。
图IOa和IOb显示了，MRSA可以通过使用本发明的单克隆抗体从其他金黄色葡萄球菌选择性检测。图IOa是这样的测试结果，即其中使用从本发明的单克隆抗体构建的抗体对通过夹心ELISA测定从5株MRSA和1株MSSA收集的裂解物。图IOb显示了这样的测试结果，即其中使用从本发明的单克隆抗体构建的抗体对通过夹心ELISA检查多个菌株中 PBP2a的存在情况。
图11显示了使用从本发明的单克隆抗体构建的抗体对的侧流免疫测定的结果。
图12显示了其中抗-蛋白质A多克隆抗体被用于检测蛋白质A存在情况的夹心 ELISA结果。
图13显示了其中使用了抗-蛋白质A多克隆抗体的侧流免疫测定的结果。
图14a至14e显示了使用本发明的单克隆抗体和抗-蛋白质A多克隆抗体的MRSA 的检测结果。图14a是夹心ELISA的结果，而图14b至14e是侧流免疫测定的结果。
具体实施方式
技术问题
认识到以上所述的问题，本发明人研究了用于MRSA感染的检测方法并提供了本发明，本发明通过使用PBPh特异性单克隆抗体和蛋白质A特异性抗体能够以快速且准确的方式检测MRSA。
因此，本发明的一个目的是提供一种与包含青霉素结合蛋白2a(PBP2a)片段的多肽特异性结合的单克隆抗体，其中所述PBPh片段具有SEQ ID NO 1的氨基酸。
本发明的另一个目的是提供一种产生所述单克隆抗体的杂交瘤细胞，其中所述杂交瘤细胞的登记号为 KCLRF-BP-00202、KCLRF-BP-00203 或 KCLRF-BP-00204。
本发明的又另一个目的是提供一种用于MRSA检测的方法，包括以下步骤使测试样本与PBPh特异性抗体和蛋白质A特异性抗体接触；检测抗原-抗体复合物的形成。
本发明的再另一个目的是提供一种用于MRSA检测的试剂盒，所述试剂盒包含 PBP2a特异性抗体和蛋白质A特异性抗体。
本发明的再另一个目的是提供一种用于MRSA检测的组合物，所述组合物包含 PBP2a特异性抗体和蛋白质A特异性抗体。
技术方案为了实现上述目的，本发明提供了一种与包含PBPh片段的多肽特异性结合的单克隆抗体。所述PBPh片段优选具有SEQ ID NO :1的氨基酸序列。本发明还提供了一种产生所述单克隆抗体的杂交瘤细胞。所述杂交瘤细胞的登记号为 KCLRF-BP-00202、KCLRF-BP-00203 或 KCLRF-BP-00204。本发明还提供一种用于MRSA检测的方法，包括以下步骤使测试样本与PBPh特异性抗体和蛋白质A特异性抗体接触；检测抗原-抗体复合物的形成。本发明还提供一种用于甲氧西林抗性金黄色葡萄球菌(MRSA)检测的试剂盒，所述试剂盒包含PBPh特异性抗体和蛋白质A特异性抗体。本发明还提供一种用于甲氧西林抗性金黄色葡萄球菌(MRSA)检测的组合物，所述组合物包含PBPh特异性抗体和蛋白质A特异性抗体。以下是本发明的更详细描述。对于本发明，术语“单克隆抗体”是指本发明所属领域广泛为人所知的单克隆抗体。单克隆抗体显示高特异性，即对单个抗原位点特异(单一特异性的)。与包括不同抗体(每个抗体识别每个不同的表位)的多克隆抗体不同，单克隆抗体识别每个抗原的单个表位。本发明的单克隆抗体能够通过常规克隆和细胞融合技术制备。例如，可通过将目标免疫原(抗原)注射进入野生小鼠或养殖小鼠(即BALB/c)制备天然单克隆抗体或人单克隆抗体。这样的抗体可以被单独注射或与佐剂结合注射，可以通过载体表达，或者可以以 DNA或融合蛋白的形式诱导免疫应答。融合蛋白可以是由免疫应答诱导的肽偶联的载体蛋白质。这样的载体蛋白质的实例包括但不限于半乳糖苷酶、谷胱甘肽S-转移酶、匙孔虫威血蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白。在该情况下，肽作为运载蛋白质的半抗原发挥作用。下文简单地提供了单克隆抗体的制备方法。将选出的动物加强免疫之后，取出脾脏收集脾细胞。然后使用本发明所属技术领域已知的技术将脾细胞与骨髓瘤细胞融合 [Kohler and Milstein,Nature 256 :495-497(1975) ；and Harlow and Lane,Antibodies A Laboratory Manual,ColdSpring Harbor Laboratory,New York(1988)]。获得杂交瘤细胞后，通过常规技术(例如，通过有限稀释)进行克�。�然后培养产生所需单克隆抗体的克隆。单克隆抗体提供以下益处提高利用抗原-抗体复合物的诊断和分析技术的选择性和特异性。另一个益处是，这样的单克隆抗体无污染，因为它们是通过杂交瘤培养生产的。对于本发明，术语“杂交瘤，，为本领域技术人员广泛所知，是指由抗体产生细胞和无限增殖细胞融合产生的细胞。例如，杂交瘤可以是与骨髓瘤细胞融合产生的细胞。杂交瘤能够持续提供抗体。对于本发明，术语“检测标签”是指用于检测免疫复合体的标签。这样的检测标签的实例包括但不限于放射性同位素、酶、化学发光化合物、荧光物质(如荧光素)、藻胆蛋白、镧系元素螯合物、罗丹明、酶辅因子和生物素。对于本发明，术语“测试样本”是指任何生物材料，包括细胞、组织和生物流体 (biofluid) ο对于本发明，术语“抗原-抗体复合物”是指PBP2a(或蛋白质Α)和识别所述 PBP2a(或蛋白质A)的相应抗原的复合物，因此所述复合物可以用于确定PBP2a(或蛋白质A)在所给样本中存在与否。
本发明的PBP^i特异性抗体可以是与包含具有SEQ ID NO :1的氨基酸的PBPh片段的多肽特异性结合的抗体，该片段在PBPh序列中显示低程度的种间同源。所述PBP2a 特异性抗体优选可以是单克隆抗体。
此外，所述具有SEQ ID NO 1的氨基酸的PBPh片段可以纯化自所述MRSA株，或者可以通过使用载体以重组蛋白的形式制备。所述PBPh片段优选可以通过使用EcoR I 和》!0 I作为限制性内切酶进行载体克隆而获得。
所述多肽被构建为包含对MRSA的PBPh特异的N末端区，这是通过在金黄色葡萄球菌多个株中同源分析PBPh发现的(参见实施例1-1)。
因此，本发明的抗体可以将所述多肽识别为抗原，从而检测PBPh的存在情况。所述抗体优选可以是单克隆抗体。可使用常规抗体制备技术制备所述单克隆抗体。抗体优选产生自选自杂交瘤KCLRF-BP-00202、KCLRF-BP-00203和KCLRF-BP-00204 (由保藏号表示) 的杂交瘤。所述杂交瘤于2009年2月18日保藏于韩国细胞系库(Korean Cell LineBank) 0
在本发明的一个实施方案中，可以使用PBPh特异性引物制备大量抗原(参见实施例1-2)。然后将所述抗原腹膜内注射至小鼠。之后，对产生多克隆抗体的小鼠进行选择， 其中多克隆抗体显示出针对PBP2a的最高抗体滴度，但对His-凝固酶(用作阴性对照)却显示出低度的亲和性(参见实施例1- 。通过融合所述小鼠的脾脏细胞和骨髓瘤细胞制备杂交瘤。从所述杂交瘤产生PBPh特异性单克隆抗体(参见实施例2)。
由于本发明的单克隆抗体表现出PBPh特异性识别，它们可以检测MRSA和 MR-CNS,已知它们含有PBP2a。
在本发明的一个实施方案中，由ELISA证实了本发明的单克隆抗体具有PBPh抗原特异性(参见实施例3)。由免疫印迹测定或ELISA证实，本发明的单克隆抗体可以用于检测MRSA (参见实施例4)。此外，在本发明的一个实施方案中，从本发明的单克隆抗体中选择单克隆抗体对，并且发现使用这样的单克隆抗体对可以通过夹心ELISA或免疫色谱测定检测MRSA (参见实施例5)。
本发明的单克隆抗体可以，但不限于，是与能够产生可检测信号的检测标签结合的单克隆抗体。这样的检测标签可以是选自以下的一种或多种酶、荧光物质、发光和放射性材料。更详细地，检测标签的实例包括多种酶、辅基、荧光材料、发光材料、生物发光材料和放射性材料。
所述检测标签可直接地或通过偶联物(即，本领域已知的连接物)间接地偶联或结合至本发明的单克隆抗体。合适的酶的实例包括辣根过氧化物酶、乙酰胆碱酯酶、过氧化物酶、碱性磷酸酶、β -D-半乳糖苷酶、葡糖氧化酶、苹果酸脱氢酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶和转化酶。合适的辅基的实例包括链霉亲和素/生物素和亲和素/生物素。合适荧光材料的实例包括伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、二氯三嗪基胺荧光素、丹磺酰氯、 藻红蛋白和藻胆蛋白。合适发光材料的实例包括鲁米诺、异氨基苯二酰胼(isoluminol) 和光泽精。合适生物发光材料的实例包括萤光素酶、萤光素和水母蛋白。合适放射性材料的实例包括125I、131I、mIn、99TC、14C 和 3H。
待用于本发明的杂交瘤细胞系可以是登记号为KCLRF-BP-00202、KCLRF-BP-00203 或KCLRF-BP-00204的杂交瘤细胞。所述杂交瘤细胞系于2009年2月18日保藏于韩国细胞系库。产生这样的杂交瘤的技术为本领域技术人员广泛知晓，优选通过抗体产生细胞和无限增殖细胞(例如，骨髓瘤细胞)融合制备杂交瘤。在本发明的一个实施方案中，在杂交瘤中小鼠脾细胞和小鼠杂交瘤细胞融合，通过其证实可以产生PBPh特异性单克隆抗体(参见实施例2)。可以将本发明的MRSA检测方法用于通过检测抗原-抗体复合物的存在情况来检测MRSA，在所述方法中使PBPh特异性抗体和蛋白质A特异性抗体各自与测试样本接触。所述PBPh特异性抗体可以是与包含具有SEQ ID NO=I的氨基酸序列的PBPh片段的多肽特异性结合的抗体。所述与包含具有SEQ IDNO :1的氨基酸的PBPh片段的多肽特异性结合的PBPh特异性抗体是本发明的单克隆抗体。蛋白质A是在金黄色葡萄球菌中特异性表达的蛋白，其在MRSA和MSSA中特异性表达，但不在MR-CNS或MS-CNS中表达。所述蛋白质A特异性抗体可以，但不必须，是从以蛋白质A免疫的鸡中获得的多克隆抗体。本发明的检测方法能够通过使用PBPh特异性抗体和蛋白质A特异性抗体二者检测MRSA。由于蛋白质A存在于MRSA中，但不存在于MR-CNS中，所述两菌株不能仅通过使用PBPh特异性抗体来区分，但可以通过使用PBPh特异性抗体和蛋白质A特异性抗体二者轻易地区分。由于蛋白质A对很多抗体中Fc区的亲和性，通过使用抗体检测蛋白质A有困难。 然而，已知来自鸡的抗-蛋白质A抗体不表现这种对蛋白质A的结合性质(Larsson A， Sjoquist J. 1989 ；27 (12) :2856-7. J ClinMicrobiol.)。因此，抗-蛋白质 A 抗体通过用蛋白质A免疫鸡制备(参见实施例6-1)。在本发明的实施方案中，证实了产生蛋白质A的菌株MRSA和MSSA可以以如上制备的蛋白质A特异性抗体通过夹心ELISA或免疫色谱测定检测(参见实施例6-2和6_3)。因此，本发明的MRSA检测方法⑴通过PBPh特异性抗体检测PBP2a，⑵通过蛋白质A特异性抗体检测蛋白质A，从而能够特异性检测MRSA，MRSA含有PBPh和蛋白质A 二者。换言之，可得出这样的结论，即当在(1)和(2)两项检测中都观察到阳性抗原-抗体反应时，存在MRSA。在本发明的一个实施方案中，通过如上所述的(1)和O)的抗原-抗体反应检测 MRSA的存在情况。参见实施例7。检测所述抗原-抗体复合物存在情况的方法包括但不限于放射性免疫分析、 ELISA(酶联免疫吸附测定)、夹心免疫分析和侧流免疫谱测定。抗原-抗体复合物的检测涉及使用直接或间接标记的抗体。上文描述了可用的检测标签。所述方法是本领域技术人员广泛知晓的。例如，在ELISA的情况下，将测试样本与本发明的单克隆抗体或蛋白质A特异性抗体接触，所述抗体包被在微量滴定板、膜、测试条等之上。在一个实施方案中，可用本发明的单克隆抗体或用蛋白质A特异性抗体包被微量滴定板孔，并且用BSA封闭未占据的结合位点。用测试样本孵育所述包被的孔，并对其检查以确定抗原-抗体复合物的存在情况。可如上所述将所述抗体标记，用于检测。具体地，如果使用夹心免疫分析和侧流免疫谱测定，可以使用从本发明的单克隆抗体制备的抗体对进行MRSA检测。参见图8。这样的抗体对可以是利用本发明的单克隆抗体之一的任何抗体。优选将从KCLRF-BP-00202杂交瘤产生的单克隆抗体用作检测抗体，将从KCLRF-BP-00203或KCLRF-BP-00204杂交瘤产生的单克隆抗体用作包被抗体。
在本发明的一个实施方案中，通过选择单克隆抗体对并利用所述单克隆抗体对， 可以通过夹心免疫分析和侧流免疫谱测定实现MRSA检测。具体地，进行了 MRSA的有效检测，其中从KCLRF-BP-00202杂交瘤产生的单克隆抗体被用作检测抗体，从KCLRF-BP-00203 或KCLRF-BP-00204杂交瘤产生的单克隆抗体被用作包被抗体。参见实施例5。
本发明的MRSA检测试剂盒包含PBPh特异性抗体和蛋白质A特异性抗体。
所述PBPh特异性抗体可以是与包含具有SEQ ID NO=I的氨基酸的PBPh片段的多肽特异性结合的抗体。所述PBPh特异性抗体优选是本发明的单克隆抗体。
可用于本发明的所述试剂盒系统可包含但不限于ELISA板、深插入装置 (deep-stick device)、免疫色谱测定、径向分隔免疫测定装置、流过装置(flow-through device)等。优选可以使用以免疫色谱条或装置形式提供的诊断试剂盒。在免疫色谱诊断中，测试血清中包含的抗原与结合至胶体金颗粒的微量抗体反应。然后，当通过毛细作用迁移通过硝酸纤维膜上的微孔时，所述抗原结合至捕获抗体从而在所述条上出现颜色，使得通过肉眼可观察到阳性和阴性信号。
这样的试剂盒优选使用ELISA或侧流免疫谱测定。如前所述，当使用夹心免疫测定和侧流免疫谱测定时，使用本发明的单克隆抗体制备的抗体对可用于MRSA检测。
可用于本发明的试剂盒可以是但不限于包含以下组分的试剂盒固相支持物；本发明的单克隆抗体和蛋白质A特异性抗体；和ELISA反应流体，其含有用于与抗原反应的酶标抗体溶液和用于发出酶反应信号的染料试剂。更具体地，所述酶标抗体溶液可以是山羊抗小鼠Ig-HRP (合适浓度下每孔50-150 μ 1)。所述染料试剂可选自四甲基联苯胺(TMB)。 终止溶液可选自IN HCl和IN H2S04。
本发明的用于MRSA检测的组合物包含PBPh特异性抗体和蛋白质A特异性抗体。
所述PBPh特异性抗体可以是与包含具有SEQ ID NO=I的氨基酸的PBPh片段的多肽特异性结合的抗体。所述PBPh特异性抗体优选可以是本发明的单克隆抗体。
除了所述PBPh特异性抗体和蛋白质A特异性抗体外，所述组合物还可以包含用于免疫测定的载体、能够产生可检测信号的检测标签、溶剂(resolvent)和清洗剂。此外， 在标记物质是酶的情况下，所述组合物还可包含底物和反应终止剂。合适载体的实例包括但不限于，可溶载体，例如本领域已知的生理可接受的缓冲溶液(例如，PBS)；不可溶载体， 例如聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、聚酯、聚丙烯腈、氟树脂、交联葡聚糖、多糖、大分子(包括铺在乳胶、纸、玻璃、金属、琼脂糖及其结合物上的金属磁性微粒)。
如上所述，通过使用用于检测PBPh的PBPh特异性抗体和使用用于检测蛋白质A 的蛋白质A特异性抗体，本发明能够快速且准确地检测含有PBPh*蛋白质A 二者的MRSA。
参考以下实施例进一步解释本发明。但是，这些实施例不应以任意方式解释为限制本发明的范围。
<实施例1>
制备对MRSA中PBPh特异的多克隆抗体
<1-1>确定PBP2a中的特异性位点
使用 SIB BLAST NetworkService(ExPASy Proteomics Server, http// au. expasy. orR/tools/blast/)来测量金黄色葡萄球菌PBP2a的种间同源性。结果显示在图1中。在图Ia至Ic中，绿色表示高同源性，所有显示绿色的部分都来自具有PBPh的细 。Mf 胃^"ΡΒΡ2ει 的SIB BLASTNetworkService (ExPASy Proteomics Server, http://au. expasy. org/tools/blast/)来确定显示低同源性的序列组。如图2中所示，N末端显示低同源性，而C末端显示相对高同源性。此外，在与转肽酶功能有关的C末端部分，观察到了相似PBP2a中的高度同源性。因此，N末端部分(SEQ ID No 1)被选作PBP^i蛋白质中的MRSA特异性位点。PBPh的整个氨基酸序列在SEQ ID No 2中提供。<1-2>PBP2 抗原在表1所示的条件下，对从MRSA菌落提取的基因DNA进行PCR。使用如下表2中的PBP^i特异性引物。表1 :PCR 条件
权利要求
1.一种与包含青霉素结合蛋白2a(PBP2a)片段的多肽特异性结合的单克隆抗体，其中所述PBPh片段具有SEQ ID NO 1的氨基酸序列。
2.权利要求1的单克隆抗体，其中所述单克隆抗体由登记号为KCLRF-BP-00202、 KCLRF-BP-00203 或 KCLRF-BP-00204 的杂交瘤细胞产生。
3.一种杂交瘤细胞，所述杂交瘤细胞产生权利要求1的单克隆抗体，并且具有登记号 KCLRF-BP-00202、KCLRF-BP-00203 或 KCLRF-BP-00204。
4.一种用于检测甲氧西林抗性金黄色葡萄球菌(Maphylococcusaureus) (MRSA)的方法，包括以下步骤使测试样本与亲霉素结合蛋白质h(PBP2a)特异性抗体和蛋白质A特异性抗体接触；并检测抗原-抗体复合物的形成。
5.权利要求4的方法，其中所述PBPh特异性抗体与包含具有SEQIDN0:1的氨基酸的PBPh片段的多肽特异性结合。
6.权利要求5的方法，其中所述PBPh特异性抗体是从登记号为KCLRF-BP-00202、 KCLRF-BP-00203或KCLRF-BP-00204的杂交瘤细胞中产生的抗体。
7.权利要求4的方法，其中所述蛋白质A特异性抗体是从以蛋白质A免疫的鸡得到的多克隆抗体。
8.权利要求4的方法，其中所述检测抗原-抗体复合物的形成的步骤通过选自以下的至少一种方法来进行放射性免疫分析、酶联免疫吸附测定(ELISA)、夹心免疫分析和侧流免疫谱测定。
9.一种用于检测甲氧西林抗性金黄色葡萄球菌(MRSA)的试剂盒，包含青霉素结合蛋白质h(PBP2a)特异性抗体和蛋白质A特异性抗体。
10.权利要求9的试剂盒，其中所述PBPh特异性抗体是与包含具有SEQID N0:1的氨基酸的PBPh片段的多肽特异性结合的抗体。
11.权利要求10的试剂盒，其中所述PBPh特异性抗体由登记号为KCLRF-BP-00202、 KCLRF-BP-00203 或 KCLRF-BP-00204 的杂交瘤细胞产生。
12.权利要求9的用于MRSA检测的试剂盒，其中所述试剂盒被应用于ELISA法或侧流免疫谱测定。
13.一种用于检测甲氧西林抗性金黄色葡萄球菌(MRSA)的组合物，包含青霉素结合蛋白质h(PBP2a)特异性抗体和蛋白质A特异性抗体。
14.权利要求13的用于MRSA检测的组合物，其中所述PBP2a-特异性抗体是与包含具有SEQ ID NO 1的氨基酸的PBPh片段的多肽特异性结合的抗体。
15.权利要求14的用于MRSA检测的组合物，其中所述PBPh特异性抗体由登记号为 KCLRF-BP-00202、KCLRF-BP-00203 或 KCLRF-BP-00204 的杂交瘤细胞产生。
全文摘要
本发明涉及抗在金黄色葡萄球菌甲氧西林抗性菌株(MRSA)中特异性表达的蛋白的抗体，以及用于检测MRSA的方法和试剂盒。通过使用用于检测PBP2a的PBP2a特异性抗体和用于检测蛋白质A的蛋白质A特异性抗体，本发明能够快速且准确地检测MRSA。
文档编号G01N33/569GK102482346SQ200980159211
公开日2012年5月30日 申请日期2009年6月24日 优先权日2009年3月11日
发明者宋亨根, 尹相淳, 文裕利, 池吉龍, 申美香, 金海貞 申请人:狄诺纳有限公司